半乳糖凝集素3对食管癌Eca109细胞增殖和转移的影响

目的 探讨半乳糖凝集素3（Gal3）对食管癌Eca109细胞增殖和转移的影响.方法 构建合成Gal3过表达慢病毒质粒转染食管癌Eca109细胞,应用倒置显微镜观察Gal3的过表达质粒转染食管癌细胞后荧光表达;CCK-8法检测转染前后细胞增殖能力的变化;用流式细胞术检测转染组细胞和未转染组细胞凋亡率.Transwell方法检测转染前后细胞迁移能力变化;用Western印迹检测Gal3转染前后在食管癌中表达水平变化.结果 Western印迹结果显示Gal3在食管癌细胞中表达,在Eca109/Gal3组中表达水平明显升高（t=14.33,P=0.013;t=10.28,P=0.037）.CCK-8法检测发现转染后细胞增殖能力明显升高（t=-17.277,P＜0.05;t=-13.4,P＜0.05）,流式细胞仪以Annexin-V/7-AAD双标法显示Eca109/Gal3组凋亡率明显下降（t=3.053,P＜0.05;=5.446,P＜0.05）.Transwell实验结果,Eca109/Gal3组细胞转移率高于未转染组（t=3.465,P＜0.05;t=3.252,P＜0.05）.结论 Gal3在食管癌细胞中有表达,并且其过表达能显著增强食管癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力,明显抑制细胞的凋亡,深入研究Gal3可能为食管癌的治疗提供一种新的靶点.     

FAM83H在食管鳞癌中的表达及对癌细胞生物学行为的影响

背景与目的：食管鳞癌是常见的消化道恶性肿瘤，基因异常表达参与食管鳞癌的恶性生物学行为。探讨转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）诱导的FAM83H在食管鳞癌组织中的表达水平，以及其表达水平与临床病理学参数之间的关系，初步研究FAM83H对食管癌细胞生物学行为的影响。方法：用TGF-β1处理食管癌细胞Eca109后，在倒置显微镜下观察Eca109细胞形态学的变化。应用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR）检测TGF-β1处理前后食管癌细胞中上皮-间充质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）相关标志物以及FAM83H表达水平的变化。应用RTFQ-PCR检测FAM83H在不同食管癌细胞系、67例2015—2017年河北医科大学第四医院生物样本库收集的食管鳞癌组织及癌旁正常组织中的表达情况，并分析其表达水平与临床病理学参数之间的关系。应用MTS实验以及transwell小室迁移、侵袭实验检测FAM83H在体外对食管癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。结果：TGF-β1处理后，Eca109细胞的形态变为细长梭形、纺锤形，呈现出明显的间充质细胞形态；Eca109细胞中E-cadherin表达水平降低，而N-cadherin、vimentin、Snail、Twist 1表达水平均显著升高（P<0.05）。同时，TGF-β1处理后，FAM83H表达水平上调（P<0.01）。FAM83H在食管鳞癌组织中表达升高（P<0.05），与食管鳞癌患者病理学分化程度相关（P<0.05）。FAM83H在食管癌细胞系中表达升高（P<0.01）。转染针对FAM83H的小干扰RNA后，可以显著抑制FAM83H的表达水平（P<0.05）。在体外FAM83H促进食管癌细胞的增殖、迁移及侵袭（P<0.05）。结论：TGF-β1诱导EMT过程以及FAM83H表达，FAM83H表达水平升高可能与食管鳞癌的发生、发展相关，且在体外促进食管癌细胞的增殖、迁移及侵袭。     

FOXC2对人食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及相关机制研究

目的: 探讨叉头框（FOX）C2对食管癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响及机制。方法: 选择人食管癌细胞CaES-17，Eca-109，TE13及人食管上皮细胞（HEEC），选择FOXC2较高表达的食管癌细胞（CaES-17）作为转染细胞，设siRNA FOXC2组、pcDNA-FOXC2组及未转染组和转染阴性对照组。采用qRT-PCR检测细胞FOXC2表达；CCK-8检测细胞增殖；划痕实验检测细胞迁移能力；Transwell小室实验检测细胞侵袭能力；WB检测MMP2、MMP9、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Snail、Wnt3a、β-catenin、p-β-catenin的蛋白表达水平。结果: 食管癌细胞FOXC2蛋白表达明显高于食管上皮细胞；与对照组相比，上调FOXC2表达可使MMP9、Snail表达明显升高，下调FOXC2表达可抑制食管癌细胞增殖，并抑制食管癌细胞的迁移和侵袭能力及降低Wnt3a蛋白表达。结论: 下调FOXC2抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭能力，作用机制可能与调控MMP-9、Snail水平及Wnt/β-catenin通路有关。     

miR-515-5p通过靶向HDAC2影响食管癌发生发展的分子机制

目的：探讨miR-515-5p对食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法：选取2020年6月至2020年12月在河北医科大学第四医院手术切除的60例食管癌患者的癌组织标本和20例健康成人的食管上皮组织标本,以及食管癌细胞TE1、Eca109、KYSE30和KYSE170,用 qPCR 法检测食管癌组织和细胞中 miR-515-5p 的表达水平。在Eca109细胞中转染miR-515-5p模拟物以及其阴性对照物、在TE1细胞中转染miR-515-5p抑制剂以及其阴性对照物,qPCR法检测转染效率,用CCK-8法、Transwell实验分别检测转染细胞的增殖、迁移及侵袭能力。采用生物信息学方法分析预测miR-515-5p的下游靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证组蛋白去乙酰化酶2（histone deacetylase 2,HDAC2）为miR-515-5p的靶基因。应用GEPIA和TCGA数据集分析HDAC2在食管癌组织中的表达及其与患者临床特征的关系。结果：miR-515-5p在食管癌组织及细胞中表达降低（均P<0.01）。过表达miR-515-5p抑制食管癌Eca109细胞的增殖、迁移和侵袭能力（P<0.05或P<0.01）,而敲低miR-515-5p 表达则可增强食管癌 TE1 细胞的增殖、侵袭和迁移能力（均P<0.05）。双荧光素酶报告基因分析证明,HDAC2是miR-515-5p的靶基因。qPCR和WB实验结果显示,miR-515-5p对HDAC2 mRNA和蛋白表达具有负调控作用。挽救实验证实miR-515-5P通过靶向HDAC2抑制食管癌Eca109细胞的增殖、迁移和侵袭能力（P<0.05或P<0.01）。结论：miR-515-5p通过靶向HDAC2影响食管癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

长链非编码RNAXLOC_005009对食管鳞状细胞癌生物学特性的影响

目的:探讨长链非编码RNA XLOC_005009基因对食管鳞状细胞癌(ESCC)的体外增殖、迁移、侵袭和细胞周期与细胞凋亡等生物学特性的影响.方法:收集2015-2016年河北医科大学第四医院肿瘤研究所57例ESCC患者手术切除的癌组织及癌旁组织标本.应用实时荧光定量PCR检测XLOC_005009基因在人ESCC细胞系Eca 109、Kyse 170与ESCC组织及其癌旁组织的表达,构建pcDNA3.1-XLOC_005009过表达质粒并转染Eca109、Kyse170细胞,应用MTS法、克隆形成实验、划痕实验、Transwell小室、流式细胞术分别检测转染前后细胞增殖、克隆形成、迁移、侵袭、细胞周期与凋亡的变化.结果:XLOC 005009 mRNA在食管癌组织中的表达明显低于癌旁组织(0.06±0.06 vs 0.21±0.19,P＜0.05),且食管癌细胞XLOC 005009 mRNA表达亦均低于对照组(P＜0.05).转染过表达质粒的Eca109和Kyse 170细胞XLOC_005009基因表达显著高于对照组(Eca109细胞:039±0.17 vs0.02±0.00;Kyse170细胞:0.35±0.08 vs 0.01±0.01,均P＜0.05).与对照组相比,XLOC_005009基因过表达Eca 109和Kyse170细胞增殖能力细胞显著减弱(P＜0.05);克隆形成率显著减少(P＜0.05);穿膜细胞数显著减少[Eca109细胞:(146.40±34.47) vs(193.00±26.33);Kyse170细胞:(157.80±32.51)vs (269.00±29.89),均P＜0.05];Eca109细胞迁移率无显著变化,Kyse170细胞迁移率明显减小(P＜0.05);S期细胞比例增加,细胞凋亡影响不明显.结论:XLOC_005009低表达与食管癌的发生发展密切相关,XLOC_005009过表达可抑制食管癌细胞的体外增殖、侵袭与迁移能力.     

LRRC3B对食管癌细胞Eca109迁移、侵袭及PI3K/Akt信号通路的影响

背景与目的:先前的研究已经证实富含亮氨酸重复序列3B蛋白(leucine-rich repeat-containing 3B,LRRC3B)在多种癌症中低表达,并且与癌细胞的迁移侵袭密切相关.该研究旨在探讨LRRC3B在食管癌发展中的作用机制.方法:免疫组织化学染色检测LRRC3B在60例食管癌组织及60例癌旁组织中的表达情况,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白[质]印迹法(Western blot)分别检测食管癌细胞Eca109和食管正常上皮细胞系HEEC中LRRC3B的mRNA和蛋白表达.处理食管癌细胞Eca109并分3组:正常对照组、阴性对照组(转染对照空pCMV6质粒)和过表达LRRC3B组(转染pCMV6-LRRC3B过表达质粒).采用Transwell法检测各组Eca109细胞迁移和侵袭的变化.采用Western blot检测各组细胞中上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白E-cadherin、N-cadherin和Vimentin表达以及p-Akt蛋白水平.结果:LRRC3B在食管癌组织和细胞中的表达明显低于癌旁组织和食管正常上皮细胞.过表达LRRC3B明显抑制Eca109细胞的迁移和侵袭能力,上调上皮因子E-cadherin表达,抑制间质标志物N-cadherin和Vimentin表达,同时降低细胞内p-Akt水平.结论:LRRC3B在食管癌中低表达,上调LRRC3B能够抑制食管癌细胞的EMT过程,可能与抑制PI3K/Akt信号通路有关.     

PTPN6 基因对人食管鳞状细胞癌Eca109 和Yes-2 细胞恶性生物学行为的影响

[摘要] 目的：探讨非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶6（non-receptor protein tyrosine phosphatase 6,PTPN6）基因在不同食管鳞状细胞癌细胞株中的表达及其对Eca109、Yes-2 细胞恶性生物学行为的影响。方法：应用qPCR 法检测不同食管鳞癌细胞株（TE1、Eca109、Kyse150、Kyse170、Yes-2）中PTPN6 mRNA的表达水平,以pcDNA3.1-PTPN6 质粒分别瞬时转染食管鳞癌细胞株Eca109和Yes-2,应用qPCR和Wb法检测PTPN6 mRNA和蛋白的表达水平,并应用MTS、克隆形成实验、划痕实验和Transwell 法检测过表达PTPN6 基因对食管鳞癌细胞恶性生物学行为的影响。结果：PTPN6 基因在5 种食管鳞癌细胞侏中表达均明显下调（均P<0.05）。与转染空载体的对照组相比,经pcDNA3.1-PTPN6 转染后,Eca109 和Yes-2 细胞均高水平表达PTPN6（P<0.05 或P<0.01）;过表达PTPN6 基因后,Eca109 和Yes-2 细胞的增殖、迁移和侵袭能力均明显被抑制（均P<0.05）。结论：PTPN6 基因高表达能抑制食管鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其可能是影响食管鳞癌细胞生物学特性的一个重要因素。     

双反义腺病毒载体Ad—ODC—AdoMetDOas对食管癌细胞凋亡及抑制细胞生长影响的研究

目的：探讨双反义腺病毒载体（Ad—ODC—AdoMetDCas）对食管癌Eca109细胞凋亡作用及抑制细胞生长的影响。方法：应用M1Tr法测定不同MOI的腺病毒对肺癌Eca109细胞的基因转染效率，观察Ad—ODC—AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞生长增殖的影响；采用Western印迹和HPLC的方法分别检测腺病毒载体对食管癌Eca109细胞中ODC和AdoMetDC蛋白表达以及胞内多胺含量的抑制作用，采用流式细胞术检测腺病毒介导的鸟氨酸脱羧酶反义RNA（Ad—ODCas）和Ad—ODC—AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞周期分布的影响，同时应用原位末端标记（TUNEL）法观察Ad—ODC—AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞凋亡作用的影响。结果：MTT法实验表明，Ad—ODC—AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞生长增殖有显著抑制作用（P〈0．05）。以Ad—ODC—AdoMetDCas感染食管癌Eca109细胞，可明显抑制食管癌Eca109细胞中ODC和AdoMetDC基因表达（P〈0．05）。流式细胞术结果显示感染了Ad—ODC—AdoMetDCas的食管癌Eca109细胞周期阻滞在G。期。HPLC结果显示，食管癌Eca109细胞感染Ad—ODC—AdoMetDCas后，细胞内3种多胺含量均明显降低（P〈0．05）。TUNEL标记检测结果显示，Ad—ODC—AdoMet—DCas可明显引起食管癌Eca109细胞凋亡（P〈0．05）。结论：Ad—ODC—AdoMetDCas能显著抑制食管癌细胞生长，促进细胞凋亡，为探讨食管癌基因治疗的可行性提供实验依据。     

miR-495通过抑制RNF113A的表达调控食管鳞癌细胞恶性表型

目的：探讨微小RNA-495(miR-495)对食管鳞癌细胞恶性表型的影响及分子机制。方法：在食管鳞癌细胞Eca109中转染miR-495模拟物、miR-495抑制剂及相应的随机对照序列，分别采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测miR-495的表达，CCK-8试剂盒检测细胞增殖能力，流式细胞术检测细胞周期及凋亡率变化，Transwell实验检测细胞的侵袭和迁移情况，并用qPCR和Western blot检测下游靶基因RNF113A mRNA和蛋白的表达。结果：与对照组比较，转染miR-495模拟物组Eca109细胞中miR-495 mRNA水平显著升高(P<0.05)，转染miR-495抑制剂组Eca109细胞中miR-495 mRNA水平显著降低(P<0.05)；各组间细胞增殖能力无显著变化(P>0.05)；与对照组比较，转染miR-495模拟物组细胞凋亡增多(P<0.01)，迁移和侵袭能力下降(P<0.01)，细胞被阻滞在G0/G1期(P<0.01)；转染miR-495抑制剂组细胞凋亡减少(P<0.01)，迁移和侵袭能力升高(P<0...     

IL-27基因转染人食管癌细胞诱导PBMC产生IFN-γ和IL-12的研究

目的：探讨小鼠白介素（mIL-27）基因转染人食管癌细胞株诱导正常人外周血单个核细胞（PBMC）产生IFN-γ和IL-12的作用。方法：以逆转录病毒作为载体，将mIL-27基因转染入人食管癌细胞株Ecal09获得表达mIL-27的阳性细胞克隆（Eca109／mIL-27），RT-PCR检测目的基因的表达，用MTT法检测转基因mIL-27对细胞增殖的影响，用EUSA法检测其诱导正常人PBMC产生IFN-γ和IL-12的能力。结果：建立了表达mIL-27基因的人食管癌细胞株，Eca109／mIL-27细胞中有mIL-27p28和EBI3亚基基因表达，而Eca109／LXSN和Eca109细胞中未见表达，P〈0．01；Eca109／mIL-27与Eca109／LXSN和Eca109体外的体外增殖差异无统计学意义，P〉0．05；Eca109／mIL-27诱导正常人PB—MC产生IFN-γ和IL-12的含量高于Eca109／LXSN和Eca109，P〈0．01。结论：IL-27基因转染人食管癌细胞后可以诱导PBMC产生IFN-γ和IL-12的能力提高，提示可以用于肿瘤的免疫治疗。     

lncRNA NUP50-AS1 在食管鳞癌组织中的表达及其对Eca109 细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨长链非编码RNA（long non-coding RNA, lncRNA）NUP50-AS1 在食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell cancer, ESCC）组织及细胞株中的表达及其对人食管癌Eca109 细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法：选取自2015 年1 月至2016 年12 月河北医科大学第四医院生物标本库的49 例ESCC手术患者的癌组织和相应癌旁组织,qRT-PCR检测ESCC癌组织、癌旁组织及5 种食管癌细胞株（TE1、TE13、Eca109、Kyse150 和Kyse170）中NUP50-AS1 表达水平。shRNA 转染NUP50-AS1 后,选用sh2 -NUP50-AS1 进行后续功能实验。采用MTS法、克隆形成实验检测敲减NUP50-AS1 表达对Eca109 细胞增殖的影响,划痕实验检测敲减NUP50-AS1 表达对细胞迁移的影响,Transwell 小室实验检测敲减NUP50-AS1 表达对细胞侵袭的影响。结果：NUP50-AS1 在ESCC组织中的相对表达量显著高于癌旁组织(2.003±0.870 vs 1.000±0.000,P<0.05）;NUP50-AS1 在ESCC组织中的表达水平与淋巴结转移及TNM分期相关（均P<0.01）,NUP50-AS1 在5 株食管癌细胞系中相对表达量均明显上调（P<0.05）,其中Eca109 细胞的NUP50-AS1 表达水平最高。转染后,sh2-NUP50-AS1 转染组干扰效率最高,敲低NUP50-AS1 可明显抑制Eca109 细胞增殖、迁移和侵袭能力。结论：ESCC组织中lncRNA NUP50-AS1 表达明显高于癌旁组织,且与癌症分期和淋巴结转移有关,敲减其表达明显抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,NUP50-AS1 的高表达可能与ESCC的发生发展密切相关。     

SRSF1通过调控VEGFA mRNA可变剪接促进食管鳞状细胞癌Eca9706细胞增殖、侵袭和迁移

背景与目的:丝氨酸/精氨酸富集剪接因子1(serine/arginine-rich splicing factor 1,SRSF1)与肿瘤的发生、发展密切相关.食管癌是常见的消化系统恶性肿瘤,但SRSF1在食管癌中的作用罕有报道.检测SRSF1在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carc...     

钠尿肽受体A在食管鳞状细胞癌中的表达及对食管癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的探讨钠尿肽受体A(NPRA)在食管鳞状细胞癌中的表达及其对食管癌细胞迁移和侵袭的影响。方法采用免疫组织化学染色法检测119例食管鳞状细胞癌组织和91例癌旁组织中NPRA的表达情况,并分析食管鳞状细胞癌组织中NPRA表达情况与患者临床特征及预后的关系。采用蛋白质印迹法(Western blot)检测食管癌细胞株Eca109、TE-1以及正常食管上皮细胞株Het-1A中NPRA的表达情况,采用短发夹RNA(shRNA)沉默食管癌细胞株Eca109细胞中NPRA基因表达,应用Transwell小室实验分析其对Eca109细胞迁移和侵袭的影响。结果 NPRA在食管鳞状细胞癌组织中的高表达率为69.7%(83/119),明显高于癌旁组织的27.5%(25/91),差异有统计学意义(P﹤0.01)。分化程度为G2~G3级、TNM分期为Ⅱ~Ⅲ期的食管鳞状细胞癌患者食管鳞状细胞癌组织中NPRA的高表达率分别明显高于分化程度为G1级、TNM分期为Ⅰ期的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。NPRA低表达患者的5年生存情况优于NPRA高表达患者,差异有统计学意义(P﹤0.05)。食管癌细胞株Eca109、TE-1中NPRA的表达水平均高于正常食管上皮细胞株Het-1A,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。shRNA沉默食管癌细胞株Eca109中NPRA基因的表达后,肿瘤细胞的迁移和侵袭能力明显降低。结论 NPRA在食管鳞状细胞癌组织中表达水平较高,且其高表达与肿瘤的TNM分期、分化程度以及预后密切相关,同时可以促进食管癌细胞的迁移与侵袭。     

原花青素对食管癌细胞增殖及糖酵解的影响及作用机制研究

目的 探讨原花青素对食管癌细胞株细胞增殖及糖酵解的影响及作用机制.方法 采用0、60、120、180、240、300 μmol/L的原花青素作用于食管癌细胞株OE33、CP-C、Eca109后,噻唑蓝检测细胞存活情况,计算半数抑制浓度,筛选增殖抑制作用最大的Eca109细胞继续研究.用半数抑制浓度的原花青素作用于Eca109细胞后,分别用试剂盒检测三磷酸腺苷(ATP)含量、丙酮酸激酶活性、己糖激酶活性及上清中乳酸含量,Western blot法检测蛋白激酶B(Akt)、磷酸化的Akt(p-Akt)、信号转导与转录因子3(STAT3)、磷酸化的STAT3(p-STAT3)的表达水平.结果 原花青素能够呈浓度依赖地抑制食管癌细胞株OE33、CP-C、Eca109的增殖,其半数浓度依次为(285.48±3.58)μmol/L、(291.00±3.36)μmol/L、(237.95±4.91)μmol/L,其对Eca109细胞增殖抑制作用最大,后续选用240 μmol/L的原花青素作用于Eca109细胞.240 μmol/L原花青素作用后,Eca109细胞的ATP含量、丙酮酸激酶活性、己糖激酶活性和分泌的乳酸水平均较0 μmol/L组降低(P﹤0.05),p-Akt、p-STAT3水平也较0 μmol/L组降(P﹤0.05).结论 原花青素能够抑制食管癌细胞增殖,影响食管癌细胞糖酵解途径,Akt、STAT3信号通路可能是其作用机制之一.     

拓扑替康对食管癌细胞株Eca-109的放射增敏作用及机制

目的：研究拓扑替康（topotecan,TPT）对人食管癌细胞株Eca-109的放射增敏作用及机制。方法：MTT法检测TPT对Eca-109细胞增殖抑制作用,克隆形成实验检测TPT对Eca-109的放射增敏效应;单击多靶模型拟合细胞存活曲线并计算放射增敏比。相差显微镜观察肿瘤细胞形态学改变,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率。结果：TPT对Eca-109细胞有增殖抑制作用,且呈时间-剂量依赖性,10、20、40mg／L TPT的放射增敏比分别为1．22、1．29、1．36;增敏组凋亡率、G2／M期细胞比例较对照组增多（P〈0．05）。结论：TPT对食管癌细胞系Eca-109有放射增敏作用,其机制可能与促进细胞凋亡及引起G2／M期阻滞有关。     

miR-21沉默下调β-catenin表达对食管癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨miR-21沉默对食管癌细胞增殖和凋亡的影响及其与β-catenin表达的关系。方法:通过脂质体转染法沉默食管癌Eca9706细胞株中的miR-21,采用荧光定量（RT-PCR）检测miR-21、β-catenin mRNA的相对表达水平;蛋白质印迹法（Western blot）检测β-catenin蛋白的相对表达水平。MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期。结果:转染48 h后,与对照组和NC组相比,miR-21组Eca9706细胞中miR-21、β-catenin mRNA和β-catenin蛋白的相对表达水平均明显降低。MTT检测miR-21组细胞的光密度值（OD值）较对照组和NC组明显下降。与NC组和对照组相比,流式细胞仪检测miR-21组中细胞的凋亡率明显上升,G0/G1期细胞所占比例明显升高,S期细胞所占比例明显下降。结论:沉默miR-21能够通过下调β-catenin的表达来抑制食管癌Eca9706细胞增殖及诱导其凋亡。