RNA干扰RSK4基因表达对裸鼠移植瘤生长与转移影响观察

目的：应用慢病毒干扰载体（RSK4-RNAi—LV）干扰RSK4基因在乳腺癌细胞株MCF-7中的表达,研究RSK4基因被干扰后对裸鼠移植瘤生长及转移的影响。方法：将转染了siRNA（RSK4-RNAi—LV）的MCF-7细胞组（实验组）、转染了siRNA（NC—GFP-LV）的MCF_7细胞组（阴性对照组）和未转染的MCF-7细胞组（空白对照组）分别接种至裸鼠乳腺脂肪垫下,建立裸鼠移植瘤模型,观察每纽裸鼠移植瘤生长情况;应用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测3组移植瘤组织中RSK4mRNA及其蛋白的表达;HE染色观察3纽裸鼠内脏转移情况。结果：实验纽的移植瘤平均体积为（2264．08±367．47）mm2,明显大于阴性对照组（843．67±318．13）mm。及空白对照组的（720．45±241．35）mm。差异有统计学意义,F=112．425,P=0．02;实验组瘤体平均体质量为（1．44±0．25）g,明显重于阴性对照组（0．73±0．20）g及空白对照组的（0．70±0．21）g,差异有统计学意义,F=89．54,P=0．01。实验组裸鼠移植瘤肺转移6只,空白对照及阴性对照组各1只。实验组肿瘤组织RSK4mRNA的相对表达量为0．140±0．843,明显低于阴性对照组的1000±0．000（P=0．008）和空白时照组的0．878±0．689（P=0．005）。实验组、阴性对照组和空白对照组RSK4蛋白的表达量分别为0．138±0．023、0．532±0．032和0．465±0．057,3组间差异有统计学意义,F=73．1,P=0．003;实验组RSK4蛋白表达量明显低于阴性对照组（P=0．006）和空白对照组（P=0．012）。结论：慢病毒干扰MCF-7细胞中RSK4基因表达能促进MCF-7细胞裸鼠移植瘤的生长及转移。     

泌乳素诱导蛋白表达下调对三阴性乳腺癌细胞裸鼠体内成瘤影响研究

目的：探讨泌乳素诱导蛋白（prolactininducibleprotein,PIP）表达下调对三阴性乳腺癌（triplenegativebreastcancer,TNBC）MDA-MB453细胞在裸鼠体内成瘤的影响。方法：采用脂质体将PIPsiRNA转染至乳腺癌MDA_MB453细胞,蛋白质印迹法检测PIP的表达下调情况。采用4周龄BALB／c雌性裸鼠,建立乳腺癌MDA-MB-453细胞裸鼠皮下种植瘤模型,瘤内注射siRNA-脂质体混悬液,观察PIPsiRNA对肿瘤生长的影响。采用免疫组织化学法检测肿瘤组织中CyclinDl和VEGF的表达情况。结果：PIP表达下调后,其在裸鼠体内成瘤能力明显降低,肿瘤平均体积空白对照组为（1075±65）mm2,阴性对照组为（1095±72）mm2,实验组为（473±56）mm2,空白对照组与阴性对照组差异无统计学意义,P=0．719,空白对照组与实验组、实验组与阴性对照组差异均有统计学意义,P〈0．001。空白对照组肿瘤平均体质量为（908士86）mg,阴性对照组为（889±64）mg,实验组为（272±30）mg,空白对照组与阴性对照组差异无统计学意义,P=0．738,空白对照组与实验组、实验组与阴性对照组差异均有统计学意义,P〈0．001。肿瘤生长抑制率为71．1％。免疫组化结果显示,PIP表达下调的肿瘤组织中CyclinD1的相对表达量空白对照组为1535±78,阴性对照组为1594±123,实验组为367±72,空白对照组与阴性对照组差异无统计学意义,P=0．472,空白对照与实验组、实验组与阴性对照组差异均有统计学意义,P〈O．001。VEGF的相对表达量空白对照组为4270±558,阴性对照组为4365±324,实验组为1286±292,空白对照组与阴性对照组差异无统计学意义,P=0．758,空白对照与实验组、实验组与阴性对照组差异均有统计学意义,P〈0．001。结论：下调PIP基因表达可明显抑制乳腺癌MDA-MB-453细胞体内成瘤能力,提示PIP可能在乳腺癌发生和发展中发挥重要作用。     

沉默PCAF基因抑制人肾上腺皮质癌裸鼠移植瘤生长及血管生成的实验研究

目的 探讨靶向沉默肾上腺皮质癌SW13细胞PCAF基因表达对裸鼠移植瘤生长以及血管生成的抑制作用及其机制。方法 pLenti6.3-MiRNA-PCAF重组慢病毒及pLenti6.3-MiRNA-NC重组慢病毒分别感染SW13细胞,将感染后的两组细胞及未处理的SW13细胞分别接种于15只裸鼠腋下,构建裸鼠移植瘤模型,分为实验组、阴性对照组、空白对照组,并观察各组肿瘤生长情况。Western blot、荧光定量PCR检测移植瘤组织PCAF蛋白、mRNA表达水平,HE染色法观察各组移植瘤组织形态学变化,免疫组织化学法检测VEGF表达及微血管密度。结果 实验组小鼠的肿瘤体积较阴性对照组和空白对照组显著缩小,肿瘤抑制率分别为49.2%和52.9%;PCAF蛋白相对表达水平较阴性对照组下降58.4%,mRNA相对表达水平较阴性对照组下降74.3%;实验组与阴性对照组和空白对照组相比,瘤内VEGF蛋白表达明显下调;实验组微血管密度（19.4±4.2）与阴性对照组（42.7±6.5）和空白对照组（51.3±8.6）相比明显下降。结论 慢病毒介导的pLenti6.3-MiRNAPCAF能有效抑制肾上腺皮质癌细胞裸鼠移植瘤的生长及血管生成。     

罗格列酮促进卵巢癌细胞凋亡的体内实验研究

[目的]探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPAR-γ）配体罗格列酮（RGZ）对人卵巢浆液性乳头状囊腺癌SKOV3细胞的抑制作用。[方法]建立卵巢癌SKOV3细胞裸鼠移植瘤模型,观察不同剂量RGZ对移植瘤体积的影响;HE染色观察各组移植瘤组织细胞形态学变化;免疫细胞化学法观察移植瘤中Bcl-2、Cytochrome C蛋白表达水平。[结果]RGZ组（4mg/kg,12mg/kg,60mg/kg,120mg/kg）裸鼠移植瘤体积分别为0.190±0.023mm3、0.065±0.003mm3、0.195±0.004mm3和0.182±0.023mm3,较对照组（0.300±0.016mm3）均明显缩小,差异有统计学意义（P〈0.05）。抑瘤率分别为36.7%、78.3%、35.0%和40.0%。HE染色观察RGZ作用SKOV3细胞后有变性细胞、单细胞死亡及大面积的凝固性坏死。Bcl-2在RGZ组（60mg/kg,120mg/kg）中的表达较对照组显著下调,Cytochrome C在RGZ组（60mg/kg,120mg/kg）中的表达较对照组显著上调,差异均有统计学意义（P〈0.05）。[结论]RGZ对卵巢癌裸鼠移植瘤有明显抑制作用,可促进凋亡。提示PPAR-γ可能成为卵巢癌治疗的新分子靶点。     

乏氧射线双调控的TK腺病毒载体联合放疗抑制乳腺癌裸鼠移植瘤的生长

目的观察乏氧射线双调控的TK腺病毒载体-Ad.HRE.CArG.HSV-TK联合放疗对乳腺癌细胞Bcap37裸鼠移植瘤生长的影响。方法皮下接种细胞于BALB/C(nu/nu) 裸鼠建立移植瘤模型。当肿瘤直径达8~10mm时,将裸鼠分为对照组（control）、载体组(Ad)、照射组（RT）和载体合并照射组(Ad+RT)。治疗开始为第1天,于第1、5天瘤内多点注射0.2ml表达载体,给药次日起腹腔注射GCV(40mg/kg),每日1次,连续14天。第2、4、6天给予2Gy X线照射。每3天测量肿瘤长短径,计算肿瘤体积。治疗后30天处死裸鼠,剥离瘤块称重,计算抑瘤率。对肿瘤组织行HE染色和AnnexinV法检测凋亡。结果实验组平均肿瘤体积和瘤重均显著小于对照组（P<0.05）。HE染色可见肿瘤细胞变性坏死和凋亡细胞,AnnexinV检测显示实验组凋亡率明显高于对照组（P<0.05）。结论腺病毒载体联合放疗对Bcap37裸鼠移植瘤生长具显著抑制作用并可介导凋亡,为乳腺癌进一步的放射基因治疗研究奠定了基础。     

TAT-OSBP-MKK6（E）抑制卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤恶性生物学行为的研究

目的 探讨TAT-OSBP-MKK6（E）对人卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤生长、侵袭及转移等恶性生物学行为的影响。方法 18只裸鼠随机分为实验组［TAT-OSBP-MKK6（E）］、阴性对照组［TAT-OSBP-MKK6（E）+SB202190］和空白对照组（生理盐水）,每组6只,细胞接种法建立人卵巢癌腹腔移植瘤模型,每2天测量腹围。4周后解剖裸鼠,观察裸鼠成瘤情况,测定腹水量,统计肿瘤播散器官数及瘤结节数,称量瘤体重量并计算抑瘤率。采用HE染色分析移植瘤的病理形态学特点;采用TUNEL法检测移植瘤组织的细胞凋亡指数（AI）;免疫组化SP法检测各组移植瘤组织中血管内皮生长因子（VEGF）的表达;Western blotting检测各组移植瘤组织中p38蛋白表达。结果 与阴性对照组和空白对照组比较,实验组裸鼠腹围增长明显滞后（P＜0.05）,腹水量明显减少（P＜0.05）,肿瘤播散器官数、瘤结节数及瘤体重量均明显减少（P均＜0.05）,抑瘤率达70.99％。实验组的AI为（20.44±1.20）％,显著高于阴性对照组的 （4.94±0.24）％和空白对照组的（4.00±0.79）％,差异均有统计学意义（P＜0.05）;实验组VEGF蛋白的阳性表达率为21.2％,显著低于阴性对照组的81.4％和空白对照组的85.7％,差异均有统计学意义（P＜0.05）;实验组p38蛋白的相对表达量为0.40±0.01,显著高于阴性对照组的0.22±0.01和空白对照组的0.20±0.01,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 TAT-OSBP-MKK6（E）能显著抑制人卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤的生长、侵袭及转移。     

Nucleostemin基因特异性短发夹状干扰RNA在裸鼠移植瘤模型体内的抗白血病作用

目的探讨核干细胞因子（NS）特异性短发夹状干扰RNA（NS-shRNA）在裸鼠移植瘤模型体内的抗白血病作用。方法对数生长期HL-60细胞接种于裸鼠皮下使其致瘤并洗脱,体外传至第5代再次接种裸鼠,Transwell法验证HL-60细胞体外侵袭力,建立高致瘤性HL-60白血病细胞异种移植瘤裸鼠模型。腹腔注射体外合成的NS-shRNA脂质包裹体,观察治疗前后瘤体体积、重量的变化,组织切片、HE染色观察肿瘤细胞学改变,免疫组织化学检测瘤体细胞内NS蛋白含量,TdT介导的dUTP缺口末端标记技术（Tunel）检测细胞凋亡情况。结果制备的高致瘤性HL-60细胞使30只裸鼠均形成异种移植瘤,成瘤率为100%,瘤体大小均一。腹腔注射NS-shRNA脂质包裹体13天后,治疗组裸鼠移植瘤体积增长率为207.1%,阴性和空白对照组分别为497.1%和5696%。治疗组瘤体重量为（1.18±0.27）g,阴性和空白对照组为（2.04±0.73）g和（2.35±0.41）g。切片观察治疗组有大量斑片状组织结构破坏,并出现“凋亡特征”样细胞改变。免疫组织化学检测治疗组移植瘤细胞NS蛋白阳性率和积分值分别为（71.59±1.80）%和（110.26±13.46）,阴性对照组为（90.72±1.47）%和（195.11±9.71）,空白对照组为（97.33±1.76）%和（220.93±16.54）,与阴性和空白对照组相比,NS蛋白表达抑制率分别为435%和501%。Tunel法检测治疗组移植瘤内出现较多凋亡细胞。结论NS-shRNA在裸鼠移植瘤模型体内具有抗白血病作用,其作用机制之一可能是通过下调NS表达诱发白血病细胞凋亡增加。     

钆血卟啉单甲醚介导的光动力疗法治疗口腔舌鳞状细胞癌移植瘤的实验研究

目的:探讨钆血卟啉单甲醚（gadolinium coordinated hemetoporphyrin monomethyl ether,Gd-HMME）介导的光动力疗法（photodynamic therapy,PDT）对裸鼠口腔舌鳞状细胞癌（oral tongue squamous cell carcinoma,OTSCC）移植瘤的治疗效果,为今后的临床治疗提供理论依据。方法:选取36只BALB/c-nu裸鼠随机分为4组,分别为对照组、PDT组、Gd-HMME组和Gd-HMME-PDT组,每组9只。治疗后定期测量裸鼠体重以及肿瘤体积,14 d后各组随机处死裸鼠6只,计算抑瘤率和生命延长率,行苏木精-伊红（hematoxylin-eosin staining,HE）染色后病理形态学观察,评估Gd-HMME-PDT对移植瘤的治疗效果。结果:实验结果显示,各处理组的肿瘤体积均小于对照组,Gd-HMME-PDT组肿瘤体积减小最明显（P＜0.01）;PDT组、Gd-HMME组、Gd-HMME-PDT组的抑瘤率分别为3.17%、6.13%、59.62%。HE染色可见Gd-HMME-PDT组肿瘤细胞坏死和空泡性变,对照组及PDT组、Gd-HMME组均未见明显改变;PDT组、Gd-HMME组、Gd-HMME-PDT组的生命延长率分别为2.82%、7.04%、73.24%。结论:Gd-HMME-PDT对口腔舌鳞状细胞癌移植瘤的生长具有抑制作用,并且可以延长裸鼠的生存时间。     

沉默EC9706核干细胞因子基因对裸鼠移植瘤生长的作用

观察由RNAi诱导的EC9706核干细胞因子（NS）基因沉默对裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法:BALB/c裸鼠15只,分为3组,siRNA干预组皮下注入pRNAT-U6.1-siNS2转染的EC9706细胞,无关siRNA对照组皮下注入pRNAT-U6.1-siC转染的EC9706细胞,空白对照组皮下注入正常EC9706细胞,接种5周分别测定各组裸鼠移植瘤体积,并应用RT-PCR技术检测裸鼠移植瘤组织中NS mRNA的表达。结果:无关siRNA对照组及空白对照组于第4天在接种部位出现肉眼可见的肿块,siRNA干预组于第6天在接种部位发现肉眼可见肿块。第5周各组裸鼠成瘤率均为100%。空白对照组、无关siRNA对照组和siRNA干预组瘤体大小分别为（1 806.40±77.75） mm3、（1 702.20±88.60） mm3和（847.00±82.25） mm3,3组相比差异有统计学意义（P<0.05）。空白对照组、无关siRNA对照组和siRNA干预组移植瘤组织中NS mRNA的表达量分别为0.681±0.033、0.685±0.034和0.497±0.056,3组相比差异有统计学意义（P<0.05）。结论:沉默EC9706细胞的NS基因可抑制裸鼠移植瘤生长,降低裸鼠体内NS mRNA的表达。沉默NS基因有可能成为治疗食管癌的新策略。      

MAP2K6-FP和紫杉醇对上皮性卵巢癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的:研究靶向融合肽MAP2K6-FP（mitogen-activated protein kinase kinase 6-fusion protein)、紫杉醇单独和两者联合对上皮性卵巢癌裸鼠移植瘤的抑制作用。方法:建立卵巢癌HO8910细胞的裸鼠皮下移植瘤模型,分为空白对照组（予生理盐水 5 ml/kg腹腔注射治疗）、MAP2K6-FP组（予0.25 mg/kg MAP2K6-FP腹腔注射治疗）、紫杉醇组（予15 mg/kg 紫杉醇腹腔注射治疗）、联合用药组（予0.25 mg/kg MAP2K6-FP+15 mg/kg 紫杉醇腹腔注射治疗）,比较4组裸鼠的移植瘤生长速度、体积、裸鼠体质量;TUNEL法、免疫组织化学法和蛋白印迹法分别检测移植瘤中细胞凋亡情况、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）的表达以及Bcl-2、Beclin 1蛋白的表达。结果:联合用药组裸鼠移植瘤体积（90 mm3）,小于MAP2K6-FP组（324 mm3）、紫杉醇组（215 mm3）和空白对照组（804 mm3）（P<0.05）。联合用药组肿瘤细胞的凋亡指数（apoptosis index,AI）(28.88±2.03)%,高于MAP2K6-FP组(14.36±0.56)%、紫杉醇组(15.78±0.87)%以及空白对照组(4.78±0.87)%（P<0.05）。联合用药组VEGF蛋白表达水平(0.14±0.06),低于MAP2K6-FP组(0.32±0.10)、紫杉醇组(0.29±0.08)及空白对照组(0.78±0.14）（P<0.01);联合用药组PCNA表达水平(18.4%),低于MAP2K6-FP组(32.3%)、紫杉醇组(29.8%)及空白对照组(81.4%）（P<0.05）。联合用药组Beclin 1/Bcl-2比例较单一用药组高(P<0.05)。结论:MAP2K6-FP联合紫杉醇能够显著抑制卵巢癌裸鼠移植瘤的生长,其机制可能与促进细胞凋亡有关。     

AFP对裸鼠肝癌移植瘤生长的促进作用及对血管形成相关因子的影响

目的:探讨AFP对肝癌移植瘤生长及血管生成调节因子表达的影响。方法:采用pEGFP-N1-AFP和pEGFP-N1质粒分别转染SMMC-7721细胞构建SMMC-7721/AFP和SMMC-7721/CON细胞，将裸鼠分为实验组和对照组，分别于裸鼠皮下接种SMMC-7721/AFP和SMMC-7721/CON，从而建立人肝癌移植瘤模型，动态观测裸鼠肿瘤体积和质量变化;取肿瘤组织用实时定量RT-PCR和Western blot检测组织中的HOXA7、eIF4E、VEGFA和FGF2表达。结果:构建SMMC-7721/AFP和SMMC-7721/CON细胞，并将其接种到裸鼠皮下成功建立肝癌移植瘤模型。与对照组比较，实验组移植瘤体积与质量显著增高，成瘤后第12天，实验组移植瘤体积和质量分别为（307.71±47.63）mm3和（20.243±0.411）g，差异均具有显著性（P=0.012，P=0.04）。实时定量RT-PCR结果显示AFP过表达提高了肝癌移植瘤细胞HOXA7、eIF4E和FGF2 mRNA表达水平，分别为2.488±1.155、23.828±2.465和4.407±1.164，与对照组相比增高程度具有显著性差异，但VEGFA mRNA表达未见显著增强。Western blot结果显示:SMMC-7721/AFP较SMMC-7721/CON细胞显著提高HOXA7蛋白表达水平，但对FGF2和VEGFA无显著影响。结论:AFP基因转染可明显促进裸鼠肝癌移植瘤的生长，该作用可能与其促进肿瘤血管形成因子在mRNA水平的调控有关。     

腹膜加球囊配合OPS技术在肝癌放疗中的临床应用

目的:设计简易腹部加压技术（simple abdominal pressure，SAP）配合红外定位系统（optical positioning system，OPS），研究其在肝癌放射治疗中对摆位误差的影响及其在胸腹部肿瘤精确放疗中的临床应用价值。方法:本研究根据肝癌患者摆位技术的不同分为2个对比组，每组选取15例患者，分别是采用自由呼吸常规定位的对照组和SAP配合OPS技术控制患者呼吸幅度定位的实验组。首先观察模拟机下两组患者的肿瘤运动度，然后勾画靶区设计计划，治疗前均行千伏级锥形束CT(cone beam computed tomography，CBCT)验证，分别分析定位时肿瘤运动度和治疗时摆位在X（左右方向）、Y（头脚方向）、Z（面背方向）的线性误差。结果:实验组与对照组在模拟机下X、Y、Z方向的肿瘤运动度分别为（2.461 5±0.660 2、3.923 1±1.187 5）mm、（5.692 3±1.548 4、19.076 9±4.499 3）mm、（3.230 8±1.165 8、8.692 3±2.982 9）mm，各方向对应的P值分别为P=0.001、P<0.001、P<0.001；实验组与对照组在X、Y、Z方向上的线性摆位误差分别为（2.175 3±0.464 8、4.940 0±0.573 3）mm、（1.435 3±0.304 9、6.408 0±0.555 0）mm、（2.288 7±0.591 4、4.967 3±0.353 9）mm，各方向对应的P值均小于0.001。结论:与常规定位摆位相比，设计的SAP配合OPS技术可明显减小肝癌患者放疗中的肿瘤呼吸运动度和提高治疗时的摆位精度，对于提高肝癌以及胸腹部肿瘤的治疗精度具有临床应用价值。     

ELAM-1在鼻咽癌裸鼠移植瘤中的表达及其与转移的关系

目的 建立裸鼠鼻咽癌转移模型并探讨 E-选择素（ELAM-1）与鼻咽癌转移的相关性。方法 将鼻咽癌5-8F细胞悬液注射于裸鼠左后肢爪垫，观察裸鼠状态、成瘤情况并测量裸鼠体重及移植瘤长短径；采用连续病理切片苏木精-伊红染色观察移植瘤及转移情况，将16只人鼻咽癌荷瘤裸鼠分为转移组和非转移组；采用免疫组织化学法检测两组移植瘤组织中ELAM-1的表达。 结果 16只裸鼠均成瘤，成瘤率为100.0%，其中10只裸鼠出现转移瘤，转移率为62.5%。建模前，两组裸鼠体重差异无统计学意义［（13.83±0.56）g vs （14.62±0.30） g，t=1.026，P=0.071］。建模后4~7周，裸鼠瘤体体积呈指数增长，且转移组移植瘤增长速度较非转移组快，非转移组裸鼠瘤体体积小于转移组［（198.91 ± 163.29） mm³ vs （268.76 ±174.31） mm³，t=4.376，P=0.005］。ELAM-1在鼻咽癌裸鼠移植瘤、淋巴结转移灶及远处转移灶中的表达均为阳性，主要表达于细胞膜。转移组移植瘤光密度值高于非转移组（0.4497±0.0705 vs 0.0435±0.0082，t=4.388，P＝0.001）。结论 本研究成功构建稳定性好、转移率高的鼻咽癌裸鼠移植瘤转移模型，且ELAM-1在裸鼠移植瘤中高表达，可促进鼻咽癌裸鼠移植瘤生长和转移。     

发泡胶枕在鼻咽癌调强放疗中的应用

目的:应用MVCT研究鼻咽癌放疗中个体化发泡胶枕与标准聚氨酯头枕两种不同固定方式的摆位精度。方法:选取鼻咽癌螺旋断层调强放疗患者共34例，分为试验组和对照组，分别采用个体化发泡胶枕和标准化聚氨酯头枕，结合头颈肩热塑网膜进行体位固定。两组患者每次放疗前行MVCT扫描并与定位CT在线匹配，对得出的两组摆位误差数据行独立样本t检验，并以线性误差3 mm和旋转误差2°为限定阈值，对两组摆位误差数据行χ2检验。结果:对照组在左右、上下、前后三个方向的摆位线性误差和绕这三个方向形成的旋转误差分别为（1.79±2.05）mm、（1.82±1.36）mm、（1.48±1.77）mm和（0.94±1.23）°、（1.15±1.08）°、（0.54±0.61）°；试验组在上述的摆位误差和旋转误差分别为（1.19±1.09）mm、（1.24±0.97）mm、（0.91±0.89）mm和（0.71±0.79）°、（0.99±0.79）°、（0.67±0.68）°，两组在上述方向比较P=0.00、0.00、0.00、0.00、0.01、0.00，两组超出误差限定阈值次数的比较，除绕前后方向的旋转误差无统计学意义（P>0.05），其余各方向均有意义（P<0.05）。结论:采用个体化发泡胶枕对鼻咽癌患者进行体位固定，摆位精度优于标准化聚氨酯头枕。     

PD-L1抑制剂对非小细胞肺癌小鼠血清IL-4、IFN-γ及生存率的影响

目的:分析程序性细胞死亡蛋白配体-1（PD-L1）抑制剂对非小细胞肺癌（NSCLC）小鼠血清白细胞介素-4（IL-4）、干扰素-γ(IFN-γ)及生存的影响。方法:将20只重量16～20 g小鼠随机分为对照组、实验组各10只，对照组在制备NSCLC荷瘤鼠模型后注射0.9%氯化钠溶液，实验组在制备NSCLC荷瘤鼠模型后注射PD-L1抑制剂尼伏单抗，均连续注射4周，测定其体积大小、肿瘤抑制率与血清IL-4、IFN-γ变化，并记录小鼠生存率、生存时间。结果:注射前、注射3 d两组小鼠肿瘤体积比较差异无统计学意义（P>0.05），注射1周、2周、3周、4周实验组肿瘤体积均低于对照组（P<0.05），尤其在注射2～3周时实验组肿瘤体积抑制率基本达最大值；注射1周、2周、3周、4周实验组血清IL-4、IFN-γ水平明显高于对照组（P<0.05）；注射4周实验组生存率高于对照组，实验组平均生存时间较对照组长（P<0.05），注射1周、2周、3周两组生存率比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论:PD-L1抑制剂能抑制NSCLC小鼠生长，可能通过上调其血清IL-4、IFN-γ水平而延长小鼠生存时间。     

siRNA沉默FAM83A基因表达对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:研究FAM83A基因对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移、侵袭及肿瘤生长的影响。方法:运用qRT-PCR法检测非小细胞肺癌细胞H1299中FAM83A的表达；将blank组（未作任何处理）、si-control组（转染si-control）、si-FAM83A组（转染si-FAM83A）用脂质体法转染至H1299细胞；Western blot检测细胞中FAM83A、p16、p21、MMP-2、MMP-9的蛋白表达；MTT法检测细胞的增殖；Transwell小室检测细胞的迁移和侵袭；裸鼠成瘤实验检测肿瘤的生长。结果:沉默FAM83A后，H1299细胞的增殖、迁移和侵袭能力均得到显著下调，并且p16、p21的蛋白表达明显上调，MMP-2、MMP-9的蛋白表达明显下调。最重要的是，沉默FAM83A后的异种移植裸鼠体内的肿瘤生长能力得到明显抑制。结论:沉默FAM83A可抑制非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭，并抑制裸鼠体内肿瘤的生长。     

RNA干扰Bcl-2基因表达对人胆管癌细胞及胆囊癌细胞株裸鼠移植瘤生长的抑制

目的：探讨Bcl-2基因的小干扰RNA（siRNA）真核表达载体干扰Bcl-2基因表达对人胆管癌细胞QBC939、胆囊癌细胞GBC-SD裸鼠体内移植瘤生长的抑制作用。方法：分别制作人胆管癌细胞QBC939、胆囊癌细胞GBC-SD细胞株移植瘤模型,随机分为3组,pSilencerTM-EGFP sh515组（实验组）、pSilencerTM-EGFP shCon组（空载体阴性对照组）和对照组。实验组用Bcl-2基因的小干扰RNA（siRNA）真核表达载体多点注射于移植瘤周围,空载体阴性对照组用空载体多点注射于移植瘤周围,对照组不作处理,观察其生长情况,计算肿瘤生长体积、生长率。6周后,处死裸鼠,剥离瘤体组织进行称重,并采用免疫组化检测Bcl-2蛋白的表达。结果：成功建立裸鼠人胆管癌细胞QBC939,胆囊癌GBC-SD细胞的动物模型。胆管癌细胞实验组、空载体阴性对照组、对照组瘤体平均体积（mm3）分别为：801.776±59.6,1383.980±78.2,1490.235±89.0。瘤体平均瘤体重量（g）为：0.90±0.11,1.49±0.31,1.63±0.22。平均生长率为：20.558%,35.587%,38.211%。人胆囊癌细胞实验组、空载体阴性对照组、对照组瘤体平均体积（mm3）分别为：729.736±66.6,1493.162±98.9,1548.668±101.0。瘤体平均瘤体重量（g）为：0.82±0.10,1.68±0.21,1.90±0.25。平均生长率为：18.711%,38.286%,39.709%。两组实验组分别和空载体阴性对照组、对照组比较有统计学意义（P〈0.05）,空载体阴性对照组和对照组比较无统计学意义（P〉0.05）。结论：针对Bcl-2基因siRNA真核表达载体通过局部多点注射于移植瘤周围可以有效降低Bcl-2基因的表达,该基因沉默后肿瘤细胞增殖受到抑制,体内瘤体生长减慢。     

miR-130a对胰腺癌细胞系PANC-1细胞增殖和凋亡的调控作用及其 机制探讨

目的:研究miR-130a对胰腺癌细胞系PANC-1细胞增殖和凋亡的影响，并探讨其机制。方法:体外培养胰腺癌细胞PANC-1、SW 1990、MIA PaCa-2和正常胰腺上皮细胞HPDE6-C7，检测各细胞中miR-130a表达水平。将PANC-1细胞分为miR-130a低表达组（miR-130a-inhibitor组）、阴性对照组（miR-130a-NC组）和空白对照组（miR-130a-BC组）。转染48 h后，CCK-8试验检测细胞增殖情况；裸鼠皮下成瘤实验检测miR-130a对肿瘤体内生长的影响；流式细胞术检测细胞凋亡情况；TargetScan数据库预测miR-130a的靶基因，并采用蛋白免疫印迹（WB）和荧光素酶报告实验进行验证。结果:PANC-1、SW 1990、MIA PaCa-2人胰腺癌细胞中miR-130a表达水平均显著高于正常胰腺上皮细胞，差异有统计学意义（P<0.05）。转染miR-130a-inhibitor后，PANC-1细胞miR-130a相对表达量显著下调（P<0.05）；与miR-130a-NC和miR-130a-BC组比较，miR-130a-inhibitor组PANC-1细胞增殖能力显著下降（P<0.05）、裸鼠皮下肿瘤体积明显减小（P<0.05）、细胞凋亡率显著升高（P<0.05）。TargetScan数据库显示FOS样抗原1（FOSL1）是miR-130a潜在靶基因，WB和双荧光素酶报告实验证实FOSL1是miR-130a的作用靶点。结论:下调miR-130a表达通过作用于FOSL1基因抑制PANC-1细胞增殖，促进其凋亡，可能为胰腺癌的临床治疗提供新思路。