耐甲氧西林金黄色葡萄球菌表型及基因型同源性分析

<正>耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)是引起医院和社区感染的重要病原菌之一[1]。近年来随着广谱及超广谱β-内酰胺类抗菌药物在临床上的广泛使用,MRSA的检出率不断增加[2]。MRSA感染有逐年增高的趋势,且具有多重耐药的特点。对MRSA耐药机制进行研究,寻找药物作用的新靶点,是目前全世界都密切关注的问题之一。由于MRSA在不同国     

DHA诱导小鼠乳癌4T1细胞凋亡及其对死亡受体蛋白表达的影响

目的 研究二十二碳六烯酸(DHA)对小鼠乳癌4T1细胞凋亡的诱导作用及其对死亡受体(DR)蛋白表达的影响。方法 体外培养4T1细胞,应用MTT方法观察不同浓度的DHA对4T1细胞增殖活力的影响;Annexin V/PI双染流式细胞术分析不同浓度DHA对4T1细胞凋亡率影响;采用Western blotting方法检测DR4、DR5和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)表达的变化。结果 采用不同浓度DHA处理后,4T1细胞增殖活力较对照组显著下降(F=84.62,q=16.54~25.31,P<0.05);细胞凋亡率明显增高(F=287.68,q=32.74~56.58,P<0.05);DR5和TRAIL表达均明显上调(F=64.75、149.72,q=9.32~51.59,P<0.05)。结论 DHA可能通过DR途径抑制小鼠4T1乳癌细胞的生长,诱导其凋亡。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药机制和临床耐药研究的新进展

金黄色葡萄球菌为临床常见的病原菌,能产生多种毒素、酶及抗原蛋白,具有较强的致病力,可以引起皮肤软组织感染、血流感染及全身各脏器感染[1]。随着青霉素的广泛使用,有些金黄色葡萄球菌产生青霉素酶,能水解β-内酰胺环,     

KDR siRNA对乳癌细胞凋亡和NES1与RUNX3基因甲基化影响

目的探讨体外水平利用化学修饰的小干扰RNA(siRNA)敲减含激酶插入区受体(KDR)基因治疗乳癌的可行性和特异性。方法采用阳离子脂质体Lipofectamine 2000TM作为转染试剂,将针对人KDR基因的siRNA转染人乳癌细胞株MCF-7敲减KDR基因的表达。通过Hoechst 33258染色观察MCF-7细胞的凋亡情况;采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测NES1基因和RUNX3基因甲基化状态和mRNA的转录水平。结果靶向KDR的siRNA转染MCF-7细胞后可诱导细胞凋亡,NES1基因和RUNX3基因甲基化程度降低,出现非甲基化条带,同时mRNA表达上调。结论KDR siRNA在体外能逆转MCF-7细胞的NES1基因和RUNX3基因甲基化,并诱导细胞凋亡。     

FGFR2基因单核苷酸多态性与乳腺癌的相关性研究

目的：探讨成纤维细胞生长因子受体2（FGFR2）基因第二内含子单核苷酸多态性与女性乳腺癌发生的相关性。方法：运用等位基因扩增-聚合酶链反应（ASA-PCR）方法结合琼脂糖凝胶电泳技术,对200例女性乳腺癌患者（乳腺癌组）和200例正常女性（对照组）进行检测,分析两组人群FGFR2基因第二内含子的三个单核苷酸位点rs2912778r、s3135718和rs11200014的多态性分布,并进行统计学分析。结果：rs2912778（T/T、T/C、C/C）r、s3135718（A/A、A/G、G/G）r、s11200014（A/A、A/G、G/G）的基因型分布在对照组和乳腺癌组之间的差异有明显的统计学意义（P〈0.01）;根据病理分型进一步分析,三个位点野生型与变异型相比差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论：FGFR2基因第二内含子的三个位点单核苷酸多态性可能与中国女性乳腺癌的发生有关。     

人乳癌细胞小球藻CVFad3基因的表达和作用

目的 构建真核表达载体pEGFP-C3-n-3,检测小球藻n-3脂肪酸脱氢酶基因CvFad3在人乳癌MCF-7细胞中的表达和作用.方法 通过RT-PCR法扩增得到CvFad3基因,将CvFad3基因cDNA插入到真核表达载体pEGFP-C3中,构建重组表达载体pEGFP-C3-n-3,并将其转染入MCF-7细胞中,设空载体pEGFP-C3为对照组.采用RT-PCR检测CvFad3基因的表达,MTT法分析CvFad3基因对MCF-7细胞增殖的影响,气相色谱检测CvFad3基因对MCF-7细胞n-3多不饱和脂肪酸含量的影响.结果 构建的重组载体pEGFP-C3-n-3转染入乳癌MCF-7细胞48 h后可检测到CvFad3基因mRNA的条带,而转染pEGFP-C3的MCF-7细胞48 h后检测不到CvFad3基因mRNA的条带.与对照组比较,转染pEGFP-C3-n-3的细胞MTT吸光度明显降低(t=6.039,P＜0.01);人乳癌细胞MCF-7细胞膜n-3多不饱和脂肪酸的含量显著升高.结论 重组载体pEGFP-C3-n-3构建成功,CvFad3基因能在MCF-7细胞内有效异源表达,且抑制了MCF-7细胞的增殖,增加了细胞膜n-3多不饱和脂肪酸的含量.     

非小细胞肺癌组织RUNX3和P16的表达及意义

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织新型抑癌基因Runt相关转录因子3(RUNX3)和p16的表达及其与肿瘤生物学行为的关系.方法 应用免疫组化SP法,对72例NSCLC组织及其癌旁组织RUNX3和P16蛋白表达进行检测.结果 RUNX3和P16的阳性染色均定位于细胞核,NSCLC组织RUNX3阳性表达率为30....     

褐藻糖胶对人乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用

目的：研究褐藻糖胶对体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响，并探讨其凋亡机制。方法:不同浓度(100 mg/L、300 mg/L、500 mg/L、1 000 mg/L)褐藻糖胶处理MCF-7细胞48h后，应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞的增殖；Hoechst 33258染色、琼脂糖凝胶电泳法观察细胞的凋亡的形态学及生化改变；逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白印迹分别测定细胞〖STBX〗bcl-2〖STBZ〗和bax mRNA及其蛋白的表达。结果:不同实验浓度(100 mg/L、300 mg/L、500 mg/L、1 000 mg/L)的褐藻糖胶均能抑制MCF-7细胞的增殖（P<0.01），抑制率呈浓度依赖性增大；褐藻糖胶诱导MCF-7细胞凋亡数增加，且可见明显的、凋亡特有的DNA梯形条带；在褐藻糖胶存在下，〖STBX〗 bcl-2〖STBZ〗 mRNA和蛋白表达减少，而bax mRNA和蛋白表达增加，Bcl-2/Bax比值下降（P<0.05）。结论:褐藻糖胶可抑制MCF-7细胞增殖，且诱导其凋亡，其凋亡机制是下调Bcl-2和上调Bax蛋白的表达。     

VEGF基因特异性siRNA转染后对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨利用干扰RNA（RNAi）抑制血管内皮生长因子（VEGF）基因表达对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响。方法：设计针对VEGF基因的小干扰RNA（siRNA）,合成DNA模板,体外转录siRNA。以脂质体转染法将双链siRNA导入MCF-7细胞后,用MTT比色法检测siRNA对MCF-7细胞增殖的影响。通过Hoechst33258染色观察MCF-7细胞的凋亡。用流式细胞术检测细胞周期的改变,RT-PCR检测VEGF mRNA表达的变化,免疫细胞化学法检测VEGF蛋白的表达。结果：所设计的两个靶位点siRNA,均能有效地抑制MCF-7细胞的增殖,诱导细胞凋亡,使细胞周期阻滞于G0/G1期,VEGFmRNA及其蛋白的表达明显减少;而作为阴性对照的错义序列组siRNASCR则没有上述效应。结论：体外转录合成的siRNA可抑制MCF-7细胞中VEGF基因的表达,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。     

大肠杆菌表达耐热DNA聚合酶的纯化和鉴定

目的探讨工程菌表达的耐热ＤＮＡ聚合酶的纯化方法。②方法收集ＩＰＴＧ诱导带有耐热ＤＮＡ聚合酶（ＴＤ聚合酶）基因表达质粒的工程菌株ＤＨ－ＴＤ４，用溶菌酶裂解，６０℃处理后，上清液用硫酸铵沉淀，根据溶解度差异进行粗分级，然后进行离子交换层析细分级，并经聚合酶链式反应（ＰＣＲ扩增）鉴定其活性。③结果纯化的ＴＤ聚合酶具有良好的聚合活性。④结论溶解度差异与离子交换层析是工程菌表达的耐热ＤＮＡ聚合酶纯化的主要步骤。基因工程制备的ＤＮＡ聚合酶可用于ＰＣＲ检测