重组人核心蛋白聚糖基因增强多柔比星对白血病 K562细胞抑制作用的实验研究

 目的　探讨重组人核心蛋白聚糖（rhDCN）基因增强多柔比星（ADM）对人类白血病 K562细胞的作用。方法　取对数生长期的K562细胞分为0.9 % NaCl溶液组、pcDNA3.1(+)-DCN／K562组、ADM／K562组、pcDNA3.1(+)-DCN加ADM／K562组。瑞特染色观察细胞形态改变,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术（FCM）分析细胞凋亡,RT-PCR分析各组TGF-β1 mRNA含量。结果　pcDNA3.1(+)-DCN加ADM／K562组细胞比单独DCN和ADM组细胞,染色呈现更显著的凋亡形态学改变;MTT法结果显示联合组细胞增殖抑制率为（61±1.32）%,明显高于单独干预组[DCN组（20±1.90）%;ADM组（47±1.04）%]（P＜0.05）;FCM检测结果显示联合组细胞凋亡指数为（61.30±0.9）%,较单独干预组[DCN组（28.25±1.3）%及ADM组（31.85±1.5）%]明显增加（P＜0.05）;RT-PCR结果显示,联合组细胞TGF-β1 mRNA的转录减少。结论　rhDCN可以明显增强ADM对K562细胞的杀伤作用,提高肿瘤细胞的凋亡率。rhDCN可能通过下调TGF-β1 mRNA的转录发挥其作用,其具体机制有待进一步研究。     

重组人血管内皮生长因子165对K562白血病细胞生物学活性的影响

目的：探讨人重组血管内皮生长的因子165对人K562白血病细胞生物学活性的影响。方法：利用pcDNA3.1（＋）质粒构建人重组含VEGF165的真核表达载体,脂质体转染至K562白血病细胞,并用G418筛选阳性克隆;以RT-PCR测定重组质粒载体VEGF165基因的表达;MTT法测定K562白血病细胞的生长;建立裸鼠皮下移植人K562肿瘤模型,测定肿瘤体积的大小;免疫组化检测肿瘤的微血管密度（MVD）。结果：成功构建pcDNA3.1（＋）-VEGF165表达质粒。K562白血病细胞转染重组质粒后,明显增加K562细胞中VEGF165 mRNA的表达,转染重组质粒的K562细胞增殖明显快于对照组;移植重组pcDNA3.1（＋）-VEGF165质粒转染的K562细胞之后,荷瘤鼠移植瘤生长明显快于对照组;并且移植瘤组织微血管密度明显高于对照组（P〈0.05）。结论：利用pc DNA3.1（＋）真核表达质粒可成功构建含人VEGF165的重组质粒,重组质粒转染K562细胞后,体内外均明显促进K562细胞增殖。     

反义寡核苷酸对K562细胞增殖和端粒酶活性的影响

 目的　研究靶向封闭端粒酶反转录酶（hTERT）mRNA的反义硫代寡核苷酸（ASPSODN）对K562细胞目的基因的抑制及其对端粒酶活性及细胞增殖周期和凋亡的影响 。方法　ASPSODN转染到人类红白血病细胞株K562,采用MTT法、酶联免疫吸附（ELISA）法和流式细胞术（FCM）检测K562细胞的增殖、端粒酶活性、细胞凋亡和细胞周期的改变,RT-PCR检测hTERT mRNA的表达。结果　0.6 μmol／L的ASPSODN（0.42±0.16）能明显下调hTERT表达（P＜0.05）,端粒酶相对活性降至52 %;MTT法检测显示明显抑制K562细胞增殖活性;FCM显示细胞凋亡率为10.31 %,PI染色显示细胞被阻止在G1／G0期,S期及G2／M期的细胞减少,但无特征性的凋亡峰。结论　ASPSODN靶向 hTERT 能特异性抑制K562细胞hTERT mRNA的表达,明显下调端粒酶活性,抑制K562细胞增殖,并通过降低细胞的端粒酶活性而诱发细胞凋亡。     

敲除CIAPIN1基因提高白血病K562细胞对伊马替尼的敏感性

目的： 探讨靶向干扰细胞因子诱导凋亡抑制因子1 （cytokine induced apoptosis inhibitor 1,CIAPIN1）基因表达后慢性 粒细胞性白血病K562细胞对伊马替尼的敏感性。 方法 ：构建靶向CIAPIN1基因的shRNA干扰载体;使用实时定量PCR、West- ern blotting以及免疫荧光评价CIAPIN1-shRNA组（CIAPIN1-shRNA转染）和scramble-shRNA组（scramble-shRNA转染K562细 胞）干扰效率;伊马替尼（imatinib）处理两组K562细胞后,MTT法检测其增殖能力,集落形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细 胞术和Western blotting检测细胞周期、凋亡及凋亡相关蛋白的变化。 结果： shRNA干扰可有效抑制CIAPIN1表达,CIAPIN1- shRNA组的CIAPIN1 mRNA表达量为scramble-shRNA组的(29.74±4.03)%、CIAPIN1蛋白表达量前者为后者的(21.57±2.18)%。 CIAPIN1表达下调能显著抑制伊马替尼对K562细胞的增殖和克隆形成,CIAPIN1-shRNA+imatinib组的细胞克隆形成数为 （15.60±1.03）个/视野,克隆半径为（2.63±0.55）μm,均小于scramble-shRNA+imatinib组（P<0.05或P<0.01）。CIAPIN1-shRNA+ imatinib组的细胞G1期细胞比例比scramble-shRNA+imatinib组明显增多,S期细胞比例较scramble-shRNA+imatinib组明显减少 （均P<0.01）。CIAPIN1-shRNA+imatinib组K562细胞凋亡率明显增加（P<0.01）。敲除CIAPIN1能抑制细胞周期相关蛋白Cyclin D1、Bcl-xl、Bcl-2、Mcl-1表达,诱导细胞内细胞凋亡相关蛋白p21、Bid、Bim表达,且与伊马替尼具有协同作用。 结论： CIAPIN1表 达下调可明显提高K562细胞对伊马替尼的敏感性,该作用主要通过阻滞K562细胞周期及诱导凋亡相关蛋白表达实现。     

MicroRNA-17-5p反义寡核苷酸阻滞白血病K562细胞的细胞周期

目的： 以反义寡核苷酸技术研究microRNA-17-5p（miR-17-5p）对人慢性髓系白血病K562细胞增殖的影响及其可能的机制。 方法： 脂质体法将miR-17-5p反义寡核苷酸（miR-17-5p antisense oligonucleotide,miR-17-5p-ASO）和对照无义寡核苷酸（control nonsense oligonucleotide,Ctrl-NSO）转染入K562细胞,同时设未转染对照组（Ctrl）。 MTT法检测K562细胞的增殖,TUNEL法检测K562细胞的凋亡,流式细胞术检测K562细胞周期的改变。 结果： MTT检测结果显示,miR-17-5p-ASO组K562细胞增殖活性为Ctrl-NSO组的(61.7±4.7)%,miR-17-5p-ASO转染显著抑制K562细胞的增殖（P<0.05）。TUNEL检测显示,miR-17-5p-ASO转染不影响K562细胞凋亡（P>0.05）;miR-17-5p-ASO组K562细胞G2期细胞比例为(10.8±08)％,显著低于Ctrl-NSO组和Ctrl组的(34.6±0.4)％和(33.9±1.3)％(P<0.05)。 结论： MiR-17-5p反义寡核苷酸可以通过调控细胞周期抑制K562细胞的增殖,有望成为白血病治疗的新手段。     

Raf激酶抑制蛋白增强卵巢癌细胞的化疗敏感性

摘 要　目的：探讨Raf激酶抑制蛋白（Raf kinase inhibitor protein,RKIP）对卵巢癌SKOV-3细胞化疗敏感性的影响。方法：以脂质体法将含有人全长RKIP基因的真核表达质粒pcDNA3.1-ssRKIP转染入SKOV-3细胞中,Western blotting检测SKOV-3细胞中RKIP蛋白的表达。不同浓度顺铂作用转染后的SKOV-3细胞,MTS法观察RKIP基因转染对顺铂处理后SKOV-3细胞增殖的影响,流式细胞仪检测RKIP基因转染对顺铂诱导SKOV-3细胞凋亡及细胞周期的影响。结果：pcDNA3.1-ssRKIP转染的SKOV-3细胞RKIP表达明显升高。不同浓度顺铂处理细胞24、48、72 h后,RKIP基因转染细胞增殖抑制率显著高于对照细胞（P<0.05）。用2.5 μg/ml顺铂作用SKOV-3细胞24 h后,RKIP转染细胞的凋亡率为（10.86±0.73）%,明显高于未转染细胞的（4.27±0.67）%和空质粒转染细胞的（4.02±0.43）%（P<0.01);在无顺铂作用情况下,RKIP转染细胞的凋亡率为（3.11±0.78）%,仍然高于未转染细胞的（1.51±0.13）%和转染空质粒细胞的（1.97±0.46）%（P<0.01)。细胞周期检测结果显示,RKIP转染细胞G0/G1期的比例下降,S期的比例增加,转染的SKOV-3细胞发生S期阻滞。结论：RKIP基因的转染可以增加卵巢癌SKOV-3细胞对化疗药物顺铂的敏感性。     

抑制人高迁移率族蛋白1基因表达对胰腺癌细胞凋亡影响的研究

目的:探讨反义人高迁移率族蛋白1(HMGB1)基因转染对人胰腺癌细胞的凋亡诱导作用及对Bcl-2/bax mRNA表达水平的影响.方法:应用分子克隆技术构建反义HMGB1基因真核表达栽体pcDNA3.1/anti-HMGB1,脂质体介导转染人胰腺癌细胞pane1,G418筛选获得阳性克隆.RT-PCR方法检测HMGB1、Bcl-2和Bax表达水平,MTT法测定细胞增殖,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡及细胞周期情况.结果:成功构建pcDNA3.1/anti-HMGB1真核表达裁体,转染pcDNA3.1/anti-HMGB1可使pancl细胞HMGB1和Bcl-2 mRNA表达水平显著降低,P<0.01;Bax mRNA的相对表达量明显升高,P>0.05;与对照组相比,Bax/Bcl-2 mRNA的比值显著升高,P<0.05.肿瘤细胞增殖能力明显受到抑制,P<0.01;并出现G1期阻滞和凋亡细胞百分率增加.结论:反义HMGB1基因转染能抑制胰腺癌细胞增殖,促进细胞凋亡,是胰腺癌基因治疗的策略之一.     

多药耐药基因、谷胱甘肽S-转移酶特异性siRNA逆转K562／A02细胞多药耐药.

 目的　研究多药耐药基因（mdr1）、谷胱甘肽S-转移酶（GSTπ）特异性siRNA逆转K562／A02细胞多药耐药性。方法　以mdr1 mRNA第79～99和GSTπmRNA第308～327核苷酸为作用靶点，合成针对靶区域序列的siRNA，克隆入pSilence2.1-U6 neo，克隆产物为pSilence-mdr1和pSilence-GSTπ，脂质体介导下转染K562／A02细胞。用实时荧光定量PCR检测K562／A02细胞 mdr1和GSTπ mRNA的表达；流式细胞仪检测细胞凋亡；MTT法检测多柔比星的半数抑制浓度（IC50）。结果　经酶切、测序分析表明，成功构建siRNA真核表达载体。经pSilence-mdr1转染后的K562／A02细胞株mdr1 mRNA表达量下降了71.5 %，从（2.8±1.65）×108拷贝／μg RNA下降至（3.9±2.37）×107拷贝／μg RNA（P＜0.01）；同时pSilence-GSTπ 作用后，K562／A02细胞 GSTπmRNA表达量较显示空载体pSilence2.1-U6 转染组下降了39.8 %，从（2.3±1.14）×105拷贝／μg RNA下降至（5.4±2.45）×104拷贝／μg RNA（P＜0.01）；流式细胞仪显示空载体pSilence2.1-U6 转染组细胞凋亡率为（11.65±4.06）%，pSilence-mdr1和 pSilence-GSTπ共转染组细胞凋亡率为（44.98±11.27）%（P＜0.01）；空载体转染组耐药指数为23，pSilence-mdr1和pSilence-GSTπ共转染组耐药指数降低为7，IC50值从转染前的（1.16±0.38）mmol／ml下降为（0.33±0.04）mmol／ml（P＜0.01）。结论　siRNA 真核表达载体pSilence-mdr1、pSilence-GSTπ对K562／A02细胞株多药耐药性具有明显的下调作用。     

转录因子XBP1S对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨人剪接型X盒结合蛋白1(X-box binding protein1spliced,XBP1S)对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响。方法:应用衣霉素(tunicamycin,Tm)和毒胡萝卜素(thapsigargin,Tg)建立HepG2细胞的内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)模型。将XBP1S真核表达载体pcDNA3.1(-)-XBP1S和靶向XBP1S的RNA干扰质粒pSUPER-XBP1S转染HepG2细胞,MTT法检测细胞的增殖能力,荧光显微镜下观察细胞的形态学变化,FCM法检测细胞凋亡率,Western印迹法检测caspase12的表达。结果:转染pSUPER-XBP1S可有效抑制细胞增殖,而转染pcDNA3.1(-)-XBP1S可促进细胞增殖。荧光显微镜下可见Tm处理组细胞出现细胞凋亡的形态学改变,进一步下调XBP1S的表达可使这一改变增强。对照组、Tm组、Tm+pSUPER-XBP1S转染组和Tm+pcDNA3.1(-)-XBP1S转染组细胞的凋亡率分别为5.21%、41.51%、52.15%和35.87%,差异有统计学意义(P<0.05)。HepG2细胞中caspase12的表达,Tm组高于对照组,Tm+pSUPER-XBP1S转染组高于Tm组,Tm+pcDNA3.1(-)-XBP1S转染组低于Tm组。结论:XBP1S可以促进肝癌HepG2细胞增殖,抑制或促进XBP1S表达可调节ERS介导的细胞凋亡。     

增强子结合蛋白C/EBPα对白血病BALB/c裸鼠的肿瘤抑制作用

  目的　探讨增强子结合蛋白C／EBPα在白血病裸鼠体内的肿瘤抑制作用。方法　将30只BALB／c裸鼠随机分转染组（10只）、空载组（10只）、对照组（10只）,建立皮下瘤模型,并将30只BALB／c裸鼠如上分组建立白血病模型,将C／EBPα稳定表达细胞株pEGFP-C／EBPα-K562、空载细胞株pEGFP-K562及白血病细胞株K562分别经皮下和尾静脉注射到相应组裸鼠体内,形成皮下瘤和血液病模型。观测皮下肿瘤的变化,应用TUNEL检测细胞的凋亡,瑞特-吉姆萨染色观察血液病模型裸鼠外周血和骨髓中白血病细胞增殖能力,RT-PCR检测增殖相关基因的表达。结果　皮下瘤模型中pEGFP-C／EBPα-K562组肿瘤质量及最大直径为（2.4±0.1）g和（11±2）mm,空载组和对照组分别为（5.1±0.3）g、（19±3）mm和（5.7±0.4）g、（23±3）mm（均P＜0.05）,TUNEL检测发现pEGFP-C／EBPα-K562组肿瘤细胞凋亡明显增加（P＜0.05）;血液病模型鼠外周血可见白血病细胞,pEGFP-C／EBPα-K562组白血病细胞增殖能力明显低于空载组和对照组,可见明显细胞分化现象,RT-PCR检测发现p53基因上调和c-myc基因下调。结论　增强子结合蛋白C／EBPα在白血病小鼠体内具有促进肿瘤细胞凋亡和抑制白血病细胞增殖的能力,并能促进白血病细胞分化。C／EBPα的白血病抑制作用可能是通过对相应基因的调控来实现。     

重组人源白细胞介素-24联合重组人源核心蛋白聚糖对人类肝细胞癌HepG2细胞增殖抑制和凋亡诱导协同效应的研究

目的 观察外源基因重组人源白细胞介素（IL）-24（rhIL-24）联合重组人源核心蛋白聚糖（rhDCN）对人类肝细胞癌HepG2细胞的增殖、凋亡和细胞周期的影响.方法 采用脂质体瞬时转染法将pcDNA3.1（＋）-IL-24和pcDNA3.1（＋）-DCN质粒转染至HepG2细胞,48 h后倒置显微镜下观察细胞生长状况、形态学改变.分别在转染后24h、48 h和72 h,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察IL-24和DCN单独及联合转染对HepG2细胞的增殖抑制效应.转染后48 h流式细胞术检测HepG2细胞凋亡情况,并进行细胞周期阻滞分析.结果 与对照组相比,转染目的基因48 h后显微镜下可见细胞生长不同程度地被抑制,并可见典型的凋亡细胞形态改变,以联合转染组改变更为明显.MTT结果显示转染后48 h和72 h,双基因联合转染组的抑制率分别是（31.88±6.57）％和（36.83±3.76）％,与对照组和单独转染组比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）.流式细胞术结果显示,单独转染IL-24和DCN基因可诱导HepG2细胞出现不同程度凋亡,而双基因联合转染组细胞凋亡率可达（32.56±0.90）％,与空质粒转染组的（2.98±0.72）％、空白细胞对照组的（3.50±0.92）％、IL-24组的（20.01±1.08）％和DCN组的（22.20±0.91）％比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）.细胞周期分析结果表明,与对照组相比,IL-24基因转染组的G2/M期和DCN基因转染组的G0/G1期细胞比例明显增高分别为（11.24±0.35）％、（77.93±0.67）％,而双基因联合转染组G0/G1期和G2/M期细胞比例同时增高,分别是（71.36±0.60）％和（10.39±0.67）％,差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 联合转染IL-24和DCN基因可以协同发挥较单独应用更强的抑制HepG2细胞增殖和诱导HepG2细胞凋亡的作用.IL-24可使HepG2细胞发生G2/M期阻滞,DCN可使HepG2细胞发生G0/G1期阻滞,双基因联合使HepG2细胞同时发生G2/M期和G0/G1期阻滞,是IL-24和DCN对HepG2细     

重组hDCN对肝癌细胞株HepG2表面HLA分子表达的影响

目的研究peDNA3．1（＋）-核心蛋白聚糖（DCN）重组质粒对体外培养的HepG2细胞株表面HLAⅠ、Ⅱ类分子表达的影响,探讨DCN增强抗肿瘤免疫应答的作用。方法重组质粒pcDNA3．1（＋）-DCN转染HepG2细胞,用流式细胞术（FCM）检测转染前后HepG2细胞表面HLAⅠ、Ⅱ类分子的表达。结果HepG2细胞低表达HLAⅠ、Ⅱ类分子,经转染重组质粒作用后,HLAⅠ、Ⅱ类分子的荧光强度明显增强。结论rhDCN核心蛋白能上调肿瘤细胞表面HLAⅠ、Ⅱ类分子的表达,这一作用可能参与其抗肿瘤效应机制。     

RIN1过表达对人胃腺癌MKN28细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响

[目的]研究RIN1过表达对人胃腺癌MKN28细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响。[方法]①采用Western blot法和免疫荧光法检测RIN1在MKN28细胞中表达;②采用Burd-U标记检测MKN28细胞高表达RIN1后细胞增殖能力变化;③采用Transwell法、细胞划痕法检测MKN28细胞高表达RIN1后细胞侵袭和迁移能力变化;④采用AV/PI染色法、Hoechst染色法检测MKN28细胞高表达RIN1后细胞凋亡情况。[结果]①RIN1在MKN28细胞中呈高表达,表达量是空载对照组的3.22倍,且主要分布在细胞质中;②Burd-U染色结果显示,RIN1高表达MKN28细胞的阳性率显著性升高,与空载对照组相比为75.6%±5.4%vs 25.6%±1.1%（P〈0.01）;③RIN1高表达MKN28细胞的侵袭和迁移能力明显增强,与空载对照组相比分别为122.0±7.0 vs 65.00±2.52（P〈0.01）和54.22%±3.45%vs 38.6%±2.45%（P〈0.01）;④RIN1高表达MKN28细胞株细胞凋亡数显著性减少,与空载对照组相比为21.63%±2.60%vs 8.07%±1.60%（P〈0.01）。[结论]RIN1过表达促进MKN28细胞增殖、侵袭和迁移,抑制MKN28细胞凋亡;RIN1可能是介导胃癌发生的癌基因之一。     

舒芬太尼预处理对大鼠肠缺血再灌注肝损伤的影响及阿片受体的介导作用

  目的　探讨舒芬太尼对大鼠肠缺血再灌注肝细胞凋亡、bcl-2、Bax表达的影响及阿片受体的介导作用。方法　成年健康Wistar大鼠72只,体质量200～250 g,雌雄不限,随机分为9组,每组8只：假手术组（S组）、缺血再灌注组（IR组）、舒芬太尼预处理组（SPC组）、δ受体阻断剂组（NTD组）、μ受体阻断剂组（CTOP组）、κ受体阻断剂组（nor-BNI组）、3种阿片受体阻断剂干预组（NTD+SPC组、CTOP+SPC组、nor-BNI+SPC组）。通过夹闭肠系膜上动脉制作肠缺血再灌注损伤（IIRI）模型,实验结束后即刻取肝左叶做标本。用免疫组织化学法检测bcl-2、Bax蛋白表达,末端转移酶标记技术（TUNEL）法检测肝细胞凋亡指数（AI）。结果　与IR组相比,SPC组bcl-2表达升高（0.277±0.014比0.230±0.013）（P＜0.05）、bcl-2／Bax 比值升高（1.375±0.113比0.819±0.102）（P＜0.05）,Bax表达下调（0.202±0.013比0.283±0.025）（P＜0.05）,肝细胞AI降低（6.491±1.191比10.094±1.051）（P＜0.05）。与SPC组比较,NTD+SPC组、nor-BNI+SPC组、CTOP+SPC组bcl-2表达降低（F＝59.698,P＜0.05）,bcl-2／Bax 比值降低（F＝40.349,P＜0.05）,Bax表达升高（F＝53.765,P＜0.05）,肝细胞AI升高（F＝76.728,P＜0.05）。结论　舒芬太尼预处理可抑制大鼠肠缺血再灌注时肝细胞凋亡,δ、κ、μ3种阿片受体介导了舒芬太尼的保护且作用相当。     

Bcl-w对膀胱肿瘤细胞5637增殖、顺铂敏感性的影响

[目的]探讨过表达的Bcl-w蛋白对膀胱肿瘤细胞5637的增殖能力、顺铂敏感性的影响。[方法]采用质粒pcDNA3.1（＋）构建Bcl-w过表达载体,转染5637细胞后用Western blot验证过表达效果,用CCK-8、平板克隆形成实验、流式细胞仪检测pcDNA3.1-Bcl-w细胞和对照组细胞的增殖和生存曲线、克隆形成能力、细胞周期。[结果]成功构建pcDNA3.1-Bclw重组质粒并转染5637细胞。pcDNA3.1-Bcl-w细胞增殖曲线在24、48、72h均高于对照组（0.814±0.022 vs 0.727±0.017,P=0.006;1.259±0.017 vs 1.078±0.027,P=0.001;1.787±0.024 vs1.520±0.021,P〈0.001）,差异具有统计学意义;克隆形成能力高于对照组（60.67±6.03 vs48.67±6.11,P〈0.001）,差异具有统计学意义;处于G0/G1期的比例低于对照组（50.76%vs57.02%,P〈0.001）,差异具有统计学意义;在30、50、70、90、110μmol/L各浓度顺铂处理下生存曲线高于对照组[（83.8%±1.7%）vs（93.9%±1.2%）,P〈0.001;（59.5%±0.7%）vs（72.5%±1.9%）,P=0.028;（50.5%±2.2%）vs（57.2%±1.2%）,P=0.007;（37.2%±0.7%）vs（45.7%±1.4%）,P〈0.001;（29.1%±0.5%）vs（33.2%±0.6%）,P〈0.001],差异具有统计学意义。[结论]高表达的Bcl-w增强了膀胱癌细胞5637的增殖能力,削弱了肿瘤细胞对化疗药物顺铂的敏感性。     

Apollon siRNA对慢性髓系白血病K562细胞株阿糖胞苷敏感性影响研究

目的：研究小干扰RNA（RNAi）技术沉默凋亡抑制蛋白Apollon基因联合小剂量阿糖胞苷（Ara-C）对K562细胞化疗敏感性的影响。方法：构建pGPHI-GFP-Neo-Apollon真核表达载体,经阳离子脂质体转染K562细胞,实验分为RNAi组、阴性质粒组、细胞对照组、Ara-C组和RNAi＋Ara-C组5组,采用RT-PCR和细胞免疫荧光检测干扰效果。RNAi与小剂量Ara-C单独和联合应用后,采用MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果：RT-PCR结果显示,实验组Apollon mRNA的相对表达量为（27.622±0.057）%,与细胞对照组（89.770±0.028）%和阴性对照组（84.868±0.057）%相比明显降低,差异有统计学意义,F=57.573,P=0.012。细胞免疫荧光检测结果显示,实验组细胞Apollon蛋白的荧光强度为（15.96±1.71）%,明显低于细胞对照组（35.36±2.90）%和阴性对照组（34.97±2.65）%,差异有统计学意义,F=71.063,P=0.013。重组载体和（或）10μg/mL Ara-C作用于K562细胞24、48和72h后,RNAi组和RNAi＋Ara-C组K562细胞增殖抑制率（IR%）明显增高,随着作用时间的延长,抑制效果越明显。流式细胞术结果显示,RNAi＋Ara-C组细胞凋亡率为（30.816±1.06）%,明显高于细胞对照组（4.803±0.112）%、阴性对照组（4.566±0.205）%和Ara-C组（11.61±0.604）%及RNAi组（20.226±0.986）%,差异有统计学意义,F=138.57,P〈0.001。结论：靶向Apollon RNAi联合小剂量Ara-C能有效抑制K562细胞增殖并促进其凋亡,显著减少Ara-C使用剂量,明显提高了K562细胞对Ara-C的敏感性。     

辛伐他汀联合阿糖胞苷对K562细胞增殖与凋亡的影响

 目的　探讨辛伐他汀（SV）联合阿糖胞苷（Ara-C）对K562 细胞增殖与凋亡的影响。方法　不同浓度SV和Ara-C单用或者联合处理K562细胞,对照组为K562细胞。药物作用24、48、72 h后收集细胞,分别观察各组细胞形态,采用MTT法检测不同组别细胞的生长抑制率,采用流式细胞术检测细胞早期凋亡率、细胞坏死比例。结果　SV联合Ara-C组与单药组相比细胞形态明显有核固缩现象,且可见凋亡小体形成,并且随着处理时间的增加,抑制率也增大。其中15 μmol／L SV联合20 μmol／L Ara-C的细胞抑制作用最为显著,72 h细胞抑制率为（72±1）%,明显高于15 μmol／L SV组的（45±2）%和20 μmol／L Ara-C组的（44±0）%（P＜0.01）,表现为协同抑制作用（24、48 h金氏Q值为1.24和1.19）。流式细胞术检测发现20、15和 10 μmol／L SV组K562细胞早期凋亡率AnnexinV明显高于对照K562细胞（P＜0.01）,而且随着时间延长和剂量的增大早期凋亡率也增加（P＜0.05）。20和15 μmol／L SV组早期凋亡率均高于10 μmol／L SV组,而前两者之间差异无统计学意义（P＞0.05）。晚期凋亡细胞率（PI）各组中差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论　SV 体外抑制K562细胞增殖及诱导细胞凋亡,SV 与Ara-C具有协同作用,增加了K562细胞对化疗药物的敏感性。15 μmol／L 可能为SV体外最佳作用浓度。     

PTEN/PI3K/Akt信号通路对K562细胞凋亡调控的研究

 目的 探讨PTEN/PI3K/Akt信号传导通路对人慢性粒细胞白血病细胞系K562的增殖、凋亡调控的研究及可能的分子作用机制。 方法 将携带有野生型PTEN及绿色荧光蛋白的腺病毒（Ad-PTEN-GFP）及空载体（Ad-GFP）腺病毒,转染人慢性粒细胞白血病细胞系K562。通过MTT检测细胞生长曲线,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞增殖指数,同时用细胞光镜、电镜形态等方法检测细胞凋亡,荧光定量PCR（FQ-PCR）检测PTEN及凋亡相关基因Bcl-2、Bcl-_xL、Bax mRNA水平变化,Western blot检测PTEN及Akt、p-Akt蛋白水平变化。 结果 与Ad-GFP组相比,Ad-PTEN-GFP 转染K562细胞后,细胞增殖受抑,增殖指数降低,凋亡率增加,p-Akt表达降低,抗凋亡相关基因Bcl-2、Bcl-_xL mRNA表达降低,促凋亡基因Bax mRNA表达增加。 结论 过表达PTEN可能通过抑制PI3K/Akt通路抑制K562细胞系增殖,促进细胞凋亡。