重组结缔组织生长因子对体外培养成骨细胞核结合因子α1基因表达的影响

目的:研究发现,结缔组织生长因子可促进软骨细胞和成骨细胞的增殖及其表型的发生,在骨骼发育以及骨量维持方面发挥重要作用,但其对成骨细胞的作用机制目前尚不清楚。观察重组结缔组织生长因子对体外培养人成骨细胞核结合因子α1基因表达的影响。方法:实验于2006-01/2007-01在日照市人民医院完成。①实验材料:外科手术取正常成人髂骨松质骨,患者对试验知情同意。②实验方法:体外培养正常人成骨细胞,用不同浓度0,50,100,200,1000μg/L的重组结缔组织生长因子(0μg/L作为空白对照组)干预48h后,抽提细胞总RNA和总蛋白。③实验评估:采用半定量反转录-聚合酶链反应和蛋白免疫印迹分析方法观察不同浓度重组结缔组织生长因子对体外培养人成骨细胞核结合因子α1基因表达的影响。结果:半定量反转录-聚合酶链反应和蛋白免疫印迹结果显示,50,100,200,1000μg/L重组结缔组织生长因子干预后均可显著上调成骨细胞核结合因子α1的表达,并呈明显剂量依赖关系,与空白对照组比较,差异显著(P<0.01)。结论:重组结缔组织生长因子可剂量依赖性上调成骨细胞核结合因子α1基因的表达,核结合因子α1可能参与了结缔组织生长因子对成骨细胞增殖和分化的调节。     

2型糖尿病患者视黄醇结合蛋白4与炎症因子、脂代谢及胰岛素抵抗的相关分析

目的探讨RBP-4对与2型糖尿病患者炎症因子超敏C反应蛋白（hs—CRP）、脂代谢及胰岛素抵抗的关系。方法105例门诊初诊患者及同期门诊或体检中心健康体检者,正常葡萄糖耐量（NGT）组34例和T2DM组71例,按BM1分为正常体重组（NW）56例及超重／肥胖组（OW／OB）49例。用ELISA测定血清RBP-4。全自动生化仪检测hs—CRP、游离脂肪酸（FFA）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（Tc）;化学发光法检测胰岛素。结果T2DM组ln（HOMA—IR）、TG、FFA、In（hs—CRP）均高于NGR组[1．20±0．38VS0．76±0．34,（2．74±2．20）mmol／L vs（1．88±1．41）mmol／L,（0．80±0．29）mmol／L vs（0．61±0．22）mmol／L,0．62±1．00 vs -0．17±1．07],差异有统计学意义。单因素简单相关分析显示,NGR组lnRBP-4与In（HOMA-IR）存在正相关（r=0．382,P〈0．05）,与TC、TG、FFA、in（hs．CRP）无关。T2DM组,lnRBP-4与FFA、In（hs—CRP）呈正相关（r=0．242,P〈0．05;r=0．346,P〈0．01）,但与in（HOMA—IR）、TC、TG均无相关性。NW组,lnRBP-4与ln（HOMA—IR）、TC、TG、FFA、ln（hs-CRP）均无相关性。而OW／OB组,lnRBP-4与ln（HOMA—IR）、In（hs—CRP）呈正相关（r=0．290,0．295,P〈0．05）,但与TC、TG、FFA无关。逐步多元线性回归分析显示,各组的ln（hs—CRP）、TC、TG、FFA、in（HOMA—IR）均非lnRBP-4的独立影响因素。结论在T2DM患者中,RBP-4与ln（hs．CRP）、FFA正相关,可作为一新的炎症标志物。     

雌二醇诱导人成骨样MG-63细胞表达下调基因的筛查

目的 筛查17β雌二醇（E2）诱导MG-63细胞下调表达cDNA片段，寻找MG-63细胞中E2相关基因，探讨雌激素的骨保护作用机制。方法 用改良cDNA代表性差异分析法筛查E2干预MG-63细胞表达下调的cDNA片段，Southern杂交和快速Northern杂交分析cDNA片段来源后。克隆到pGEM-Teasy载体，蓝白筛选挑取阳性克隆进行测序和同源性比较分析。最后选取部分阳性差异表达克隆行Northern杂交分析。结果 得到2个表达下调的cDNA条带，证实差异表达cDNA片段经E2干预后表达下调。随机挑取20个克隆测序得到19个序列，分别代表14个不同基因，均与已知基因高度同源，这些基因与骨基质形成、转录信号转导及细胞分化发育调节等相关，其中1个克隆经Northern杂交证实其受E2干预表达下调。结论 cDNA代表性差异分析法可快速筛查差异表达基因。MG-63细胞受E2诱导下调表达的部分基因可能参与了雌激素介导的骨重建过程从而起到骨保护作用。     

糖尿病对骨密度及相关激素的影响

目的 观察DM患者骨密度（bone mineral density,BMD)及其相关激素的改变，并探讨其发生机制。方法 采用双能（线吸收法测量2型DM患者68例、1型DM患者54例和健康人62例的BMD，放免法测定血清骨钙素、降钙素和25羟维生素D3，免疫放射法测定血清完整甲状旁腺素及I型胶原羧基末段前肽。结果 ①两组DM患者全血HbA1c水平均显著高于对照组（P＜0．01），血清骨钙素水平显著低于对照组（P＜0．01）；②2型DM组BMI、大转子BMD显著高于对照组和1型DM组（BMI，P＜0．01；BMD，P＜0．05）；1型DM组股骨颈BMD低于对照组和2型DM组（P＜0．05），经BMI纠正后，1型DM组股骨颈BMD仍低于对照组（P＜0．05）；③1型DM组各位点BMD与血清I型胶原羧基末段前肽水平呈负相关（P＜0．05），2型DM组腰椎和大转子BMD与全血HbA1c水平呈负相关（P＜0．05）。结论 与健康人群相比，1型DM患者BMD明显降低，2型DM患者BMD明显增高，但经BMI纠正后，这种差异性消失；骨转化降低以及糖尿病代谢紊乱可能参与了糖尿病骨质疏松的发生。     

随增龄不同骨骼部位骨密度减少的性别差异

目的 了解随增龄骨密度（BMD）减少的性别差异。方法 采用双能X线（DXA）骨密度仪，测量1133例（女性796例，男性337例）60～84岁的老年志愿者腰椎正位（L1～L4）、腰椎侧位（L2-L4）、髋部和前臂远端的BMD。结果 女性股骨颈和前臂远端1／3处的BMD与年龄分别呈3次回归模型和线性回归模型关系，女性其他骨骼部位及男性所有骨骼部位的BMD与年龄均呈复合曲线模型关系；女性不同骨骼部位的BMD平均累积丢失（20．5±8．5）％，范围-32．5％～-9．6％，男性丢失（10．9±4．7）％，范围-18．9％～-5．1％。BMD丢失最多的骨骼部位是前臂远端，女性和男性分别丢失32．5％和18．9％。老年女性各骨骼部位BMD平均每10年减少8．6％，男性减少4．5％。结论 老年人各骨骼部位BMD的丢失存在性别差异；衰老所致的骨丢失率，女性高于男性。髋部和前臂远端是老年人骨丢失的敏感部位，测量这两个骨骼部位，将有利于老年人低骨量和骨质疏松的检出率。     

糖尿病患者雌激素受体基因多态性与骨密度的相关性研究

目的 探讨糖尿病患者雌激素受体（ER）基因多态性与骨密度的关系。方法 采用聚合酶链反应－限制性片段长度多态性（PCR－RFLP）技术，对140例糖尿病患者和60例健康人的ER基因（Pvu Ⅱ、Xba Ⅰ位点）进行分型，并计算基因分布频率，同时采用双能X线吸收法测量腰椎及股骨近端骨密度。结果 糖尿病患者PP、xx基因型频率明显高于健康对照组（P＜0.01),pp、XX基因型频率明显低于健康照组（P＜0.01)。I型糖尿病组骨量减少或骨质疏松的发生率明显高于健康对照组和2型糖尿病组（P＜0.01)。糖尿病患者、健康对照组ER基因多态与腰椎、股骨颈、Ward′s三角区骨密度之间均存在显著相关性（P＝0.001)。结论 健康对照组与糖尿病患者ER基因型分布差异有显著性，ER基因型与骨密度相关，p、X等位基因对骨量具有保护作用；胰岛素水平与骨密度亦存在相关性。     

1型糖尿病基因治疗研究进展

1型糖尿病自身免疫发病机制涉及到免疫耐受、自身抗原提呈、T细胞活化以及细胞凋亡等异常。转染β细胞特异性抗原基因可诱导免疫耐受,转染前炎性因子受体拮抗蛋白基因及干扰协同刺激信号可阻止抗原提呈细胞及T细胞活人,可通过抑制细胞凋亡来阻断针对胰岛的自身免疫反应,最终达到治疗糖尿病的目的。此外,通过转基因技术可使非胰岛β细胞获得合成分泌胰岛素的能力,用于治疗胰岛素缺乏所致糖尿病亦将成为可能。     

17β-雌二醇对体外培养人成骨细胞CTGF和PAIP-1基因表达的作用

目的　观察结缔组织生长因子 (CTGF)和多聚腺苷酸结合蛋白相互作用蛋白 1(PAIP 1)mRNA在体外培养的人成骨细胞增殖分化不同阶段的表达 ,研究 17β- 雌二醇 (E2 )对成骨细胞CTGF和PAIP 1mRNA表达的作用 ,探讨雌激素对骨组织保护作用的新机制。方法　用改良的钙 钴法ALP染色 ,vanGieson法 1型胶原染色 ,0. 1%茜素红矿化结节染色 ,半定量RT- PCR检测成骨细胞碱性磷酸酶 (ALP)、骨钙素 (OC)和 1型胶原mRNA的表达 ,半定量RT- PCR和Northernblot方法检测成骨细胞CTGF和PAIP- 1mRNA表达。结果　半定量RT -PCR和组织化学染色的结果均表明 ,成骨细胞接种培养后 0～11d为细胞增殖阶段 ,7～ 15d为骨基质成熟阶段 ,15d后为骨基质矿化阶段 ;在成骨细胞培养的不同阶段 ,均检测到CTGF和PAIP- 1mRNA的表达 ,E2 可显著下调成骨细胞CTGFmRNA的表达 ,呈时间剂量依赖关系 (P <0 . 0 1) ,但对PAIP 1mRNA表达无明显作用。结论　E2 时间剂量依赖性下调成骨细胞CTGFmRNA的表达 ,但对PAIP 1mRNA表达无明显影响。     

左旋肉毒碱对人成骨细胞增殖和凋亡的影响

目的观察左旋肉毒碱(L-carnitine,L-C)对人成骨细胞增殖和凋亡的作用。方法以3H掺入法(3H-TdR)测定左旋肉毒碱对人成骨细胞增殖的影响;以吖啶橙/溴化乙啶染色和细胞凋亡ELISA(酶联免疫吸附法)试剂盒测定左旋肉毒碱对人成骨细胞凋亡的影响;以免疫印记法检测左旋肉毒碱干预前后活化型Caspase-3、-9蛋白质表达水平的改变。结果10~100mmol/L左旋肉毒碱能促进人成骨细胞增殖。吖啶橙/溴乙啶染色法示100mmol/L左旋肉毒碱干预使人成骨细胞凋亡细胞明显减少。ELISA结果示10~100mmol/L左旋肉毒碱干预可显著抑制人成骨细胞凋亡。10~100mmol/L左旋肉毒碱干预可抑制无血清饥饿诱导的人成骨细胞caspase-3、9活化增加。结论左旋肉毒碱促进人成骨细胞增殖,并通过下调Caspase-3、-9的活化抑制人成骨细胞凋亡。     

沿海欠发达地区代谢综合征及其相关疾病的流行病学调查

代谢综合征(M S)是一组以高血糖、高血压、肥胖或中心性肥胖、脂代谢紊乱等为主要表现,多种心血管危险因素在同一个体的聚集状态,与胰岛素抵抗密切相关。近年来,随着我国经济的快速增长、人们生存环境和生活方式的改变以及人口老龄化的加剧,M S及其相关疾病的发病率迅速增加。2