microRNA-155在食管癌中的表达及其对食管癌细胞增殖凋亡的影响

目的 探讨miRNA-155在食管癌中的表达及其对食管癌EC9706细胞增殖及凋亡的影响.方法 采用TaqMan探针实时定量PCR(qRT-PCR)方法检测50例食管癌患者中新鲜食管癌组织和其相应癌旁正常组织中miRNA-155的表达情况;使用脂质体LipofectamineTM2000转染EC9706细胞上调miRNA-155的表达,利用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测转染后细胞的增殖变化,流式细胞仪检测其细胞凋亡率的变化.结果 食管癌组织中miRNA-155的表达水平明显低于与其相应的癌旁正常组织(P=0.000);转染miRNA-155后,miRNA-155转染组EC9706细胞中miRNA-155的表达水平高于对照组和NC组(P﹤0.05);细胞的增殖明显受到抑制,且细胞的凋亡率明显升高.结论 miRNA-155在食管癌组织中呈低表达,上调其表达能够明显抑制食管癌EC9706细胞增殖和诱导其凋亡.     

miRNA-4686通过靶向PDIA4影响食管癌细胞增殖和迁移

目的探讨miRNA-4686(miR-4686)和蛋白质二硫键异构酶A4(PDIA4)在食管癌组织和细胞中的表达, 以及miR-4686体外对食管癌细胞增殖和迁移能力的影响及可能机制。方法采用miRWalk version 3在线网站预测到miR-4686与PDIA4 mRNA互补结合。利用从加州大学圣克鲁兹分校基因组(UCSC)数据库获得的miR-4686和PDIA4 mRNA的表达谱, 分析食管癌组织和癌旁组织中miR-4686和PDIA4 mRNA相对表达量。从UCSC数据库获得miR-4686在人体细胞中的定位。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测食管癌细胞Eca109、TE-13、EC9706、KYSE-510与正常食管上皮细胞HET-1A中miR-4686和PDIA4 mRNA的相对表达量。选择miR-4686相对表达量最低的Eca109细胞进行后续研究。将Eca109细胞分为miR-4686组(转染miR-4686模拟物)和miR-NC组(转染miR-4686阴性对照序列模拟物)。通过克隆形成实验检测两组Eca109细胞增殖能力, 划痕愈合实验检测Eca10...     

Survivin反义寡核苷酸抑制EC9706细胞增殖并诱导细胞凋亡

目的 观察Sunrivin反义寡核苷酸(ASODN)对人食管癌细胞系EC9706细胞增殖和凋亡的影响.方法 人工合成Survivin基因反义和正义ODN,并进行硫代磷酸化修饰,通过脂质体途径分别转染 EC9706 细胞;应用 RT-PCR 和 Western Blot 检测 SurvivinmRNA和蛋白表达;应用MTT法检测 Survivin ASODN 对 EC9706 细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞周期变化及细胞凋亡比率.结果 体外培养的 EC9706 细胞可表达较强的 Survivin mRNA 和蛋白;Survivin ASODN 可呈浓度依赖性地抑制 Survivin mRNA 和蛋白表达,50μmoL/L ASODN 几乎可以完全抑制.MTT 研究结果表明,Survivin ASODN 可呈浓度依赖性地抑制 EC9706 细胞增殖,50μmol/L ASODN 对细胞生长的抑制率可达78.5%,诱导细胞凋亡,使细胞阻滞于G2/M 期.Survivin SODN 对 Survivin mRNA 和蛋白以及 EC9706 细胞的增殖和细胞周期无明显的抑制作用.结论 脂质体介导转染 Survivin 反义寡核苷酸可抑制细胞增殖、诱导细胞G2/M 期阻滞而促进细胞凋亡.     

干扰GTPBP4基因对食管癌EC9706细胞放射敏感性影响

目的 探讨沉默GTPBP4基因对人食管癌EC9706细胞系放射敏感性影响。方法 通过GEO数据库分析食管癌患者组织中GTPBP4的表达情况。利用重组质粒载体介导的RNA干扰(RNAi)技术转染食管癌EC9706细胞系,使细胞中GTPBP4基因沉默,观察GTPBP4基因沉默对EC9706细胞增殖、凋亡及放射敏感性影响。通过qRT-PCR和蛋白质印迹法评估基因沉默效果及检测凋亡相关蛋白表达。应用MTT法检测转染后细胞的增殖变化。采用流式细胞术检测干扰GTPBP4基因表达后细胞凋亡变化。应用克隆形成实验检测细胞照射后放射敏感性变化。结果 GEO数据库分析表明GTPBP4基因在人食管癌组织中的表达明显高于正常邻近食管组织(P<0.001)。与空白对照组和阴性对照组相比,干扰组EC9706细胞的GTPBP4 mRNA及蛋白表达水平明显下降(均 P<0.001),表明质粒成功转染EC9706细胞。MTT检测结果显示干扰组EC9706细胞增殖率受到显著抑制(P<0.001)。流式细胞术结果显示干扰组EC9706细胞凋亡率明显升高(P<0.001),细胞凋亡明显增加(P<0.001);凋亡相关蛋白(Cleaved caspase-9、Cleaved caspase-3、Bax)表达明显升高,抗凋亡蛋白(Bcl-2)表达下降(P<0.001、P=0.001、P=0.0014、P=0.005)。克隆形成实验结果显示干扰组EC9706细胞放射增敏比1.716。结论 GTPBP4基因在人食管癌组织中高表达,RNAi技术可有效抑制EC9706细胞GTPBP4基因表达,从而抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡、增强细胞对放射线的敏感性。     

基于miR-152-3p/Wnt轴辣椒素对乳腺癌他莫昔芬耐药细胞株LCC9耐药的作用机制

目的 探讨辣椒素对乳腺癌他莫西芬耐药细胞株LCC9耐药性的影响及其具体机制。方法 不同浓度辣椒素处理LCC9细胞，CCK8法检测细胞存活率，qRT-PCR检测MCF-7和LCC9细胞中miR-152-3p和Wnt1 mRNA相对表达水平。将LCC9细胞分为对照组、inhibitor NC组(转染inhibitor NC)、inhibitor组(转染miR-152-3p inhibitor)、inhibitor+辣椒素组(转染miR-152-3p inhibitor 24 h后，200μmol/L辣椒素处理),CCK8法检测细胞存活率、qRT-PCR检测miR-152-3p相对表达水平、流式细胞仪检测细胞凋亡率、双荧光素酶报告基因法检测miR-152-3p与Wnt的靶向关系、蛋白印迹法检测β-连环蛋白(β-catenin)和T细胞因子4(TCF4)蛋白相对表达量。结果 细胞存活率随辣椒素浓度的升高而降低(P<0.05)。LCC9细胞中miR-152-3p表达较MCF-7细胞降低，Wnt1 mRNA水平较MCF-7细胞升高(P<0.05)。与inhibitor NC组比较，in...     

miR-495通过抑制RNF113A的表达调控食管鳞癌细胞恶性表型

目的：探讨微小RNA-495(miR-495)对食管鳞癌细胞恶性表型的影响及分子机制。方法：在食管鳞癌细胞Eca109中转染miR-495模拟物、miR-495抑制剂及相应的随机对照序列，分别采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测miR-495的表达，CCK-8试剂盒检测细胞增殖能力，流式细胞术检测细胞周期及凋亡率变化，Transwell实验检测细胞的侵袭和迁移情况，并用qPCR和Western blot检测下游靶基因RNF113A mRNA和蛋白的表达。结果：与对照组比较，转染miR-495模拟物组Eca109细胞中miR-495 mRNA水平显著升高(P<0.05)，转染miR-495抑制剂组Eca109细胞中miR-495 mRNA水平显著降低(P<0.05)；各组间细胞增殖能力无显著变化(P>0.05)；与对照组比较，转染miR-495模拟物组细胞凋亡增多(P<0.01)，迁移和侵袭能力下降(P<0.01)，细胞被阻滞在G0/G1期(P<0.01)；转染miR-495抑制剂组细胞凋亡减少(P<0.01)，迁移和侵袭能力升高(P<0...     

siRNA抑制食管癌EC9706细胞CXCR4基因表达的实验

目的运用RNAi技术沉默食管癌EC9706细胞CXCR4（chemokine receptor4）基因表达,观察其对肿瘤细胞的生长和转移影响。方法设计CXCR4 基因为靶向的siRNA ,构建siRNA表达载体,通过脂质体将siRNA表达载体转入EC9706细胞。荧光定量PCR法检测细胞CXCR4 mRNA表达水平;流式细胞术检测细胞周期; MTT法检测细胞侵袭和增殖的情况。结果构建出CXCR4 基因为靶向的siRNA表达载体pRNAT-U6.2/Lenti-siCX1和pRNAT-U6.2/Lenti -siCX2;荧光定量PCR结果显示,转染pRNAT-U6.2/Lenti-siCX1的EC9706细胞和转染pRNAT-U6.2/Lenti-siCX2的EC9706细胞与对照组相比CXCR4 mRNA的表达水平明显降低（P＜0.01）;细胞生长速度较对照组明显减慢（P＜0.01）;流式细胞仪检测结果显示：转染pRNAT-U6.2/Lenti-siCX1的EC9706S期细胞比例低于对照组(P＜0.05)。结论沉默CXCR4基因表达对食管癌EC9706细胞的生长和侵袭、转移有明显的抑制作用。     

干扰β-catenin表达对淋巴瘤细胞增殖、凋亡及cleaved caspase 3蛋白表达水平的影响

目的探讨干扰β-连环蛋白(β-catenin)表达对淋巴瘤细胞增殖、凋亡及活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase 3)表达水平的影响。方法以淋巴瘤细胞Raji为研究对象,采用β-catenin小干扰RNA(siRNA)转染细胞作为β-catenin siRNA组,以阴性对照control siRNA转染细胞作为siRNA control组,以不转染的细胞作为对照组。分别采用实时逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测β-catenin mRNA和β-catenin蛋白表达水平,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测cleaved caspase 3、c-myc、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的表达水平。结果 siRNA control组和对照组的β-catenin mRNA和β-catenin蛋白表达水平、细胞存活率、细胞凋亡率及cleaved caspase 3、c-myc、cyclin D1蛋白表达水平比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05)。β-catenin siRNA组的β-catenin mRNA和β-catenin蛋白表达水平、细胞存活率及c-myc、cyclin D1蛋白表达水平均低于对照组,细胞凋亡率和cleaved caspase 3蛋白表达水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论干扰β-catenin的表达可能通过影响cyclin D1、c-myc、cleaved caspase 3蛋白的表达,抑制淋巴瘤细胞增殖,促进淋巴瘤细胞凋亡。     

RNA干扰沉默Survivin表达提高131I对甲状腺癌FTC-133细胞增殖的抑制作用

目的:探讨RNA干扰沉默Survivin表达对131I抑制甲状腺癌FTC-133细胞生长的作用及其机制。方法:采用脂质体法将Survivin-siRNA及其阴性对照NC-siRNA转染至干扰组和NC组细胞中，Real-time PCR和Western blot检测Survivin mRNA和蛋白的表达；以131I孵育后，MTT法、流式细胞仪检测Survivin对FTC-133细胞增殖、周期和凋亡的影响，Western blot检测细胞中CDK2、Cyclin E、Bax和Bcl-2蛋白的表达变化。结果:转染Survivin-siRNA成功沉默FTC-133细胞中Survivin mRNA和蛋白的表达，抑制FTC-133细胞增殖，诱导细胞阻滞于G0/G1期和细胞凋亡，并下调细胞中CDK2、Cyclin E和Bcl-2蛋白的表达，上调Bax蛋白的表达；131I孵育后，干扰组细胞中的上述变化较NC组明显增强。结论:沉默Survivin表达可提高131I对FTC-133细胞增殖的抑制作用和对细胞凋亡的促进作用，其作用机制可能与下调CDK2、Cyclin E、Bcl-2和上调Bax蛋白的表达有关。     

miR-224对宫颈癌SiHa和HeLa细胞增殖、凋亡及迁移的影响

目的:探讨miR-224对宫颈癌SiHa和HeLa细胞增殖、凋亡及迁移的影响。方法:对宫颈癌细胞株SiHa和HeLa中miR-224进行过表达或沉默,采用qRT-PCR法检测miR-224的转染效果,转染成功后采用CCK-8法、FCM检验、Transwell试验检测各组细胞增殖、凋亡及迁移情况。结果:与正常293T细胞相比,宫颈癌细胞SiHa、HeLa中miR-224表达量均升高,差异具有统计学意义（P<0.01）;转染成功后CCK-8法检测SiHa和HeLa细胞增殖情况,与阴性对照组和空白组比较,miR-224 mimic组细胞增殖能力增强,miR-224 inhibitor组细胞增殖能力减弱,差异具有统计学意义（P<0.01）;流式细胞仪检测SiHa和HeLa细胞凋亡情况,miR-224 mimic组细胞凋亡百分比明显低于阴性对照组（P<0.01）,miR-224 inhibitor组细胞凋亡百分比明显高于阴性对照组（P<0.01）;划痕试验检测SiHa和HeLa细胞迁移能力,48 h时miR-224 mimic组细胞愈合速率明显较阴性对照组和空白组快,差异有统计学意义（P<0.01）,miR-224 inhibitor组细胞愈合速率明显较阴性对照组慢,差异有统计学意义（P<0.01）。结论:宫颈癌细胞中miR-224过表达可促进细胞增殖和迁移并抑制凋亡,沉默miR-224可抑制细胞增殖和迁移并促进凋亡。     

抑制β-catenin诱导的多发性骨髓瘤细胞自噬与凋亡关系的研究

目的:通过慢病毒介导的siRNA转染沉默β-catenin的表达以证实抑制β-catenin所诱发的细胞自噬与凋亡之间的可能相互关系。方法:培养多发性骨髓瘤细胞系RPMI 8226细胞,应用慢病毒转染的方法沉默β-catenin表达,分别联合自噬抑制剂3-MA及凋亡抑制剂Z-VAD,Western blot检测细胞加药前后β-catenin、自噬相关蛋白LC3及凋亡相关蛋白Caspase-3（active)的表达变化;CCK-8法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:沉默β-catenin后,联合自噬抑制剂3-MA,细胞加药前后β-catenin表达无明显变化,LC3Ⅱ表达降低,Caspase-3（active）表达增高,细胞增殖能力下降,细胞死亡增加;联合凋亡抑制剂Z-VAD,细胞加药前后β-catenin无明显变化,LC3Ⅱ表达增高,Caspase-3（active）表达降低,细胞增殖能力下降,细胞死亡增加。结论:沉默β-catenin所诱发的自噬与凋亡共同促进细胞死亡,自噬和凋亡任一途径受抑,均可使细胞转向另一死亡途径。     

半乳糖凝集素3对食管癌Eca109细胞增殖和转移的影响

目的 探讨半乳糖凝集素3（Gal3）对食管癌Eca109细胞增殖和转移的影响.方法 构建合成Gal3过表达慢病毒质粒转染食管癌Eca109细胞,应用倒置显微镜观察Gal3的过表达质粒转染食管癌细胞后荧光表达;CCK-8法检测转染前后细胞增殖能力的变化;用流式细胞术检测转染组细胞和未转染组细胞凋亡率.Transwell方法检测转染前后细胞迁移能力变化;用Western印迹检测Gal3转染前后在食管癌中表达水平变化.结果 Western印迹结果显示Gal3在食管癌细胞中表达,在Eca109/Gal3组中表达水平明显升高（t=14.33,P=0.013;t=10.28,P=0.037）.CCK-8法检测发现转染后细胞增殖能力明显升高（t=-17.277,P＜0.05;t=-13.4,P＜0.05）,流式细胞仪以Annexin-V/7-AAD双标法显示Eca109/Gal3组凋亡率明显下降（t=3.053,P＜0.05;=5.446,P＜0.05）.Transwell实验结果,Eca109/Gal3组细胞转移率高于未转染组（t=3.465,P＜0.05;t=3.252,P＜0.05）.结论 Gal3在食管癌细胞中有表达,并且其过表达能显著增强食管癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力,明显抑制细胞的凋亡,深入研究Gal3可能为食管癌的治疗提供一种新的靶点.     

miR-1471对胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及其机制探讨

目的:探讨miR-1471对胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及其机制。方法:体外培养人胶质瘤细胞U251,将miR-1471模拟物或阴性对照分别转染至细胞中,记为miR-1471组和阴性对照（NC组）,同时设置对照组。qRT-PCR检测转染效果。CCK8检测各组细胞增殖能力。Transwell实验检测各组细胞侵袭能力。划痕实验检测各组细胞迁移能力。qRT-PCR和Western blot检测转移黏附基因（metadherin, MTDH）及Wnt/β-catenin信号通路相关基因和蛋白的表达。结果:与对照组和NC组比较,miR-1471组细胞增殖活性均显著降低（P＜0.05）,侵袭细胞数均显著减少（P＜0.05）,划痕间距明显较大,细胞中MTDH、Wnt1和β-catenin mRNA和蛋白表达水平均显著降低（P＜0.05）。结论:miR-1471能抑制人胶质瘤细胞U251的增殖、侵袭和迁移能力,其作用机制可能与下调MTDH表达,抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。     

生长抑制因子4对宫颈癌细胞CaSki增殖和凋亡的影响及作用机制研究

目的 探讨生长抑制因子4(ING4)对宫颈癌细胞CaSki增殖和凋亡的影响及作用机制.方法 取50例宫颈癌患者的宫颈癌组织和癌旁组织,宫颈癌细胞系Hela、SiHa、CaSki和正常宫颈细胞系Ect1/E6E7,定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测宫颈癌组织和细胞中ING4 mRNA的相对表达量,蛋白质印迹(Western blot)法检测组织和细胞中ING4蛋白的相对表达量.分别将转染ING4过表达慢病毒和稳定阴性对照慢病毒的宫颈癌细胞CaSki作为Lv-ING4组和Lv-NC组,将没有转染慢病毒的细胞作为对照组,CCK8法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡能力,Western blot法检测caspase 3、β-catenin、c-myc蛋白的相对表达量.采用WNT/β-catenin信号激活剂LiCl处理ING4表达上调的宫颈癌CaSki细胞,检测细胞增殖能力、凋亡能力,以及caspase 3、β-catenin、c-myc蛋白的相对表达量.结果 宫颈癌组织中ING4 mRNA的相对表达量明显低于癌旁组织(P<0.01),宫颈癌细胞CaSki中ING4 mRNA和ING4蛋白的相对表达量均明显低于宫颈癌细胞Hela、SiHa和正常宫颈细胞Ect1/E6E7(P<0.01).慢病毒转染后,Lv-ING4组细胞中ING4 mRNA和ING4蛋白的相对表达量均明显高于对照组和Lv-NC组(P<0.01),光密度(OD)值明显低于对照组和Lv-NC组(P<0.01),细胞凋亡率明显高于对照组和Lv-NC组(P<0.01);Lv-ING4组宫颈癌细胞caspase 3蛋白的相对表达量明显高于对照组和Lv-NC组(P<0.01),β-catenin、c-myc蛋白的相对表达量均明显低于对照组和Lv-NC组(P<0.01).WNT/β-catenin信号激活剂LiCl处理ING4表达上调的宫颈癌细胞CaSki后,Lv-ING4+LiCl组细胞OD值明显高于Lv-ING4组(P<0.01),凋亡率明显低于Lv-ING4组(P<0.01),Lv-ING4+LiCl组细胞caspase 3蛋白相对表达量明显低于Lv-ING4组(P<0.01),β-catenin、c-myc蛋白相对表达量均明显高于Lv-ING4组(P<0.01).结论 ING4在宫颈癌中表达下调,其可能通过下调WNT/β-catenin信号激活通路抑制宫颈癌细胞增殖并诱导细胞凋亡.     

miR -450a -5p 对人卵巢癌 SKOV3细胞生物学行为的影响

目的:研究miR-450a-5p对体外培养的人浆液性卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭、周期、凋亡机制的影响,分析miR-450a-5p对人卵巢癌SKOV3细胞肿瘤生物学行为的影响。方法:运用Hiperfect转染试剂介导的转染法将miR-450a-5p mimics转染人卵巢癌SKOV3细胞,设阴性对照组(NC组)及空白对照组(blank组)。采用MTT法、Transwell迁移及侵袭实验、划痕实验、流式细胞术,分别检测细胞增殖、迁移及侵袭能力、周期及凋亡。结果:MTT实验:miR-450a-5p mimics组细胞增殖活性与NC组、blank组无明显差异(P>0.05)。Transwell迁移及侵袭实验均显示转染miR-450a-5p mimics后,细胞的迁移及侵袭能力明显减弱(P<0.05)。划痕后miR-450a-5p mimics组细胞迁移能力较NC组、blank组降低(P<0.05)。流式细胞术:转染miR-450a-5p mimics后,mimics组细胞周期明显被阻滞于G1期(P<0.05)。miR-450a-5p mimics组、NC组、blank组凋亡结果无明显差异(P>0.05)。结论:过表达miR-450a-5p可能对人卵巢癌细胞系SKOV3的侵袭及迁移能力存在负性调控,可能将SKOV3细胞周期阻滞于G1期。     

XIAP基因对食管癌细胞黏附、侵袭和迁移能力的影响

目的:探讨沉默X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）基因表达对食管癌细胞黏附、侵袭和迁移能力的影响及机制。方法:参照LipofectamineTM2000说明将设计合成的XIAP特异性siRNA（si-XIAP）转染人食管癌EC9706细胞，将转染阴性对照siRNA(NC组）和仅加入脂质体的空白细胞作为两个对照组，siRNA转染48 h，通过Western blotting检测XIAP、AKT、p-AKT、E-cadherin和MMP-2蛋白表达；通过MTT法、Transwell法分别检测细胞黏附、侵袭和迁移能力；MTT法检测转染siRNA后24 h、48 h和72 h的细胞增殖。结果:XIAP特异性siRNA转染后，EC9706细胞XIAP表达明显降低，与空白组比较差异有统计学意义（P<0.05）。与空白组比较，si-XIAP组细胞增殖明显降低，黏附率明显升高，侵袭和迁移能力明显降低，p-AKT和MMP-2表达明显降低，E-cadherin表达明显升高（P<0.05）。结论:沉默XIAP基因可增强食管癌细胞黏附率，抑制侵袭和迁移能力，机制与抑制PI3K/AKT信号通路有关。     

shRNA靶向沉默ZEB2表达通过Wnt/β-catenin信号通路降低肺癌细胞增殖活性的实验研究

目的:研究shRNA靶向沉默E盒结合锌指蛋白2（zinc finger E-box binding homeobox,ZEB2）表达对肺癌细胞增殖活性的影响。方法:用shRNA-ZEB2慢病毒和shRNA阴性对照慢病毒感染肺癌细胞,Real time PCR和Western blot检测沉默效果。MTT检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测细胞中激活型Caspase-3（Cleaved Caspase-3）、β-连环蛋白（β-catenin）、C-myc蛋白水平。用Wnt/β-catenin信号通路抑制剂处理沉默ZEB2的肺癌细胞,MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中激活型Caspase-3、β-catenin、C-myc蛋白水平。结果:shRNA-ZEB2慢病毒可以明显沉默肺癌细胞中ZEB2的表达和转录,shRNA阴性对照慢病毒对肺癌细胞中ZEB2的表达没有影响。沉默ZEB2后的肺癌细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高,细胞中激活型Caspase-3蛋白水平升高,β-catenin、C-myc蛋白水平降低。Wnt/β-catenin信号通路抑制剂下调沉默ZEB2的肺癌细胞株中Wnt/β-catenin信号通路的激活水平,同时可以降低细胞存活率,诱导细胞凋亡,促进细胞中激活型Caspase-3的表达。结论:shRNA靶向沉默ZEB2表达通过Wnt/β-catenin信号通路降低肺癌细胞增殖活性。     

NRAGE影响人食管癌细胞放射抗性的作用及其机制研究

背景与目的：食管癌是全球威胁人类生命和健康的常见恶性肿瘤之一，中国每年食管癌发病人数占全球发病总人数的一半以上，以食管鳞癌最为常见。放疗是食管癌三大治疗手段之一，而放射抗性是导致其治疗失败的主要原因。神经营养因子受体相互作用MAGE类药物（neurotrophin receptor-interacting MAGE homolog，NRAGE）在放射抗性细胞株TE13R120中表达量明显高于亲本TE13细胞，且NRAGE亚细胞定位变化可能参与食管癌细胞放射抗性的形成。通过基因转染构建NRAGE稳定表达的食管癌细胞系，以进一步明确NRAGE基因与食管鳞癌细胞放射抗性的关系，分析该基因影响放射抗性的具体机制。方法：通过基因转染构建NRAGE稳定表达的食管癌细胞系。采用细胞克隆形成实验检测细胞放射敏感性，采用流式细胞术检测细胞周期及凋亡；细胞划痕、Transwell侵袭实验检测细胞迁移、侵袭能力，采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitive polymerase chain reaction，RTFQ-PCR）和蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞中β-catenin表达情况。组间差异采用t检验或方差分析。结果：实验分为转染过表达组（Eca109/NRAGE组）和空白对照组（Eca109组）。Eca109/NRAGE细胞中NRAGE的表达量明显高于Eca109（t=29.65，P<0.05）。照射后Eca109/NRAGE细胞的放射抗性显著高于Eca109。流式细胞术检测结果显示，Eca109/NRAGE细胞中对射线抵抗性最强的S期细胞比例增加，对射线最敏感的G ₂ /M期减少。Eca109/NRAGE细胞凋亡率较Eca109细胞降低（t=3.268，P<0.05）。Eca109/NRAGE细胞迁移和侵袭能力均高于Eca109。RTFQ-PCR和Western blot检测结果显示，β-catenin的mRNA表达及蛋白水平在Eca109/NRAGE细胞中明显高于Eca109（t=15.87，P<0.05）。结论：NRAGE参与Eca109细胞放射抗性的形成，改变细胞的细胞周期分布和凋亡情况，影响细胞迁移及侵袭能力并可能影响食管癌细胞的放射敏感性，该作用可能与激活Wnt/β-catenin信号转导通路有关。     

miR-32-5p靶向CEBPA调控EGFR/β-catenin信号通路影响骨髓瘤细胞的增殖、凋亡和侵袭

目的:探究miR-32-5p靶向CCAAT增强子结合蛋白α（CCAAT/enhancer binding proteins α,CEBPA）调控表皮生长因子/β联蛋白（EGFR/β-catenin）信号通路影响骨髓瘤细胞增殖、凋亡和侵袭的机制。方法:qRT-PCR、Western blot检测细胞中miR-32-5p、CEBPA的表达水平;转染慢病毒至骨髓瘤细胞U266,MTT检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡水平;生物信息学预测miR-32-5p的靶基因,双荧光素酶报告基因、Western blot验证miR-32-5p与CEBPA的关系及在骨髓瘤细胞中的作用,Western blot检测miR-32-5p与CEBPA的表达对EGFR/β-catenin信号通路的影响。结果:与正常浆细胞比较,骨髓瘤细胞株H929、U266、IM-9、RPMI-8226中miR-32-5p表达水平显著增高,CEBPA mRNA和蛋白水平显著降低（P＜0.05）;与NC、anti-miR-con组比较,anti-miR-32-5p组miR-32-5p mRNA表达量显著降低,细胞凋亡率显著升高,24 h、48 h、72 h的OD值显著降低,细胞侵袭数目显著减少（P＜0.05）;TargetScan生物信息学预测显示,miR-32-5p与CEBPA 3' UTR存在结合位点,双荧光素酶报告实验、Western blot进一步证实miR-32-5p可与CEBPA直接结合负向调控CEBPA的表达;与NC、pcDNA-control组比较,pcDNA-CEBPA组CEBPA 表达量显著升高,24 h、48 h、72 h的OD值显著降低,凋亡率显著升高,细胞侵袭数目显著减少（P＜0.05）;与anti-miR-con组比较,anti-miR-32-5p组CEBPA蛋白表达量显著升高,EGFR、p-EGFR、β-catenin蛋白表达量显著降低;与anti-miR-32-5p+si-con组比较,anti-miR-32-5p+si-CEBPA组CEBPA蛋白表达量显著降低,EGFR、p-EGFR、β-catenin蛋白表达量显著升高（P＜0.05）。结论:骨髓瘤细胞的增殖、凋亡和侵袭受miR-32-5p和CEBPA的双重调控,miR-32-5p可靶向CEBPA调控EGFR/β-catenin信号通路影响骨髓瘤细胞的增殖、凋亡和侵袭。     

miR-369靶向调节SOX4表达对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的调控作用

目的:观察微小RNA（miRNA,miR）-369通过调节SOX4对骨肉瘤MG-63细胞增殖、凋亡的影响。方法:miR-369体外模拟物（mimics）转染,构建miR-369上调表达模型,以转染阴性对照链为对照组,CCK-8法和流式细胞技术分别检测细胞增殖率和凋亡率变化;Real-time PCR法检测SOX4 mRNA表达水平;双荧光素酶活检检测证实miR-369与SOX4相互作用关系;Western-blot法检测不同组间SOX4及Bcl-2家族相关蛋白表达水平变化。结果:miR-369 mimics转染后,MG-63细胞中miR-369表达水平较对照组明显提高(P=0.009);miR-369 mimic转染后24 h及48 h后细胞相对存活率均明显低于对照组;流式细胞仪结果显示mimic组细胞凋亡率较对照组明显提高（P=0.031）;Real-time PCR和Western blot实验分别证实miR-369 mimic转染后,SOX4在mRNA和蛋白水平表达均明显抑制;而Bcl-2家族相关蛋白表达水平发生明显变化。结论:miR-369表达上调可以抑制骨肉瘤细胞增殖并诱导凋亡,这些作用与靶向下调SOX4表达有关。