MALAT -1对胃癌细胞系 SGC7901侵袭和迁移能力的影响

目的:探讨MALAT-1对胃癌细胞系SGC7901侵袭和迁移能力的影响。方法:用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)的方法在mRNA水平测定MALAT-1在20对胃癌组织及癌旁正常组织的表达,以及在GES和SGC7901细胞中的表达。RNA干扰(RNAi)技术下调胃癌细胞系SGC7901中MALAT-1的表达后,以高内涵细胞运动试验检测其运动能力,Transwell实验检测其侵袭和迁移能力。结果:RT-PCR结果显示MALAT-1在胃癌组织中的表达高于癌旁正常组织;相比GES,MALAT-1在SGC7901中的表达升高。下调MALAT-1在SGC7901中的表达后,高内涵细胞运动试验和Transwell实验结果显示SGC7901的运动、侵袭和迁移能力均明显减弱。结论:MALAT-1能够促进胃癌细胞SGC7901的侵袭和迁移能力。     

GSTP1基因对人肝癌细胞系HepG2增殖和侵袭能力的影响

目的 探讨过表达/沉默GSTP1基因对人肝癌细胞系HepG2增殖及侵袭能力的影响。 方法 采用腺病毒载体转染人肝癌细胞系HepG2,获得过表达/沉默GSTP1基因的HepG2细胞。实时荧光定量PCR（qPCR）法检测细胞中GSTP1 mRNA表达水平;CCK-8法和Transwell小室法分别检测细胞的细胞活力和侵袭能力;免疫印迹法（Western blot）检测细胞中Akt、mTOR、p-Akt和p-mTOR的蛋白表达。 结果 经腺病毒载体转染后,成功获得过表达/沉默GSTP1基因的HepG2细胞;过表达GSTP1 基因后,HepG2细胞的细胞活力和侵袭能力显著降低（P<0.05）,而沉默GSTP1基因后,HepG2细胞的细胞活力和侵袭能力则显著增高（P<0.05）;过表达GSTP1基因后,p-Akt和p-mTOR的蛋白表达水平显著降低（P<0.05）,而沉默GSTP1基因的结果则相反。 结论 过表达GSTP1基因可抑制HepG2细胞的增殖和侵袭能力,沉默GSTP1基因则促进HepG2细胞的增殖和侵袭能力,其作用机制可能与Akt/mTOR信号通路有关。     

microRNA let-7f-5p对胃癌细胞系GC9811迁移和侵袭能力的影响

目的:探讨转染let-7f-5p mimics/inhibitor对胃癌细胞系GC9811迁移和侵袭能力的影响 。方法:用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)的方法在mRNA水平测定转染let-7f-5p mimics/inhibitor及其阴性对照后let-7f-5p表达水平的变化;以Transwell实验检测转染let-7f-5p mimics/inhibitor后迁移和侵袭能力有无变化。结果:RT-PCR结果显示:转染let-7f-5p mimics可明显上调GC9811细胞let-7f-5p的表达;转染let-7f-5p inhibitor可明显下调GC9811细胞let-7f-5p的表达。Transwell实验结果显示与对照组相比转染let-7f-5p mimics的GC9811细胞迁移和侵袭能力明显减弱;与对照组相比转染let-7f-5p inhibitor的GC9811细胞迁移和侵袭能力明显增强。结论:microRNA let-7f-5p能够抑制胃癌细胞GC9811的迁移和侵袭能力。     

肝癌组织中EGFL9基因的表达及其对Huh-7肝癌细胞系增殖、侵袭和迁移的影响

目的:研究表皮生长因子样结构域9（epiderma growth factor-like domain 9,EGFL9）基因在肝癌组织及细胞系中的表达水平及其对Huh-7肝癌细胞系增殖、侵袭和迁移的影响。方法:采用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,RT-qPCR）方法检测EGFL9基因在20例肝癌及对应的癌旁肝组织标本中的表达水平。下载癌症基因组图谱（The Cancer Genome Atlas,TCGA）数据库内肝癌基因表达数据,对EGFL9在肝癌中的表达进行分析。RT-qPCR检测EGFL9基因在Huh-7、SMMC-7721及HepG2三种常见的肝癌细胞系和HL-7702正常肝脏细胞系中的表达水平。采用慢病毒介导的siRNA及基因转导技术分别构建EGFL9基因敲减及过表达的Huh-7肝癌细胞,以噻唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法、Transwell侵袭实验和迁移实验观察EGFL9基因敲减及过表达对Huh-7肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。结果:RT-qPCR结果显示,EGFL9基因在20例肝癌组织中的表达量高于对应的癌旁组织。TCGA数据库分析结果也显示,EGFL9在肝癌组织中的平均表达量明显高于癌旁组织。EGFL9在3株肝癌细胞系中的表达水平均高于正常肝脏细胞系。EGFL9基因敲减的Huh-7肝癌细胞的增殖速度明显慢于对照Huh-7肝癌细胞,其侵袭、迁移能力也明显被抑制;EGFL9基因过表达的Huh-7肝癌细胞实验结果则与之相反。结论:EGFL9在肝癌组织和细胞中的表达水平明显上调,且可促进肝癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力,提示EGFL9可能是一个潜在的肝癌治疗靶点。     

高转移潜能人肝癌细胞特异性结合肽对肝癌侵袭和转移的影响

目的 研究高转移潜能人肝癌细胞特异性结合肽(AWYPLPP肽)对肝癌侵袭和转移的影响.方法 采用Matrigel侵袭实验、迁移实验、二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)实验以及黏附实验,探讨AWYPLPP肽对高转移潜能人肝癌细胞HCCLM3侵袭表型的影响.裸鼠皮下接种HCCLM3细胞,建立肿瘤肺转移模型,观察AWYPLPP肽对HCCLM3肺转移的影响.结果 侵袭实验结果显示,在AWYPLPP肽浓度为0.1～100 μmol/L时,能显著促进HCCLM3细胞的侵袭能力,呈剂量效应关系.迁移实验、MTT实验和黏附实验表明,AWYPLPP肽对HCCLM3细胞的迁移、增殖和黏附能力无影响.HCCLM3细胞皮下接种30 d后处死裸鼠,AWYPLPP肽组出现明显的肺转移,肺转移率为88.9%(8/9),与PBS组比较,差异有统计学意义(P<0.05),但对皮下肿瘤的生长无明显影响.结论 AWYPLPP肽能促进高转移潜能人肝癌细胞体外侵袭能力以及肿瘤肺转移;进一步寻找肿瘤细胞表面与AWYPLPP肽结合的受体,可能为深入研究肝癌侵袭转移的机制和设计干预治疗的靶点提供新思路.     

microRNA 10a对胃癌细胞系BGC823迁移和侵袭能力的影响

摘　要　目的:研究人微小RNA10a（microRNA10a，miR10a）对胃癌细胞系BGC823迁移和侵袭能力的影响。方法：利用Transwell小室对胃癌细胞系BGC823进行侵袭筛选，获得高侵袭能力的BGC823P3亚系；通过miRNA芯片差异分析发现miR10a在高侵袭能力BGC823P3细胞的表达显著高于BGC823细胞。通过化学方法合成成熟型的人miR10a，以脂质体包裹合成的miR10a（25、50、100、150 nmol/L）转染BGC823细胞，并设空白转染、无关序列转染对照组; Realtime PCR分别检测以上各组细胞miR10a的表达。采用细胞计数试剂盒8（Cell Counting Kit8，CCK8）检测miR10a对细胞增殖的影响，流式分析检测miR10a对细胞凋亡的影响，Transwell小室检测miR10a对细胞的迁移和侵袭能力的影响。结果：化学合成的成熟型miR－10a转染后，BGC823细胞miR10a表达的提高以100 nmol/L miR10a转染组最佳，较无关序列转染组提高了2.06倍。 miR10a（１００ nmol/L）的转染对胃癌细胞系BGC823的增殖和凋亡无明显影响，但对BGC823的迁移和侵袭能力有明显的促进作用，促进率分别为（88.34± 0.61）% 和（56.02±3.13）%。结论：转染成熟型人miR－10a能使胃癌细胞系BGC823中miR10a的表达提高，并能显著促进胃癌细胞系BGC823的迁移和侵袭。     

Leptin基因沉默对胆囊癌GBC-SD和OCUG细胞系侵袭和迁移能力的影响

背景与目的：研究表明,与肥胖症密切相关的源自脂肪细胞的细胞因子瘦素（leptin）在癌变和肿瘤发生中起着重要作用。通过体外实验观察leptin对人胆囊癌细胞系GBC-SD和OCUG侵袭和迁移能力的影响,探讨其可能的作用机制。方法：将胆囊癌GBC-SD和OCUG细胞分为对照组和实验组。实验组利用小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）技术靶向沉默胆囊癌GBC-SD和OCUG细胞的leptin表达,应用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）检测转染效率,通过细胞划痕实验和transwell小室法检测胆囊癌GBC-SD和OCUG细胞的迁移和侵袭能力,采用免疫荧光和免疫细胞化学实验检测siRNA干扰后胆囊癌GBC-SD和OCUG细胞的leptin蛋白水平,利用蛋白质印迹法（Western blot）检测干扰后GBC-SD和OCUG细胞的leptin和p-AKT蛋白表达。结果：细胞划痕实验结果显示,利用siRNA靶向沉默leptin后GBC-SD和OCUG细胞的迁移能力下降（t=26.614,P ＜ 0.01;t=19.338,P ＜ 0.01）。Transwell迁移实验结果显示,利用siRNA靶向沉默leptin后GBC-SD和OCUG细胞的迁移能力也下降（t=7.185,P=0.002;t=8.889,P=0.003）。Transwell侵袭实验结果显示,干扰后GBC-SD和OCUG细胞的侵袭能力下降（t=10.183,P=0.001;t=9.697,P=0.001）。免疫荧光和免疫细胞化学实验结果显示,干扰后GBC-SD和OCUG细胞的leptin蛋白表达下降,Westernblot检测结果表明,靶向沉默GBC-SD细胞后leptin和p-AKT蛋白表达下调（t=26.463,P ＜ 0.01;t=13.904,P ＜ 0.01）,靶向沉默OCUG细胞后leptin和p-AKT蛋白表达也下调（t=21.335,P ＜ 0.01;t=17.914,P ＜ 0.01）。结论：下调GBC-SD和OCUG细胞的leptin表达可抑制细胞侵袭和转移能力,并可能通过AKT信号通路调控胆囊癌细胞的侵袭和迁移。Leptin有望成为胆囊癌治疗的一个重要靶点。     

microRNA-10a对胃癌细胞系BGC823迁移和侵袭能力的影响

目的：研究人微小RNA-10a（microRNA-10a,miR-10a）对胃癌细胞系BGC823迁移和侵袭能力的影响。方法：利用Transwell小室对胃癌细胞系BGC823进行侵袭筛选,获得高侵袭能力的BGC823-P3亚系;通过miRNA芯片差异分析发现miR-10a在高侵袭能力BGC823-P3细胞的表达显著高于BGC823细胞。通过化学方法合成成熟型的人miR-10a,以脂质体包裹合成的miR-10a（25、50、100、150nmol/L）转染BGC823细胞,并设空白转染、无关序列转染对照组;Real-timePCR分别检测以上各组细胞miR-10a的表达。采用细胞计数试剂盒-8（Cell Counting Kit-8,CCK-8）检测miR-10a对细胞增殖的影响,流式分析检测miR-10a对细胞凋亡的影响,Transwell小室检测miR-10a对细胞的迁移和侵袭能力的影响。结果：化学合成的成熟型miR-10a转染后,BGC823细胞miR-10a表达的提高以100nmol/LmiR-10a转染组最佳,较无关序列转染组提高了2.06倍。miR-10a（100nmol/L）的转染对胃癌细胞系BGC823的增殖和凋亡无明显影响,但对BGC823的迁移和侵袭能力有明显的促进作用,促进率分别为（88.34&#177;0.61）%和（56.02&#177;3.13）%。结论：转染成熟型人miR-10a能使胃癌细胞系BGC823中miR-10a的表达提高,并能显著促进胃癌细胞系BGC823的迁移和侵袭。     

间隙连接蛋白Connexin32对肝癌侵袭和转移能力的影响

目的:探讨肝癌细胞中间隙连接蛋白Connexin32对肝癌细胞体内侵袭和转移能力的影响.方法:利用可以通过增减细胞外环境中Doxycycline调控Connexin32蛋白表达的肝癌细胞HuH7 Tet-off Cx32亚克隆,将之原位移植到重度联合免疫缺陷鼠肝脏浆膜下,通过饮用水中添加(去除)Doxycycline调控动物体内Connexin32的表达,8周后处死小鼠,观察肿瘤形成及转移情况,蛋白质印迹法及免疫组织化学方法检测其与对照组的Connexin32蛋白表达情况.结果:移植HuH7 Tet-off Cx32细胞的小鼠,在饮用水中去除Doxycycline诱发Connexin32高表达条件下,形成明显的肝内转移灶和腹膜转移灶;而饮用水中添加了Doxycycline的小鼠没有发现明显的转移灶形成.免疫组化证实,高表达的Connexin32蛋白定位于细胞质.蛋白质印迹法结果显示,Doxycycline在小鼠体内呈现较好的诱导性.结论:细胞质内异位蓄积的Connexin32蛋白明显增强肝癌细胞的体内侵袭和转移能力.     

上调miR-222对肝癌细胞系HepG2增殖和侵袭能力的影响

目的 通过上调miR-222,检测肝癌细胞增殖能力和侵袭能力的变化。方法 采用载有miR-222超表达子的脂质体转染HepG2肝癌细胞系,使miR-222过表达;采用Western blot检测miR-222的靶蛋白PTEN的表达;MTT比色法检测转染前后HepG2细胞增殖能力的变化;Transwell试验检测转染前后细胞侵袭能力的变化。结果 Western blot实验中转染组的PTEN蛋白表达量明显低于阴性对照组和空白对照组;在MTT实验中,转染组OD值较阴性对照组和空白对照组升高(P＜0.05);在Transwell小室实验中,转染组的穿膜细胞数目较阴性对照组和空白对照组升高(P＜0.05)。结论 上调miR-222,HepG2细胞PTEN蛋白表达量明显降低,抑癌基因PTEN表达受抑制使肿瘤细胞的增殖能力和侵袭能力增强。     

乳糖酸修饰mPEG-PLGA-PLL纳米粒靶向肝癌细胞Huh7的研究

背景与目的:去唾液酸糖蛋白受体(asialoglycoprotein receptor,ASGPR)是一种肝细胞特异性表达的膜表面蛋白,能够特异性地识别带有半乳糖残基的糖蛋白。乳糖酸含有半乳糖基团,可以作为靶向肝癌的特异性配基。该研究旨在探讨乳糖酸修饰的聚乙二醇/聚丙交酯-乙交酯/聚赖氨酸[methoxy-poly(ethylene glycol)-b-poly(D,L-lactide-co-glycolide)-b-poly(L-lysine)(mPEG-PLGA-PLL)纳米粒,mPEG-PLGA-PLL-GAL NPs)]对肝癌Huh7靶向效果,为构建新型的靶向肝癌的纳米递送系统提供实验数据。方法:MTT法确定Huh7细胞摄取mPEG-PLGA-PLL NPs与mPEG-PLGA-PLL-GAL NPs适当的浓度;通过激光共聚焦和荧光显微镜定性观察Huh7对罗丹明B标记的mPEG-PLGA-PLL NPs和mPEG-PLGA-PLL-GAL NPs的摄取;并采用流式细胞计数仪定量研究Huh7细胞对两者的摄取差别;尾静脉注射荷Huh7瘤裸鼠研究两者体内分布情况。结果:mPEG-PLGA-PLL NPs与mPEG-PLGA-PLL-GAL NPs的浓度在0.2 mg/mL时细胞存活率较高且对Huh7细胞的毒性较小。激光共聚焦断层扫描显示Huh7细胞可以较好地摄取mPEG-PLGA-PLL-GAL NPs,同时流式细胞仪定量显示mPEG-PLGA-PLL-GAL NPs在Huh7细胞的分布较mPEG-PLGA-PLL NPs高40%(P<0.05)。mPEG-PLGA-PLL NPs与mPEG-PLGA-PLL-GAL NPs在移植瘤中的分布明显多于其他脏器,并且随时间的延长mPEG-PLGA-PLL-GAL NPs体现了更好的靶向效果。结论:体外与体内实验证明乳糖酸修饰的mPEG-PLGA-PLL NPs对肝癌细胞Huh7有很好的靶向效果,可为肝癌的靶向治疗提供较好的药物载体。     

lncRNA LOC730101对肝细胞癌增殖、迁移与侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)LOC730101对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）生物学行为的影响。方法 利用R软件分析TCGA数据库LIHC数据集374例HCC组织和50例正常组织中LOC730101的表达差异。收集2018年广西医科大学附属肿瘤医院外科手术切除、经病理确诊的40例HCC患者的癌组织及其相应癌旁组织,培养肝癌细胞系Huh-7、HCCLM3、HepG2和人正常肝细胞系L02,采用qRT-PCR检测组织和细胞系中LOC730101的相对表达水平。在肝癌细胞系Huh-7、HCCLM3中采用慢病毒感染法构建过表达LOC730101(OE-LOC730101)和敲低LOC730101(sh-LOC730101)的稳转细胞株,同时设置相应空白对照（control组）及阴性对照组（sh-NC组、OE-NC组）,然后采用qRT-PCR验证感染效果,CCK-8实验检测各组细胞的增殖能力,划痕愈合实验和Transwell小室侵袭实验检测各组细胞的迁移、侵袭能力。结果 TCGA数据库分析结果显示,LOC...     

细胞分裂周期7蛋白在肝癌组织的表达及其对肝癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 检测细胞分裂周期7(CDC7)蛋白在人肝癌组织的表达,探讨CDC7过表达对肝癌细胞增殖和侵袭的影响。方法 实时定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测CDC7 mRNA在肝癌组织和癌旁组织的表达,检测CDC7 mRNA在肝癌细胞系和正常肝脏细胞中的表达。Western blot检测CDC7蛋白在肝癌组织和癌旁组织中的表达,检测CDC7蛋白在肝癌细胞系和正常肝脏细胞中的表达水平。利用慢病毒载体构建稳定过表达CDC7的肝癌HCCLM3和SMMC 7721细胞株。细胞克隆实验和CCK-8法检测CDC7过表达对肝癌细胞增殖的影响。Transwell实验和划痕实验检测CDC7过表达对肝癌细胞侵袭迁移的影响。结果 与癌旁组织相比,CDC7 mRNA和蛋白在肝癌组织中表达水平显著升高(P＜0.001);与正常肝细胞相比,肝癌细胞系的CDC7 mRNA和蛋白表达水平显著增高(P＜0.001);CCK-8法、细胞克隆实验说明CDC7过表达会明显增强肝癌细胞的增殖能力;划痕实验、Transwell实验说明CDC7过表达会明显提高肝癌细胞的侵袭能力。结论 CDC7蛋白在人肝癌组织高表达,其过表达促进肝癌细胞的增殖和侵袭能力。     

miR-148a对肝癌细胞株侵袭和迁移的抑制作用及机制

背景与目的：原发性肝癌是肝细胞或肝内胆管上皮发生的恶性肿瘤,其复发和转移十分常见。本实验以慢病毒介导miR-148a,感染人肝癌SMMC-7721细胞,观察其对SMMC-7721细胞侵袭和迁移能力的影响。方法：选用SMMC-7721肝癌细胞株,进行miR-148a慢病毒载体的构建,筛选稳定表达miR-148a肝癌细胞株。RTPCR检测细胞中miR-148a的表达水平。划痕实验及Transwell侵袭实验检测细胞侵袭迁移能力。采用明胶酶谱法测定MMP-2、MMP-9的活性。蛋白质印迹法(Western blot)检测MMP-2、MMP-9和EMT相关蛋白(E-cadherin、vimentin)的表达情况。结果：RT-PCR结果显示,和对照组相比,LV-miR-148a肝癌细胞感染组表达miR-148a明显增高,体外侵袭实验细胞划痕实验显示过表达miR-148a后SMMC-7721的侵袭和迁移能力明显下降。明胶酶谱法结果显示过表达miR-148a的肝癌细胞,MMP-2和MMP-9降解明胶的能力下降(P<0.05)。过表达miR-148a同时能降低肝癌细胞SMMC-7721中vimentin、MMP-2和MMP-9蛋白的表达,但并未影响E-cadherin的表达。结论：miR-148a在体外能抑制肝癌细胞SMMC-7721的侵袭和迁移,其机制可能与下调MMP-2、MMP-9和vimentin的表达水平有关。     

LncRNA AFAP1-AS1对食管鳞癌细胞株EC9706转移潜能影响机制探讨

目的 食管癌是常见的消化道肿瘤,其细胞侵袭与迁移机制尚不清楚.本研究旨在探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA) AFAP1-AS1对食管鳞癌细胞株EC9706侵袭及迁移能力的影响及可能的作用机制.方法 构建AFAP1-AS1真核表达载体,用脂质体2000将pcDNA3.1-AFAP1-AS1表达载体及pcDNA3.1空载体转染食管癌细胞EC9706.通过G418筛选,建立稳定表达AFAP1-AS1 RNA的EC9706-AFAP1-AS1细胞系.Millicell小室检测2株细胞侵袭及迁移能力的变化,Real-time PCR法检测2株细胞中血管内皮生长因子C(vascular endothelialgrowth factor C,VEGF-C)及Artemin的mRNA表达情况,蛋白质印迹法检测2株细胞中VEGF-C及Artemin蛋白表达的变化.结果 成功构建稳定表达AFAP1-AS1的EC9706细胞系,过表达AFAP1-AS1后,EC9706细胞的迁移(数据分布符合正态分布,SW1=0.912,SW2=0.878,均P＞0.05;两组间均值差异有统计学意义,t=0.002,P＜0.001)及侵袭(数据分布符合正态分布,SW1=0.945,SW2=0.972,均P＞0.05;两组间均值差异有统计学意义,t=0.02,P＜0.001)能力均增加,VEGF-C(数据分布符合正态分布,SW1=0.931,SW2=0.922,均P＞0.05;两组间均值差异无统计学意义,t=0.14,P＞0.05)和Artemin(数据分布符合正态分布,SW1 =0.964,SW2=0.981,均P＞0.05;两组间均值差异无统计学意义,t=0.29,P＞0.05)的mRNA表达差异无统计学意义,但VEGF-C(数据分布符合正态分布,SW1=0.762,SW2=0.82,均P＞0.05;两组间均值差异有统计学意义,t=0.005,P＜0.001)及Artemin(数据分布符合正态分布,SW1 =0.892,SW2=0.853,均P＞0.05;两组间均值差异有统计学意义,￡=0.004,P＜0.001)的蛋白表达明显增加.结论 AFAP1-AS1可能通过增加EC9706细胞中VEGF-C及Artemin的蛋白表达来增强其侵袭及迁移能力,在食管癌侵袭及进展中发挥作用.     

沉默VEGF对人鼻咽癌放射抗拒细胞株CNE-2R侵袭迁移的影响

目的 探讨沉默血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）对人鼻咽癌放射抗拒细胞株CNE-2R迁移和侵袭能力的影响。方法 制备含VEGF-shRNA的慢病毒载体（VEGF-LV1、VEGF-LV2、VEGF-LV3）和对照shRNA重组慢病毒（VEGF-NC）,并转染人鼻咽癌放射抗拒细胞株CNE-2R,建立稳定沉默VEGF细胞（CNE-LV1、CNE-LV2和CNE-LV3）和阴性对照细胞（CNE-NC）。采用RT-qPCR和Western blot法检测细胞转染效果,划痕实验和Transwell小室实验检测VEGF沉默后细胞的迁移和侵袭能力。结果 成功构建VEGF-shRNA重组慢病毒并建立了稳定沉默VEGF细胞CNE-LV3。划痕实验和Transwell小室迁移实验显示,与空白对照组和CNE-NC组相比,CNE-LV3组细胞迁移率明显降低［（50.17±1.76）% vs （37.97±1.56）%,P＝0.001;（50.63±1.52）% vs （37.97±1.56）%,P＝0.001］,穿膜细胞数亦明显下降［（95.3±3.8） 个 vs （41.3±1.5） 个,P＜0.001;（94.3±4.0） 个 vs （41.3±1.5） 个,P＜0.001］;Transwell小室侵袭实验结果亦显示,CNE-LV3组细胞穿膜细胞数较空白对照组和CNE-NC组明显下降［（46.3±2.1） 个 vs（105.3±1.5） 个,P＜1.001;（46.3±2.1） 个 vs （93.3±2.5） 个,P＜0.001］。结论 沉默VEGF表达可抑制人鼻咽癌放射抗拒细胞株CNE-2R的迁移和侵袭能力。     

瘦素促进人肝癌细胞侵袭性生长的体外研究

目的：观察瘦素（leptin）对人肝癌细胞Huh7生长和侵袭的影响，并初步探讨其可能的机制。方法：培养人肝癌细胞Huh7，在不同浓度的瘦素作用不同时间后，以四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞增殖能力，流式细胞仪检测细胞周期；用Transwell小室检测瘦素（100ng／mL）作用24h后对Huh7细胞侵袭能力的影响，并用实时荧光定量PCR分析瘦素对基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）mRNA的影响。结果：瘦素可以促进Huh7细胞的增殖（P〈0．05或P〈0．01），存在一定的剂量依赖性；流式细胞仪检测结果显示，瘦素能明显降低G0／G1期细胞比例并提高S期细胞比例（P〈0．05或P〈0．01）；瘦素（100ng／mL）处理24h后，Huh7细胞穿透聚碳酸酯膜的能力比对照组显著增强（P〈0．01）；实时荧光定量PCR检测发现，MMP-2和MMP-9 mRNA表达量分别增高至对照组的4．25和2．73倍（P〈0．01）。结论：瘦素可以明显提高人肝癌细胞Huh7的增殖和侵袭力，瘦素提高其侵袭力的作用机制可能与MMP水平的增高有关。     

肝癌Huh7干细胞样细胞的富集培养及鉴定

目的：建立一种体外有效富集、培养和鉴定具有肝癌干细胞特征的细胞亚群的方法。方法：采用成球培养法利用肿瘤干细胞样细胞（cancer stem cell, CSC）分化培养基对肝癌Huh7细胞进行富集培养,获得的干细胞样细胞于体外进一步扩增获得肝癌干细胞球。流式细胞术检测Huh7干细胞样细胞表面肿瘤干细胞标志物EpCAM、CD90和CD133的表达,平板克隆集落形成实验和裸鼠成瘤实验分别检测Huh7细胞和Huh7干细胞样细胞的克隆集落形成能力、体内成瘤能力。结果：Huh7细胞成球培养3~7 d后即可形成肝癌干细胞样细胞球,获得的干细胞样细胞具有自我更新和增殖能力,其EpCAM阳性细胞比例较Huh7细胞明显增加\[（99.6%±0.31）% vs（0.12%±0.05）%,P<0.01\],但两种细胞CD90\[(0.11%±0.06)% vs (0.09%±0.07)%, P>0.05\]和CD133\[(0.17%±0.08)% vs (0.15%±0.05)%, P>0.05]表达差异无统计学意义。Huh7干细胞样细胞克隆集落形成数量明显多于Huh7细胞\[（188.67±12.5）vs （79±16.7）个,P<0.01\];当接种量为5×104个细胞时,与接种Huh7细胞的对照裸鼠相比,接种Huh7干细胞样细胞的裸鼠成瘤时间更短（11 vs 30 d）,成瘤率更高（100% vs 16.67%）;接种5×105数量级的细胞时,实验组成瘤体积\[（171.90±10.94）vs（86.39±11.21）mm3, P<0.01\]和瘤体质量\[（2.98±0.82）vs（0.32±0.17）g, P<0.01\]均明显大于对照组。结论：利用成球培养法能够从Huh7肝癌细胞系中富集培养获得Huh7肝癌干细胞,其具有比Huh7细胞更强的成瘤能力。     

转录水平RNA干扰肝素酶基因对肝癌细胞侵袭能力的影响

目的 探讨转录水平基因沉默（TGS）技术和转录后水平基因沉默（PTGS）技术对肝素酶（HPA）基因干扰效果及其对肝癌SMCC-7721细胞侵袭能力的影响。方法 从HPA基因启动子区和编码区分别设计并合成TGS和PTGS的小干扰RNA（siRNA）,并转染肝癌细胞SMMC-7721;实时半定量PCR和Western blotting检测TGS和PTGS siRNA转染后48、72和96h HPA的表达,并设空白组作为对照;Transwell小室实验检测干扰后SMMC-7721细胞的侵袭能力。结果 TGS和PTGS两种技术在转染48h后,从mRNA和蛋白水平上均能成功干扰HPA表达;转染后72h,PTGS组HPA恢复表达,而TGS组仍保持沉默;转染后96h,两组HPA均恢复表达。Transwell小室实验表明,TGS和PTGS组HPA基因均能使SMCC-7721的穿膜细胞数减少,TGS组效果更明显。结论 TGS技术沉默肝癌SMMC-7721细胞中HPA基因的能力优于PTGS技术,并使肝癌细胞的侵袭能力显著降低。