不同强度正弦交变磁场对体外培养成骨细胞增殖与分化影响

目的研究频率为50Hz的不同强度正弦交变电磁场对体外培养成骨细胞(Osteoblasts,OB)的影响。方法原代培养大鼠颅骨成骨细胞,传代后随机分为9组,每组分别暴露在频率50Hz,磁场强度为0(对照组)、0.9、1.2、1.5、1.8、2.1、2.4、2.7、3.0mT的正弦交变磁场中,30min/次/d。倒置相差显微镜下观察细胞形态,48h后测定细胞增殖情况,第3、6、9、12、15d测定碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,ALP)活性,第10d进行ALP组织化学染色,第12d进行茜素红钙化结节染色。结果成骨细胞于磁场暴露处理3d～4d后呈漩涡样分布;与对照组相比,0.9、1.2、1.5、1.8、2.1、2.7和3.0mT组均显著抑制细胞增殖(P0.01或P0.05),2.4mT组无明显影响(P0.05);除3.0mT组外,其它各组的ALP活性均高于对照组(P0.05),尤以1.8mT组最高(P0.01);1.2、1.5、1.8、2.1和2.4mT组的ALP阳性克隆数明显多于对照组,1.8mT组最多,0.9、2.7和3.0mT组与对照组无明显差别;茜素红钙化结节计数结果与ALP组织化学染色结果的趋势相一致。结论 50Hz,0.9mT～3.0mT的正弦交变磁场(2.4mT除外)均抑制体外培养成骨细胞的增殖,但能促进其分化成熟与钙化,尤以1.8mT效果最为明显。     

适宜电刺激对成骨细胞平面培养下细胞增殖分化及BMP-2表达的实验研究

目的:观察适宜电流刺激成骨细胞在平面培养下成骨细胞增殖及分化,明确是否具有促进增殖、分化作用,并观察电流刺激下BMP-2表达的变化。方法:将来自家兔幼仔颅骨提取的成骨细胞进行平面培养,2代之后进行分类培养,实验组进行电流刺激,并给予相同的刺激时间和刺激强度,对照组未进行电流刺激。之后在不同时间点进行细胞增殖、分化检测及BMP-2蛋白表达分析。结果:实验组8d内光镜下可见大量成骨细胞增殖,成骨细胞呈多形性改变,6～8d细胞内出现少量钙化点,而对照组骨细胞增殖缓慢。实验组分化明显,碱性磷酸酶及钙结节染色阳性,碱性磷酸酶定量分析显示逐渐增加。实验组经免疫组化分析显示BMP-2量逐渐增加。结论:电刺激可促进成骨细胞的增殖分化而达到实现细胞数目的短时间增加,细胞内部经过免疫组化染色后显示BMP-2表达增加。     

肿瘤坏死因子α介导人脐动脉血管平滑肌细胞成骨样钙化

目的 观察肿瘤坏死因子α（TNF-α）对体外培养人脐动脉血管平滑肌细胞（hUASMC）骨特异性碱性磷酸酶（BAP）、骨桥蛋白（OPN）和骨形成蛋白2（BMP-2）等成骨样分化标志蛋白表达以及细胞外钙盐沉积的影响。 方法 植块贴壁法原代培养人hUASMC。予以TNF-α刺激，甲O-酚酞络合酮方法测定细胞外基质钙盐沉积；Von Kossa法观察钙化染色；实时定量PCR法测定血管平滑肌细胞BAP和OPN mRNA表达水平；免疫印迹法观察血管平滑肌细胞BAP、OPN和BMP-2蛋白表达水平。 结果 一定浓度范围内的TNF-α可促进hUASMC增殖；增加细胞外基质钙盐沉积。TNF-α 50 μg/L刺激可在第3天上调血管平滑肌细胞BAP和OPN mRNA表达水平（BAP mRNA：1.908±0.034比1.000±0.033，OPN mRNA： 3.600±0.073比1.000±0.079，均P < 0.05）。TNF-α 50 μg/L刺激可在第5天上调血管平滑肌细胞BAP、OPN和BMP-2蛋白表达水平（BAP蛋白：3.394±0.083比1.000±0.030，OPN蛋白： 1.967±0.134比1.000±0.070，BMP-2蛋白：2.745±0.289比1.000±0.208， 均P < 0.05）。 结论 一定浓度范围的TNF-α可刺激hUASMC增殖；介导细胞成骨样分化；增加细胞外基质钙盐沉积，从而参与血管钙化的发生发展。     

特异性阻抑DKK-1对小鼠脂肪细胞向成骨细胞转分化的影响研究

[目的]研究特异性阻抑Wnt信号通路抑制因子DKK-1对脂肪细胞向成骨细胞的转分化的影响,以进一步探讨激素性股骨头坏死的发病机制及其防治。[方法]将小鼠前脂肪细胞3T3～L1诱导分化为脂肪细胞,将分化成功的脂肪细胞分为两组:对照组在DMEM(H)培养基培养,实验组在DMEM(H)+DKK-1抗体培养基培养。两组细胞培养3周后分别行油红O染色、ALP染色及茜素红钙结节染色;RT-PCR检测PPARγ-2、LPL、ALP、OCN及Runx-2基因mRNA的转录水平;Western-blot检测PPARγ-2、Runx-2的蛋白表达水平。[结果]与对照组相比,加入DKK-1抗体的实验组的细胞形态呈长梭形,胞浆内未见脂滴沉积,有成骨活性表达,有钙结节形成;RT-PCR结果显示实验组成骨因子Runx-2、ALP及OCN基因mRNA的表达显著高于对照组,而成脂因子PPARγ-2及LPL基因mRNA的表达显著低于对照组(P<0.05);Western-blot检测结果显示实验组PPARγ-2蛋白几乎无表达,而成骨转录分化因子Runx-2蛋白的表达则明显增强,与RT-PCR的结果一致。[结论]在一定条件下,DKK-1抗体可以促使脂肪细胞转分化为具有一定成骨活性的成骨细胞,这为防治激素性股骨头坏死提供了新的思路。     

骨形态发生蛋白-2对人脐带间充质干细胞增殖和分化的影响

目的 观察骨形态发生蛋白-2(BMP-2)对人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)增殖和分化的影响.方法 体外培养hUCMSCs,在培养基中加入20 mg/L BMP-2,噻唑蓝(MTT)比色法观察BMP-2对hUCMSCs的增殖效果,流式细胞术检测BMP-2作用后细胞表面STRO-1的表达,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测量BMP-2作用后hUCMSCs骨桥蛋白(OPN)、碱性磷酸酶(ALP)、Ⅰ型胶原蛋白(COL1)的mRNA表达变化,碱性磷酸酶染色观察hUCMSCs在BMP-2培养基作用下ALP染色变化,Von kossa染色实验观察BMP-2对hUCMSCs钙结节的形成.结果 细胞在未加BMP-2和加BMP-2培养基中培养1、3、5、7 d,虽然细胞的增殖率上升,但各组间比较差异无统计学意义(P＞0.05),同时发现在2%血清的培养基中培养7 d后,hUCMSCs的增殖促进约10%左右.BMP-2培养7 d后细胞表面STRO-1阳性细胞比例上升明显,由25.1±4.0上升至51.1±6.4,差异有统计学意义(P＜0.01).BMP-2培养条件下COL1 mRNA的表达增强,差异有统计学意义(P＜0.05),OPN mRNA出现表达,ALP mRNA比无BMP-2培养明显增强,差异有统计学意义(P＜0.05).在BMP-2培养条件下ALP染色出现大片细胞阳性染色.在培养28 d,Von kossa染色出现明显的钙结节.结论 BMP-2对hUCMSCs成骨诱导分化作用明显,而增殖作用很弱.     

甲状旁腺激素对大鼠成骨细胞增殖分化的影响

目的 探讨甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)对大鼠成骨细胞增殖及相关细胞因子的调节作用.方法 将传代的成骨细胞分为对照组、PTH持续给药组、PTH间歇给药组.持续给药组48 h中持续给药;PTH间歇给药组前6 h给予PTH,后42 h撤除;对照组予溶媒液.每48 h为一循环,持续作用8个循环,每个循环结束时,MTT法测定细胞增殖,检测碱性磷酸酶(ALP)活性,实时荧光定量PCR法(RT-PCR)测定胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)的表达水平.结果 间歇给药组细胞增殖在第7、8个循环时明显增加;而持续给药组在第5个循环时达到峰值,随后逐渐低于其他两组,在第7、8个循环时抑制作用明显.1～4个循环时3组间ALP活性差异无统计学意义,第5～8个循环ALP活性显著增加;持续给药组第6～8个循环对ALP活性有明显抑制作用.间歇给药组细胞IGF-1 mRNA的表达在第6个循环时达到高峰后有所下降,但始终明显高于其他两组;持续给药组前期IGF-1 mRNA表达水平较高,而后期则明显低于对照组.间歇给药组BMP-2 mRNA表达水平持续升高;持续给药组前3个循环表达水平较高,随给药时间的增长呈下降趋势.结论 间歇给予一定浓度的PTH可刺激成骨细胞的增殖与分化,后期作用大于前期.给药前期的ALP水平主要与IGF-1 mRNA表达水平相关,而后期则可能是通过BMP-2 mRNA表达的升高使ALP活性增强.     

普伐他汀抑制肿瘤坏死因子α介导的人脐动脉血管平滑肌细胞成骨样钙化

目的 研究普伐他汀干预对肿瘤坏死因子α（TNF-α）介导的人脐动脉血管平滑肌细胞（hUASMC）成骨样分化标志蛋白骨特异性碱性磷酸酶（BAP）、骨桥蛋白（OPN）和骨形成蛋白2（BMP-2）表达以及细胞外钙盐沉积的影响，并探讨普伐他汀在血管钙化防治中的潜在作用。 方法 植块贴壁法原代培养人hUASMC。予以TNF-α刺激和普伐他汀干预，甲O-酚酞络合酮方法测定细胞外基质钙盐沉积；实时定量PCR法观察血管平滑肌细胞BAP和OPN mRNA表达水平；免疫印迹法观察血管平滑肌细胞BAP、OPN和BMP-2蛋白表达水平。 结果一定浓度范围的普伐他汀呈浓度依赖方式抑制TNF-α对hUASMC的促增殖作用（r = －0.946，P < 0.01）；一定浓度范围的普伐他汀呈浓度依赖方式下调TNF-α介导上调的BAP、OPN mRNA表达（r = －0.972，P < 0.01）与蛋白的表达水平（BAP蛋白，r = －0.820，P < 0.01；OPN蛋白，r = －0.972，P < 0.01；BMP-2蛋白，r = －0.928，P < 0.01），抑制血管平滑肌细胞成骨样分化，减少细胞外基质钙盐的沉积（r = －0.973，P < 0.01）。 结论 普伐他汀可抑制TNF-α对hUASMC的促增殖作用，抑制细胞成骨样分化，减少细胞外基质钙盐的沉积。     

17β-雌二醇对体外培养人成骨细胞CTGF和PAIP-1基因表达的作用

目的　观察结缔组织生长因子 (CTGF)和多聚腺苷酸结合蛋白相互作用蛋白 1(PAIP 1)mRNA在体外培养的人成骨细胞增殖分化不同阶段的表达 ,研究 17β- 雌二醇 (E2 )对成骨细胞CTGF和PAIP 1mRNA表达的作用 ,探讨雌激素对骨组织保护作用的新机制。方法　用改良的钙 钴法ALP染色 ,vanGieson法 1型胶原染色 ,0. 1%茜素红矿化结节染色 ,半定量RT- PCR检测成骨细胞碱性磷酸酶 (ALP)、骨钙素 (OC)和 1型胶原mRNA的表达 ,半定量RT- PCR和Northernblot方法检测成骨细胞CTGF和PAIP- 1mRNA表达。结果　半定量RT -PCR和组织化学染色的结果均表明 ,成骨细胞接种培养后 0～11d为细胞增殖阶段 ,7～ 15d为骨基质成熟阶段 ,15d后为骨基质矿化阶段 ;在成骨细胞培养的不同阶段 ,均检测到CTGF和PAIP- 1mRNA的表达 ,E2 可显著下调成骨细胞CTGFmRNA的表达 ,呈时间剂量依赖关系 (P <0 . 0 1) ,但对PAIP 1mRNA表达无明显作用。结论　E2 时间剂量依赖性下调成骨细胞CTGFmRNA的表达 ,但对PAIP 1mRNA表达无明显影响。     

铁饱和乳铁蛋白对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响

目的 探讨铁饱和乳铁蛋白对体外培养的大鼠成骨细胞增殖和分化的影响.方法 用酶消化法分离大鼠颅盖骨成骨细胞进行原代培养;乳铁蛋白螯合Fe~(2+)获得铁饱和乳铁蛋白;将其稀释到不同浓度作用于成骨细胞,四唑盐比色法(MTT)测定细胞增殖;碱性磷酸酶法(ALP)测定细胞碱性磷酸酶活性.结果 随着时间的增加,各浓度组均可促进成骨细胞增殖及增强碱性磷酸酶活性.其中100 μg/mL浓度组在72 h时细胞增殖数目最大、碱性磷酸酶活性最高,较对照组有统计学意义(P＜0.01).结论 铁饱和乳铁蛋白能促进大鼠成骨细胞的增殖和分化.     

二至丸促进围绝经期妇女成骨细胞增殖的分子机制

目的观察二至丸对围绝经期妇女成骨细胞分化过程的影响,并探讨其可能的分子机制。方法随机收集临床不同年龄段符合纳入标准的围绝经期妇女松质骨,分为绝经前骨量正常组、绝经前骨量减少组、绝经后骨量正常组、绝经后骨质疏松组,分离培养体外成骨细胞,对二至丸干预前后成骨细胞的增殖分化,采用MTT法检测各组细胞增殖能力,比色法测AKP,ELISA法检测BMP-2和OCN表达,实时荧光定量PCR-SYBR GREEN法检测核心结合因子BMP-2mRNA、ER-αmRNA、OCNmRNA的表达。结果二至丸干预后,各组成骨细胞增殖能力、AKP、BMP-2和OCN的表达量及BMP-2mRNA、OCNmRNA和ER-αmRNA的表达量总体由高到低依次为绝经前骨量正常组、绝经后骨量正常组、绝经前骨量减少组、绝经后骨质疏松组,且均较同组干预前显著上升,差异有统计学意义(P0.05)。结论二至丸能在一定程度上促进成骨细胞增殖分化,对防治骨质疏松起到积极作用。     

Effects of 50 Hz sinusoidal electromagnetic fields of different intensities on proliferation, differentiation and mineralization potentials of rat osteoblasts

Electromagnetic fields (EMFs) have been used clinically to slow down osteoporosis and promote fracture healing for many years. However, the underlying action mechanisms and optimal parameters of the EMF applications are unclear. In this study, we investigated the effects of treatment for different durations with 50 Hz sinusoidal electromagnetic fields (SEMFs) at different intensities on proliferation, differentiation and mineralization potentials of rat osteoblasts. Osteoblasts isolated from neonatal rats were treated with SEMFs (50 Hz at 0.9 mT–4.8 mT, 0.3 mT interval, 30 min/day up to 15 days). Compared to untreated control, SEMFs inhibited osteoblast proliferation (after 3 days' treatment) but increased alkaline phosphatase (ALP) activity (after treatment for 9 days) from 0.9 mT to 1.8 mT, declined from 1.8 mT until 3.0 mT, and then increased again from 3.0 mT to 3.6 mT and decreased once again from 3.6 mT to 4.8 mT. Numbers of colonies stained positive for ALP after 8 days and mineralized nodules stained by Alizarin red after 10 days showed the same bimodal tendency as with the ALP activity, with two peaks at 1.8 mT and 3.6 mT. SEMFs also bimodally increased Runx-2, Col1α2 and Bmp-2 mRNA expression levels in osteoblasts at 12, 24 and 96 h after exposure. The results indicated that while exposure to 50 Hz SEMFs inhibits the osteoblast proliferation, it significantly promotes differentiation and mineralization potentials of osteoblasts in an intensity-dependent manner with peak activity at 1.8 mT and 3.6 mT.     

骨细胞分离培养及其与成骨细胞鉴别比较的实验研究

目的:建立比较稳定的骨细胞实验室分离培养方法,并将其部分生物学特性与实验室培养的成骨细胞进行比较研究,明确两者区别.方法:采用序列酶消化法,分别从3只3dSD乳鼠骨骼中分离培养骨细胞和成骨细胞,培养24 h后进行细胞形态学观察.第1代细胞用碱性磷酸酶试剂盒采用重氮盐法(改良Kaplow氏法)染色,采用免疫细胞化学法对细胞的骨钙素(BGP)染色,测定碱性磷酸酶并计算其活性.结果:骨细胞多呈星状或树枝状,且有很多的突触;成骨细胞呈长梭形,有少量的突触.骨细胞碱性磷酸酶染色,胞浆内cAKP颗粒不明显;成骨细胞碱性磷酸酶染色,胞浆内可见众多cAKP颗粒.骨细胞BGP染色阳性明显,成骨细胞BGP染色阳性不如骨细胞明显.ALP在骨细胞中分泌较成骨细胞低,且有统计学差异.结论:实验室条件下能培养出骨细胞,该类细胞和成骨细胞有明显区别.     

Differentiation of osteoprogenitor cells is affected by trauma-haemorrhage

Introduction

In multiple trauma patients an increased incidence of delayed healing and non-union has been observed. The exact mechanisms underlying this delayed fracture healing are still not fully understood.

Material and Methods

40 male C57BL/6N-mice underwent standardized midline laparotomy and pressure-controlled haemorrhage (TH) or implantation of catheters without blood loss (sham procedure). Animals were sacrificed 24 h or 72 h later. Osteoprogenitor cells derived from bone marrow were isolated and differentiated into osteoblasts for 20 days and osteoclasts for 7 days. Osteoblast mineralization and osteoclast numbers were determined, and gene expression of Alpl, Bglap, Opg, Rankl was measured in osteoblast cell culture, as well as gene expression of Rank, Ctsk and Nfatc1 was determined in osteoclast cell culture. Furthermore, plasma Opg, Rankl and TRAP were measured.

Results

Mineralization capacity of osteoblasts was unchanged after TH, but Alpl gene expression after 23 days was significantly decreased compared to sham. Osteoclast number of group TH 8 days was significantly decreased compared to sham. Furthermore, gene expression of Ctsk and Nfatc1 were increased in group TH 10 days compared to group TH 8 days. Plasma Opg concentration was significantly elevated and Rankl concentrations were significantly declined in TH groups compared to sham groups after 24 h and 72 h.

Conclusion

TH results in a diminished osteoclast number after 8 days, whereas differentiation of osteoblasts seems to be unaffected. The reduction of osteoclast number seems to be mediated through the Rankl-Opg-signalling pathway. However, further studies in models including a fractured extremity with a longer observation period are needed to identify the relevance of the Rankl-Opg- pathway in delayed fracture healing after TH and to focus on possible therapeutic interventions.     

右归饮对激素性股骨头坏死患者股骨近端骨髓骨活性影响的实验研究

目的：观察右归饮含药血清对激素性股骨头坏死患者股骨近端骨髓体外分化为成骨细胞的影响。方法：将右归饮含药血清加入人骨髓间充质细胞诱导分化成骨细胞的培养体系,采用观察细胞学形态、MTT法、细胞内ALP含量及矿化结节形成,并与普通血清组进行比较。结果：与普通血清组相比,形态学观察及MTT法表明,右归饮舍药血清对激素性股骨头坏死患者股骨近端骨髓体外分化成骨细胞的增殖起促进作用（P〈0．01）;矿化结节染色及细胞内ALP含量测定表明右归饮对成骨细胞的活性有促进作用（P〈0．01）。结论：右归饮对激素性股骨头坏死患者股骨近端骨髓间充质干细胞诱导分化的成骨细胞的增殖和活性起促进作用。     

Low-level laser therapy vs. pulsed electromagnetic field on neonatal rat calvarial osteoblast-like cells

To compare the effects of pulsed electromagnetic field (PEMF) and low-level laser therapy (LLLT) on osteoblast cells in a cell culture model. Fifty thousand neonatal rat calvarial osteoblast-like cells per milliliter were seeded and 0.06 mT PEMF, 0.2 mT PEMF, and LLLT at 808 nm were applied for 24 and 96 h on the cells. To evaluate cellular proliferation and differentiation, specimens were examined for DNA synthesis, alkaline phosphatase (ALP) activity, cell numbers, and viability of the cells. Morphological appearances of the cells were observed using scanning electron microcopy after 24 and 96 h of incubation. At 24 and 96 h, the control group had a higher cell proliferation than 0.06 and 0.2 mT PEMF groups (p?=?0.001). At 96 h, 0.2 mT PEMF group had higher cell proliferation rate than 0.06 mT PEMF and LLLT groups (p?=?0.001). The cell count and cell viability in 0.2 mT PEMF group were higher than the 0.06-mT PEMF and LLLT groups, although these differences were not statistically significant at 96 h (p?>?0.05). At 24 and 96 h, cell viability in the control group was higher than the test groups. Alkaline phosphatase levels of the groups were comparable in both time intervals (p?>?0.05). 0.2 mT PEMF application on osteoblast-like cells led to cell proliferation and differentiation better than 0.06 mT PEMF and LLLT at 808 nm, although a remarkable effect of both PEMF and LLLT could not be detected. The ALP activity of 0.2 and 0.06 mT PEMF and LLLT were comparable.     

负载BMP-2掺锶磷酸钙复合材料对成骨细胞增殖及功能的影响

目的探索负载BMP-2掺锶磷酸钙复合材料对成骨细胞增殖及功能的影响。方法获取SD大鼠成骨细胞,随机分为空白对照组(Con组)、磷酸钙组(CPC组)和复合材料组(BSCPC组);培养基中分别添加安慰剂、磷酸钙和负载BMP-2掺锶磷酸钙共培养一段时间,通过CCK-8法检测成骨细胞的增殖情况,碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)及茜素红染色观察细胞的功能状态,蛋白电泳观察骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、核因子κB受体活化因子(receptor activator of nuclear factor-KB,RANK)及核因子κB受体活化因子配体(ligand of receptor activator of nuclear factor-κB,RANKL)蛋白的表达情况。结果共培养1、3、5和7 d,和Con组比较,CPC组和BSCPC组的成骨细胞数目明显增加(P0.05),且以BSCPC组成骨细胞数目最多(P0.05);共培养14 d及21 d,和Con组比较,CPC组和BSCPC组的成骨细胞的矿化能力及ALP活性明显增加(P0.05),且以BSCPC组细胞钙化能力最强及ALP活性最高(P0.05);共培养7 d,和Con组比较,CPC组和BSCPC组的成骨细胞的OPG表达明显增加,而RANK及RANKL蛋白表达明显降低(P0.05),且以BSCPC组的成骨细胞蛋白OPG、RANK及RANKL蛋白表达量改善最为显著(P0.05)。结论负载BMP-2掺锶磷酸钙复合材料促进成骨细胞增殖分化和改善细胞活性和功能。     

骨形成蛋白联合雷奈酸锶对成骨细胞增殖和分化的影响

目的探索骨形成蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)联合雷奈酸锶(strontium ranelate,SR)对成骨细胞增殖和分化的影响,为临床上两者联合使用可行性提供细胞学基础。方法获取SD大鼠成骨细胞,随机分为对照组、SR组、BMP组和BMP-SR组等4组,培养基中分别添加安慰剂、SR、BMP-2和SR联合BMP-2干预,培养12 d后,通过MTT法检测细胞的增殖情况,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)及茜素红染色观察细胞的功能状态,蛋白电泳观察骨钙素(osteocalcin,OCN)及Runx2蛋白的表达情况。结果 SR及BMP-2单独作用于成骨细胞时,都可以明显促进成骨细胞的增殖,增加ALP活性及矿化能力,同时明显促进OCN及Runx2蛋白的表达;联合使用效果明显优于单独使用,比较差异有统计学意义(P0.05)。结论 BMP-2及SR都可以明显促进成骨细胞增殖和分化,且联合使用效果更佳。     

羊胎素对体外成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响

目的 观察羊胎素在体外对新生大鼠颅骨成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响。方法将提取之羊胎素稀释加入体外培养的SD新生大鼠颅骨成骨细胞体系中,终浓度分别为0.625％、1.25％、2.5％、5％和10％;加药后24、48和96 h用MTT法检测细胞的增殖并绘制生长曲线:培养5 d时用PNPP法测定细胞碱性磷酸酶(ALP)活性;培养31 d时用茜素红染色2.5％羊胎素组形成之矿化骨结节,用图像分析仪计算骨结节的面积。结果 所有含羊胎素浓度组,其MTT法测得的A值都显著高于空白对照组(P<0.01),生长曲线表现为含羊胎素组的细胞增殖加快,以2.5％浓度组最为显著;ALP结果显示,羊胎素各浓度组的碱性磷酸酶活性都显著高于空白对照组(P<0.01);茜素红染色后显示,2.5％羊胎素组所形成的骨结节面积显著高于空白对照组(P<0.01)。结论羊胎素对体外培养的SD新生大鼠颅骨成骨细胞有显著的促进增殖、分化和矿化的作用。