RSK4与Ki-67、cyclin D1、CXCR4、E-cadherin在乳腺癌裸鼠移植瘤中的相关性研究

目的 分析乳腺癌裸鼠移植瘤中核糖体 S6蛋白激酶 4（ribosomal protein S6 kinase 4,RSK4） 与Ki-67、cyclin D1、CXCR4、E-cadherin表达的相关性,进一步探讨RSK4在乳腺癌发展中的作用机制。方法 将转染siRNA （RSK4-RNAi-LV）的MCF-7细胞（实验组）、转染siRNA （NC-GFP-LV）的MCF-7细胞（阴性对照组）和未转染的MCF-7细胞（空白对照组）分别接种至裸鼠乳腺脂肪垫下,建立乳腺癌裸鼠移植瘤模型,剥离裸鼠移植瘤;采用免疫组织化学法检测移植瘤标本中增殖因子RSK4、Ki-67、cyclin D1 及侵袭因子CXCR4、E-cadherin蛋白的表达。结果 实验组RSK4、E-cadherin蛋白的表达水平分别为（3.2±0.5）％、（28.2±0.7）％,明显低于空白对照组的（36.7±3.4）％、（51.7±4.2）％和阴性对照组的（61.1±5.1）％、（49.2±3.8）％,差异有统计学意义（F=56.79,61.89,P＜0.05）。实验组Ki-67、cyclin D1、CXCR4蛋白的表达水平分别为（67.8±5.8）％、（61.7±4.6）％、（56.3±3.9）％,明显高于空白对照组的（34.5±1.4）％、（29.7±2.5）％、（30.7±3.1）％和阴性对照组的（29.8±1.9）％、（35.7±4.6）％、（28.5±3.7）％,差异有统计学意义（F=45.24,52.16,61.24,P＜0.05）。相关性分析显示,RSK4与 Ki-67、cyclin D1、CXCR4表达呈负相关（r=-0.857,-0.826,-0.867,P<0.001）,与E-cadherin表达呈正相关（r=0.879,P<0.001）。 结论 RSK4可能通过调节CXCR4、Ki-67、CyclinD1和E-cadherin肿瘤相关因子的表达,在乳腺癌在乳腺癌生长及转移过程中发挥作用。     

泌乳素诱导蛋白表达下调对三阴性乳腺癌细胞裸鼠体内成瘤影响研究

目的：探讨泌乳素诱导蛋白（prolactininducibleprotein,PIP）表达下调对三阴性乳腺癌（triplenegativebreastcancer,TNBC）MDA-MB453细胞在裸鼠体内成瘤的影响。方法：采用脂质体将PIPsiRNA转染至乳腺癌MDA_MB453细胞,蛋白质印迹法检测PIP的表达下调情况。采用4周龄BALB／c雌性裸鼠,建立乳腺癌MDA-MB-453细胞裸鼠皮下种植瘤模型,瘤内注射siRNA-脂质体混悬液,观察PIPsiRNA对肿瘤生长的影响。采用免疫组织化学法检测肿瘤组织中CyclinDl和VEGF的表达情况。结果：PIP表达下调后,其在裸鼠体内成瘤能力明显降低,肿瘤平均体积空白对照组为（1075±65）mm2,阴性对照组为（1095±72）mm2,实验组为（473±56）mm2,空白对照组与阴性对照组差异无统计学意义,P=0．719,空白对照组与实验组、实验组与阴性对照组差异均有统计学意义,P〈0．001。空白对照组肿瘤平均体质量为（908士86）mg,阴性对照组为（889±64）mg,实验组为（272±30）mg,空白对照组与阴性对照组差异无统计学意义,P=0．738,空白对照组与实验组、实验组与阴性对照组差异均有统计学意义,P〈0．001。肿瘤生长抑制率为71．1％。免疫组化结果显示,PIP表达下调的肿瘤组织中CyclinD1的相对表达量空白对照组为1535±78,阴性对照组为1594±123,实验组为367±72,空白对照组与阴性对照组差异无统计学意义,P=0．472,空白对照与实验组、实验组与阴性对照组差异均有统计学意义,P〈O．001。VEGF的相对表达量空白对照组为4270±558,阴性对照组为4365±324,实验组为1286±292,空白对照组与阴性对照组差异无统计学意义,P=0．758,空白对照与实验组、实验组与阴性对照组差异均有统计学意义,P〈0．001。结论：下调PIP基因表达可明显抑制乳腺癌MDA-MB-453细胞体内成瘤能力,提示PIP可能在乳腺癌发生和发展中发挥重要作用。     

TAT-OSBP-MKK6（E）抑制卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤恶性生物学行为的研究

目的 探讨TAT-OSBP-MKK6（E）对人卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤生长、侵袭及转移等恶性生物学行为的影响。方法 18只裸鼠随机分为实验组［TAT-OSBP-MKK6（E）］、阴性对照组［TAT-OSBP-MKK6（E）+SB202190］和空白对照组（生理盐水）,每组6只,细胞接种法建立人卵巢癌腹腔移植瘤模型,每2天测量腹围。4周后解剖裸鼠,观察裸鼠成瘤情况,测定腹水量,统计肿瘤播散器官数及瘤结节数,称量瘤体重量并计算抑瘤率。采用HE染色分析移植瘤的病理形态学特点;采用TUNEL法检测移植瘤组织的细胞凋亡指数（AI）;免疫组化SP法检测各组移植瘤组织中血管内皮生长因子（VEGF）的表达;Western blotting检测各组移植瘤组织中p38蛋白表达。结果 与阴性对照组和空白对照组比较,实验组裸鼠腹围增长明显滞后（P＜0.05）,腹水量明显减少（P＜0.05）,肿瘤播散器官数、瘤结节数及瘤体重量均明显减少（P均＜0.05）,抑瘤率达70.99％。实验组的AI为（20.44±1.20）％,显著高于阴性对照组的 （4.94±0.24）％和空白对照组的（4.00±0.79）％,差异均有统计学意义（P＜0.05）;实验组VEGF蛋白的阳性表达率为21.2％,显著低于阴性对照组的81.4％和空白对照组的85.7％,差异均有统计学意义（P＜0.05）;实验组p38蛋白的相对表达量为0.40±0.01,显著高于阴性对照组的0.22±0.01和空白对照组的0.20±0.01,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 TAT-OSBP-MKK6（E）能显著抑制人卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤的生长、侵袭及转移。     

沉默SIAH2基因抑制人肝癌细胞HepG2裸鼠移植瘤生长实验研究

目的 本研究前期实验发现,靶向SIAH2的shRNA载体能显著抑制HepG2细胞SIAH2 mRNA和蛋白的表达,并抑制细胞体外增殖.本研究从体内水平验证靶向SIAH2的干扰载体对人肝癌细胞HepG2细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用.方法 转染pGenesil-SIAH2的HepG2细胞作为实验组,命名为HepG2-SIAH2;转染空载体pGenesil-1的HepG2细胞作为阴性对照组,命名为HepG2-neo;未转染任何质粒的HepG2细胞作为空白对照组,通过G418筛选出稳定转染细胞株.将15只裸鼠随机分为3组,接种肿瘤细胞后观察裸鼠成瘤情况.4周后测量肿瘤的体积和瘤体质量,绘制移植瘤生长曲线,并用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测移植瘤中SIAH2的表达情况.结果 稳定转染pGenesil-SIAH2的细胞株构建成功,3组裸鼠接种癌细胞后均有肿瘤形成.与空白对照组和阴性对照组相比,实验组肿瘤生长速度明显减慢,实验组平均瘤体积(261.57±41.141)mm3,明显低于阴性对照组(494.35±93.236) mm3(P=0.015)和空白对照组(418.3±28.576 5)mm3(P=0.012),差异有统计学意义;实验组平均瘤体质量为(0.162±0.02)g,明显低于阴性对照组(0.358±0.12)g(P=0.032)和空白对照组(0.322±0.24)g(P=0.028).实验组瘤体内SIAH2 mRNA相对表达量为0.83±0.35,明显低于阴性对照组2.35±0.96(P=0.003)和空白对照组2.57±0.41(P=0.006),差异有统计学意义.实验组瘤体内SIAH2蛋白表达量为0.72±0.02,明显低于阴性对照组2.61±0.67(P=0.004)和空白对照组2.49±0.91(P=0.007),差异有统计学意义.结论 靶向SIAH2的shRNA干扰载体能有效抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生长,SIAH2有可能成为肝癌基因治疗新的分子靶.     

慢病毒载体介导shRNA干扰对乳腺癌MCF-7细胞RSK4基因表达的影响

目的观察慢病毒干扰载体（RSK4-RNAi—LV）转染对低侵袭、低转移潜能的乳腺癌MCF-7细胞中核糖体s6蛋白激酶4（fibosomalproteins6kinase4,RsK4）基因表达的影响。方法设计合成特异性的RSK4shRNA干扰体RSK4-RNAi—Lv,稳定转染至乳腺癌MCF-7细胞中,应用实时荧光定量PCR法和Westernblot法检测RSK4mRNA及其蛋白的表达情况。结果稳定转染慢病毒干扰载体至乳腺癌细胞后,72h开始检测到GFP荧光表达,90h后GFP荧光表达明显增强,RSK4mRNA及其蛋白的表达均被明显抑制,抑制率分别为98．2％和80．1％。结论稳定转染RSK4．RNAi。LV可有效抑制乳腺癌MCF-7细胞中RSK4mRNA及其蛋白的表达。     

RNAi沉默MCM7基因对人肝癌细胞SMMC-7721裸鼠移植瘤影响研究

目的探讨微小染色体维持蛋白7(miniehromosome maintenanceprotein7,MCM7)基因RNAi(RNA interference)的重组慢病毒载体,对人肝癌细胞SMMC-7721 MCM7基因表达和裸鼠移植瘤生长的影响。方法构建重组逆转录慢病毒载体MCM7-shRNA,以MCM7基因沉默重组慢病毒颗粒(LV-shRNA-MCM7)感染SMMC-7721细胞,作为实验组;以对照慢病毒颗粒(LV-shRNA-NC)感染SMMC-7721细胞,作为阴性对照组;空白对照组常规培养,不做任何处理。通过嘌呤霉素筛选出稳定转染细胞株。3组细胞分别接种至裸鼠皮下,建立人肝癌裸鼠移植瘤模型。观察裸鼠成瘤情况、移植瘤生长情况并绘制肿瘤生长曲线;4周后测定肿瘤体积和质量,并用RT-PCR、实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法及免疫组织化学法检测移植瘤中MCM7的表达情况。结果 MCM7-shRNA慢病毒载体构建成功。裸鼠接种癌细胞后第6天均有肿瘤形成,与空白对照组和阴性对照组相比,实验组的肿瘤生长速度明显减慢,实验组、阴性对照组和空白对照组的瘤体平均体积分别为(27.72±7.80)、(81.86±10.91)和(79.75±16.61)mm3,差异有统计学意义,F=61.949,P<0.05;实验组、阴性对照组和空白对照组的瘤体平均质量分别为(0.19±0.06)、(0.501±0.14)和(0.509±0.18)g,差异有统计学意义,F=18.41,P<0.05。实验组MCM7mRNA的相对表达量为0.253±0.198,阴性对照组1.213±0.548,空白对照组1.201±0.744,实验组相比阴性对照组和空白对照组明显下降,差异有统计学意义,F=4.091,P<0.05;实验组MCM7蛋白相对表达量为0.207±0.015,阴性对照组1.116±0.062,空白对照组1.088±0.040,实验组相比阴性对照组和空白对照组明显下降,差异有统计学意义,F=292.778,P<0.05。MCM7蛋白在阴性对照组和空白对照组中阳性表达率均为100%(10/10),在实验组中为30%(3/10),实验组明显低于阴性对照组和空白对照组,差异有统计学意义,χ2=18.261,P<0.001。结论慢病毒沉默SMMC-7721细胞MCM7基因表达能有效抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生长,MCM7基因可能成为肝癌基因治疗的有效靶点。     

CXCR4-PI3KⅢ-自噬轴与结肠癌LoVo细胞转移潜能相关性研究

目的：探讨调控CXCR4-PI3KⅢ-自噬轴对结直肠癌LoVo细胞迁移和侵袭能力的影响。方法：实验分为正常LoVo细胞组、介导CXCR4-RNAi慢病毒转染LoVo细胞组（CXCR4-RNAi组）和无意义慢病毒转染LoVo细胞组（NC组）。采用Q-PCR检测P13KBImRNA表达,蛋白质印迹法检测P13KⅢ、LC3Ⅱ及Beclin 1的表达,激光共聚焦显微镜观察绿色荧光颗粒,透射电镜观察自噬溶酶体,Transwell小室评价LoVo细胞迁移与侵袭能力。结果：P13K Ⅲ mRNA表达量正常LoVo细胞纽为1．09±0．11,Nc纽为1．07±0．25,CXCR4-RNAi组为0．86±0．06。P13KⅢ相对表达量CXCR4-RNAi组为0．227±0．023,低于正常LoVo细胞组的0．607±0．012（P〈0．001）和NC组的0．667±0．040（P〈0．001）,正常LoVo细胞组和Nc组差异无统计学意义,P=0．310。LC3—Ⅱ相对表达量CXCR4-RNAi组为0．083±0．012,低于正常LoVo细胞组的0．233±0．015（P〈0．001）和NC组的0．253±0．020（P〈0．001）,正常LoVo细胞组和Nc组差异无统计学意义,P=0．184。Beclin1相对表达量cXCR4-RNAi组为0．207±0．012,低于正常LoVo细胞组的0．440±0．053（P=0．134）和NC组的0．650±0．252,P=0．011。绿色荧光颗粒和自噬溶酶体数量正常LoVo细胞组和NC组明显多于CXCR4-RNAi组。CXCR4-RNAi组迁移实验细胞计数（87．7±9．1）低于正常LoVo细胞组的126．3±4．9（P=0．009）和NC组的115．0±18．7（P=0．035）。CXCR4-RNAi组侵袭实验细胞计数（88．7±10．5）低于正常LoVo细胞组的109．7±4．7（P=0．019）和NC组的107．7±8．1,P=0．029。结论：CXCR4-P13KⅢ-自噬轴可调控结肠癌LoVo细胞自噬状态,影响肿瘤细胞迁移和浸润,可能是恶性肿瘤浸润转移的机制之一。     

沉默Bmi-1表达对人食管鳞癌细胞生长影响观察

目的：通过RNA干扰（RNAinterference,RNAi）抑制人食管鳞癌细胞Ecal09Bmi-1表达,探讨其对Ecal09细胞生物学特性的影响及可能机制。方法：通过对Bmi-1的小干扰RNA（siRNA）重组腺相关病毒（Bmi-1shRNA）转染Ecal09细胞,以转染空病毒（AAV—Null）的Ecal09细胞作阴性对照组,以未转染Ecal09细胞作空白对照组（PBS）,应用蛋白质印迹法分析,绘制细胞生长曲线、流式细胞检测、裸鼠成瘤实验和免疫组化分析等方法观察RNAi对Bmi-1基因的抑制情况及沉默Bmi1表达在体外及体内对Ecal09细胞增殖、侵袭、致瘤和凋亡的影响。结果：转染Bmi-1shRNA后蛋白质印迹法检测结果显示,Bmi-1shRNA组蛋白条带灰度扫描值为681．74±28．89,明显低于AAV—Null组的964．00±41．73（P=0．001）和空白对照组的1005．51±41．16,P=-0.001;AAV—Null组与空白对照组比较,差异无统计学意义,P=0．007。实验组细胞生长曲线较平缓,细胞生长速度较对照组（P=0．009）和空白对照组（P-0．031）明显降低。Ecal09细胞转染AAV—Bmi-1shRNA后,Bmi-1shRNA组增殖指数（proliferationindex,PI）为0．42±0．13,明显低于AAV-Null组的0．81±0．37（P=0．023）和空白对照组的0．91±0．25（P=0．006）,提示RNAi后细胞增殖活性明显降低。裸鼠成瘤实验提示转染Bmi-1shRNA后肿瘤生长减慢,Bmi-1shRNA组肿瘤质量（1．47±0．35）g明显低于AAV—Null组的（1．83±0．28）g（P=0．028）和空白对照组的（1．96±0．40）g,P=0．004;Bmi-1shRNA组细胞凋亡指数（16．9±5．31）％明显高于AAvlNull组的（9．57±3．84）％和空白对照组的（8．13±3．97）％,差异有统计学意义,P值均为0．001。结论：沉默Bmi-1表达能显著抑制Ecal09细胞生长,减慢肿瘤细胞的增殖,促进凋亡,抑制肿瘤生长。     

RNA干扰Bcl-2基因表达对人胆管癌细胞及胆囊癌细胞株裸鼠移植瘤生长的抑制

目的：探讨Bcl-2基因的小干扰RNA（siRNA）真核表达载体干扰Bcl-2基因表达对人胆管癌细胞QBC939、胆囊癌细胞GBC-SD裸鼠体内移植瘤生长的抑制作用。方法：分别制作人胆管癌细胞QBC939、胆囊癌细胞GBC-SD细胞株移植瘤模型,随机分为3组,pSilencerTM-EGFP sh515组（实验组）、pSilencerTM-EGFP shCon组（空载体阴性对照组）和对照组。实验组用Bcl-2基因的小干扰RNA（siRNA）真核表达载体多点注射于移植瘤周围,空载体阴性对照组用空载体多点注射于移植瘤周围,对照组不作处理,观察其生长情况,计算肿瘤生长体积、生长率。6周后,处死裸鼠,剥离瘤体组织进行称重,并采用免疫组化检测Bcl-2蛋白的表达。结果：成功建立裸鼠人胆管癌细胞QBC939,胆囊癌GBC-SD细胞的动物模型。胆管癌细胞实验组、空载体阴性对照组、对照组瘤体平均体积（mm3）分别为：801.776±59.6,1383.980±78.2,1490.235±89.0。瘤体平均瘤体重量（g）为：0.90±0.11,1.49±0.31,1.63±0.22。平均生长率为：20.558%,35.587%,38.211%。人胆囊癌细胞实验组、空载体阴性对照组、对照组瘤体平均体积（mm3）分别为：729.736±66.6,1493.162±98.9,1548.668±101.0。瘤体平均瘤体重量（g）为：0.82±0.10,1.68±0.21,1.90±0.25。平均生长率为：18.711%,38.286%,39.709%。两组实验组分别和空载体阴性对照组、对照组比较有统计学意义（P〈0.05）,空载体阴性对照组和对照组比较无统计学意义（P〉0.05）。结论：针对Bcl-2基因siRNA真核表达载体通过局部多点注射于移植瘤周围可以有效降低Bcl-2基因的表达,该基因沉默后肿瘤细胞增殖受到抑制,体内瘤体生长减慢。     

沉默PCAF基因抑制人肾上腺皮质癌裸鼠移植瘤生长及血管生成的实验研究

目的 探讨靶向沉默肾上腺皮质癌SW13细胞PCAF基因表达对裸鼠移植瘤生长以及血管生成的抑制作用及其机制。方法 pLenti6.3-MiRNA-PCAF重组慢病毒及pLenti6.3-MiRNA-NC重组慢病毒分别感染SW13细胞,将感染后的两组细胞及未处理的SW13细胞分别接种于15只裸鼠腋下,构建裸鼠移植瘤模型,分为实验组、阴性对照组、空白对照组,并观察各组肿瘤生长情况。Western blot、荧光定量PCR检测移植瘤组织PCAF蛋白、mRNA表达水平,HE染色法观察各组移植瘤组织形态学变化,免疫组织化学法检测VEGF表达及微血管密度。结果 实验组小鼠的肿瘤体积较阴性对照组和空白对照组显著缩小,肿瘤抑制率分别为49.2%和52.9%;PCAF蛋白相对表达水平较阴性对照组下降58.4%,mRNA相对表达水平较阴性对照组下降74.3%;实验组与阴性对照组和空白对照组相比,瘤内VEGF蛋白表达明显下调;实验组微血管密度（19.4±4.2）与阴性对照组（42.7±6.5）和空白对照组（51.3±8.6）相比明显下降。结论 慢病毒介导的pLenti6.3-MiRNAPCAF能有效抑制肾上腺皮质癌细胞裸鼠移植瘤的生长及血管生成。     

硒联合5-FU对MCF-7乳腺癌细胞株和裸鼠移植瘤抑制作用研究

目的研究硒和5-氟尿嘧啶（5-FU）对MCF-7乳腺癌细胞株及其裸鼠移植瘤的抑制作用。方法实验分对照组（NS）、5-FU组、亚硒酸钠组（Na2SeO3）和联合用药组（5-FU＋Na2SeO3）4组,体外培养MCF-7乳腺癌细胞,应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测各组MCF-7细胞的增殖情况,AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞技术检测各组细胞的凋亡率;建立裸鼠皮下移植瘤模型,监测各组裸鼠移植瘤的生长情况,免疫组织化学及蛋白质印迹法检测移植瘤组织中Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达情况。结果加药处理后,与对照组相比,各用药组MCF-7细胞的增殖均受到抑制,P值均〈0.001,两药联合没有交互性,P=0.864;各用药组MCF-7细胞的凋亡明显增加,P值均〈0.001,两药联合有交互作用,P=0.031;各用药组裸鼠移植瘤质量及体积均显著减小,P值均〈0.001,两药联合有协同作用,P〈0.001;免疫组织化学检测移植瘤组织中Bcl-2蛋白的表达,5-FU组（P=0.036）和Na2SeO3组（P=0.006）显著减少,两药联合没有交互性,P=0.957;Bax蛋白的表达,5-FU组（P=0.006）和Na2SeO3组（P=0.008）显著增加,两药联合没有交互性,P=0.516;Caspase-3蛋白的表达,5-FU组（P=0.004）和Na2SeO3组（P=0.002）显著增加,两药联合没有交互性,P=0.372;蛋白质印迹检测移植瘤组织中Bcl-2蛋白的表达,5-FU组和Na2SeO3组显著减少,P值均〈0.001,两药联合有交互性,P〈0.001;Bax蛋白表达,5-FU组和Na2SeO3组显著增加,P值均〈0.001,两药联合有交互性,P=0.015;Caspase-3蛋白表达,5-FU组和Na2SeO3组显著增加,P值均〈0.001,两药联合无交互性,P=0.139。结论硒和5-FU均可抑制MCF-7乳腺癌细胞株及其裸鼠移植瘤的生长,两药联合具体作用有待进一步实验证实。     

三氧化二砷-泊洛沙姆４０７缓释剂瘤内注射治疗裸鼠人肝癌移植瘤的实验研究

目的：观察三氧化二砷-泊洛沙姆４０７（Ａｓ_２Ｏ_３-Ｐ４０７）缓释剂对裸鼠皮下人肝癌移植瘤的有效性。方法：以人肝癌ＨｅｐＧ２细胞为来源建立裸鼠皮下移植瘤模型,实验共分３组：Ａｓ_２Ｏ_３-Ｐ４０７缓释剂治疗组、Ａｓ_２Ｏ_３治疗组和生理盐水（ＮＳ）对照组,于造模成功后６～８天行瘤体注射,每４天１次,共４次。比较各组抗癌疗效,观察裸鼠体重、肿瘤体积变化、抑瘤率、肿瘤组织病理及骨髓涂片以及裸鼠的存活情况、生存质量。结果：Ａｓ２Ｏ３ Ｐ４０７缓释剂治疗组肿瘤生长受到显著抑制,肿瘤体积较Ａｓ_２Ｏ_３组小（Ｐ＜０.０５）,瘤重分别为（０.２５７±０.０８０）ｇ和（０.６４１±０.１０９）ｇ,差异有统计学意义（Ｐ＜０.０５）;两组与ＮＳ对照组瘤重（１.０９４±０.１４７）ｇ相比,差异有统计学意义（Ｐ＜０.０５）。治疗后Ａｓ_２Ｏ_３-Ｐ４０７缓释剂组裸鼠体重大于Ａｓ_２Ｏ_３组和ＮＳ对照组,差异有统计学意义（Ｐ＜０.０５）。各组均未见骨髓抑制现象。结论：Ａｓ_２Ｏ_３-Ｐ４０７缓释剂瘤内注射,使用安全,可维持局部有效药物浓度、延长作用时间,疗效优于Ａｓ_２Ｏ_３注射液。     

白桦酯醇对卵巢癌裸鼠皮下移植瘤组织中MMP-2和MMP-9表达的影响及意义

目的 探讨白桦酯醇对卵巢癌SKOV3细胞裸鼠皮下移植瘤组织中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达的影响和意义。方法 建立卵巢癌SKOV3细胞裸鼠移植瘤模型,将30只裸鼠随机分为白桦酯醇高剂量组（80mg／kg）、中剂量组（40mg／kg）、低剂量组（20mg／kg）以及对照组（生理盐水）和紫杉醇组（135mg／m2）,每组6只,腹腔给药02ml/只,隔日1次,连续21d。停药后第2d处死裸鼠,测量其移植瘤体积和瘤重;用免疫组织化学法检测移植瘤组织中MMP-2和MMP-9蛋白的表达并计算表达率。结果 白桦酯醇处理组和紫杉醇组的移植瘤体积和瘤重均小于对照组（P＜0.05）;白桦酯醇中、高剂量组的抑瘤率分别为44.5％和51.4％,均高于其低剂量组的17.5%（P＜0.05）。与对照组比较,白桦酯醇处理组和紫杉醇组移植瘤组织中MMP-2和MMP-9蛋白表达水平均减弱;白桦酯醇低、中、高剂量组移植瘤组织中MMP-2和MMP-9蛋白的表达率（％）分别为47.13±8.67和53.82±7.41、38.29±4.37和48.79±4.63、26.88±5.12和38.93±2.82,均低于对照组的56.78±6.42和69.35±5.03,且白桦酯醇3组之间的差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 白桦酯醇对卵巢癌SKOV3细胞皮下移植瘤的生长有抑制作用,其机制可能与下调MMP-2和MMP-9蛋白的表达有关。     

阿霉素联合他莫昔芬对人子宫内膜癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的：分别研究阿霉素、他莫昔芬及两者联合用药对人子宫内膜癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用及相应机制;方法：建立裸鼠活体二次移植肿瘤的动物模型,并随机分为4组,每组5只.分别为阿霉素用药组、他莫昔芬用药组、阿霉素他莫昔芬联合用药组及对照组;用药处理裸鼠移植瘤模型3周.对照组予以注射生理盐水3周.计算各组移植瘤体积、抑瘤率及裸鼠体重情况,肿瘤组织标本进行免疫组化检测Ki67蛋白的表达,并用TUNEL法检测细胞凋亡情况.结果：联合用药组与单独用药组及对照组的瘤体积比较差异均有统计学意义（P＜0.05）;用药前各组裸鼠体重差异无统计学意义（P＞0.05）,用药后对照组与单独用药组及联合用药组的体重比较差异均有统计学意义（P＜0.05）;联合用药组与单独用药组及对照组的抑瘤率比较差异均有统计学意义（P＜0.05）;用药组的Ki67表达阳性率明显低于对照组,联合用药组Ki67表达最低;TUNEL法检测联合用药组肿瘤细胞凋亡率为（32.33 ±3.68）％,明显高于阿霉素组（17.40±2.58）％、他莫昔芬（15.40±6.05）％和对照组（3.50±1.50）％,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论：阿霉素、他莫昔芬均可抑制人子宫内膜癌裸鼠移植瘤的生长,两者联合应用较两药单独应用对人子宫内膜癌裸鼠移植瘤的抑制作用更为显著.     

CAFs对乳腺癌细胞生物学特性的影响及机制探讨

目的：通过乳腺癌间质成纤维细胞（ carcinoma-associated fibroblasts,CAFs）与乳腺癌细胞系MDA-MB-231共培养的体外细胞实验及裸鼠接种的在体动物实验,观察CAFs对乳腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭和转移活性的影响,并探讨其作用机制。方法：体外实验：分离培养浸润性导管癌组织中CAFs和正常成纤维细胞（ normal fibroblasts,NFs）,然后分别与乳腺癌细胞MDA-MB-231体外共培养,采用MTT法、流式细胞仪、Ma-trigel人工模拟基底膜法分别检测乳腺癌细胞的增殖、凋亡、细胞黏附和侵袭能力。动物在体实验：选择乳腺癌细胞系MDA-MB-231、CAFs和NFs,结合生理盐水（NS）、基质细胞衍生因子-1（SDF-1）及其配体拮抗剂AMD3100,组成不同的组别并接种于裸鼠（共6组）。观察肿瘤的大小,有无淋巴结、肺、肝脏转移。留取血标本及肿瘤组织行SDF-1表达水平的检测。结果：MDA-MB-231与CAFs和NFs共培养后乳腺癌细胞的增殖活性显著增强,其中CAFs的作用较NFs更强（P＝0.011）;CAFs组的黏附能力（34.70±4.84个/视野）明显强于NFs组（20.16±3.09个/视野）,P＝0.000;而CAFs组的侵袭性（89.0±4.62个/视野）也明显强于NFs组（81.6±6.08个/视野,P＝0.045）。CAFs组中的MDA-MB-231的早期凋亡率（2.9±2.4）较NFs组（5.0±4.2）明显降低（P＝0.026）;MDA231﹢CAFs ﹢NS 组的种植肿瘤平均体积最大（9.092±2.662cm3, P＝0.000）;此外,该组共有4只（66.6％）,MDA231﹢NS组有2只（33.3％）存在腋窝淋巴结转移,未见肝肺转移灶。在MDA231﹢CAFs﹢NS组中,血标本 SDF -1值（75.25±16.23pg/ml）、肿瘤组织标本中 SDF -1mRNA值（11.686±8.926）、组织中SDF-1蛋白表达水平（1.006±0.327）均为最高,与其他各组相比均有统计学差异（ P＝0.000）。结论：CAFs可影响乳腺癌肿瘤细胞的生物学特性,具有促进肿瘤细胞增殖,增强其黏附、侵袭及转移能力。其机制可能是通过乳腺癌间质成纤维细胞分泌SDF-1与其特定的受体CXCR4结合这一信号通路来实现的。     

洋地黄毒苷对裸鼠甲状腺乳头状癌组织生长的抑制作用

目的:探讨洋地黄毒苷对裸鼠甲状腺乳头状癌的治疗效果。方法:建立裸鼠肿瘤模型后，分为空白对照组、实验组，每组8只，分别给予生理盐水、洋地黄毒苷（1 mg/kg），隔日腹腔注射。治疗15天后，分析肿瘤体积，取下瘤体，选取实验组及空白对照组肿瘤组织进行HE染色。结果:治疗前，空白对照组与实验组裸鼠肿瘤体积分别为(109.43±7.67)mm3和(107.15±6.97)mm3。治疗15天后，空白对照组裸鼠肿瘤体积为（732.67±72.40）mm3，实验组裸鼠肿瘤体积为（251.91±27.29）mm3(实验组vs空白对照组，P<0.01）。HE染色结果示，实验组部分区域肿瘤细胞核淡染、缩小，且局部出现了变性、坏死。表明了洋地黄毒苷的抑瘤作用可能与其诱导肿瘤组织的破坏有关。结论:洋地黄毒苷可以抑制裸鼠体内甲状腺乳头状癌的生长。     

DNA聚合酶θ表达对MCF－7乳腺癌细胞系体外增殖和早期凋亡的影响

目的研究DNA聚合酶0（POLQ）在MCF-7乳腺癌细胞系中的表达及其对该细胞系体外增殖和早期凋亡的影响。方法经脂质体Lipofectamine^TM2000介导将POLQ—siRNA转染入MCF-7乳腺癌细胞系中,MCF-7细胞被分为POLQ—siRNA组、Control—siRNA组和空白对照组;用实时荧光定量逆转录-多聚酶链反应（qRT—PCR）和Westernblot分别从基因和蛋白水平检测POLQ表达率的变化;利用四甲基偶氮唑盐（MTF）法和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力的变化;用流式细胞术判断转染前后细胞周期和凋亡率的改变。数据采用单因素方差分析和重复测量数据的方差分析进行统计。结果POLQ在MCF-7乳腺癌细胞系中高表达,其相对分子质量（怛）〉250000,同时在M,约170000和100000处容易检测到明显的条带。POLQ—siRNA组细胞POLQmRNA平均表达量是空白对照组的（0．12_＋0．01）倍（P=0．oo）,POLQ蛋白表达率为（32．0±0．7）％。POLQ—siRNh组细胞增殖能力显著低于空白对照组（P=0．00）;POLQ—siRNA组细胞克隆形成率明显低于空白对照组（P=0．00）。转染后48h,POLQ—siRNA组G0／G1期细胞比例显著高于空白对照组（P=0．00）,S期细胞比例显著低于空白对照组（P=0．00）,细胞早期凋亡率高于空白对照组（P=0．00）,阴性对照组与空白对照组相比差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论POLQ在MCF-7乳腺癌细胞系中高表达,阻断该基因表达可以抑制细胞增殖,同时提高乳腺癌细胞的早期凋亡率。     

白桦脂酸对人宫颈癌裸鼠移植瘤的抑制作用及机制

目的 探讨白桦脂酸（BA）对人宫颈癌HeLa细胞株裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用及其机制。方法 将4×10⁶个HeLa细胞接种于裸鼠右肩背部皮下,建立人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤模型,24只荷瘤裸鼠随机分为BA高剂量（80mg／kg）、中剂量（40mg／kg）、低剂量（20mg／kg）组及空白对照组（含溶剂）,每组6只,隔日腹腔注射连续给药21d,停药24 h后处死裸鼠,测量裸鼠体重、移植瘤体积、瘤重,计算抑瘤率;光镜下观察移植瘤组织形态学变化;TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡指数;免疫组化法检测瘤组织内caspase-3、CytoC蛋白表达。结果 裸鼠处死后,BA处理组的移植瘤体积均明显小于空白对照组（P＜0.01）,其中高、中、低剂量组抑瘤率分别为56.2％、40.4％和24.6％ （P＜0.01）;HE染色法显示BA处理组小鼠的移植瘤组织出现明显凋亡及坏死改变;TUNEL检测对照组和BA低、中、高剂量组的凋亡指数分别为（8.36±2.78）％、（20.98±3.01）％、（28.74±4.77）％和（39.34±6.15）％（P＜0.05）;免疫组化法示BA处理组的肿瘤组织caspase-3、CytoC蛋白表达水平较空白对照组明显升高（P＜0.01）。结论 BA对人宫颈癌HeLa细胞移植瘤的生长具有明显的抑制作用,其机制可能与上调caspase-3、CytoC蛋白的表达及诱导细胞凋亡有关。