特异性阻断Shh信号通路对胰腺癌细胞系SUIT-2增殖和凋亡的影响

目的： 研究组抑胚胎发育相关信号通路Sonic hedgehog (Shh)对人胰腺癌细胞系SUIT-2增殖和凋亡的影响。方法：用四唑蓝（MTT）比色试验检测Shh信号通路特异性抑制剂cyclopamine对胰腺癌细胞系SUIT-2增殖的抑制作用；流式细胞术检测细胞增殖指数(PI)和凋亡指数(AI)；用裸鼠移植瘤模型检测cyclopamine对移植瘤生长的抑制作用。 结果：cyclopamine对SUIT-2细胞株增殖的抑制作用呈剂量和时间依赖性。cyclopamine作用后使胰腺癌细胞周期阻滞在G0／G1期，细胞凋亡增加；SUIT-2的AI为14.3±0.35， PI为36.1±0.44，对照组分别为1.3±0.24和52.3±0.28（均P<0.05）。在裸鼠移植瘤模型中，cyclopamine同时给药组肿瘤生长明显受到抑制，而延期给药组对肿瘤生长的抑制作用较弱。结论：shh信号分子对胰腺癌细胞的增殖起维持作用；通过特异性阻断该信号通路，可以抑制胰腺癌细胞增殖，并促进细胞凋亡。     

生长抑素类似物基因对胰腺癌的治疗作用

目的 利用携带SSTR2基因的重组腺病毒载体Adeno-X-SSTR2转染裸鼠胰腺癌皮下模型，使用SSTR2特异激动剂NC-8-12，观察其在体内实验中是否能取得抑制胰腺癌细胞增殖的效果。方法 构建重组携带SSTR2基因的肿瘤增殖缺陷型腺病毒载体Adeno-X-SSTR2。建立裸鼠胰腺癌皮下模型，分为转染和未转染SSTR2基因的两组，皮下分别给予不同剂量NC-8-12，观察肿瘤体积和重量的变化。结果 在裸鼠皮下模型实验中，NC-8-12对未转染SSTR2基因的胰腺癌细胞无抑制作用（P〉0．05）；在转染了SSTR2基因的胰腺癌细胞中，NC-8—12在每日200μg／kg体重剂量下可以明显抑制肿瘤细胞增殖（P〈0．05）。结论（1）携带SSTR2基因的肿瘤增殖缺陷型腺病毒载体Adenc-X-SSTR2可以高效转染胰腺癌细胞株。（2）一定剂量的NC-8-12（每日200μg/kg体重）对裸鼠体内转染了SSTR2基因的胰腺癌细胞的生长有明显抑制作用。     

AdKDR-CDglyTK融合基因系统治疗胰腺癌的实验研究

目的 观察腺病毒介导的KDR启动子驱动的CD/TK融合双自杀基因系统(以下简称为AdKDR-CDglyTK)对胰腺癌的治疗作用.方法 采用培养细胞移植法,将人胰腺癌细胞系Capan-2接种于裸鼠背部皮下,建立裸鼠人胰腺癌移植瘤模型.将20只裸鼠随机分为4组,每组5只.分组方法:Ⅰ组:注射重组腺病毒AdKDR-CDglyTK与前药5-FC与GCV;Ⅱ组:仅注射前药5-FC与GCV;Ⅲ组:仅注射重组腺病毒AdKDR-CDglyTKⅣ组:空白对照,不施加任何处理.重组腺病毒AdKDR-CDglyTK采用瘤体内多点注射,5-FC与GCV给药方法采用腹腔内注射的方法,观察各组小鼠的生存状况及肿瘤体积、瘤重、肿瘤生长抑制率、常规病理等指标;应用透射电镜观察细胞超微结构,用TUNEL法检测细胞凋亡率,比较观察各治疗组的治疗效果;并对各组的肿瘤组织行RTPCR的检测,以了解有无双自杀基因CDglyTK的表达.结果 第Ⅰ组裸鼠移植瘤的生长显著受到抑制,第Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组肿瘤生长情况无明显差别.第Ⅰ组肿瘤细胞凋亡指数为(34.20±4.60)%,较对照组显著增加(P=0.00).结论 AdKDR-CDglyTK联合前药5-FC及GCV对人胰腺癌Capan-2细胞具明显的抑制作用,并且诱导裸鼠体内人胰腺癌Capan-2细胞的凋亡.其可能的机制是通过下调凋亡抑制基因Bcl-2的表达.     

5-氟尿嘧啶缓释剂瘤内注射治疗胰腺癌的实验研究

目的:观察5FU缓释剂瘤内注射对裸鼠胰腺癌肿瘤细胞的影响,探讨其作用机制。方法:体外培养胰腺癌细胞株PC3,以2×106个细胞分别接种于70只裸鼠。4周后挑选肿瘤大小一致的裸鼠60只,随机分成5组,即静脉NS对照组、5FU静注组(10mg/kg)、基质植入组、5FU缓释剂(4mg/kg)植入组及5FU缓释剂(1mg/kg)植入组。于治疗前及治疗后14d内测量肿瘤大小,计算肿瘤生长速度;观察组织学变化和细胞分裂指数;免疫组化法测定bcl2和Bax的蛋白表达水平;采用脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测凋亡指数(AI)。结果:5FU缓释剂瘤内注射组裸鼠移植瘤生长速度减慢(P<0.05),最终瘤重小于其他各组(P<0.05);细胞分裂指数亦均低于其他各组(P<0.05)。5FU缓释剂瘤内注射组肿瘤组织中炎症反应和血管内膜增厚程度明显高于其他各组(P<0.05)。5FU缓释剂瘤内注射组荷瘤裸鼠的bcl2基因蛋白表达明显低于其他各组,而Bax基因的蛋白表达明显高于其他各组,其肿瘤细胞的AI明显高于其他各组(P<0.05)。结论:5FU缓释剂瘤内注射可明显抑制裸鼠胰腺癌瘤体的生长,其作用机制与药物在肿瘤组织中引起的炎症反应和血管内膜增厚等因素有关,并可能与诱导肿瘤细胞的凋亡有关。     

二氢青蒿素对胰腺癌生长的抑制作用

目的 探讨二氢青蒿素在体外、体内对胰腺癌的生长抑制作用.方法 通过MTT法检测二氢青蒿素对胰腺癌细胞株生长的抑制作用,Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测BxPC-3细胞中增殖、凋亡相关蛋白的表达.监测给药后胰腺癌裸鼠移植瘤体积的变化,并通过对肿瘤组织标本Ki-67染色和TUNEL染色检测肿瘤细胞增殖和凋亡情况.结果 MTT结果显示,二氢青蒿素可抑制体外培养的胰腺癌细胞BxPC-3和AsPC-1的增殖,诱导细胞凋亡,且呈剂量依赖性.二氢青蒿素亦可通过抑制增殖和诱导凋亡而抑制胰腺癌的体内生长.Western blot检测BxPC-3细胞中蛋白的表达水平,结果显示二氢青蒿素上调增殖相关蛋白p21WAF1、下调PCNA的表达;上调凋亡相关蛋白Bax、下调Bcl-2的表达,且可增加caspase-9的活化水平.结论 二氢青蒿素在体内外对胰腺癌均有抗肿瘤作用,是胰腺癌治疗的潜在药物.     

3TSR对胰腺癌生长及转移抑制的实验研究

目的 研究血管生成抑制因子3TSR对胰腺癌生长和转移的抑制作用. 方法 采用人胰腺腺癌细胞株MIAPa Ca-2,建立类似于临床的胰腺癌原位转移裸鼠模型.分别自腹腔注射3TSR、键择(Gemcitabine,Gem)和3TSR+Gem,注射3周后处死动物,测量原位肿瘤体积、抑瘤率,观察肿瘤细胞肝、腹膜转移及腹水情况. 结果 体内实验时3TSR组、Gem组和3TSR+Gem组肿瘤体积较对照组明显减少,抑瘤率分别为71.9%,80.1%和85.8%,但该3组间平均肿瘤体积差异无统计学意义(P>0.05);对照组、3TSR组、Gem组和3TSR+Gem组肝转移率分别为66.7%,22.2%,44.4%和11.1%;腹膜转移率分别为100%,66.7%,66.7%和22.2%;腹水发生率分别为77.8%,55.6%,22.2%和11.1%.与对照组相比,3TSR组胰腺癌肝转移率显著降低(P<0.05),而腹膜转移及腹水发生率差异无统计学意义.3TSR联合Gem后,胰腺癌的腹膜、肝转移及腹水形成均受到显著抑制(P<0.05). 结论 3TSR对体内胰腺癌生长和肝转移具有一定的抑制作用,与传统化疗药物Gem联用后对胰腺癌肝和腹膜转移均起到抑制作用,并可抑制腹水形成.     

Gleevec在胰腺癌中的应用及其作用机制

目的探讨Gleevee对胰腺癌细胞的生长抑制作用及其作用机制。方法应用噻唑氮蓝（MTT）比色分析法测定测Gleevee对胰腺癌细胞株的生长抑制作用及对生长因子的抑制作用。应用膜联蛋白（annexin）V标记与碘化丙啶（propidium iodide，PI）染色检测胰腺癌细胞经Gleevec作用后的死亡与凋亡情况。采用Western blot检测Gleevec对生长因子受体及MAPK磷酸化的影响。结果Gleevec抑制胰腺癌细胞的生长，半数有效量介于17-31．5μM。Annexin与PI染色观察到胰腺癌细胞的坏死及细胞膜完整性破坏。Gleevec部分抑制生长因子对胰腺癌细胞的促生长作用，但是对生长因子受体与MAPK磷酸化没有影响。结论Gleevee对胰腺癌细胞有生长抑制作用，其体内疗效尚待进一步研究。     

汉黄芩素对胰腺癌作用的体外、体内实验研究

目的：探讨汉黄芩素对胰腺癌Panc-1细胞体内外生长的影响。方法：将不同浓度（1,10,100 μmol/L）汉黄芩素作用胰腺癌Panc-1细胞24 h,用MTT法和流式细胞仪检测细胞的增殖与凋亡情况。将20只荷Panc-1细胞移植瘤裸鼠随机均分为对照组,汉黄芩素组（汉黄芩素60 mg/kg,1次/d）,吉西他滨组（吉西他滨150 mg/kg,1次/周）与联合用药组（汉黄芩素+吉西他滨）,连续给药2周并停药7 d后,比较各组移植瘤生长情况,用免疫组化法检测瘤组织微血管密度（MVD）与血管内皮生长因子（VEGF）的表达。结果：与无处理的对照细胞比较,3个浓度汉黄芩素处理后的Panc-1细胞OD值均明显降低,凋亡率均明显升高,且均呈浓度依赖性（均P<0.05）。与对照组比较,汉黄芩素组,吉西他滨组与联合用药组移植瘤的生长均被明显抑制,抑瘤率分别为24.8%,30.5%,66.1%,联合用药组的抑制率明显大于两个单药组（均P<0.05）,但两单药组间差异无统计学意义（P>0.05）;3个治疗组肿瘤组织CD31（反映MVD）与VEGF的表达均明显减少,且吉西他滨组,汉黄芩素组,联合用药组减少程度依次明显,组间差异均有统计学意义（均P<0.05）。结论：汉黄芩素能抑制胰腺癌细胞的增殖并促进凋亡;能一定程度抑制胰腺癌在体内的生长,并增加肿瘤对化疗药物的敏感性,该作用的机制部分与抑制肿瘤的血管生成有关。

     

3TSR对胰腺癌的抑制作用及机制探讨

目的研究血管形成抑制剂3TSR在体内外对胰腺癌的抑制作用,并初步探讨其机制。方法分别在体外培养条件下比较对照组、3TSR、键择(Gem)和3TSR Gem组对胰腺癌MIAPaCa-2细胞增殖及凋亡的影响,以及对裸鼠原位移植瘤肿瘤体积、细胞增殖指数及凋亡的影响。结果体外培养时3TSR对胰腺癌细胞无增殖抑制及诱导凋亡的作用,而Gem对胰腺癌细胞具有明显的抑制增殖及诱导凋亡的作用,但3TSR与Gem在体外无协同作用。体内实验时3TSR组、Gem组和3TSR Gem组肿瘤体积较对照组分别缩小70.1%,79.3%和84.9%;3TSR组、Gem组和3TSR Gem组胰腺癌细胞增殖指数分别为(19.7±3.1)%,(8.1±1.9)%和(13.2±4.2)%,其中3TSR组增殖指数与对照组比较差异无统计学意义,而Gem组和3TSR Gem组细胞增殖指数明显小于对照组和3TSR组(P<0.05);3TSR组、Gem组和3TSR Gem组胰腺癌细胞凋亡率分别为(5.0±2.2)%,(21.1±4.2)%和(22.8±4.2)%,其中3TSR组胰腺癌细胞凋亡率与对照组比较差异无统计学意义(P<0.05),而Gem组和3TSR Gem组细胞凋亡率显著大于对照组和3TSR组(P<0.05);3TSR组及3TSR Gem组血管内皮细胞凋亡率又高于对照组和Gem组(P<0.05)。结论3TSR体内外对胰腺癌细胞无直接增殖抑制及诱导凋亡作用,但能显著减少肿瘤体积,其机制可能与诱导内皮细胞凋亡有关;3TSR与化疗药物Gem合用未明显提高胰腺癌的治疗效果。     

环杷明抑制胰腺癌细胞系ASPC-1增殖和促凋亡作用

目的 探讨环杷明(Cyclopamine)对胰腺癌细胞系ASPC-l增殖和凋亡的作用机制.方法 不同浓度环杷明处理胰腺癌细胞系ASPC-l后,通过噻唑蓝(MTT)比色法试验检测癌细胞增殖状况,并计算不同浓度和作用时间的抑制率;用流式细胞仪检测各组的细胞周期,计算增殖指数(PI)和凋亡指数(AI);用裸鼠移植瘤模型验证环杷明的体内抑制作用.结果 随着环杷明作用浓度增加和时间延长,对ASPC-l细胞增殖的抑制作用逐渐增强,当环杷明浓度达到10 mol/L时,24h抑制率达到近90%.环杷明使细胞周期阻滞在G0/G1期,细胞凋亡率增加.环杷明浓度为10mol/L时,AI达到25%左右,而PI下降至24%左右.在裸鼠移植瘤模型中,环杷明同期给药组肿瘤生长缓慢,而延期给药组开始生长速度与对照组相似,给药后生长逐渐受抑制,3组肿瘤均值间差异均有统计学有意义(P＜0.05).结论 环杷明通过细胞周期阻滞和促进细胞凋亡,发挥对胰腺癌细胞增殖的抑制效应,并且这种效应呈剂量和时间依赖性.     

红色荧光蛋白标记的胰腺癌裸鼠原位移植瘤转移模型的建立

目的 建立稳定、高表达红色荧光蛋白(RFP)标记的胰腺癌裸鼠原位移植瘤自发转移模型.方法 将稳定、高表达RFP的人胰腺癌细胞株SW1990-RFP注射至裸鼠皮下,建立人胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型.通过外科手术原位移植裸鼠皮下荧光肿瘤组织小块,建立人胰腺癌裸鼠原位移植瘤自发转移模型.应用整体荧光成像系统评价人胰腺癌裸鼠原位移植瘤模型肿瘤转移及微转移的发生情况.结果 成功建立12只人胰腺癌裸鼠原位移植瘤自发转移模型,建模成功率为100%.应用整体荧光成像系统可以实时监测原发肿瘤的牛长状况以及在肿瘤生长早期即可检测到各脏器微小转移的发生.结论 本实验所建立的RFP标记的胰腺癌裸鼠原位移植瘤自发转移模型稳定、可靠,可以在体外无创性动态观察肿瘤的发生、发展,具较强的灵敏性及特异性.     

人肾细胞癌原位移植裸鼠肺转移模型的建立

目的：建立肾癌原位肺转移动物模型,研究动物模型肾癌移植瘤和肺部转移瘤的生长情况,确定肾癌肺转移的初始时间。方法：人肾癌细胞株SN12-PM6种植于裸鼠右肾实质内,连续观察裸鼠肾脏肿瘤及肺部转移瘤的生长情况。所有采用标本10％甲醛溶液固定,常规石蜡包埋,切片HE染色后分析结果。结果：肾脏的成瘤率为100％（39／39）,第5周开始观察到肿瘤的肺转移灶,肺部转移率50％（4／8）,在随后3周其肺部转移率分别为75％（3／4）,100％（8／8）和100％（7／7）,肠道、肝脏、脾脏等脏器未发现明显的转移灶。结论：成功构建人肾细胞癌原位裸鼠肺转移动物模型,为肾癌特别是肾癌肺部转移提供了一个非常理想的研究模型。     

前药热化疗对裸鼠转基因结肠癌肝转移的靶向作用

目的 探讨组织特异性胞嘧啶脱氨酶/5-氟胞嘧啶(CD/5-FC)系统热化疗对裸鼠结肠癌肝转移的靶向治疗效果.方法 脂质体法转CD基因至人结肠癌LoVo细胞株.45只BALB/c裸鼠采用经门静脉注射转CD基因LoVo细胞(LoVo-CEACD,0.2 mL,107/L)至裸鼠体内建立模型后,随机分为3组,每组15只,即对照组、前药治疗组及前药热疗组.3组分别经腹腔注射42℃生理盐水和38℃5-FC及42℃5-FC.5-FC剂量为500 mE/(kg·d),连续21 d后,待动物自然死亡,观察自然生存期、肝脏转移率、肝脏转移结节数;切取肝脏转移瘤组织,正常肝组织及胃、肺、胰腺、小肠、大肠组织,行RT-PCR检测各组织CD基因表达,观察各组织病理学变化、肿瘤细胞凋亡指数.结果 目的基因在肝脏转移瘤组织中能有效表达,在正常肝组织及胃、肺、胰腺、小肠、大肠组织中无表达.3组的自然生存期分别为(25.80±3.65),(34.27±4.08).(41.87±3.91)d;肝脏转移率分别为100.0%(15/15).40.0%(6/15),13.3%(2/15);平均肝脏转移结节数分别为(2.93±1.16),(0.80±1.01).(0.20±0.56)个.前药治疗组和前药热疗组的自然生存率明显长于对照组(P<0.05);3组间的肝脏转移率两两比较,差异均有统计学意义(均P<0.05).肿瘤细胞凋亡指数(AI)分别为4.59%,9.87%,17.4%,各组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 组织特异性CD/5-FC系统热化疗对裸鼠结肠癌肝转移有明显的靶向抑制作用.     

人胰腺癌细胞系MIA PaCa-Ⅱ神经侵袭原位移植瘤动物模型的建立

目的 建立人胰腺癌细胞系MIA PaCa-Ⅱ裸鼠胰腺原位移植瘤模型并观察神经侵袭情况,为研究胰腺癌神经侵袭的发生、发展提供实验依据和条件.方法 将人胰腺癌细胞系MIA PaCa-Ⅱ行裸鼠背部皮下接种.建立高转移特性胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型,然后将高转移性移植瘤组织接种于裸鼠胰腺被膜下,分别于4周、6周和8周处死裸鼠行移植瘤组织解剖和病理学检查.测量移植瘤大小和重量,并用HE和银染方法观察神经侵袭情况.结果 模型建立过程中,胰腺癌细胞系MIA PaCa-Ⅱ细胞裸鼠皮下接种成瘤率为100%(10/10),皮下移植瘤呈局限性生长,无脏器和神经转移.原位移植4周、6周和8周后,胰腺癌原位移植瘤成瘤率均为100%(10/10),神经转移率分别为50%(5/10)、80%(8/10)和60%(6/10),并可见多个脏器转移,以肝脏、肝门淋巴结、胃窦转移和腹膜播散多见.结论 成功建立了人胰腺癌细胞系MIA PaCa-Ⅱ裸鼠胰腺原位移植瘤模型并观察了神经侵袭情况,此模型为一较理想的"拟人"神经浸润转移模型,可用于胰腺癌体内嗜神经性机制的研究.     

TK/GCV、CD/5-Fc系统对结肠癌肝转移抑制作用的实验研究

目的：研究胸苷激酶／丙氧鸟苷（TK／GCV）系统和胞嘧啶脱氨酶／5-氟胞嘧啶（CD／5-Fc）系统对结肠癌肝转移的抑制作用。方法：将40只裸鼠随机分为四组：对照组、TK组、CD组、TK-CD组，每组10只。脾内注射法建立结肠癌肝转移动物模型。对照组：脾内注射SW480细胞，腹腔注射生理盐水；TK组：脾内注射SW480／TK-CD细胞，腹腔注射GCV；CD组：脾内注射SW480／TK-CD细胞，腹腔注射5-Fc；TK-CD组：脾内注射SW480／TK-CD细胞，腹腔注射GCV、5-Fc。观察各组裸小鼠的肝转移率、肝转移瘤数目、电镜下肿瘤组织病理学变化、肿瘤细胞凋亡指数（AD、生存期等指标。结果：各治疗组裸鼠肝转移白9发生率下降，平均肝转移瘤数减少，其动物的生存期延长，肝转移瘤内的癌细胞凋亡率增高。联合基因治疗组效果更好，且TK／GCV与CD／5-Fc有交互协同作用。结论：TK/GCV、CD／5-Fc系统联合应用具有协同效应，可有效地抑制结肠癌肝转移的形成。     

特异性阻断I型磷脂酰肌醇-3激酶信号通路对裸鼠胃癌移植瘤的抑瘤作用

目的研究利用重组腺病毒特异性阻断I型磷脂酰肌醇-3激酶（P13K）信号转导通路,对裸鼠胃癌移植瘤的影响,并探讨其相关作用机制。方法用人胃癌细胞SGC7901建立裸鼠胃癌移植瘤模型,分为3组,分别给予重组腺病毒P13K（I）-RNAi-AD、空病毒NC-RNAi-GFP-AD和生理盐水处理。给药后第3、6和9天分别取5只裸鼠处死,测量移植瘤体积,计算抑瘤率;应用免疫组织化学法检测移植瘤组织的TNF-α、环氧化酶2（COX2）、P53、增殖细胞核抗原（PCNA）、E-cadherin及nm23／DNPK的表达水平。结果给药后第3、6和9天,P13K（I）-RNAi-AD组的抑瘤率分别为14.2％,21.0％和28.1％,显著高于空病毒组（1.3％、1.9％和2.0％,均P〈0.05）。给药后第9天。P13K（I）-RNAi-AD组TNF-α、P53、E-eadherin、nm23／DNPK蛋白的表达均明显高于空病毒组和对照组;而COX2、PCNA的表达则明显减少（P〈0.05）。结论重组腺病毒P13K（I）-RNAi-AD对裸鼠胃癌移植瘤有一定的抗肿瘤作用,其机制为通过抑制胃癌细胞增殖、血管生成、降低侵袭能力等多个途径共同发挥抑癌效应。     

绿脓杆菌制剂抑制肝细胞肝癌生长转移的实验研究

目的 观察绿脓杆菌制剂对裸鼠肝癌生长和转移的抑制作用.方法 将具有肺转移潜能的人MHCC97L肝癌组织块种植于BALB/c nu/nu雄性裸鼠肝脏,建立转移性人肝癌裸鼠原位模型.荷瘤裸鼠随机分为对照组、绿脓杆菌制剂腹腔注射组及皮下注射组.各组均于种植后第3天开始用药,于种植后第6周末处死动物,HE染色观察肿瘤组织坏死情况,荧光Tunel法检测肿瘤组织细胞凋亡情况,测量肿瘤体积,计算抑瘤率、肺转移灶数目及肺转移率.结果 对照组、绿脓杆菌制剂皮下注射组和腹腔注射组肿瘤体积分别为(3.12±0.85)cm~3、(1.90±0.87)cm~3(P>0.05)和(0.79±0.36)cm~3(P<0.05),肺转移率分别为66.7%、66.7%(P>0.05)和0(P<0.01),平均肺转移灶数目分别为2.40±1.85,1.2±0.75(P<0.05)和0(P<0.01),凋亡指数分别为(1.4±0.37)%、(4.1±1.7)%(P<0.05)和(10.3±0.40)%(P<0.01).与对照组比较,绿脓杆菌制剂皮下注射组和腹腔注射组的抑瘤率分别为39.1%和74.7%,腹腔注射组肿瘤组织坏死明显.结论 绿脓杆菌制剂腹腔注射可明显促进肝癌组织坏死及凋亡并抑制其生长和转移.