缺氧诱导因子-1α参与胃癌多药耐药的机制

目的 探讨缺氧诱导因子(HIF)-1α参与胃癌SGC7901/DDP细胞株多药耐药的机制.方法 采用化疗药物顺氯胺铂(顺铂,DDP)按浓度梯度递增法(0.02～1.00mg/L)诱导胃癌SGC7901细胞株,10个月后成功建立对顺铂稳定耐药并具有MDR、MRP4表型的胃癌SGC7901/DDP细胞株,应用HIF-1α通路抑制剂YC-1(75 μmol/L)抑制HIF-1α在敏感株SGC7901和耐药株SGC7901/DDP中的表达,通过噻唑蓝(MTT)比色法检测药物敏感性,流式细胞术分析细胞凋亡率,逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测敏感株SGC7901和耐药株SGC7901/DDP中HIF-1α和耐药蛋白P-糖蛋白(P-gp)的表达变化.结果 YC-1抑制HIF-1α表达后,耐药株SGC7901/DDP的药物敏感性显著增加,对DDP的半数抑制浓度(IC50)由(52.175±6.163)mg/L降低为(11.078±3.645)mg/L(P＜0.01).耐药株SGC7901/DDP的细胞凋亡率由1.03%增加为14.26%(P＜0.01).耐药株SGC7901/DDP的P-gP在基因和蛋白表达水平均明显减低,分别由1.846±0.135和2.017±0.102下降至0.814±0.057和0.962 ±0.039(P＜0.01).结论 HIF-1α可通过调节P-gP表达及抗凋亡信号通路参与胃癌顺铂耐药,可成为逆转胃癌耐药的新的靶点.     

高压氧联合顺铂对肺腺癌A549/DDP细胞增殖的影响

目的 观察高压氧(HBO)联合顺铂(DDP)对肺腺癌A549/DDP细胞增殖的影响以及高压氧对细胞周期和凋亡的影响.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测高压氧和顺铂对A549/DDP细胞是否有协同抑制作作用,流式细胞法(FCM)分析高压氧对细胞周期和细胞凋亡的影响.结果 单纯高压氧对A549/DDP细胞的抑制率为2.90％,与常压对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).不同浓度(3、6、12、24μg/ml)的顺铂对A549/DDP细胞的抑制率分别为1.87％、4.62％、11.15％、30.45％,各组间比较差异均有显著性(P＜0.01);高压氧联合不同浓度顺铂对A549/DDP细胞的抑制率分别为4.37％、8.92％、21.88％、48.71％,与顺铂组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).FCM结果显示,A549/DDP细胞经高压氧干预后,G0/G1期细胞减少,S期细胞增多,与对照组比较差异均有极显著性(P＜0.01).凋亡率由2.8％增至7.9％,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 高压氧与顺铂可起到协同抑制A549/DDP细胞增殖的作用,高压氧能阻滞细胞于S期,并促进细胞凋亡.     

RNA干扰Kupffer细胞肿瘤坏死因子-α减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤

目的 观察RNA干扰肝脏Kupffer细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用.方法 构建针对大鼠TNF-α基因的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体.肝脏缺血再灌注损伤前48 h经门静脉注射磷酸盐缓冲液(PBS)、空载体或TNF-α shRNA.实验随机分为4组,假手术组、PBS组、空载体组和shRNA组.阻断大鼠70%入肝血流40 min,再灌注6 h检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、肝脏Kupffer细胞TNF-α mRNA、血清TNF-α、肝组织中丙二醛(MDA)以及超氧化物岐化酶(SOD)含量.结果 与PBS组和空载体组比较,shRNA组再灌注6 h后血清ALT和AST水平显著降低(P＜0.05),Kupffer细胞TNF-α mRNA水平、血清TNF-α水平(56.6±6.7 pg/ml比87.8±8.7 pg/ml和96.5±7.3 pg/ml,P＜0.05)、肝组织中MDA含量(93.4±13.3 nmol/mg比133.5±12.4 nmo1/mg和136.7±13.6 nmol/mg,P＜0.05)显著降低,SOD活性显著升高(22.4±4.6 U/mg比12.2±3.1 U/mg和11.4±2.9 U/mg,P＜0.05).结论 RNA干扰Kupffer细胞TNF-α基因的表达可以减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤.     

氯胺酮对大鼠全肝缺血/再灌注后肺损伤的保护作用及机制

目的 观察10 mg/kg氯胺酮对于大鼠全肝缺血/再灌注诱发的急性肺损伤保护作用及其机制.方法 30只9～10周龄雌性SD大鼠以区组随机法随机分为3组(每组10只),假手术组(Sham组),全肝缺血/再灌注组(IR组)以pringle's法阻断门静脉和肝动脉30 min后再灌注1h.全肝缺血/再灌注氯胺酮预处理组(Ket组),以10 mg/kg氯胺酮于全肝血流阻断前20 min经尾静脉注射预处理.测定各组肺组织干湿重比值(W/D比值);血清中天冬氨酸氨基转移酶(AST)、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)含量;逆转录/实时聚合酶链式反应( RT-PCR)法测定肺组织中血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA、细胞间黏附分子-1( ICAM-1 )mRNA含量;Western blot法测定肺组织中核因子-kb( NF-kJ )/P65含量;各组肺组织HE染色后病理评分.结果 血清AST、ALT含量:IR组[AST:(91±25)U/ml,ALT:(67.0±19.4) U/ml]和Ket组[AST:(85±12) U/ml,ALT:(51.3±9.9) U/ml]均高于Sham组[AST:(29±9) U/ml,ALT:(7.8±2.7) U/ml] (P＜0.05).血清TNF-α、ICAM-1含量:IR组[TNF.α:(23.1±4.8) μg/L,ICAM-1:(34±9)μg/L]和Ket组[TNF-α:(19.1+5.8)μg/L,ICAM-1:(41±7) μg/L]均高于Sham组[TNF-α:(8.7±2.4) μg/L,ICAM-1:(13±5)μg/L](P＜0.05).而Ket组和IR组之间无统计学差异(P＞0.05).W/D比值:IR组(6.9±1.7)和Ket组(5.1±1.1)高于Sham组(3.7±0.7)(P＜0.05),IR组高于Ket组(P＜0.05).肺组织中TNF-α mRNA、ICAM-1 mRNA和NF-kb/P65含量:IR组[TNF-α mRNA:(2.91±0.49)μg/L,ICAM-1 mRNA:(2.39±0.58) μg/L,NF-kb/P65:(1.97±0.17) μg/L]高于Sham组[TNF-αmRNA:(1.75±0.29) μg/L,ICAM-1 mRNA:( 1.63±0.33) μg/L,NF-kb/P65:(1.06±0.24) μg/L]和Ket组[TNF-α mRNA:(2.19±0.52) μg/L,ICAM-1 mRNA:(1.78±0.28)μg/L,NF-kb/P65:(1.33±0.30μg/L](P＜0.05).Sham组和Ket组之间无统计学差异(p＞0.05).肺组织病理评分:Sham组低于IR组和Ket组(P＜0.05),Ket组低于IR组(P＜0.05).相关性:TNF-α mRNA与NF-kb/P65正相关,R=0.849(P＜0.05),ICAM-1 mRNA与NF-kb/P65正相关,R=0.639(P＜0.05).结论 10 mg/kg氯胺酮20 min前预处理对于全肝缺血/再灌注肺损伤有保护作用.     

硫喷妥钠预先给药对肿瘤坏死因子-α激活Jurkat细胞NF-κB活性的影响

目的探讨硫喷妥钠预先给药对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)激活Jurkat细胞NF-κB水平的影响。方法选择人T淋巴瘤细胞系Jurkat细胞,浓度调节至1×105/ml,实验分两部分,1．将细胞随机分为6组:空白对照组不加入药物;TNF-α5 U/ml组;400、1 000μg/ml硫喷妥钠组;400μg/ml硫喷妥钠 +TNF-α 5 U/ml组和1000 μg/ml硫喷妥钠+TNF-α 5 U/ml组:加入硫喷妥钠1 h后洗去,再加入5 U/ml TNF-α;在加入TNF-α后1 h提取细胞核蛋白,采用凝胶电泳迁移率分析方法测定NF-κB活性,Western 杂交法对NF-κB的抑制因子IκB-α进行半定量研究。2．将细胞随机分为8组,空白对照组不加入药物;TNF-α5U/ml组;其他6组先用1 000μg/ml硫喷妥钠孵育1 h,随后用PBS冲洗,加入新鲜完全培养基,分别在培养后即刻、2、4、6、8、10 h加入TNF-α 5 U/ml刺激1 h,用上述方法测定NF-κB活性。结果 TNF-α可激活Jurkat细胞的NF-κB活性,下调IκB-α表达,1000μg/ml硫喷妥钠可抑制TNF-α激活 Jurkat细胞的上述改变。1000μg/ml硫喷妥钠被洗脱后8 h以内对NF-κB活性有抑制作用。结论 1 000μg/ml硫喷妥钠对人淋巴瘤Jurkat细胞TNF-α激活的NF-κB活性具有一定的抑制作用,与上调 IκB-α表达有关,而且可以被该细胞记忆数小时。     

黄芪单体毛蕊异黄酮对TNF-α损伤人脐静脉内皮细胞ET-1/NO的影响

目的 探讨黄芪单体毛蕊异黄酮对TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞(ECV-304)的一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)的影响.方法 用DMEM培养液在37℃、5％ CO2条件下对ECV304细胞株进行扩增至足够数量后,调细胞密度为1×105,并分为7组:A组:空白组,不加任何诱导剂;B组:TNF-α(40ng/ml)诱导组;C组:TNF-α(40ng/ml)+氯沙坦钾(105 mol/l);D组:TNF -α(40ng/ml)+毛蕊异黄酮(0.1 mg/ml);E组:TNF -α(40ng/ml)+毛蕊异黄酮(1mg/ml);F组:TNF-α(40ng/ml)+毛蕊异黄酮(10mg/ml);G组:TNF-α (40ng/ml)+毛蕊异黄酮(20mg/ml).分别于孵育6小时、24小时后时收集上清液,用ELISA检测上清液中一氧化氮(NO)、内皮素1(ET-1)的含量.结果 ①与空白组比较,TNF-α降低了ECV-304NO水平(P＜0.001)、提高了ET-1水平(P＜0.001);②氯沙坦钾提高了ECV-304NO水平(P ＜0.001)、降低了ET-1水平(P＜0.001);③毛蕊异黄酮(0.1 mg/ml～10mg/ml)能够促进ECV-304细胞NO的产生(P＜0.001)、降低ET -1的产生(P＜0.001);④氯沙坦钾和毛蕊异黄酮(20mg/ml)对ECV-304细胞ET-1和NO水平的影响无明显差异((P＞0.05);⑤毛蕊异黄酮浓度(在0.1 mg/ml ～20mg/ml内)与ECV-304 ET-1的分泌呈负相关性(r=-0.02、P＜0.001);与ECV-304NO的分泌呈正相关性(r=0.0075、P ＜0.001).结论 黄芪毛蕊异黄酮单体可以促进TNF-α诱导的内皮细胞NO分泌,抑制ET-1分泌,并在一定浓度内(0.1 mg/ml～20mg/ml)呈浓度依赖性.     

聚集素抗LNCaP细胞凋亡作用的研究

目的研究聚集素抗LNCaP细胞凋亡的作用及聚集素反义寡核苷酸(AS-ODN)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)细胞毒性作用的影响。方法培养转染全长聚集素序列的LNCaP细胞(A)为实验组,野生型LNCaP细胞(L)及转染PIRES2-EGFP空载体的LNCaP细胞(M)为对照组,以20 ng/ml TNF-α进行诱导,MTT及ELISA法检测3组细胞增殖活性与凋亡程度；转染聚集素AS-ODN后A细胞分4组,①对照组：常规培养；②AS-ODN组：转染AS-ODN,培养液不含TNF-α；③TNF-α组：未转染AS-ODN,培养液含20ng/ml TNF-α；④TNF-α+AS-ODN组：转染AS-ODN,培养液含20ng/ml TNF-α,观察4组细胞增殖活性与凋亡程度的变化。结果L、M、A3组细胞增殖活性分别为0.84±0.03、0.85±0.04、0.95±0.03,L与M间差异无统计学意义(P＞0.05),L、M与A相比增殖活性显著降低(P值均＜0.01)。3组细胞ELISA吸光度值分别为0.59±0.04、0.62±0.03、0.33±0.04,L与M间差异无统计学意义(P＞0.05),但L、M与A相比凋亡程度显著增高(P值均＜0.01)。A细胞①～④组细胞增殖活性吸光度值分别为1.30±0.03,1.25±0.03,0.99±0.03,0.80±0.03,两两比较组间差异均有统计学意义(P值均＜0.05)；4组细胞凋亡程度吸光度值分别为0.02±0.00,0.21±0.02,0.63±0.07,1.16±0.04,两两比较组间差异均有统计学意义(P值均＜0.01)。结论转染并永久表达全长序列聚集素后,TNF-α对LNCaP细胞的细胞毒性作用显著降低,转染聚集素AS-ODN显著增强TNF-α的细胞毒性作用,聚集素具有抗LNCaP细胞凋亡的作用。     

地氟醚预处理与缺氧/复氧损伤内皮细胞凋亡相关基因表达

目的 观察地氟醚预处理对缺氧/复氧(A/R)损伤内皮细胞凋亡相关基因Bcl-2及Bax表达的影响.探讨地氟醚预处理抑制细胞凋亡的机制.方法 选用人脐静脉内皮细胞株(ECV304).将细胞分为五组,即A/R组(A组)、A/R 肿瘤坏死因子α(TNF-α)10 ng/ml组(B组)、地氟醚1.0MAC预处理 A/R组(C组)、地氟醚1.0 MAC预处理 A/R TNF-α 10 ng/ml组(D组)和空白对照组(E组).应用Real-time PCR、Western Blot方法检测各组细胞中Bcl-2及Bax mRNA和蛋白水平.结果 Real-time PCR和Western Blot结果提示,与E组相比,A、B组Bcl-2表达降低,Bax表达升高(P<0.05或P<0.01).经地氟醚预处理后,C、D组细胞较相应未经预处理的A、B组Bcl-2表达增加.Bax表达降低(P<0.05或P<0.01).结论 地氟醚预处理可通过调节Bcl-2及Bax的表达来抑制缺氧/复氧所引起的内皮细胞凋亡.     

地氟醚预处理对人脐静脉内皮细胞缺氧/复氧损伤的影响

目的 探讨地氟醚预处理对人脐静脉内皮细胞缺氧/复氧损伤的影响.方法 人脐静脉内皮细胞株接种于培养板或培养皿中,随机分为5组(n=5),正常对照组(C组)不行任何处理;缺氧/复氧组(A/R组)缺氧30 min后,复氧60 min;缺氧/复氧+炎症介质刺激组[A/R+重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)组]在复氧同时加入10 ng/ml rhTNF-α 10 μl;地氟醚预处理+缺氧/复氧组(Des+A/R组)及地氟醚预处理+缺氧/复氧+炎症介质刺激组(Des+A/R+ rhTNF-α组)先给予7.2%地氟醚30 min,洗脱10 min,然后进行缺氧/复氧,复氧同时加入10 ng/ml rhTNF-α 10 μl.采用流式细胞术和原位缺口末端标记法测定细胞凋亡情况,计算细胞凋亡率;应用透射电镜观察细胞凋亡和坏死情况.结果 与C组比较,A/R组和A/R+rhTNF-α组细胞凋亡率升高(P＜0.05);与A/R组比较,Des+A/R组细胞凋亡率降低(P＜0.05);与A/R+rhTNF-α组比较,Des+A/R+rhTNF-α组细胞凋亡率降低(P＜0.05).电镜下,A/R组和A/R+rhTNF-α组可见凋亡和坏死细胞,Des+A/R组和Des+A/R+rhTNF-α组细胞处于增殖和修复状态.结论 7.2%地氟醚预处理30 min可减轻人脐静脉内皮细胞缺氧/复氧损伤.     

甲基丙烯酸甲酯单体对A549肺癌细胞的不良反应

目的 观察甲基丙烯酸甲酯(MMA)单体对A549肺癌细胞的不良反应.方法 设置实验组(5个单体浓度组:1、10、40、80、120 mg/L)及阴性对照组,用噻唑蓝(MTT)比色法测定单体与A549肺癌细胞接触后30 min、1、3、5d细胞吸光度(A)值.用膜联蛋白V/碘化丙锭(Annexin V/PI)双染法检测接触单体1d后细胞凋亡、坏死百分比.结果 10mg/L组5 d以及40、80、120 mg/L组1、3、5d的A值与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).10、40、80、120 mg/L组细胞凋亡百分比分别为(1.78±0.09)％、(3.97±0.22)％、(4.58±0.36)％、(5.27±0.14)％,坏死百分比分别为(3.43±0.08)％、(6.70 ±0.21)％、(7.93±0.40)％、(9.51±0.64)％,较对照组凋亡及坏死百分比(1.14±0.08)％、(1.24±0.09)％差异有统计学意义(P＜0.05).结论 MMA单体对A549肺癌细胞有毒性作用.     

急性胰腺炎大鼠脑组织TNF-α mRNA和蛋白表达及其意义

目的 探讨急性胰腺炎大鼠脑组织中TNF-α mRNA和蛋白的表达及其对胰性脑病发病机制的意义.方法 应用5%、1%的牛磺胆酸钠分别诱导急性坏死性胰腺炎(ANP)和急性水肿性胰腺炎(AEP)大鼠模型,同时设立假手术组,每组16只.分别于模型诱导后12 h,以酶联免疫吸附(ELISA)法测定大鼠血液和脑脊液标本中TNF-α的含量,RT-PCR方法测定脑组织TNF-α mRNA的表达,Western-Blot测定TNF-α蛋白的表达水平,免疫组化观察TNF-α蛋白的定位表达.结果 ANP组、AEP组和假手术组的血清TNF-α水平分别为1065.6pg/ml、577.5pg/ml和543.8pg/ml,脑脊液TNF-α水平分别为820.9pg/ml、307.4pg/ml和481.6pg/ml.ANP组血清和脑脊液TNF-α水平同AEP组和假手术组相比,差异均有显著性(P＜0.05).ANP组脑组织TNF-α mRNA和蛋白的表达明显增强.ANP组TNF-α蛋白的表达定位于大脑小胶质细胞和神经元细胞.结论 在ANP病程中,大鼠脑组织可能是细胞因子过度表达的来源之一;脑组织中,TNF-α主要由小胶质细胞和神经元细胞表达;TNF-α的过度表达可能是ANP早期脑髓鞘损伤的原因之一.     

非小细胞肺癌细胞A549顺铂耐药潜在机制的全转录组测序分析

目的通过全转录组测序分析比较野生型A549细胞和顺铂耐药A549细胞(A549/DPP)表达谱的差别,揭示非小细胞肺癌(NSCLC)顺铂耐药潜在机制。方法首先建立A549/DDP细胞系,对A549和A549/DDP进行全转录组测序,分别对lnc RNA-seq,circ RNA-seq和mi RNA-seq数据进行差异表达以及功能富集分析(KEGG和GO分析)。然后进行全转录组数据联合分析以及ce RNA网络的构建。结果与A549细胞系相比,其中4517个lnc RNA、123个circ RNA以及145个mi RNA在A549/DDP细胞中有差异表达。显著富集在与癌症相关的通路上。mi RNA-circ RNA-lnc RNA-m RNA四元网络包含了12个mi RNA,4个circ RNA,23个lnc RNA和9个m RNA节点。经过拓扑学性质分析hsa-mi R-125a-5p和hsa-mi R-125b-5p是顺铂耐药相关的关键mi RNA。结论肿瘤坏死因子信号通路和p53信号通路参与了A549/DPP耐药机制。Hsa-mi R-125a-5p和hsa-mi R-125b-5p可能是逆转顺铂抗性的潜在靶点。     

肿瘤坏死因子α对人肝癌多药耐药逆转作用的实验研究

目的研究肿瘤坏死因子α（TNF-α）对体外培养的人肝癌耐阿霉素细胞系（HepG2／ADM）多药耐药现象的逆转作用。方法不同浓度（100、500及2500U／ml）TNF-α作用于HepG2／ADM细胞72h后进行以下试验：用实时荧光定量聚合酶链反应技术检测各组多药耐药相关基因（MDR1）及脂质过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPAR-α）基因的mRNA表达情况;用罗丹明外排法检测各组P-糖蛋白活性;用Annexin V检测0．5mg／L阿霉素诱导的各组细胞凋亡情况;利用MTF法检测各组耐药性的改变。结果TNF-α能诱导HepG2／ADM细胞的MDR1基因表达下调,PPAR-α基因表达上调,且能增加阿霉素诱导的凋亡细胞的比例及细胞毒作用。结论TNF-α可能分别通过抑制MDR1表达及促进PPAR-α表达而逆转HepG2／ADM细胞的耐药性。     

小分子干扰RNA抑制肺癌细胞Survivin表达对凋亡和顺铂耐药性的影响

目的 观察应用小分子干扰RNA(siRNA)技术抑制肺癌A549细胞中Survivin表达对细胞凋亡和顺铂耐药性的影响.方法 设计、合成特异性抑制Survivin表达的siRNA,转染肺癌A549细胞48 h后,检测Survivin基因mRNA表达量以及肺癌细胞凋亡率和对顺铂耐药性变化.结果 A549细胞转染Survivin特异siRNA后,Survivin/β-actin基因mRNA表达比例1.17±0.25下降至0.41±0.18,抑制率65.10%;细胞凋亡率由2.67%上升至32.33%;顺铂半数抑制浓度(ICSO)由6.37 ms/L降低至2.42 ms/L.结论 通过siRNA特异性抑制肺癌A549细胞中Survivin基因表达可增加凋亡,逆转顺铂耐药.     

异丙酚对肿瘤坏死因子诱导的内皮细胞凋亡的影响

目的 评价异丙酚对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的影响.方法3～4代人脐静脉内皮细胞于融合状态,随机分为5组:①TNF-α组(P0+TNF-α);②12.5μmol/L异丙酚和TNF-α组(P12.5+TNF-α);③25μmol/L异丙酚和TNF-α组(P25+TNF-α);④50μmol/L异内酚和TNF-α组(P50+TNF-α);⑤100μmol/L异丙酚和TNF-α组(P100+TNF-α);TNF-α终末浓度为2000U/ml,各组先加入不同浓度的异丙酚孵育30min后再加入TNF-α共同培养24h。用DNA原位缺口末端标记(TUNEL)技术检测细胞凋亡指数(AI),并用透射电镜观察细胞形态学改变。结果 肿瘤坏死因子组(P0+TNF-α)可见较多凋亡细胞,不同浓度的异丙酚预处理后再加入肿瘤坏死因子的各组(P12。5+TNF-α、P25+TNF-α、P50+TNF-α、P100+TNF-α细胞凋亡指数与肿瘤坏死因子组(P0+TNF-α)比较,均有明显下降(P<0.05或P<0.01),且随异丙酚浓度的升高,AI逐渐减小,内皮细胞损伤明显减轻。结论 临床相关浓度的异丙酚可抑制TNF-α诱导的内皮细胞凋亡。     

粉防己碱对膀胱癌BIU-87/ADM细胞株的耐药逆转作用及其机制

目的 探讨粉防己碱(TET)对膀胱癌耐药株BIU-87/ADM多药耐药性(MDR)的逆转作用及其机制。方法 应用CCK法观察不同浓度TET( 1.0、1.5、2.0、2.5 mg/L)对BIU-87和BIU-87/ADM细胞生长的抑制作用,并测定1 mg/L TET逆转多药耐药的活性;Annexin-V与PI双染法流式细胞术分析1 mg/L TET对细胞凋亡的影响;免疫荧光法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测1 mg/L TET对P-gp蛋白和MDR1表达水平的影响;细胞免疫化学法和RT-PCR法检测1 mg/L TET对BIU-87/ADM细胞Caspase-3和Survivin表达水平的影响。结果 1.0 mg/L无毒剂量下的TET显著增加阿霉素(ADM)对耐药株BIU-87/ADM的细胞毒性作用(P＜0.01),逆转指数(RF)为5.33,而对敏感株BIU-87无明显作用(P＞0.05),RF为1.33;1.0 mg/L TET和1.5 mg/LADM共同作用48 h,能使BIU-87/ADM细胞凋亡率增加至(40.86±4.35)％,与单独应用ADM的(12.42 ±3.24)％比较差异有统计学意义(P＜0.01)。而BIU-87细胞凋亡率为(61.23 ±5.46)％,与单独应用ADM的(57.79±4.73)％比较差异无统计学意义(P＞0.05)。TET能明显抑制mdr1mRNA和P-gp蛋白在BIU-87/ADM的表达;与单用ADM比较,TET和ADM联用能使BIU-87/ADM细胞株中Caspase-3的表达水平明显升高(P＜0.01),Survivin的表达水平显著降低(P＜0.01)。结论 粉防己碱能逆转BIU-87/ADM细胞的多药耐药性,这一作用可能与粉防己碱抑制P-gp的表达和增强化疗药诱导细胞凋亡有关。     

促红细胞生成素对大鼠坐骨神经损伤后炎性反应和细胞凋亡的影响

目的 探讨促红细胞生成素(EPO)对大鼠坐骨神经损伤后炎性反应和细胞凋亡的影响及其作用机制,为周围神经损伤的临床治疗提供实验依据.方法 雌性SD大鼠36只,制备大鼠左侧坐骨神经缺损模型,随机分为3组,即EPO组、神经生长因子(NGF)组和生理盐水(NS)组.EPO组、NGF组和NS组分别于术后立即及每日腹腔注射FPO、NGF和NS.术后7、14 d,HE染色光镜下观察L5背根神经节细胞形态变化;应用RT-PCR检测损伤近、远端坐骨神经IL-6和TNF-α mRNA的表达;以TUNEL法检测L5背根神经节细胞凋亡.结果 术后7、14 d,EPO组近、远端坐骨神经IL-6mRNA表达低于NS组,差异有统计学意义(P＜0.01);EPO组远端坐骨神经IL-6 mRNA表达低于NGF组,差异有统计学意义(P＜0.01).术后7d,EPO组近、远端坐骨神经TNF-α mRNA表达低于NS组和NGF组,差异有统计学意义(P＜0.01);术后14 d,EPO组远端坐骨神经TNF-α mRNA表达低于NS组,差异有统计学意义(P＜0.05).术后7、14 d,EPO组凋亡细胞数低于NS组,差异有统计学意义(P＜0.01);术后14 d,EPO组凋亡细胞数低于NGF组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 EPO可能通过减少致炎因子IL-6和TNF-α释放,减轻炎性反应,抑制细胞凋亡,对大鼠坐骨神经损伤发挥保护作用.     

乌司他丁后处理及其联合预处理对体外循环下心脏瓣膜置换术患者心肌细胞凋亡的影响

目的 评价乌司他丁后处理及其联合预处理对CPB下心脏瓣膜置换术患者心肌细胞凋亡的影响.方法 择期CPB下心脏瓣膜置换术患者80例,性别不限,年龄21～59岁,心功能分级Ⅱ或Ⅲ级.采用随机数字表法,将患者随机分为4组(n=20):生理盐水对照组(C组)、乌司他丁预处理组(U1组)、乌司他丁后处理组(U2组)和乌司他丁预处理联合后处理组(U3组).U1组进行乌司他丁预处理:于气管插管后～升主动脉阻断前10 min经中心静脉输注乌司他丁500～ 1000 U·kg-1·min-1(剂量20000U/kg),U2组进行乌司他丁后处理:于主动脉开放前5～7 min经主动脉根部灌注乌司他丁4000～5000 U·kg-1·min-1(剂量l0000U/kg),U3组进行乌司他丁预处理联合后处理,C组给予等容量生理盐水.分别于升主动脉阻断前10 min、升主动脉阻断后40 min、升主动脉开放后45 min和术毕时采集动脉血样,分离血浆,测定血浆肿瘤坏死因子-α (TNF-α)和可溶性肿瘤坏死因子受体l( sTNF-R1)浓度.于升主动脉开放后45 min时取右心耳心肌组织,测定TNF-α、Bcl-2、Bax、caspase-3表达和细胞凋亡情况,并计算Bcl-2与Bax的比值(Bcl-2/Bax比率)和凋亡指数(AI).结果 与C组比较,U1组、U2组和U3组血浆TNF-α和sTNF-R1的浓度及AI降低,心肌组织TNF-α、Bax、caspase-3表达下调,Bcl-2表达上调,Bcl-2/Bax比率升高(P＜0.05);与U1组和U2组比较,U3组血浆TNF-α和sTNF-R1的浓度和AI降低,心肌组织TNF-α、Bax和caspase-3表达下调,Bcl-2表达上调,Bcl-2/Bax比率升高(P＜0.05).结论 乌司他丁后处理可抑制CPB下心脏瓣膜置换术患者心肌细胞凋亡,联合预处理时其效应增强,其机制与平衡心肌细胞Bcl-2与Bax表达及下调TNF-α及其受体表达有关.     

Notchl参与调节胃癌顺铂耐药的机制

目的 探讨Notchl参与胃癌SGC7901/DDP细胞株顺铂耐药的机制.方法 应用Notchl通路抑制剂MW167抑制Notchl在敏感株SGC7901和耐药株SGC7901/DDP中的表达,通过噻唑蓝(MTT)比色法检测药物敏感性,流式细胞术分析细胞凋亡率,逆转录-聚合酶链反应(RTPCR)和Western blot检测敏感株SGC7901和耐药株SGC7901/DDP中Notch1和NF-kappa B(NF-κB),耐药蛋白P-糖蛋白(P-gP)的表达变化.结果 MW167抑制Notch1表达后敏感株SGC7901和耐药株SGC7901/DDP的药物敏感性显著增加,细胞凋亡率分别为23.71%和12.48%(P＜0.01),NF-κB和耐药蛋白P-gP在基因和蛋白表达水平均明显减低(P＜0.01).结论 Notch1可通过调节P-gP表达及抗凋亡信号通路参与胃癌顺铂耐药,可成为逆转胃癌耐药的新的靶点.     

c-Jun氨基末端激酶信号通路在高氧诱导A549细胞凋亡中的作用

目的 探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路在高氧诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞A549细胞凋亡中的作用.方法 培养A549细胞,以1×105/ml密度接种于6孔板(1 ml/孔)或10 cm培养皿(5ml/皿),采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=12):空气对照组(C组)和空气+JNK抑制剂组(C+S组)、高氧组(O2组)和高氧+JNK抑制剂组(O2+S组).C+S组和O2+S组均加入终浓度为5μmol/L的JNK抑制剂SP600125.将细胞分别放入空气或95％O2中进行培养,培养24h时测定细胞存活率、细胞裂解液中Fas-L和裂解caspase-3表达水平.结果 与C组比较,C+S组细胞存活率、Fas-L和裂解caspase-3表达差异无统计学意义(P＞0.05),O2组细胞存活率降低,Fas-L和裂解caspase-3表达上调(P＜0.05);与O2组比较,O2+S组细胞存活率升高,Fas-L及裂解caspase-3表达下调(P＜0.05).结论 JNK信号通路参与了高氧诱导A549细胞凋亡.