七氟烷预处理对心肌缺血/再灌注损伤大鼠心肌NF-κBp50活性表达的影响

目的 观察七氟烷预处理对心肌缺血/再灌注大鼠心肌核因子-κB(NF-κB)p50表达的影响,进而探讨NF-κB在七氟烷预处理保护机制中的作用.方法 SD雄性大鼠70只.随机分为7组.空白对照组;单纯缺血组;七氟烷组于吸入2.4%七氟烷30 min,继之15 min药物排出后进行心肌缺血,再灌注;七氟烷对照组吸入七氟烷30 min后停止吸入165 min;小白菊内酯(parthenolide.PTN)组于缺血前15 min腹腔内注射NF-κB特异性抑制剂PTN 500 μg/kg;PTN+七氟烷组于七氟烷预处理前15 min腹腔内注射PTN 500μg/kg;七氟烷+PTN组于预处理后即刻腹腔内注射PTN 500 μg/kg.建立大鼠心肌缺血/再灌注损伤的在体模型,阻断左冠状动脉前降支30 min,再灌注120 min,分别于大鼠心肌缺血/再灌注前、后或相应时间点取心肌标本.采用western blot法测定NF-κB p50的蛋白表达.结果 缺血前七氟烷组较空白对照组NF-κB p50蛋白表达明显上调(P<0.05);缺血后与空白对照组比较,单纯缺血组、七氟烷组NF-κB p50蛋白表达显著增多(P<0.05);与单纯缺血组比较,七氟烷组NF-κB p50蛋白表达显著减少(P<0.05);缺血后七氟烷组较缺血前七氟烷组NF-κB p50蛋白表达显著减少(JP相似文献   

七氟烷预处理对缺血/再灌注损伤大鼠心肌磷酸化抑制蛋白的影响

目的 观察七氟烷预处理对缺血/再灌(ischemia/reperfusion,I/R)损伤大鼠心肌磷酸化抑制蛋白(phosphorylation inhebitory kappaB,p-IκBα)的影响,从另一角度进一步探讨NF-κB在七氟烷预处理中的保护机制.方法 SD雄性大鼠56只,建立大鼠心肌I,R损伤在体模型,随机分为7组:假手术组(CON组);单纯缺血组(I/R组)进行30 min心肌缺血后再灌注120min;七氟烷组(SEVO组)于吸入1.0 MAC七氟烷30 min,继之15 min药物排出后进行心肌I/R;SEVO 165'组吸人七氟烷30min后停止吸人165 min;小白菊内酯(parthenolide,PTN)组于缺血前60 min腹腔内注射NF-κβ特异性抑制剂PTN 500 μg/kg;PTN+SEVO组、SEVO+PTN组分别于七氟烷预处理前15 min、预处理后即刻腹腔内注射PTN 500 μg/kg.分别于大鼠心肌I/R前、后或相应时间点取心肌标本,采用Western blotting法测定p-IκBa的蛋白表达.结果 缺血前即刻:SEVO组(22±3)和SEVO 165'组(20±4)较CON组(15±3)p-IκBα蛋白表达上调(P<0.05);再灌注2 h后即刻:I/R组(44±6)和SEVO组(30±3)较CON组(15±4)p-IκBα蛋白表达均上调(P<0.05),而与I/R组相比,SEVO组p-IκBα蛋白上调幅度减小(P<0.05).结论 七氟烷预处理早期p-IκBα蛋白的表达上调,反馈性抑制了I/R后p-IκBα蛋白的表达,该作用可被PTN所阻断.从另一角度进一步论证了NF-κB参与七氟烷预处理的心肌保护机制.     

小肠旷置术对2型糖尿病大鼠糖耐量的影响

目的 观察不同肠段小肠旷置术对2型糖尿病大鼠血糖和糖耐量的影响.方法 将40只Goto-Kakizaki(GK)大鼠随机分为旷置十二指肠组(A组)、旷置十二指肠和近端空肠组(B组)、旷置十二指肠和全部空肠组(C组)、旷置次全小肠组(D组)和假手术组(SO组)5组,每组8只.测定各组大鼠术前及术后1、3、6、12、24周空腹血糖;用葡萄糖3 g/kg灌胃,测定各组大鼠术前及术后1、24周口服葡萄糖后0、30、60、120和180 min耐糖血糖值,描制血糖值随时间变化曲线,计算糖耐量曲线下面积.结果 与术前比较,各旷置组术后各时间点空腹血糖、糖耐量血糖峰值和糖耐量曲线下面积均明显减少(B组术前和术后1周空腹血糖分别为(9.0±2.4)mmoL/L和(4.4±1.0)mmol/L、糖耐最血糖峰值和糖耐量曲线下面积分别为(20.8±3.1)mmol/L和(10.3±2.0)mmol/L、(2658±417)mmol·min/L和(1324±317)mmol·min/L,P＜0.05或P＜0.01);SO组空腹血糖在术后1、3、6周未发生明显变化(P＞0.05),术后12周(9.1±2.4)mmol/L、24周(10.0±2.3)mmol/L显著高于术前(8.1±1.9)mmol/L,P＜0.01);与术前比较,SO组糖耐量血糖峰值和糖耐量曲线下面积在术后1周未发现明显变化(P＞0.05),术后24周糖耐量血糖峰时后移、峰值增高(25.6±2.0)mmol/L比(21.4±2.7)mmol/L,糖耐量曲线下面积明显增加(3422±360)mmol·min/L比(2667±377)mmol·min/L,P＜0.01.与SO组比较,各旷置组术后各时间点空腹血糖、糖耐最血糖峰值和糖耐量曲线下面积均较SO组显著下降(P＜0.05或P＜0.01).各旷置组之间比较,B组术后各时间点空腹血糖、糖耐最血糖峰值和糖耐量曲线下面积均显著低于A组[术后24周B组和A组空腹血糖分别为(4.6±1.2)mmol/L和(6.2±1.5)mmoL/L、糖耐量血糖峰值分别为(9.7±2.2)mmol/L和(12.4±1.7)mmoL/L、糖耐量曲线下面积分别为(1230±293)mmol·min/L和(1599±264)mmol·min/L,P＜0.05或P＜0.01],对血糖控制和糖耐量改善效果优于A组,但与C组和D组相比差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 小肠旷置术可控制2型糖尿病大鼠的血糖并改善糖耐量,其中旷置十二指肠和近端空肠是临床可行的术式.     

七氟烷预处理对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠线粒体通透性转换孔的影响

目的 探讨七氟烷预处理对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠线粒体通透性转换孔(mPTP)的影响.方法 成年雄性SD大鼠60只,体重250～300 g,随机分为5组(n=12):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、七氟烷预处理组(Sev组)、线粒体ATP敏感性钾离子通道(mito-KATP通道)阻断剂5-羟癸酸(5-HD)+Sev组和5-HD组.采用大脑中动脉阻断法制备局灶性脑缺血再灌注模型.S组只分离血管不置入线栓;I/R组制备局灶性脑缺血再灌注模型;Sev组吸入2.4%七氟烷60 min行预处理,24 h后制备局灶性脑缺血再灌注模型;5-HD+Sev组腹腔注射5-HD 40mg/kg,30 min后行七氟醚预处理,其余处理同Sev组;5-HD组腹腔注射5-HD 40 mg/kg,30 min后制备局灶性脑缺血再灌注模型.于再灌注24 h时断头取缺血侧顶叶皮层组织,测定mPTP活性,Western blot法测定Bcl-2、Bax表达水平,并计算Bcl-2/Bax比值,采用TUNEL法检测神经元凋亡情况.结果 与S组比较,I/R组、Sev组、5-HD+Sev组和5-HD组凋亡神经元计数升高,Bcl-2和Bax表达上调,Bcl-2/Bax比值升高,mPTP活性升高(P＜0.05);与I/R组比较,Sev组凋亡神经元计数减少,Bcl-2表达上调,Bcl-2/Bax比值升高,mPTP活性降低(P＜0.05);与Sev组比较,5-HD+Sev组和5-HD组Bcl-2表达下凋,Bcl-2/Bax比值降低,mPTP活性升高(P＜0.05);5-HD+Sev组与5-HD组上述指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 七氟烷预处理可能通过激活神经元mito-KATP通道,上调Bcl-2的表达,从而抑制mPTP的大量开放减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注时的神经元凋亡.     

鼻咽腔降温对大鼠全脑缺血-再灌注损伤的保护作用

目的 探讨鼻咽腔降温对大鼠全脑缺血-再灌注损伤的保护作用.方法 健康雄性Wistar大鼠18只,随机均分为三组:全身降温组(A组)、鼻咽腔降温组(B组)、常温组(C组).采用Pulsinelli四血管阻断法建立大鼠伞脑缺血-再灌注损伤模璎.A、B组海马温度降至靶温度33℃.阻断双侧颈总动脉20 min再灌注,低温维持1 h后复温.C组保持大鼠直肠和海马温度均为(37±0.5)℃,阻断双侧颈总动脉20 min再灌注.利用微透析技术收集大鼠海马CA1区微透析液并测其谷氨酸(Glu)含量.再灌注8 h后断头取脑,用免疫组化法观察海马CA1区Bcl-2和Bax的表达.结果 A组海马温度从37℃降到33℃所需时间为B组的4.8倍;缺血10、20 min、再灌注后10、20、30 min时A、B组Glu含量明显低于C组(P＜0.05);A、B、C组海马CA1区Glu含量恢复至缺血前水平所需时间分别为(19.92±1.30)、(20.17±1.34)、(39.67±1.49)min.与C组比较,A、B组的Bax免疫阳性细胞数显著减少(P±0.05);A、B组的Bcl-2免疫阳性细胞数显著增多(P＜0.05).结论 鼻咽腔降温对大鼠全脑缺血-再灌注损伤具有保护作用,且鼻咽腔降温法降低海马温度的速度明显快于全身降温法.     

七氟烷预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤时细胞凋亡的影响

目的 探讨七氟烷预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤时细胞凋亡的影响.方法 成年雄性SD大鼠64只,体重270～350 g,随机分为4组(n=16):假手术组(S组)仅穿线不结扎,心肌缺血再灌注组(I/R组)阻断左冠状动脉前降支缺血30 min,恢复灌注2 h制备心肌缺血再灌注损伤模型,七氟烷组(Sevo组)吸入2.5%七氟烷30 min,七氟烷预处理+心肌缺血再灌注组(SR组)吸入2.5%七氟烷30 min,15 min后制备模型.于再灌注2 h时随机取4只大鼠处死取左心室,采用氯化三苯四唑染色法测定心肌梗死范围,随机取4只大鼠处死取左心室,采用TUNEL法检测凋亡心肌细胞,计算凋亡指数,于缺血前即刻和再灌注2 h时分别随机取4只大鼠处死取左心室,采用Western blot法测定Bcl-2及caspase-3的蛋白表达水平.结果 与S组相比,再灌注2 h时I/R组和SR组心肌梗死范围增大,心肌细胞凋亡指数升高,caspase-3蛋白表达上调,Sevo组Bcl-2蛋白表达上调,I/R组Bcl-2蛋白表达下调,Sevo组和SR组缺血前即刻Bcl-2蛋白表达上凋(P＜0.05);与I/R组相比,再灌注2 h时SR组心肌梗死范围缩小、心肌细胞凋亡指数降低,Sevo组和SR组Bcl-2蛋白表达上调,SR组caspase-3蛋白表达下调(P＜0.05);与缺血前即刻相比,I/R组和SR组再灌注2 h时Bcl-2蛋白表达下调,caspase-3蛋白表达上调(P＜0.05).结论 七氟烷预处理可通过抑制细胞凋亡减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤.     

缺血后处理和预处理对大鼠骨骼肌缺血-再灌注损伤的作用

目的 探讨缺血后处理( IPost)和缺血预处理(IPC)对大鼠骨骼肌缺血再灌注(IR)损伤的影响.方法 将40只大鼠随机分成缺血再灌注组(A组)、缺血后处理组(B组)、缺血预处理组(C组)、缺血预处理加缺血后处理组(D组)以及对照组(E组),采用切断患肢全部皮肤、肌肉和神经,保留患肢股动、静脉的动物模型,通过夹闭和开放股动、静脉造成骨骼肌缺血再灌注损伤,通过测定骨骼肌缺血4h、再灌注1h后血清丙二醛(MDA)和骨骼肌髓过氧化物酶(MPO),以及再灌注6h后骨骼肌的坏死程度来观察缺血后处理.缺血预处理及缺血预处理加缺血后处理对大鼠骨骼肌缺血再灌注损伤的影响.结果 B组、C组和D组再灌注1 h MDA和MPO水平以及再灌注6h骨骼肌坏死程度均低于A组(P＜ 0.05),但是高于E组(P＜0.05);B组和D组再灌注1 h MDA和MPO水平以及再灌注6h骨骼肌坏死程度基本相同(P＞0.05);B组和D组再灌注1 h MDA和MPO水平低于C组(P＜0.05),但再灌注6h骨骼肌坏死程度基本相同(P＞0.05).结论 应用缺血后处理和缺血预处理对大鼠骨骼肌缺血再灌注损伤有一定的保护效果,联合应用缺血后处理和缺血预处理,对骨骼肌缺血再灌注损伤的保护作用并没有明显增强.     

七氟烷预处理对心肌缺血／再灌注损伤大鼠心肌NF—κBp50活性表达的影响

目的观察七氟烷预处理对心肌缺血／再灌注大鼠心肌核因子-κB（NF-κB）p50表达的影响,进而探讨NF-κB在七氟烷预处理保护机制中的作用。方法SD雄性大鼠70只,随机分为7组。空白对照组;单纯缺血组;七氟烷组于吸入2．4％七氟烷30min,继之15min药物排出后进行心肌缺血／再灌注;七氟烷对照组吸入七氟烷30min后停止吸入165min;小白菊内酯（parthenolide,PTN）组于缺血前15min腹腔内注射NF-κB特异性抑制剂PTN500μg／kg;PTN＋七氟烷组于七氟烷预处理前15min腹腔内注射PTN500μg／kg;七氟烷＋PTN组于预处理后即刻腹腔内注射门N500μg／kg。建立大鼠心肌缺血,再灌注损伤的在体模型,阻断左冠状动脉前降支30min,再灌注120min,分别于大鼠心肌缺血／再灌注前、后或相应时间点取心肌标本。采用western blot法测定NF-κBp50的蛋白表达。结果缺血前七氟烷组较空白对照组NF-κBp50蛋白表达明显上调（P〈0．05）;缺血后与空白对照组比较,单纯缺血组、七氟烷组NF-κBp50蛋白表达显著增多（P〈0．05）;与单纯缺血组比较,七氟烷组NF-κBp50蛋白表达显著减少（P〈0．05）;缺血后七氟烷组较缺血前七氟烷组NF-κBp50蛋白表达显著减少（P〈0．05）.结论七氟烷预处理期间NF-κBp50大量激活,抑制了心肌缺血／再灌注后期NF-κBp50蛋白的表达,该作用被PTN所阻断,NF-κBp50可能参与了七氟烷预处理的心肌保护机制。     

七氟烷预处理对大鼠离体心肌缺血/再灌注损伤线粒体细胞色素C释放的影响

目的 探讨七氟烷预处理对大鼠离体心肌缺血/再灌注损伤(ischemia/reperfusion injury,I/RI)时心肌细胞凋亡及线粒体细胞色素C释放的影响.方法 40只SD大鼠应用随机数字表法随机分为4组(每组10只):对照组(C组),0.75％、1.5％、3.0％七氟烷预处理组(S1、S2、S3组).应用Langendorff离体心脏灌注模型,经主动脉用Krebs-Henseleit( K-H)液逆行灌注.各组均缺血30 min,再灌注60 min.S1、S2、S3组在缺血前分别以含相应浓度七氟烷的K-H液灌注10 min,再冲洗5 min,重复2次.记录平衡灌注末、缺血前即刻、再灌注30、60 min时的心功能指标.再灌注60 min时用DNA原位末端缺口标记技术(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labelling,TUNEL)测定凋亡细胞,提取心肌线粒体,免疫印迹法测定线粒体和胞浆的细胞色素C水平.结果 与C组比较,S1、S2、S3组再灌注30、60 min时左室舒张末压(left ventricular end-diastolic pressure,LVEDP)降低、左室发展压(left ventricular developed pressure,LVDP)升高(P＜0.05);与C组比较,S1、S2、S3组凋亡率明显下降(P＜0.05或0.01),再灌注末心肌细胞凋亡率C、S1、S2、S3组分别为(33.10±2.57)％、(28.03±3.11)％、(25.20±3.04)％、(24.06±2.58)％;与C组比较,S1、S2、S3组心肌线粒体细胞色素C释放减少,胞浆细胞色素C的量明显降低(P＜0.05或0.01).结论 七氟烷预处理能够通过抑制心肌线粒体细胞色素C释放到胞浆,降低心肌细胞凋亡率,减轻心肌I/RI.     

雷帕霉素减弱七氟烷预处理对心肌缺血/再灌损伤的保护作用

目的 观察自噬增强剂雷帕霉素(rapamycin,RAPA)对七氟烷预处理离体大鼠心脏缺血/再灌注损伤(ischemia/reperfusion injury,I/RI)保护作用的影响,探讨自噬在七氟烷预处理对心肌I/RI保护中的作用. 方法 36只健康成年雄性Wistar大鼠,体重250 g～280 g,采用随机数字表法分为3组(每组12只):缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)组,七氟烷预处理组(S+I/R组),七氟烷预处理+RAPA组(S+I/R+RAPA组).采用Langendorff灌注装置制备离体心脏I/R模型,缺血30 min、再灌注120 min,记录平衡末及再灌注末的左室舒张末期压(left ventricular diastolic pressure,LVEDP)、左室发展压(left ventricular developed pressure,LVDP)、左心室内压最大上升/下降速率(the maximum rate of increase or decrease of left ventricular pressure,±dp/dtmax)、心率(heart rate,HR).再灌注120 min后,收集冠状动脉流出液测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性;取心肌,计算心肌梗死面积百分比.Western blot半定量检测自噬标记物微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light 3,LC3)、RAPA靶蛋白(target of rapamycin,mTOR)及磷酸化mTOR (phosphorylated mTOR,p-mTOR)蛋白表达量. 结果 再灌注末,与I/R组比较,S+I/R组心功能明显改善(P＜0.05),心肌梗死面积[(47±6)％、(29±5)％]、冠状动脉流出液LDH活性[(29±5) U/L、(19±4) U/L]均降低,心肌LC3-Ⅱ表达下调,p-mTOR表达上调(P＜0.05);S+I/R+RAPA组各指标与I/R组比较,差异无统计学意义.与S+I/R组比较,S+I/R+RAPA组心功能各项指标呈损害性变化(P＜0.05)、梗死面积增大[(29±5)％、(46±3)％]、冠状动脉流出液LDH活性[(19±4) U/L、(27±5) U/L]均增加(P＜0.05),LC3-Ⅱ表达水平增加,p-mTOR表达降低. 结论 RAPA能够减弱七氟烷预处理对I/RI产生的保护作用,可能与其降低p-mTOR表达,减弱对自噬的抑制作用有关.     

钙网蛋白在不同预处理心肌细胞缺血再灌注的保护作用

目的 观察3种不同预处理对在体缺血再灌注心肌的保护作用,探讨钙网蛋白(CRT)在预处理心肌细胞缺血再灌注损伤的作用.方法 将30只成年SD大鼠随机分成5组(n=6),分别为缺血再灌注组、缺血预处理组、腺苷预处理组、远程预处理组和假手术组.建立大鼠在体缺血冉灌注损伤模型,观察各组缺血再灌注前后心功能变化,并检测再灌注末血清肌钙蛋白T(cTnT)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的变化以及心肌组织CRT的表达.结果 缺血预处理组、远程预处理组与缺血再灌注组比较(±dp/dt max)有明显提高(P<0.05).缺血预处理组、腺苷预处理组、远程预处理组cTnT、MDA值均低于缺血再灌注组,SOD值高于缺血再灌注组(P<0.05);腺苷预处理组SOD值高于缺血预处理组和远程预处理组,cTnT值则低于后2组(P<0.05);缺血预处理组、腺苷预处理组、远程组与缺血再灌注组比较,CRT表达灰度值均显著降低(P<0.05).结论 腺苷预处理、远程预处理均可以模拟缺血预处理的心肌保护作用;预处理可能通过下调钙网蛋白高表达减轻在体大鼠心肌细胞缺血再灌注损伤.     

缺血预处理对大鼠心肌细胞凋亡的影响及其机制

目的 观察心肌细胞凋亡及其机制在大鼠心肌缺血再灌注损伤和缺血预处理中的作用.方法 将40只大鼠随机分成4组:对照组(A组)、60min缺血再灌注组(B组)、120min缺血再灌注组(C组)、缺血预适应组(D组);应用TUNEL法检测心肌组织的凋亡;心脏病理改变用光学和电子显微镜观察;检测肿瘤坏死因子(TNF)-α、bcl-2和bax因子.结果 D组心肌细胞凋亡指数(11.36±4.23)%明显优于B组(18.14±7.69)%和C组(15.59±6.31)%,D组TNF-α、bel-2和bax的表达也明显优于B、C二组.结论 缺血预处理可减轻大鼠心肌缺血再灌注后心肌细胞的凋亡;TNF-α、bcl-2和bax表达的抑制与缺血预处理保护机制有关.     

超短波肝区预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响

目的探讨超短波肝区预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响。方法 48只健康成年雄性SD大鼠随机分为对照组(A,n=24)和超短波肝区预处理组(B,n=24),动物超短波肝区预处理12 h后制作缺血再灌注模型,分别于缺血30 min及再灌注后1 h、6 h、及24 h各时相点活杀动物留取血及肝脏标本保存待检。结果与对照组比较,超短波肝区预处理组ALT、AST在上述多个时相点显著降低(P<0.05);同时HSP70在超短波肝区预处理组中的表达明显强于对照组(P<0.05);且超短波肝区预处理组具有较轻的肝脏组织病理损害。结论超短波肝区预处理可减轻大鼠肝脏的缺血再灌注损伤,并可能与其增加肝脏HSP70的表达有关。     

银杏叶提取物对大鼠脑缺血再灌注损伤bax、神经胶质纤维相关蛋白表达的影响

目的 观察银杏叶提取物(GBE)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用.方法 将80只清洁雄性SD大鼠随机分为两组:对照组(A组,给予生理盐水治疗,n=40只),银杏叶提取物干预组(B组,给予等量的银杏叶提取物,n=40只),每组再分4个亚组,即再灌注后1、3、6、24h组,每个亚组10只.制作大鼠右侧大脑中动脉缺血再灌注模型.应用苏木素-伊红(HE)染色法观察脑组织形态病理学变化,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测胶质纤维相关蛋白(GFAP)在血清中的浓度变化;应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测凋亡基因bax的表达.结果 HE染色:A组发现明显的梗死灶、神经细胞坏死、凋亡以及神经细胞外形难以辨认,大部分细胞结构消失.B组形态相对正常,损伤较A组轻.大鼠脑缺血再灌注损伤后GFAP的血清浓度升高,再灌注后各时间点(1、3、6、24h)B组GFAP的血清浓度(275.29±112.72、308.72±124.11、372.56±185.62、452.12±145.26) ng/L显著低于A组(437.17±152.26、490.27±198.37、583.45±201.42、656.26±256.36) ng/L(P＜0.05).RT-PCR检测显示bax mRNA表达水平在各时间点B组(0.256±0.018、0.302±0.023、0.417±0.034、0.527±0.052)显著低于A组(0.333±0.021、0.452±0.037、0.587±0.052、0.726±0.046) (P ＜0.05).结论 bax、GFAP在大鼠脑缺血再灌注后均发生明显的变化,参与大鼠脑缺血再灌注损伤的形成机制.银杏叶提取物可通过抑制GFAP的生成以及减少促凋亡基因bax的表达来减轻脑缺血再灌注损伤,从而对大鼠缺血脑组织具有显著保护作用.     

七氟烷后处理改善脑缺血大鼠的远期学习记忆

目的利用大鼠大脑中动脉闭塞模型(MCAO), 观察七氟烷后处理对脑缺血大鼠远期学习记忆能力的影响。方法雄性SD大鼠随机分为假手术组、对照组和七氟烷组, 每组28只, 七氟烷组在再灌注开始时吸入1.0最小肺泡浓度(MAC)七氟烷进行后处理。再灌注后28 d, 分别用氯化三苯基四氮唑(TTC)染色评估大鼠脑梗死容积, 用Morris水迷宫评估大鼠的空间学习记忆能力。组间比较采用单因素或双因素方差分析。结果再灌注28 d七氟烷组的脑梗死容积为37.59%, 明显小于对照组的46.21%(F=200.5, P<0.05)。水迷宫实验第5天七氟烷组的逃避潜伏期为16.25 s, 明显短于对照组的27.27 s(F=24.03, P<0.05)。结论七氟烷后处理可能通过减小脑梗死容积, 改善大鼠远期的空间学习和记忆能力。     

ATP敏感性钾通道(KATP)开放剂对脑缺血/再灌注大鼠谷氨酸受体1a和谷氨酸转运体1的影响

目的 研究ATP敏感性钾通道(KATP)开放剂克罗卡林对大鼠脑缺血/再灌注后脑梗死体积、代谢型谷氨酸受体1α(mGluRlα)和谷氨酸转运体1(GLT-1或者EAAT-2)的影响.方法 雄性Wistar大鼠按序号随机分为假手术组(A组)、缺血/再灌注脑缺血对照组(middle cerebral artery occlusion MCAOB,B组)、MCAO+ATP敏感性钾通道(KATP)开放剂克罗卡林组(C组).应用线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞再灌注(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,大鼠脑缺血/再灌注24 h后,Bederson法评价动物的神经行为功能,氯化三苯基四氮唑(TTC)染色观察脑梗死体积,免疫组化测定谷氨酸受体1α(mGluR1α)和GLT-1.结果 脑缺血/再灌注24 h后,动物均表现神经行为功能障碍,大鼠神经行为功能评分C组(2.23±0.11)较B组(2.61±0.19)明显改善,差异有统计学意义(P＜0.05);缺血侧出现脑梗塞病灶,脑梗死体积C组(138.3±29.9)较B组(182.5±34.5)显著减小,差异具有统计学意义(P＜0.05);B组mGluR1α吸光度(0.293±0.009)与A组mGluR1α吸光度(0.183±0.008)相比,吸光度明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05)、B组GLT-吸光度(0.147±0.009)与A组GLT-吸光度(0.255±0.009)相比,吸光度明显减少,差异有统计学意义(P＜0.05);C组mGluR1α吸光度(0.227±0.009)与B组mGluR1α吸光度(0.293±0.009)相比,其吸光度明显减小,差异有统计学意义(P＜0.05)、C组GLT-1吸光度(0.212±0.008)与B组GLT-1吸光度(0.147±0.009)相比明显增大,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 预防性应用克罗卡林可能通过减少mGluR1α表达,增强GLT-1表达,减少谷氨酸堆积,减小脑梗死体积,从而减轻脑组织缺血/再灌注损伤.     

阿霉素预处理替代缺血预处理提供鼠皮瓣缺血耐受的实验研究

目的探讨阿霉素预处理提供鼠皮瓣缺血耐受的可能性及其作用机制。方法健康成年SD大鼠24只,雌雄各半,体重250～300 g,随机分为A、B、C 3组(n=8)。于各组大鼠腹部制备以腹壁浅血管-神经束为蒂、大小为6 cm×3 cm的岛状皮瓣,A组不作处理;B组用微血管夹阻断腹壁浅血管血流10 min,松开后再灌注10 min,反复4次;C组经腹壁浅静脉推注阿霉素(1 mg/kg)。24 h后于皮瓣蒂部夹闭腹壁浅血管4 h,再灌注2 h,制备缺血再灌注损伤模型。术后观察大鼠存活情况,于缺血再灌注损伤后0、8、12、24、30 h各组取皮瓣检测丙二醛(malonyldiadehyde,MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)含量;于缺血再灌注损伤后7 d测量皮瓣成活率后处死大鼠,取皮瓣行组织学观察。结果实验中共5只大鼠死亡,其中A、B组各1只,C组3只,均给予补充。缺血再灌注损伤后7 d,A组皮瓣成活率为10.10%±0.43%,小于B组91.63%±1.76%及C组92.75%±1.48%,差异均有统计学意义(P<0.05);B组与C组比较,差异无统计学意义(t=0.29,P=0.77)。缺血再灌注损伤后0 h 3组间MDA和SOD含量比较,差异均无统计学意义(P>0.05);8 h后各时间点A组与B、C组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),B组与C组比较差异无统计学意义(P>0.05)。组织学观察示,A组炎性细胞浸润较B、C组明显,纤维增生减弱;B组与C组皮瓣组织学改变相似。结论阿霉素预处理可以提供鼠皮瓣缺血耐受,保护皮瓣减轻缺血再灌注损伤,其机制可能与诱导内源性保护物质的产生有关。     

N-myc下游调节基因2在七氟醚预处理减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的作用

目的 评价N-myc下游调节基因2(NDRG2)在七氟醚预处理减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的作用.方法 健康雄性成年SD大鼠48只,体重280～320 g,采用随机数字表,将大鼠随机分为3组(n=16):假手术组(S组)、脑缺血再灌注组(I/R组)和七氟醚预处理组(Sev组).采用大脑中动脉阻断法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型.大鼠吸入2％七氟醚lh,每天1次,连续5d行七氟醚预处理.Sev组于七氟醚预处理结束后24h制备局灶性脑缺血再灌注模型.再灌注24h时行神经功能评分,随后处死大鼠,取脑组织,测定脑梗死体积百分比,采用Western Blot法测定缺血半暗带区NDRG2和活化的Caspase-3的表达,采用免疫组织荧光测定缺血半暗带区NDRG2的表达及定位.结果 与S组比较,I/R组和Sev组脑梗死体积百分比升高,神经功能评分降低,脑组织缺血区半暗带NDRG2和活化的Caspase-3表达上调(P＜0.05);与I/R组比较,Sev组脑梗死体积百分比降低,神经功能评分升高,脑组织缺血区半暗带NDRG2和活化的Caspase-3表达下调(P＜0.05).Sev组核内NDRG2阳性染色较I/R组减浅.结论 七氟醚预处理可能通过抑制脑组织NDRG2的表达、活性和细胞凋亡,从而减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤.     

七氟醚预处理对大鼠脊髓缺血再灌注损伤的影响及自噬在其中的作用

目的 评价七氟醚预处理对大鼠脊髓缺血再灌注损伤的影响及自噬在其中的作用.方法 成年雄性SD大鼠45只,体重420～450 g,采用随机数字表法分为5组(n=9):对照组(Con组)、脊髓缺血再灌注组(I/R组)、七氟醚预处理组(Sevo组)、特异性自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤组(3-MA组)和3-MA+七氟醚预处理组(3-MA+ Sevo组).I/R组胸主动脉球囊阻断+体循环低血压制备大鼠脊髓缺血再灌注模型,Sevo组于缺血前24h时吸入3.4％七氟醚2h,3-MA组和3-MA+ Sevo组分别于再灌注即刻和吸入七氟醚前15 min时鞘内注射20出3-MA(10 mmol/L).于再灌注24h时采用神经功能缺陷评分(NDS评分)法评价大鼠神经功能,随后处死取脊髓,Western blot法检测LC3B、Beclin 1、Bcl-2蛋白的表达水平.结果 与Con组比较,I/R组脊髓LC3B、Beclin 1蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调,NDS评分升高(P＜0.05);与I/R组比较,Sevo组、3-MA组和3-MA+ Sevo组脊髓LC3B、Beclin 1蛋白表达下调,Bcl-2蛋白表达上调,NDS评分降低(P＜0.05);Sevo组、3-MA组和3-MA+ Sevo组各指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 七氟醚预处理可减轻大鼠脊髓缺血再灌注损伤,其机制可能与上调Bcl-2,抑制自噬溶酶体途径,减轻自噬有关.