VEGF参与低氧预适应对移植肝肝内胆管上皮细胞的保护作用

目的 探讨低氧预适应(hypoxic preconditioning,HP)对移植肝肝内胆管上皮细胞的保护作用及血管内皮生长因子(VEGF)在其中的作用.方法 建立大鼠自体原位肝移植模型,实验大鼠被分为3组: 自体原位肝移植组(AT组)、HP后行自体原位肝移植组(HP组)和假手术组.各组于术后6、12、24和48 h检测血清总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)及碱性磷酸酶(ALP)水平,免疫组织化学法检测肝内胆管上皮细胞中VEGF的表达,光镜下观察肝内胆管上皮细胞的病理变化.结果 AT组术后血清TBIL、DBIL及ALP水平持续高于HP组(P＜0.05);各时相HP组VEGF的表达均明显高于AT组(P＜0.05);光镜下,HP组各时相肝内胆管上皮细胞损伤及炎症细胞浸润程度均较AT组明显减轻.结论 HP对移植肝肝内胆管上皮细胞有保护作用,VEGF可能在其中发挥着重要作用.     

低氧预适应对移植肝内胆管的显微及超微结构的影响

目的：探讨移植肝内胆管的显微和超微结构的变化以及低氧预适应的保护作用。方法：建立大鼠自体原位肝移植模型，30只SD大鼠随机分为3组，A组：自体原位肝移植组；B组：低氧预适应后行自体原位肝移植组；C组：假手术组。术后48h取材，检测各组血清胆红素水平，光学显微镜下观察各组胆管上皮细胞的显微结构，透射电子显微镜下观察肝内毛细胆管的超微结构。结果：A组血清胆红素水平比B组升高更明显（P〈0．01）；光学显微镜下，A组与B组相比，胆管上皮细胞损伤严重，细胞排列缺失明显，炎性细胞浸润增加；电子显微镜下，A组与8组相比，肝内毛细胆管管腔扩张明显，微绒毛肿胀、数量减少或消失的情况严重，胆汁淤积程度明显。结论：低氧预适应对移植肝内胆管具有显著的保护作用。     

受体低氧预适应后肠黏膜改变对大鼠移植肝的影响

目的:研究低氧预适应对肠道黏膜屏障的作用以及对移植肝再灌注损伤的影响.方法:88只SD大鼠分为原位肝移植组(A组)、受体低氧预适应组(B组)和假手术组(C组)、A、B组均行原位肝移植.术后2 h检测大鼠血清肝功能和内毒素水平、肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量,观察肝、肠组织细胞形态学改变以及3d和1周存活率.结果:B组肝功能损害与A组相比明显降低(P<0.01),MDA含量、血清内毒素明显低于A组(P<0.01),SOD活性明显高于A组(P<0.01);B组肝细胞结构改变较小,肠黏膜上皮损伤较轻;术后1周存活率B组较A组高(P<0.01).结论:受体低氧预适应能够保护肠黏膜屏障,减轻移植肝再灌注损伤.     

低氧与去铁敏对移植供肝作用的对比性研究

目的 对比研究低氧预处理及去铁敏预处理对移植供肝保护作用的特点,探索一种适合指导临床的供肝保护方法.方法 SD大鼠,随机分为假手术组(S组)、自体肝移植组(AT组)、去铁敏预处理组(DP组)与低氧预处理组(HP组).检测各组术后24 h血清中谷丙转氨酶(ALT),谷草转氨酶(AST),碱性磷酸酶(ALP)、肝组织形态学改变并检测肝组织中低氧诱导因子-1(HIF-1a)及丙二醛(MDA)的含量.结果 与S组相比AT组、DP组、HP组术后血清ALT、AST、ALP明显升高,DP组、HP组与AT组相比血清ALT、AST、ALP显著降低,肝形态异常变化减轻,肝组织中HIF-1a蛋白含量升高,MDA含量下降(P<0.05).结论 在肝移植术前行DP,可以起到与HP相似的供肝保护效果,但DP更适合指导临床.     

低氧预适应对自体肝移植大鼠肝细胞EGR-1表达的影响

目的 探讨低氧预适应对大鼠肝移植术后早期生长反应因子1(early growth response factor-1,EGR-1)的影响.方法 采用门静脉灌注的大鼠自体肝移植模型:A组:低氧预适应大鼠自体肝移植组;B组:大鼠自体肝移植组;C组:正常大鼠对照组.比较大鼠自体肝移植术后肝脏组织病理学改变、肝组织中低氧诱导因...     

肝移植术后肝动脉缺血对胆管上皮细胞分泌VEGF的影响

目的：探讨肝移植术后肝动脉缺血对肝内胆管上皮细胞自分泌VEGF-A、B、C及其受体（VEGFR）-1、2、3的影响;方法：对行常规改良Gao＇s肝移植术后的大鼠,分别实施二次手术：结扎肝动脉（HAL组）;肝动脉微球注射并肝动脉结扎（MS＋HAL组）;对照组（SO组）：肝动脉不做缺血处理.术后3、7 d处死动物,取肝脏组织进行免疫组化和RT-PCR检测.结果：（1）VEGFR-1的蛋白表达在各组中或未见表达,或表达极弱.术后3、7 d HAL组及MS＋HAL组的的VEGF-A、B、C及VEGFR-2、3各项免疫组化阳性胆管上皮细胞的计数值均明显低于SO组,P＜0.05.（2）各组均有VEGF-A、B、CmRNA及VEG-FR-1、2、3 mRNA的表达,各组间无明显差异（P＞0.05）.结论：肝移植术后肝动脉缺血时,肝内胆管上皮细胞自分泌并过度表达VEGF及其受体,从而促进胆管上皮细胞的代偿性增生.     

低氧预适应对自体原位肝移植大鼠TNF—α诱导肝细胞凋亡的保护作用及机制的研究

目的：探讨低氧预适应（HP）对自体原位肝移植大鼠肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导肝细胞凋亡的保护作用以及可能的机制。方法：采用经门静脉灌注法制备大鼠自体原位肝移植模型,将SD大鼠随机分为正常对照组（NC）、自体肝移植（AT）和AT＋低氧预适应（HP）3组。HP组术前用8％氮氧混合气体处理90min。3组分别于术后1,2,12,24h处死大鼠取肝脏标本,抽血检测肝功能,RT-PCR检测TNF-、C-Jun mRNA表达水平,透射电子显微镜下观察肝细胞的超微结构变化。     

低氧预适应对自体肝移植大鼠Bcl-2蛋白表达的影响及其意义

目的 探讨低氧预适应(HP)对大鼠自体肝移植后Bcl-2蛋白表达的影响及其意义.方法 采用改良的自体肝移植模型研究缺血再灌注损伤(IRI),将SD大鼠随机分为正常对照(NC)、自体移植(AT)和AT+低氧预适应(HP)3组,每组24只.HP组术前用8%氮氧混合气体处理90 min,分别于术后1,6,24 h处死大鼠取肝脏标本,抽血检测肝功能,免疫组化方法测定大鼠肝组织Bcl-2蛋白的表达,并在光镜和透射电镜下观察各组肝细胞形态学改变、线粒体损伤程度等.结果 HP组血清ALT和AST水平显著低于AT组,差异有统计学意义 (P＜0.05);HP组各时段的肝功能明显优于AT组;HP组各时段Bcl-2蛋白明显高于AT组,差异有统计学意义(P＜0.05).光镜下AT组的肝组织肿胀明显,而HP组无明显改变.透射电镜下AT组肝细胞出现典型的凋亡征象,而HP组肝细胞无明显凋亡形态;定量分析线粒体的面积、周长及直径均与AT组差异有统计学意义(P＜0.05),HP组线粒体损伤程度较AT组为轻.结论 HP对移植所导致的肝细胞凋亡有明显的抑制作用;它可能系通过上调Bcl-2蛋白的表达、减轻线粒体损伤途径而发挥其保护作用.     

低氧预适应对大鼠肝切除后残肝组织凋亡相关蛋白表达的影响及意义

目的 观察低氧预适应对大鼠肝切除术后残肝组织凋亡相关蛋白细胞色素C和caspase 3表达的影响及其意义.方法 采用SD大鼠肝切除模型研究低氧预适应对残肝组织凋亡相关蛋白表达的影响及意义.将SD大鼠随机分为对照组(NC组)、单纯肝切除组(HR组)和低氧预适应组+肝切除组(HP组),每组24只.HP组术前用10％氮氧混合气体处理90 min,分别于术后1h、6h、12 h、24 h处死大鼠取肝脏标本,取门静脉血检测肝功能,Western-Blot法测定肝切除大鼠残肝组织细胞色素C和caspase 3蛋白的表达,并在电镜下观察各组肝细胞形态学改变、线粒体损伤程度等.结果 HP组血清ALT和AST水平显著低于HR组,差异有统计学意义(P＜0.05);HP组各时段的肝功能明显优于HR组;HP组各时段细胞色素C和caspase 3蛋白表达明显低于HR组,透射电镜下HR组肝细胞出现典型的凋亡征象,而HP组肝细胞无明显凋亡形态.结论 HP对肝切除后残肝组织的肝细胞凋亡有明显的抑制作用;可能是通过下调细胞色素C和caspase 3蛋白的表达、减轻线粒体损伤途径而发挥其保护作用.     

大鼠移植肝内胆管上皮细胞转化生长因子-β表达的变化

目的探讨肝移植术后肝内胆管上皮细胞(BEC)转化生长因子(TGF)-β的表达。方法建立大鼠原位肝移植模型,根据供肝冷保存时间而分为CP 1 h组(冷保存1 h)、CP 12 h组(冷保存12 h)、SO组(假手术组)。分别于术后1、3、7、14 d检测血清谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TBIL)、碱性磷酸酶(ALP);免疫组织化学法检测BEC增殖、TGF-β表达、肌纤维母细胞(MFB)分布。结果CP12 h组术后各时相点BEC增殖率(7.0%、27.8%、23.1%、17.8%)明显高于CP 1 h组同时相点水平(2.0%、6%、2.6%、2.3%)及SO组(1.2%)水平;血清ALT(>200 IU/L)、ALP (>160 IU/L)、TBIL(>3.6μmlo/L)水平持续高于CP 1 h组(ALP<200 IU/L,ALT<160 IU/L,TBIL<3.6μmol/L);CP 12 h组术后3 d,BEC分泌TGF-β,7、14 d表达显著,伴有大量MFB聚集于BEC周围。结论供肝较长时间的冷保存严重损伤胆道,诱导BEC活跃增殖并分泌TGF-β,促进胆管周围成纤维细胞发生向MFB的表型转化,是肝移植术后胆管周围纤维化、胆道狭窄等并发症的产生的细胞学基础。     

Role of Vascular Endothelial Growth Factor in Protection of Intrahepatic Cholangiocytes Mediated by Hypoxic Preconditioning After Liver Transplantation in Rats

Objective

To investigate the effect on intrahepatic cholangiocytes mediated by hypoxic preconditioning (HP) after liver transplantation and the role of vascular endothelial growth factor (VEGF).

Materials and Methods

This experiment was based on a model of rat orthotopic liver autotransplantation. Sprague-Dawley rats were randomly divided into 3 groups: normal control, autotransplantation (AT), and HP. The HP group was subjected to 8% oxygen atmosphere for 90 minutes before surgery. At 6, 12, 24, and 48 hours after autotransplantation, the rats were killed for testing .Serum total bilirubin, direct bilirubin, and alkaline phosphatase concentrations were determined. The microstructure of cholangiocytes and the ultramicrostructure of cholangioles were determined. Immunohistochemistry was used to detect the expression of VEGF and the proliferation rate of cholangiocytes.

Results

Total bilirubin, direct bilirubin, and alkaline phosphatase concentrations in the AT group increased considerably more than in the HP group during the entire interval (P < .05). Light microscopy demonstrated that the microstructure of cholangiocytes in the AT group was damaged more seriously than in the HP group. At transmission electron microscopy, the ultramicrostructure of cholangioles was changed more obviously than in the HP group. The expression of VEGF on cholangiocytes and the proliferation rate of cholangiocytes were higher in the HP group than in the AT group over the entire experiment (P < .05).

Conclusion

Hypoxic preconditioning has a protective effect on cholangiocytes after liver autotransplantation. The mechanism may be related to HP-induced overexpression of VEGF on cholangiocytes.     

肝移植术后早期肠内营养的临床疗效观察

目的：探讨肝移植术后患者早期肠内营养（EN）支持的疗效。 方法：55例肝移植患者分别在术后48 h内给予EN（27例,EN组）或肠外营养（28例,PN组）支持。比较两组术后第1、9天血清白蛋白（ALB）、前白蛋白（PA）、淋巴细胞计数（LC）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆红素（TBIL）、直接胆红素（DBIL）等指标,及术后2周内感染发生情况、机械通气时间、ICU住院天数、术后住院天数。 结果：两组术后第1天各实验室指标差异无统计学意义（均P>0.05）,术后第9天,EN组ALB、PA、LC水平均明显高于PN组（均P<0.05）;两组间ALT、AST、TBIL、DBIL水平差异无统计学意义（均P>0.05）,但均较术后第1天明显下降。EN组术后2周内感染发生率明显低于PN组（P<0.05）。两组机械通气时间和ICU住院时间差异无统计学意义（均P>0.05）,但EN组术后住院时间明显低于PN组（P<0.05）。 结论：肝移植术后患者早期应用EN支持,可以有效改善机体营养状态和免疫功能,减少感染发生率,促进术后康复。  

     

受体大鼠肠道缺血预处理对肠道黏膜屏障及移植肝脏的影响

目的探讨肠道缺血预处理(IPC)对肠道黏膜屏障的作用及其对大鼠移植肝脏形态和功能的影响。方法清洁级SD大鼠,随机分为3组:S组为假手术组(n=8);A组为肝脏移植组(n=20);B组为肠道缺血预处理肝脏移植组(n=20)。A,B组在移植后1h各取8只,测定其肠道MPO与MDA含量,血清SOD,NO含量及肝功能各项指标;光镜下观察小肠组织病理改变;测定黏膜湿重、微绒毛高度和宽度及观察移植肝脏肝小叶形态结构的变化,余动物观察存活率。结果 B组1 d生存率与A组比较无统计学差异(P0.05),但1周生存率有显著提高(P0.05)。A组小肠MPO活性与MDA含量明显高于S组和B组,血清SOD活性和NO含量则显著减低,空肠黏膜湿重、绒毛高度和宽度显著低于S组与B组(均P0.01)。光镜观察见A组受鼠空肠与移植肝脏的形态学损伤性改变较B组与S组为重。结论受体大鼠肠道缺血预处理对大鼠移植肝脏具有保护作用。     

血液灌流对梗阻性高胆红素血症术后脏器保护作用的实验研究

目的；使梗阻性黄疸引起损害的各脏器功能术后尽快恢复。方法：我们采用血液灌流辅助治疗。结果；血液灌流后较灌流前CREA，TBIL，DBIL明显改善，t检验P＜0．01，有极显著性差异。手术解除梗阻后两周灌流组与手术比较CREA，TP，ALB，TBIL，DBIL，ALT均有改善，TP，ALB，TBIL化验检查，t检验P＜0．01，差异有极显著性意义。灌流组肝脏，肾脏病理恢复早于手术组。结论：血液灌流有效地清除梗阻性黄疸术后血内胆素等中分子量物质，利于各脏器的功能及病理改变，且对血液基本成分无损害是简便，安全，可靠的辅助治疗措施。     

低氧预适应对自体原位肝移植大鼠血清内毒素的影响

目的 探讨低氧预适应(HP)对大鼠自体肝移植后血清内毒素的影响.方法 采用改良的自体肝移植模型进行研究.将SD大鼠随机分为正常对照组(NC)、自体肝移植(AT)和低氧预适应+AT(HP)3组,每组24只.HP组术前用8%氮氧混合气体处理90 min.各组分别于术后1,6,12 h处死大鼠取肠标本,抽血检测ALT和AST水平;在光镜及透射电镜下观察各组小肠黏膜损伤程度及线粒体超微结构改变;同时应用ELISA试剂盒测定大鼠血清内毒素水平的变化.结果 HP组血清ALT,AST及内毒素水平均显著低于AT组,但高于NC组,差异均有统计学意义(P＜0.05);光镜下 HP组小肠黏膜损伤程度明显低于AT组;透射电镜下HP组线粒体损伤较AT组明显减轻.结论 HP可减轻肝IRI对肠道黏膜的损伤,减少了肠道内毒素移位而降低肝移植大鼠血清内毒素水平,从而减轻内毒素对移植肝功能的影响,其机制可能与减轻线粒体结构损伤,减轻缺血缺氧后线粒体功能障碍,改善细胞的供能,提高细胞的抗缺氧能力有关.     

超声刀与高频电刀在腹腔镜胆道探查术中的对比研究

目的:对比研究超声刀(ultrasonic harmonic scalpel,UHS)与高频电刀(high-frequency mono-polar electronic scalpel,HMES)在腹腔镜胆道探查术(laparoscopic common bile duct exploration,LCBDE)中的应用价值。方法:回顾分析216例LCBDE患者的临床资料,其中98例术中应用UHS(A组),118例术中应用HMES(B组);对比分析两组手术时间、术中出血量、中转开腹率、术后胆漏率、术后出血量及住院时间;检测两组患者术前及术后第1天、第3天、第5天ALT、AST、TBIL、DBIL、GGT、ALP水平。结果:两组患者手术时间、术中出血量、中转开腹率、术后胆漏率、术后出血量及住院时间差异均无统计学意义(P>0.05);肝功能检测显示,与术前比较,A组术后第1天,B组术后第1天、第3天ALT、AST明显升高(P<0.05),第5天两组均恢复至正常水平;术后第3天两组间差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者术后第3天、第5天TBIL、DBIL水平较术前及术后第1天显著降低,术后第5天较第3天显著下降(P<0.05);术后第5天两组ALP、GGT较术前显著下降,两组间相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:LCBDE术中应用UHS、HMES均是安全、有效的,可有效解除胆道梗阻。     

肝移植术中大量输血的影响因素分析及预测模型构建

目的探讨肝脏移植术中大量输血的影响因素,并建立大量输血的预测模型。方法回顾性分析南京大学医学院附属鼓楼医院2018年度肝脏外科同一肝移植小组进行的103例肝移植受者资料,根据受者术中红细胞输注量分为大量输血组(≥12 U)40例和非大量输血组(<12 U)63例,比较分析两组受者的一般情况和术前指标,用Logistic回归分析法得出肝移植术中大量输血的预测模型。结果大量输血组和非大量输血组在性别、年龄、血型等方面差异无统计学意义(P>0.05),而术前诊断、血红蛋白(Hb)、血细胞比容(HCT)、血小板计数(PLT)、国际标准化比值(INR)、凝血酶原时间(PT)、部分活化凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、血清总胆红素(TBIL)、血清直接胆红素(DBIL)、终末期肝病模型(MELD)评分等指标与术中大量输血存在相关性(P<0.05)。通过Logistic回归分析,得出肝移植术中大量输血的预测模型为Y=3.545-0.112×HCT-0.009×PLT+0.005×DBIL。其预测值经受试者操作特征曲线曲线分析得出曲线下面积为0.813,灵敏度和特异度分别为80.0%和71.4%,约登指数(Youden's index)为0.514,即Y≥0.514时则可能发生术中大量输血。结论肝移植受者术前HCT、PLT和DBIL可以作为术中大量输血的独立预测因素,其预测模型有较好的灵敏度和特异度。     

葡萄糖-6-磷酸酶和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶mRNA在梗阻性黄疸及胆道再通大鼠中的表达及意义

目的研究梗阻性黄疸及胆道再通大鼠肝脏葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)mRNA表达的改变及意义,探讨梗阻性黄疸影响糖代谢的分子机制。方法 30只健康雄性大鼠随机分为5组:假手术组(A组)、梗阻性黄疸1周组(B组)、梗阻性黄疸2周组(C组)、梗阻性黄疸1周再通1周组(D组)、梗阻性黄疸2周再通1周组(E组)。检测各组动物血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、直接胆红素(DBIL),总胆红素(TBIL)水平;光镜观察肝脏形态学改变;采用RT-PCR方法检测大鼠肝脏葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)mRNA的表达。结果胆道梗阻后,B、C两组血清TBIL、DBIL、ALT水平较A组明显升高,尤其是C组升高的更明显;光镜下可见B组和C组肝细胞肿胀,炎性细胞浸润,汇管区可见胆管增生,C组较B组除以上改变更加严重外,还可见典型的片状肝细胞坏死;B、C两组肝组织G-6-P、PEPCK的mRNA表达显著升高。相比,D、E两组血清TBIL、DBIL、ALT水平均分别低于B、C两组,肝脏形态改变也明显趋于正常,肝组织G-6-P、PEPCK的mRNA表达亦均低于B、C两组,且D组在血清、肝组织mRNA表达及光镜下肝细胞损伤方面与E组比较均降低。结论梗阻性黄疸模型形成后,大鼠肝脏分泌的胆汁排泄不畅形成淤积。肝脏中G-6-P、PEPCK mRNA表达开始增强且随梗阻时间延长其表达增强趋势更加明显,加强了糖异生的过程,可导致血糖浓度的升高。梗阻解除后,受损肝脏形态及肝功能开始恢复,肝脏G-6-P、PEPCKmRNA表达开始降低,及早解除梗阻,恢复越快。提示肝组织G-6-P、PEPCK的mRNA表达升高可能是梗阻性黄疸时糖代谢紊乱的主要原因之一。