肝癌患者血清p16、Runx3基因甲基化及其与临床病理参数的相关性

目的:探讨血清p16和Runx3基因启动子区CpG岛异常甲基化与原发性肝癌(hepatocellular carcino-ma,HCC)关系。方法:采用甲基化特异性PCR(MSP)法对56例HCC患者、40名健康体检者、40例乙肝患者和40例肝硬化患者血清p16和Runx3基因甲基化状况进行检测。结果:HCC患者血清p16和Runx3基因甲基化检出率分别为69.6%(39/56)和66.1%(37/56),而肝硬化患者、乙肝患者和健康体检者均未检出基因甲基化,与HCC组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析结果均未发现以α=0.05为显著性水准进入回归模型的变量。结论:HCC患者血清中可检测到p16和Runx3基因的甲基化,有助于肝癌的诊断、治疗和预后评估。     

p16基因甲基化与HeLa细胞凋亡相关性的研究

目的:研究天花粉蛋白诱导HeLa细胞凋亡过程中p16基因甲基化的变化情况,探讨细胞凋亡和抑癌基因甲基化的相关性,寻找新的去甲基化药物.方法:应用MTT法检测天花粉蛋白对HeLa细胞增殖抑制的影响,流式细胞仪检测天花粉蛋白对HeLa细胞的诱导凋亡作用,甲基化特异PCR(Methylation-specific PCR,MSP)检测HeLa细胞凋亡过程中p16基因启动子区CpG岛的甲基化状况.结果:在HeLa细胞中p16基因启动子区CpG岛异常甲基化,经天花粉蛋白处理后,HeLa细胞生长明显受抑,流式细胞仪直方图出现明显的亚二倍体峰,p16基因启动子区CpG岛无异常甲基化表现.结论:天花粉蛋白在诱导HeLa细胞凋亡过程中对p16基因有明显的去甲基化作用,可能是新型的去甲基化药物,抑癌基因甲基化失活与肿瘤细胞凋亡之间可能有某些密切的相关性.     

启动子区5′CpG岛去甲基化对人肠癌RKO细胞生物学表型的影响(英文)

目的:探讨DNA启动子区5′CpG岛甲基化状态与人肠癌RKO细胞生物学特征的关系。方法:应用特异性DNA甲基转移酶抑制剂-5-氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-CdR)处理肠癌RKO细胞72小时,甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)及DNA测序法分析p16/CDKN2抑癌基因5’CpG岛甲基化状态;MTT、FCM、荧光染色及透射电镜检测启动子区去甲基化后对细胞生长、形态和细胞周期凋亡的影响。结果:肠癌RKO细胞p16/CDKN2基因5’CpG岛呈高甲基化状态;DNA甲基转移酶抑制剂(5-Aza-CdR)能较好地逆转启动子区胞嘧啶甲基化状态;CpG岛去甲基化后能明显地抑制肠癌细胞的生长,增加细胞群体倍增时间(P<0.01),诱导肠癌细胞凋亡,并呈良好的量效依赖关系。结论:通过逆转CpG岛高甲基化能有效地抑制肠癌细胞增殖,为临床治疗大肠癌提供新的作用靶点。     

新疆哈萨克族食管癌survivin启动子区CpG岛甲基化状态及其临床意义

目的： 检测消化道肿瘤早期相关基因survivin mRNA在哈萨克族食管癌组织中的表达及其启动子区CpG岛甲基化状态,并进一步探究survivin启动子甲基化是否参与了食管癌的发生。方法：提取哈萨克族食管癌患者癌组织及远端无癌组织RNA,RT-PCR检测组织中survivin mRNA的表达水平,甲基化特异性PCR (methylation specific PCR,MSP)检测survivin启动子区CpG 岛的甲基化状态。结果：在20对食管癌组织标本中,癌组织中survivin mRNA阳性表达率 (95%)明显高于远端无癌组织 (65%) (P＜0.05)。癌组织及远端无癌组织中survivin基因启动子区CpG岛多为杂合型甲基化,且两种组织间甲基化状态无明显差异 (P＞0.05)。结论：survivin mRNA表达水平的增高在哈萨克族食管癌的发生、发展过程中起到了一定的作用,但其表达与启动子区CpG岛甲基化无关,提示甲基化并未直接调控该基因的表达并促进哈萨克族食管癌的发生发展。     

肝细胞癌血浆LINE-1启动子区甲基化水平的研究

目的 探讨肝细胞癌（HCC）患者血浆中长散布核元件-1（LINE-1）基因启动子区CpG位点甲基化水平变化的临床意义。方法 应用亚硫酸氢盐测序 PCR（BSP）检测33例HCC患者（HCC组）、18例肝硬化患者（肝硬化组）及16例健康志愿者（正常组）的外周血血浆中LINE 1启动子区的CpG位点甲基化程度。结果 HCC组的LINE-1启动子区多个CpG位点甲基化水平及整体甲基化水平下降;进一步通过ROC曲线分析发现CpG位点1、位点7、位点8的甲基化水平对诊断HCC的能力较优,其敏感度和特异度分别为80.0％和78.8％、81.8％和71.4％、82.9％和75.8％。结论 LINE-1基因启动子区甲基化水平在HCC中明显下降,其中CpG位点1、位点7、位点8的甲基化水平可能对HCC诊断有意义。     

DNA修复酶基因MGMT启动子区异常甲基化与食管癌的关系

背景与目的： 分析食管癌组织中MGMT启动子区CpG岛甲基化状态和食管癌发病风险的关系,探讨MGMT基因启动子的异常甲基化在食管癌筛查及早期诊断中的意义。 材料与方法： 对江苏淮安的91例新发食管癌病例的癌组织、癌旁组织及外周血血浆样本提取DNA,应用甲基化特异性PCR(MSP)分析MGMT启动子区CpG岛的甲基化状态;对食管癌组织和癌旁组织提取总RNA,采用SYBR GREEN I 实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定MGMT的mRNA水平。 结果： MGMT启动子区CpG岛异常甲基化与食管癌发病风险增高有关联 (OR=7.750, 95％CI=2.736～21.955);MGMT启动子区CpG岛甲基化状态与MGMT mRNA水平无显著相关;血浆循环DNA中MGMT启动子区CpG岛甲基化与癌组织中MGMT启动子区CpG岛甲基化相关(P<0.01),血浆循环DNA中MGMT启动子区CpG岛甲基化检出率与癌组织中MGMT启动子区CpG岛甲基化检出率中度相关(Kappa=0.603, P<0.01)。 结论： MGMT基因的启动子区CpG岛的异常甲基化与食管癌发病风险增加有关;检测血浆循环DNA中MGMT基因启动子的异常甲基化,可为食管癌的筛查、早期诊断提供有价值的信息。     

胃癌组织中p16基因甲基化与其蛋白表达的相关性及临床意义

目的:探讨胃癌组织中p16基因甲基化与其蛋白表达的相关性及临床意义.方法:应用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)和免疫组织化学法分别检测28例胃癌和相应癌旁组织中p16基因启动子区CpG岛甲基化和p16蛋白的表达情况,并分析其与临床病理参数间的关系.结果:胃癌组织中p16基因甲基化率明显高于其相应的癌旁组织(P＜0.01),并与胃癌的分化程度、浸润深度及淋巴结转移有关(P＜0.05);p16蛋白在胃癌组织中的阳性表达率显著低于相应的癌旁组织(P＜0.01);胃癌组织中p16基因甲基化与p16蛋白的表达之间呈负相关(r=-0.544,P=0.003).结论:p16基因启动子区甲基化导致的基因沉默可能与胃癌的发生和发展密切相关.     

大肠癌组织p16基因甲基化与临床病理特征的关系

目的：研究p16基因启动子CpG区甲基化的改变与大肠癌发生及其临床病理特征的关系。方法：采用甲基化特异PCR技术（MSP法）研究大肠癌组织p16基因甲基化,并分析其与临床病理特征的关系。结果：30例大肠癌组织中有12例（40．0％）呈p16CpG区甲基化阳性。DukesC、D期组织p16CpG区甲基化发生率明显高于DukesA、B期。有转移的大肠癌组织p16甲基化发生率（84．6％）明显高于无转移者（5．9％）。结论p16启动子区甲基化导致p16抑癌基因失活,参与大肠癌的发生和发展。大肠癌组织p16CpG区甲基化与Dukes分期、肿瘤转移有关。p16甲基化可作为评估大肠癌患者预后的1个指标。     

四种肿瘤细胞p16基因CpG岛甲基化的检测

目的:检测4种肿瘤细胞系中p16基因CpG岛甲基化的状况。方法:利用甲基化特异性PCR(MSP)检测了4种肿瘤细胞(SPC-A1、BIU-87、T24、Hep-G2)的甲基化状况。结果:除BIU-87外,其它3种肿瘤细胞p16基因都有不同程度的甲基化。结论:p16基因CpG岛的甲基化与肿瘤的发生、发展关系密切。     

MSP法检测胃癌组织中RASSF1A基因启动子区甲基化改变

目的:探讨抑癌基因RASSF1A启动子区CpG岛甲基化与胃癌及临床病理特征的关系.方法:采用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)法检测60例胃癌组织及相应癌旁组织和30例对照组织中RASSF1A基因启动子区甲基化状态.结果:胃癌组织中RASSF1A基因启动子区CpG岛甲基化率为65.0%(39/60),显著高于癌旁组织6.7%(4/60),及对照组0%(0/30)(P＜0.01).胃癌组织中不同年龄、性别、分化程度及淋巴结转移与否的RASSF1A基因甲基化率的差异均无统计学意义.结论:胃癌中RASSF1A基因启动子区的高甲基化提示其与胃癌的发生密切相关,MSP法对RASSF1A基因启动子区甲基化的检测有望成为胃癌早期监测的重要方法.     

FHIT和p16基因甲基化与肺癌的发生

背景与目的:探讨FHIT和p16基因甲基化与肺癌发生之间的关系. 材料与方法:采用甲基化特异性PCR检测59例原发性肺癌组织,相对应的32例正常组织及11例支气管鳞状化生组织中FHIT基因、p16基因启动子区CpG岛甲基化状况.结果:肺癌组织和正常肺组织中的FHIT基因甲基化率分别为37.3%(22/59)、0.0%(0/32),两组间的差异有统计学意义(P<0.01);支气管鳞状化生组织FHIT基因甲基化阳性率为18.1%(2/11).肺癌组织和正常肺组织中的p16基因甲基化率分别为50.8%(30/59)、0.0%(0/32),两组间的差异具有统计学意义(P<0.01);支气管鳞状化生组织p16基因甲基化阳性率为18.1%(2/11).肺癌患者吸烟组中FHIT、p16基因甲基化联合检测的阳性率为90.6%(29/32),与非吸烟组(33.3%.9/27)相比较,其差异具有统计学意义(P<0.05).结论: FHIT基因和p16基因启动子区甲基化可能与肺癌的发生有关.     

结肠癌组织中p16/MTS1基因5′CpG岛甲基化研究

:〔目的〕研究结肠癌组织中p16基因5′端CpG岛异常甲基化现象。〔方法〕采用甲基化特异PCR方法(MSP)检测了28例结肠癌和20例癌旁正常组织标本。〔结果〕28例结肠癌组织中有9例5′端CpG岛异常甲基化(32%),而20例正常组织中均阴性。〔结论〕p16基因5′端CpG岛异常甲基化在人类结肠癌的发生中可能起一定作用。     

巢式甲基化特异性PCR 检测食管癌病人血清中p16 基因启动子区过甲基化

 目的 检测食管鳞状细胞癌（squamous cell carcinoma，SCC）患者外周血血清中p16基因启动子区的甲基化状态，探讨p16基因启动子的过甲基化在食管鳞状细胞癌筛查及早期诊断中的意义。方法 利用巢式甲基化特异性PCR（nMSP）法检测食管鳞状细胞癌患者外周血血清与正常人血清中p16基因启动子的甲基化状态，并与普通甲基化特异性PCR（MSP）法进行了比较。结果 56例SCC血清样品中nMSP法发现34例p16基因启动子的过甲基化，MSP法只检出15例，而22例正常人血清中都未检测到p16基因启动子的过甲基化。测序结果进一步验证了方法的可靠性。结论 利用巢式MSP（nMSP）法检测外周血血清中p16基因启动子的甲基化，可为食管癌的筛查、早期诊断及预后判断提供有价值的信息。     

慢性乙型肝炎病毒感染与p16INK4A基因启动子甲基化关系的研究

目的探讨慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染对p16INK4A基因启动子甲基化的影响及其在HBV相关肝细胞癌(HCC)形成中的作用。方法选取23例HBV相关HCC癌及癌旁组织、25例慢性乙型肝炎肝穿刺组织,采用甲基化特异性PCR(MSP)检测p16INK4A基因启动子的甲基化状态;免疫组化EnVision二步法测定肝组织内HBsAg、HBcAg、HBeAg和HBx蛋白的表达;荧光实时定量PCR检测肝组织HBV DNA含量;PCR扩增和直接测序检测HBV x基因变异。结果癌组织p16INK4A基因启动子甲基化阳性率(47.83%)明显高于癌旁组织(17.39%),慢性乙型肝炎患者p16INK4A基因启动子甲基化阳性率(36.00%)与癌组织、癌旁组织差异无统计学意义。在癌旁组织和慢性乙型肝炎, p16INK4A基因启动子甲基化者HBx蛋白表达中位数分别为3.000和0.250,明显高于非甲基化者(0.500和0.000),但在癌组织中,HBx蛋白的表达与p16INK4A基因启动子甲基化状态无关。HBsAg、HBcAg、组织HBV DNA含量和x基因突变均与p16INK4A基因启动子甲基化状态无关。结论在癌前病变中,p16INK4A基因启动子甲基化与HBx蛋白高表达有关,HBx蛋白可能通过诱导p16INK4A基因启动子甲基化而使该抑癌基因失活,在HBV相关HCC形成中起重要作用。     

肺癌E-cadherin基因启动子CpG岛甲基化的研究

目的检测肺癌组织、相应的癌旁组织及正常肺组织中E-cadherin基因启动子CpG岛甲基化水平，探讨肺癌的发病机制。方法采用甲基化特异性PCR技术检测22例肺癌组织、相应的癌旁组织和9例正常肺组织中E-cad-herin基因启动子CpG岛甲基化水平。结果肺癌中E-cadherin基因启动子CpG岛完全甲基化率为13.6%（3/22），部分甲基化率为27.3%（6/22），总甲基化率为40.9%（9/22），显著高于相应癌旁组织中该基因的甲基化率9.1%（2/22）。9例正常肺组织中该基因未发生甲基化。此外，E-cadherin基因启动子CpG岛异常甲基化与患者性别、年龄无关，甲基化的发生率随着肿瘤的分期早晚有上升的趋势。结论E-cadherin基因启动子CpG岛的异常甲基化是肺癌发生中的常见分子事件，可能参与了肺癌的发生发展过程。     

非小细胞肺癌p16基因甲基化及缺失的研究

目的 研究p16基因在非小细胞肺癌组织中的甲基化和缺失情况，探讨其在肺癌诊断中的价值。方法 应用甲基化相关的PCR及双重PCR，检测50例肺癌组织和54例正常肺组织中p16基因第1外显子5′端启动子区域CpG岛甲基化及第2外显子缺失情况。结果 p16基因在非小细胞肺癌组织中甲基化率为32.0%(16/50)。缺失率为28.0%(14/50);54例正常肺组织甲基化率为3.7%(2/54)，缺失率为0，二组比较，甲基化率（Fisher's exact=0.000)及缺失率（Fisher's exact=0.000)均有显著性差异。结论 甲基化和缺失是非小细胞肺癌p16基因失活的主要形式，检测p16基因甲基化和缺失状态可能有助于肺癌的诊断。     

原发性肝癌(HCC)TACE治疗前后p16、AFP、sVEGF的动态变化

目的:探讨HCC患者经肝动脉灌注化疗栓塞术(TACE)治疗前、后p16基因甲基化、AFP和sVEGF变化的临床意义。方法:采用甲基化特异性PCR(MSP)法检测56例HCC患者血清p16基因甲基化率,ELISA法检测AFP和sVEGF。结果:HCC患者血清p16基因甲基化检出率为69.6%(39/56),AFP阳性检出率为80.4%(45/56),sVEGF阳性检出率为73.2%(41/56)。结论:血清DNA中p16基因甲基化检测可作为HCC分子诊断标志,三者联合检测对肝癌诊断有实用价值。     

宫颈癌中p16基因启动子异常甲基化的检测

目的:探讨宫颈癌组织及外周血浆中p16基因启动子异常甲基化的状况及其在宫颈癌诊断中的价值.方法:用甲基化特异性PCR技术对宫颈癌组织,正常宫颈组织及相对应血浆中p16基因进行甲基化的检测.结果:45例宫颈癌组织中p16基因异常甲基化率为33.3％(15/45),相对应血浆中p16基因甲基化的检出率为20％(9/45),而正常对照组织未检出甲基化.血浆中甲基化的改变与宫颈癌组织甲基化状态显著相关(P＜0.05).p16基因甲基化发生率与年龄、病理分级、临床分期之间无统计学相关性(P＞0.05).结论:p16基因CpG岛甲基化是宫颈癌发生的高频事件,其甲基化检测在宫颈癌早期诊断中有一定的应用价值.     

启动子区5''CpG岛去甲基化对人肠癌RKO细胞生物学表型的影响

目的:探讨DNA启动子区5'CpG岛甲基化状态与人肠癌RKO细胞生物学特征的关系.方法:应用特异性DNA甲基转移酶抑制剂-5-氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-CdR)处理肠癌RKO细胞72小时,甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)及DNA测序法分析p16/CDKN2抑癌基因5'CpG岛甲基化状态;MTT、FCM、荧光染色及透射电镜检测启动子区去甲基化后对细胞生长、形态和细胞周期凋亡的影响.结果:肠癌RKO细胞p16/CDKN2基因5'CpG岛呈高甲基化状态;DNA甲基转移酶抑制剂(5-Aza-CdR)能较好地逆转启动子区胞嘧啶甲基化状态;CpG岛去甲基化后能明显地抑制肠癌细胞的生长,增加细胞群体倍增时间(P＜0.01),诱导肠癌细胞凋亡,并呈良好的量效依赖关系.结论:通过逆转CpG岛高甲基化能有效地抑制肠癌细胞增殖,为临床治疗大肠癌提供新的作用靶点.     

上皮性卵巢癌组织中WWOX基因启动子区域CpG岛的甲基化状态及临床意义

目的研究上皮性卵巢癌组织中WWOX基因启动子区CpG岛的甲基化状态,并分析WWOX基因的甲基化与上皮性卵巢癌的临床病理指标之间的关系。方法采用甲基化特异性PCR(methylation specific polymerase chain reaction,MSP)方法检测48例上皮性卵巢癌、18例卵巢交界性上皮性肿瘤、26例卵巢良性上皮性肿瘤及33例正常卵巢组织中WWOX基因CpG岛甲基化状态。结果上皮性卵巢癌、卵巢交界性上皮性肿瘤、卵巢良性上皮性肿瘤组织中WWOX基因启动子区CpG岛甲基化率分别为43.75%、26.32%、3.84%,正常卵巢组织中未检测到WWOX基因CpG岛甲基化。上皮性卵巢癌组织中WWOX基因CpG岛的甲基化率明显高于其他卵巢组织,差异有统计学意义(P<0.01)。晚期(Ⅲ期、Ⅳ期)上皮性卵巢癌组织中WWOX基因CpG岛的甲基化率高于早期(Ⅰ期、Ⅱ期)上皮性卵巢癌组织,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 上皮性卵巢癌组织中广泛存在着WWOX基因启动子区CpG岛甲基化,可能是导致WWOX基因失活的重要机制。WWOX基因的异常甲基化可能与上皮性卵巢癌的发生发展密切相关,其可能成为上皮性卵巢癌的早期诊断和评估预后的重要指标。