铁死亡在重症急性胰腺炎引起的急性肾损伤中的作用及其机制

目的探讨铁死亡在重症急性胰腺炎(SAP)诱发急性肾损伤(AKI)的作用及其机制。方法胰腺炎建模后24 h,将36只SD大鼠(购自青岛大学医学部实验室动物中心)采用完全随机分组法分为3组(n=12):假手术组(SO组)、重症急性胰腺炎组(SAP组)、铁死亡抑制剂Ferrostatin-1干预组(SAP+Fer组)。建立SAP模型24 h后,检测血清淀粉酶(AMY)、肌酐(Cr)和血尿素氮(BUN)水平;检测肾组织中铁含量、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)变化及谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)活性;苏木精-伊红(HE)染色观察胰腺和肾脏组织学改变;透射电镜(TEM)观察铁死亡的形态学特征;蛋白质印迹法(Western blot)、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫荧光染色等方法分析长链脂酰CoA合成酶4(ACSL4)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)和铁蛋白重链1(FTH1)等铁死亡相关蛋白和基因的表达。组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果SAP组大鼠血清AMY[(6276.5±562.2)比(1086.6±192.3)U/L]、Cr[(98.0±16.2)比(19.5±5.2)μmol/L]、BUN[(17.1±2.8)比(7.2±1.7)mmol/L]水平明显高于SO组(t=30.314、15.927、10.375,P值均<0.01),差异均有统计学意义;肾组织铁[(0.65±0.13)比(0.44±0.12)mg/g]、MDA[(7.25±0.81)比(1.84±0.24)μmol/g]、ROS[(68.54±7.04)比(15.67±5.21)×104/mg]高于SO组(t=3.855、22.167、11.496,P值均<0.01),GSH[(358.38±41.59)比(518.64±55.72)nmol/g]和GPX4[(7.75±1.09)比(14.72±2.56)U/mg]明显低于SO组(t=7.984、8.674,P值均<0.01),差异有统计学意义;胰腺和肾组织病理损伤程度增加;线粒体出现明显萎缩;肾脏ACSL4蛋白(0.84±0.03比0.34±0.02)表达高于SO组(t=7.876,P<0.01),GPX4、FTH1蛋白(0.69±0.03比1.04±0.06、0.26±0.02比0.83±0.04)表达低于SO组(t=5.651、8.134,P值均<0.01),差异有统计学意义;ACSL4、铁响应元件结合蛋白2(IREB2)mRNA(0.87±0.06比0.24±0.03、1.23±0.05比0.32±0.02)表达高于SO组(t=12.864、15.163,P均<0.01),差异有统计学意义。SAP+Fer组大鼠血清AMY[(5124.3±483.5)比(6276.5±562.2)U/L]、Cr[(55.2±13.7)比(98.0±16.2)μmol/L]、BUN[(9.8±2.1)比(17.1±2.8)mmol/L]水平显著低于SAP组(t=5.287、6.989、7.359,P值均<0.01),差异有统计学意义;肾组织铁[(0.54±0.07)比(0.65±0.13)mg/g]、MDA[(4.67±0.73)比(7.25±0.81)μmol/g]、ROS[(28.39±6.36)比(68.54±7.04)×104/mg]低于SAP组(t=2.639、7.176、8.247,P值均<0.05),GSH[(448.21±45.51)比(358.38±41.59)nmol/g]和GPX4[(11.31±1.89)比(7.75±1.09)U/mg]高于SAP组(t=5.048、5.639,P值均<0.01),差异有统计学意义;胰腺和肾组织病理损伤程度减轻;线粒体轻度萎缩;肾脏ACSL4蛋白(0.49±0.02比0.84±0.03)表达低于SAP组(t=2.781,P<0.05),GPX4、FTH1蛋白(0.69±0.03比1.04±0.06、0.26±0.02比0.83±0.04)表达高于SAP组(t=2.427、2.876,P值均<0.05),差异有统计学意义;ACSL4、IREB2 mRNA(0.52±0.04比0.87±0.06、0.74±0.04比1.23±0.05)表达低于SAP组(t=5.843、6.781,P值均<0.01),差异均有统计学意义。结论铁死亡参与SAP引起的AKI,抑制铁死亡能改善肾功能,减轻肾组织脂质过氧化和病理损伤。     

沉默信息调节因子1激活剂SRT1720对大鼠体外循环肺损伤的保护作用及其机制

目的探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)激活剂SRT1720对大鼠体外循环肺损伤的保护作用及其机制。方法选取60只远交群SD大鼠,按照随机数字表法分为对照组、模型组和SRT1720组,对照组大鼠行动静脉穿刺置管术,模型组和SRT1720组大鼠行体外循环转流2 h。对照组和模型组泵注与SRT1720组相同体积的生理盐水,SRT1720组大鼠在体外循环前给予SRT17202 mg/kg。观察3组大鼠氧合指数和呼吸指数;苏木精-伊红(HE)染色观察3组大鼠肺部病理性改变;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)分析血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6和IL-10炎性因子的水平;采用酶促反应检测血清丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平;采用蛋白质印迹法(Western blot)分析3组内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-12表达水平。计量资料比较采用单因素方差分析。结果SRT1720组大鼠呼吸指数(1.97±0.04)低于模型组大鼠呼吸指数(2.63±0.03),而氧合指数(340.48±20.48)高于模型组大鼠氧合指数(208.39±16.79),差异有统计学意义(t=4.196,P<0.05;t=2.519,P<0.05)。SRT1720组大鼠肺组织病理评分(4.69±0.31)低于模型组大鼠病理评分(8.46±0.47),差异有统计学意义(t=2.849,P<0.05)。SRT1720组大鼠外周血清IL-6水平[(128.64±8.27)ng/L]低于模型组大鼠外周血清IL-6[(198.25±10.89)ng/L],而SRT1720组大鼠外周血清IL-10水平[(68.51±6.91)ng/L]高于模型组大鼠外周血清IL-10水平[(30.28±3.19)ng/L],差异均有统计学意义(t=2.184,P<0.05;t=2.011,P<0.05)。SRT1720组大鼠外周血清MDA水平[(9.88±1.11)μmol/L]低于模型组大鼠外周血清MDA水平[(15.33±2.87)μmol/L],而SOD水平[(147.32±8.90)U/ml]高于模型组大鼠外周血清SOD水平[(98.69±8.99)U/ml],差异均有统计学意义(t=3.408,P<0.05;t=3.001,P<0.05)。SRT1720组大鼠肺组织GRP78、CHOP和Caspase-12蛋白相对水平[(0.62±0.12)、(0.39±0.10)、(0.87±0.11)]低于模型组大鼠肺组织GRP78、CHOP和Caspase-12蛋白相对水平[(1.12±0.10)、(0.69±0.09)、(1.54±0.13)],差异均有统计学意义(t=4.150,P<0.05;t=2.988,P<0.05;t=3.405,P<0.05)。结论SIRT1激活剂SRT1720可显著下调体外循环引起的炎性反应,清除自由基和降低细胞内质网应激,进而缓解肺组织损伤。     

内质网应激在高脂血症大鼠睾丸生殖细胞凋亡中的作用

目的:探讨内质网应激途径在高脂血症大鼠睾丸生殖细胞损伤中的作用。方法:42只雄性Wistar大鼠于鼠龄4周末随机化分为两组:对照组(12只)和高脂组(30只),分别给予普通饲料和高脂高热量饲料喂养建立高脂血症大鼠模型。第10周末(即鼠龄14周)全自动生化分析仪检测外周血甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)含量,TUNEL法检测睾丸组织中凋亡生殖细胞,免疫组化法检测睾丸组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及caspase-12蛋白表达,RT-PCR法检测睾丸组织GRP78及caspase-12 mRNA的表达。结果:高脂组大鼠血清TG、TC[(3.00±0.92)mmol/L、(3.04±0.39)mmol/L]较对照组[(1.43±0.41)mmol/L、(1.55±0.23)mmol/L]显著升高(P0.01),睾丸生殖细胞凋亡指数[(37.17±2.74)%]较对照组[(5.16±0.81)%]显著升高(P0.01);以精原细胞和精母细胞凋亡为主。高脂组睾丸组织中GRP78蛋白(0.32±0.03)及caspase-12蛋白(0.34±0.02)表达较对照组(0.19±0.01、0.12±0.01)明显升高(P0.01),GRP78 mRNA及caspase-12 mRNA(0.86±0.05、0.87±0.01)较对照组(0.37±0.03、0.34±0.03)明显增加(P0.01)。结论:高脂血症大鼠睾丸生殖细胞凋亡增多;内质网应激可能是高脂血症大鼠睾丸生殖细胞凋亡的主要途径之一。     

甲基莲心碱对七氟烷麻醉后大鼠认知障碍影响的实验研究

目的探讨甲基莲心碱对七氟烷麻醉后大鼠认知障碍的影响及其分子机制。方法选取2018年7月将45只SD大鼠按照随机数字表法分为对照组、模型组和甲基莲心碱组,每组15只。模型组和甲基莲心碱组大鼠七氟烷麻醉3 h后自然苏醒,对照组不做处理。甲基莲心碱组大鼠在麻醉之前给予腹腔注射甲基莲心碱5 mg/kg,对照组和模型组大鼠经腹腔注射等体积生理盐水。干预24 h,采用Morris水迷宫实验检测大鼠空间学习记忆能力;采用酶联免疫法测定3组大鼠血清氧化应激指标变化;采用原位缺口末端标记法(TUNEL)染色分析3组大鼠脑组织细胞凋亡水平;采用荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)分析3组大鼠脑组织中半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3和Caspase-9 mRNA表达水平。应用SPSS 17.0统计软件分析,符合正态分布的计量资料以均数±标准差(±s)表示。结果甲基莲心碱组大鼠逃避潜伏期[(7.95±1.89)s]低于模型组大鼠逃避潜伏期[(12.25±2.78)s],而穿台指数(4.98±1.03)高于模型组穿台指数(3.01±0.89),差异均有统计学意义(t=3.103,P<0.05;t=1.895,P<0.05)。甲基莲心碱组大鼠血清丙二醛(MDA)水平[(8.20±1.21)μmol/L]低于模型组血清MDA水平[(13.19±1.59)μmol/L],差异有统计学意义(t=2.908,P<0.05)。甲基莲心碱组大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)水平[(410.43±60.12)U/ml]高于模型组血清SOD水平[(321.10±50.21)U/ml],差异有统计学意义(t=2.441,P<0.05)。甲基莲心碱组大鼠脑组织细胞凋亡比例[(5.01±1.21)%]低于模型组脑组织细胞凋亡比例[(9.10±2.19)%],差异有统计学意义(t=1.809,P<0.05)。甲基莲心碱组大鼠脑组织Caspase-3和Caspase-9 mRNA表达水平(1.39±0.15、1.52±0.19)低于模型组脑组织Caspase-3和Caspase-9 mRNA表达水平(1.98±0.23、2.42±0.25),差异有统计学意义(t=1.831,P<0.05;t=1.592,P<0.05)。结论甲基莲心碱通过下调氧化应激反应,显著缓解了七氟烷麻醉所致大鼠认知障碍。     

罗哌卡因通过circ_0044516/微小RNA-198通路调控肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的实验研究

目的探讨罗哌卡因对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法2019年1月至2020年4月,将体外培养A549细胞(购自中国科学院上海细胞库)分为对照组、不同剂量[25、50、100 mg/L,罗哌卡因组(Rop组)]、乱序无意义阴性序列组(si-NC组)、si-circ_0044516组、Rop+pcDNA组和Rop+pcDNA-circ_0044516组,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中细胞核增殖抗原(Ki-67)、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测circ_0044516和微小RNA(miRNA,miR)-198表达。双荧光素酶报告基因实验验证circ_0044516和miR-198调控关系。两组间比较行t检验,多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果不同剂量Rop组A549细胞抑制率均高于对照组[(22.54±2.11)%、(47.01±4.28)%、(65.84±4.63)%比(0.00±0.00)%,F=670.553,P<0.05],细胞迁移数[(82.08±4.60)、(63.02±4.34)、(47.94±3.85)个比(105.64±11.21)个,F=123.952,P<0.05]、侵袭数[(70.94±5.08)、(53.63±4.11)、(31.01±3.34)个比(93.00±6.25)个,F=267.501,P<0.05]及Ki-67(0.62±0.05、0.46±0.04、0.32±0.03比0.75±0.04,F=191.409,P<0.05)、MMP-2(0.41±0.03、0.28±0.03、0.13±0.02比0.59±0.04,F=361.500,P<0.05)和MMP-9(0.67±0.05、0.52±0.03、0.36±0.03比0.82±0.06,F=177.835,P<0.05)的蛋白表达、circ_0044516表达均低于对照组(0.81±0.06、0.61±0.05、0.45±0.04比1.00±0.06,F=182.097,P<0.05),miR-198表达高于对照组(1.64±0.12、2.16±0.20、2.77±0.23比1.00±0.05,F=185.997,P<0.05),差异均有统计学意义。si-circ_0044516组细胞抑制率高于si-NC组[(51.27±4.11)%比(5.69±0.46)%,t=33.064,P<0.05],迁移数[(55.57±4.04)个比(107.65±10.84)个,t=13.506,P<0.05]、侵袭数[(43.02±4.08)个比(92.42±7.84)个,t=16.768,P<0.05]及Ki-67[0.40±0.03比0.78±0.05,t=19.551,P<0.05]、MMP-2(0.21±0.03比0.58±0.04,t=22.200,P<0.05)和MMP-9(0.42±0.04比0.86±0.06,t=18.305,P<0.05)的蛋白表达均低于si-NC组,差异均有统计学意义。circ_0044516靶向负调控miR-198。Rop+pcDNA-circ_0044516组细胞抑制率低于Rop+pcDNA组[(28.57±2.49)%比(67.48±4.78)%,t=21.658,P<0.05],迁移数[(88.57±5.31)个比(46.35±4.33)个,t=18.486,P<0.05]、侵袭数[(74.57±5.97)个比(28.26±2.19)个,t=21.848,P<0.05]及Ki-67(0.64±0.04比0.31±0.03,t=19.800,P<0.05)、MMP-2(0.46±0.04比0.12±0.02,t=22.808,P<0.05)和MMP-9(0.73±0.06比0.33±0.03,t=17.889,P<0.05)的蛋白表达均高于Rop+pcDNA组,差异均有统计学意义。结论Rop可能通过调控circ_0044516/miR-198轴抑制肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭。     

半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-1抑制剂VX-765对急性胰腺炎的保护作用及其机制

目的探讨半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-1抑制剂VX-765对急性胰腺炎的保护作用及其分子机制。方法将60只SD大鼠(2019年8月购自河南省实验动物中心)按照随机数字表法分为假手术组、模型组和VX-765组,模型组和VX-765组经手术注射5%牛黄胆酸钠制备急性胰腺炎模型,对照组只进行手术不注射5%牛黄胆酸钠。建模24 h后对照组和模型组大鼠经腹腔注射生理盐水,VX-765组大鼠经腹腔注射50 mg/kg VX-765,治疗48 h后,观察3组大鼠存活率,采用自动生化仪检测血清淀粉酶活性;采用苏木精-伊红(HE)染色观察胰腺病理学变化;采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)分析3组大鼠外周血白细胞介素(IL)-1β和IL-18 mRNA和蛋白表达水平,计量资料比较采用单因素方差分析。结果VX-765组大鼠血清淀粉酶活性[(1530.40±280.45)U/L]低于模型组血清淀粉酶活性[(2910.43±429.12)U/L],差异有统计学意义(t=4.891,P<0.05)。VX-765组大鼠病理学评分(4.09±0.17)分低于模型组大鼠病理学评分(9.56±2.61)分,差异有统计学意义(t=3.018,P<0.05)。VX-765组大鼠胰腺组织中IL-1β和IL-18 mRNA表达水平(1.96±0.14、1.47±0.17)低于模型组大鼠胰腺组织中IL-1β和IL-18 mRNA表达水平[(3.18±0.21)、(2.67±0.17)],差异有统计学意义(t=2.999、2.104,P<0.05)。VX-765组大鼠外周血清IL-1β和IL-18水平[(159.43±7.09)、(99.50±5.09)ng/L]低于模型组大鼠外周血清IL-1β和IL-18水平[(310.48±25.55)、(190.65±10.43)ng/L],差异有统计学意义(t=2.801、2.466,P<0.05)。结论VX-765通过抑制Caspase-1活性,降低IL-1β和IL-18等炎性因子水平,进而缓解急性胰腺炎。     

断流和分流术后门脉高压性胃病大鼠Caspase-3 mRNA表达的变化

目的:研究断流术和分流术对门脉高压性胃病(PHG)大鼠胃粘膜细胞Caspase-3 mRNA表达的影响.方法:将48只Wistar雄性大鼠随机分成正常对照组、模型对照组、断流术组和分流术组.应用逆转录PCR(RT-PCR)测Caspase-3 mRNA表达.结果:正常对照组自由门脉压为(1.15±0.13)kPa,模型对照组升高至(2.68±0.16)kPa(P＜0.01),断流术组升高达(2.73±0.27)kPa,分流术组回降至(1.57±0.23)kPa,与模型对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).Caspase-3 mRNA表达有类似变化,正常对照组、模型对照组、断流术组和分流术组各组表达分别为0.48±0.02、0.96±0.04、1.04±0.06和0.65±0.03.结论:正常鼠胃粘膜上皮细胞凋亡基因Caspase-3 少量表达,PHG时Caspase-3 mRNA表达增加,断流术后Caspase-3 mRNA表达进一步上调,分流术后Caspase-3 mRNA表达有所下调.     

实验性高脂免体外培养阴茎海绵体平滑肌细胞凋亡的研究

目的观察高脂诱导的血管性ED家兔阴茎海绵体平滑肌(Corpus Cavernosum Smooth Muscle,CCSM)细胞形态、结构变化及高脂对CCSM细胞凋亡、增殖的影响。方法雄性新西兰家兔10只,随机分为模型组和对照组,每组各5只。模型组为采用经高脂、高胆固醇饮食结合球囊导管扩张双侧髂内动脉建立、鉴定的血管性ED模型;对照组喂以正常饮食。8周后切取阴茎CCSM组织观察并做体外细胞培养。经处理后分别在光镜、透射电镜下观察,流式细胞仪检测细胞凋亡,MTT比色法观察细胞增殖活性,RT-PCR法研究Caspase-3 mRNA的表达情况,免疫荧光法检测Caspase-3活性。结果与对照组相比,模型组光镜和电镜下CCSM细胞内含较多脂质囊泡,线粒体、内质网等细胞器出现损伤,凋亡小体明显增多。流式细胞仪检测证实模型组CCSM细胞凋亡率较对照组明显增高(1.44±0.20%Vs5.96±1.60%,P<0.01)。MTT比色法显示高脂对CCSM的增殖有明显抑制作用(模型组与对照组A值分别为:0.52±0.08Vs1.42±0.04,P<0.01)。模型组的Caspase-3 mRNA表达和活性值均显著高于对照组(0.74±0.00Vs0.65±0.00,P<0.01;活性值0.03±0.00Vs0.01±0.00,P<0.05)。结论高脂、高胆固醇饮食可严重影响CCSM结构,促进CCSM细胞凋亡并抑制其增殖。CCSM细胞凋亡/增生的失衡可能是高脂导致ED发生发展的重要病理环节。     

丹酚酸B 对糖尿病小鼠创面愈合及局部碱性成纤维细胞生长因子、转化生长因子-β1 的影响

目的:探讨丹参主要成分丹酚酸B(Sal B)对糖尿病小鼠慢性伤口创面修复的影响及其分子机制。方法:将30只db/db糖尿病小鼠随机分为模型组、Sal B组(1 mg/mL)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)组(3.6μg/mL),每组10只;另取db/m小鼠8只为空白组。各组小鼠背部全厚皮切除术制备伤口模型,空白组和模型组外用含生理盐水的明胶海绵;bFGF组外用含bFGF的明胶海绵,Sal B组外用含Sal B的明胶海绵。外用药以一次性无菌敷料贴包扎,隔日换药1次,并拍摄创面照片计算愈合率,给药周期为14 d。实验结束后取创面皮肤,采用苏木素-伊红(HE)染色,观察病理学改变,采用实时定量PCR法和Western blotting检测创面局部生长因子bFGF、转化生长因子β1(TGF-β1)基因和蛋白的表达。结果:造模第3、7、14天,模型组创面愈合率分别为(0.26±0.11)%、(0.43±0.12)%、(0.66±0.12)%,低于空白组[(0.63±0.09)%、(0.81±0.97)%、(0.98±0.02)%],bFGF组创面愈合率[(0.37±0.12)%、(0.59±0.07)%、(0.79±0.04)%]与Sal B组创面愈合率[(0.40±0.05)%、(0.58±0.05)%、(0.75±0.06)%]高于模型组(均P0.05)。模型组bFGF mRNA、TGF-β1mRNA的表达水平分别为(0.19±0.05)、(0.32±0.08),低于空白组[(0.95±0.16)、(1.35±0.31)],差异有统计学意义(P0.05),bFGF组TGF-β1 mRNA的表达水平(1.31±0.33)高于模型组(P0.01),Sal B组bFGF、TGF-β1 mRNA的表达[(0.71±0.25)、(1.42±0.48)]均高于模型组(P0.05)。模型组bFGF、TGF-β1蛋白的表达[(0.38±0.13)、(0.26±0.12)]低于空白组[(0.58±0.05)、(0.55±0.16)](P0.05),bFGF组bFGF、TGF-β1蛋白表达[(0.64±0.12)、(0.56±0.16)]均高于模型组,Sal B组bFGF、TGF-β1蛋白表达[(0.63±0.10)、(0.68±0.07)]高于模型组(P0.05)。结论:Sal B可以促进糖尿病小鼠创面愈合,其机制可能是升高创面生长因子的水平,促进肉芽组织生成。     

高脂对兔阴茎海绵体平滑肌细胞含量及结构的影响

目的 观察高脂诱导血管性ED家兔阴茎海绵体平滑肌细胞(smooth muscle cell, SMC)含量变化以及海绵体组织超微结构的改变情况.方法 8只性成熟雄性新西兰家兔随机分两组,每组各4只.对照组喂以正常饮食,模型组采用高脂、高胆固醇饮食结合球囊导管扩张双侧髂内动脉法建立血管性ED模型.第8周时切取阴茎海绵体组织,HE及特殊染色处理后在光镜、透射电镜下观察,计算机辅助彩色图像分析平滑肌及胶原构成百分比.RT-PCR法研究Caspase-3 mRNA的表达情况,免疫荧光法检测Caspase-3活性.结果 计算机分析表明模型组海绵体SMC含量较对照组明显减少(22.66±10.97)% vs (46.72±7.30)%,P<0.01.光镜和电镜下所见两组阴茎海绵体组织的超微结构呈显著差异.主要表现为模型组白膜结构改变,海绵体SMC明显减少,胶原成分增多.内皮细胞及SMC内存在脂质囊泡,线粒体、内质网等细胞器出现损伤,SMC凋亡小体明显增多.模型组的Caspase-3 mRNA.表达和活性值均显著高于对照组mRNA:(0.77+0.01) vs (0.68±0.01),P<0.01;活性值:(0.04±0.00) vs (0.02±0.00),P<0.05.结论 高脂、高胆固醇饮食可严重影响阴茎海绵体组织结构,主要表现为海绵体组织中SMC成分减少、胶原增加,使阴茎海绵体发生纤维化,这可能是高脂导致ED的重要原因之一.     

树突状细胞相关的C型凝集素1在小鼠肾缺血再灌注中的作用及其机制

目的探究树突状细胞相关的C型凝集素-1(Dectin-1)在小鼠肾缺血再灌注损伤中的作用及其机制。方法C56BL/6雄性小鼠60只,随机数字表法分为假手术组、肾缺血再灌注损伤(RIRI)组、生理盐水组、昆布多糖(LAM)低剂量组(20 mg/kg)、LAM中剂量组(40 mg/kg)、LAM高剂量组(80 mg/kg)。采集小鼠血液标本,测定血清肌酐(Cr)及尿素氮(BUN)水平;苏木精-伊红(HE)染色评估各组小鼠肾组织病理学改变;原位缺口末端标记法(TUNEL)法检测细胞凋亡数量;定时定量反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测白细胞介素(IL)-1β、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-1、核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)、凋亡相关微粒蛋白(ASC)的mRNA水平;蛋白质印迹法(Western blot)检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、磷酸化真核细胞翻译启始子2α(p-eIF2α)/真核细胞翻译启始子2α(eIF2α)、C/EBP同源蛋白(CHOP)的蛋白水平。组间比较采用t检验。结果RIRI组小鼠BUN及Cr水平明显高于假手术组(Cr 157.23±15.90比15.97±0.70,t=23.963,P<0.05;BUN 16.66±0.87比4.34±0.49,t=28.217,P<0.05),LAM组小鼠BUN及Cr水平明显低于假手术组(Cr 123.70±9.66比103.33±3.95比79.90±4.04比157.23±15.90,t=6.653、7.159、12.861,P值均<0.05;BUN 11.56±0.80比9.37±0.81比7.13±0.63比16.66±0.87,t=5.427、13.593、34.028,P值均<0.05),差异均有统计学意义;LAM组小鼠凋亡细胞明显低于RIRI组(14.44±1.91比40.89±4.53,t=10.137,P<0.05);LAM组小鼠IL-1β、Caspase-1、NLRP3、ASC的信使RNA(mRNA)水平明显低于RIRI组,差异有统计学意义(IL-1β为2.56±0.09比4.98±0.44,t=7.932,P<0.05;Caspase-1为1.77±0.12比4.00±0.22,t=12.160,P<0.05;NLRP3为2.43±0.28比4.71±0.28,t=16.474,P<0.05;ASC为1.99±0.16比3.14±0.17,t=15.977,P<0.05);LAM组小鼠GRP78、p-eIF2α/eIF2α、CHOP蛋白水平明显低于RIRI组,差异均有统计学意义(GRP78为0.472±0.026比1.215±0.073,t=26.501,P<0.05;eIF2α/p-eIF2α为0.697±0.016比0.871±0.028,t=9.877,P<0.05;0.621±0.035比1.086±0.115,t=5.419,P<0.05)。结论Dectin-1拮抗剂Laminarin可减轻小鼠肾缺血再灌注损伤,其机制可能与抑制细胞凋亡、焦亡及内质网应激有关。     

人脐带间充质干细胞防治早期激素性股骨头坏死的作用及其机制

目的探讨人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)对大鼠早期激素性股骨头坏死(GC-ONFH)防治作用及其机制。方法将48只SD大鼠完全随机法分为4组:对照组、模型组、低剂量治疗组、高剂量治疗组。使用注射用甲泼尼龙琥珀酸钠建立GC-ONFH的模型,并给予不同剂量的hUC-MSCs干预。6周后分离股骨头组织,利用苏木精-伊红(HE)染色、原位缺口末端标记法(TUNEL)染色、微型CT(Micro-CT)、蛋白质印迹法(Western blot)和定量聚合酶链反应(qPCR)评价股骨头坏死、细胞凋亡、骨密度及凋亡相关蛋白mRNA表达水平。采用t检验和完全随机设计的方差分析。结果对照组、模型组、高剂量治疗组和低剂量治疗组股骨头坏死发生率分别为0(0/12)、83%(10/12)、17%(2/12)、50%(6/12),空骨陷窝率和细胞凋亡率分别为(2.301±1.238)%、(26.138±2.742)%、(10.229±2.658)%和(13.518±2.241)%,治疗组中空骨陷窝率和细胞凋亡率显著低于模型组(F=13.45,P<0.05),差异有统计学意义。Micro-CT结果显示对照组、模型组、高剂量治疗组和低剂量治疗组骨体积分数分别为(0.618±0.147)%、(0.250±0.130)%、(0.563±0.127)%、(0.358±0.057)%,骨小梁厚度分别为(0.448±0.086)、(0.218±0.082)、(0.418±0.059)、(0.292±0.051)mm,骨小梁间隙分别为(0.042±0.010)、(0.016±0.008)、(0.036±0.004)、(0.023±0.004)mm,骨小梁数量分别为(4.233±1.137)、(1.950±0.650)、(3.633±0.717)、(2.333±0.457)/mm,治疗组上述指标显著高于模型组(F=11.75、13.02、14.22、10.79,P<0.05),差异有统计学意义。Western blot检测对照组、模型组、高剂量治疗组和低剂量治疗组B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bcl-2)蛋白表达分别为(1.000±0.039)、(7.508±0.253)、(1.540±0.182)、(3.778±0.160),bcl-2蛋白表达分别为(1.000±0.053)、(0.202±0.046)、(0.745±0.083)、(0.485±0.065),半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达分别为(1.000±0.045)、(8.917±0.238)、(1.694±0.189)、(4.250±0.164),qPCR检测对照组、模型组、高剂量治疗组和低剂量治疗组bax mRNA表达分别为(1.000±0.056)、(4.433±0.192)、(1.933±0.142)、(2.367±0.134),bcl-2 mRNA表达分别为(1.000±0.037)、(0.227±0.029)、(0.793±0.032)、(0.617±0.036),Caspase-3 mRNA表达分别为(1.000±0.062)、(4.467±0.393)、(1.800±0.180)、(2.600±0.131),模型组bcl-2表达显著低于对照组,Caspase-3、bax表达显著高于对照组,经hUC-MSCs干预后情况改善显著(F=67.74、54.68、104.40,P<0.05),差异有统计学意义。结论hUC-MSCs可能通过调节bax、bcl-2、Caspase-3的表达,抑制糖皮质激素诱导的成骨细胞凋亡,有助于防治大鼠早期GC-ONFH。     

The protective effect of hydroxytyrosol on contrast - induced nephropathy and endoplasmic reticulum stress

Objective To investigate the expression of glucose-regulated protein 78(GRP78) and cysteine aspartic acid protease 12(Caspase - 12) and evaluate the endoplasmic reticulum stress (ERS) in rats with contrast - induced nephropathy (CIN), and observe the protective effects of hydroxytyrosol on CIN rats. Methods Eighty-four Wistar rats, (220±20) g, were randomly divided into control group, CIN group, hydroxytyrosol treated group (group C+H). At 12th, 24th, 48th, 72th day after the rats model were established, BUN and Scr were detected. ELISA were used to detect the expression of methane dicarboxylic aldehyde (MDA), superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GSH-Px). HE staining were used to evaluate the pathological change of kidney. TUNEL were used to detect the apoptosis of tubular cells. Real-time PCR were used to detect the expression of GRP78 mRNA and Caspase-12 mRNA in tubular cells. Immunohistochemistry and Western blotting were used to detect the expression of GRP78 and Caspase - 12 protein in tubular cells. Results BUN, Scr, the mRNA and protein expression of GRP78, Caspase-12 in hydroxytyrosol treated group were higher than that in control group(P＜0.05), but were significantly lower than that in CIN group (P＜0.05). Pathological changes and the apoptosis of tubular cells in CIN group were more serious than that in hydroxytyrosol treated group (P＜0.05). Conclusions Endoplasmic reticulum stress may be associated with contrast-induced nephropathy. Hydroxytyrosol can protect kidney from contrast medium via reducing the endoplasmic reticulum stress.     

丹参对高能冲击波致肾损伤保护的实验研究

目的 :探讨丹参对高能冲击波致肾损伤的保护作用。方法 :将 30只家兔随机分为丹参组和生理盐水对照组 ,体外冲击波碎石 (ESWL)前 3d分别静脉注射丹参和生理盐水 ,测定ESWL前后不同时间血浆中内皮素 (ET 1)、超氧化物歧化酶 (SOD)、丙二醛 (MDA)水平 ,并观察肾组织病理变化。结果 :对照组ESWL在血浆中ET 1、MDA值较冲击前显著升高 (P <0 .0 5 ) ,SOD显著性降低 (P <0 .0 5 ) ;丹参组ESWL后血浆中ET 1、MDA显著低于对照组 (P <0 .0 5 ) ,SOD值则显著高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,且病理检查较对照组损伤轻。结论 :丹参对高能冲击波致肾损伤具有保护作用。     

大鼠肝脏缺血再灌注过程中信号转导与转录激活子1的表达变化及其意义

目的 观察JAK-STAT信号通路蛋白STAT1和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3在大鼠肝脏缺血再灌注不同时限的表达及丹参对两者表达的影响.方法 将80只SD大鼠随机分为正常组、假手术组、缺血再灌注组和丹参组,建立肝缺血再灌注模型,采用免疫组织化学方法 检测STAT1及Caspase-3在肝缺血45 min再灌注0、3、12、24、72 h时的表达.结果 STAT1、Caspase-3在正常及假手术组中未见明显表达.缺血再灌注组STATI在再灌注0 h即有表达(PU=10.29±0.92),再灌注12～24 h表达最明显(PU=38.73±1.59～38.90±2.29),Caspase-3在再灌注0 h亦有表达(PU=8.18±0.95),峰值出现在再灌注24 h(PU=38.06±2.85).丹参组STAT1在各时限点均较同期缺血再灌注组低(P＜0.05),除再灌注72h外丹参组Caspase-3在各时限点均较同期缺血再灌注组低(P＜0.05).结论 STAT1在大鼠肝缺血再灌注损伤中被激活,丹参可能通过抑制STAT1的表达减轻缺血再灌注对肝的损伤.     

丹参对大鼠内毒素休克性肺损伤的保护作用

目的　探讨丹参对内毒素休克性肺损伤的防治作用。方法　选用SD大鼠 5 4只 ,随机分成对照组、肺损伤组和丹参防治组。三组动物根据注入内毒素后时间不同分为 1、2和 4小时三小组。丹参防治组按 8g/kg体重经颈静脉注入丹参 ,30分钟后 ,再按 5mg/kg体重经颈静脉注入大肠杆菌内毒素 ;肺损伤组以生理盐水代替丹参 ;对照组中 ,丹参和内毒素均以等量生理盐水代替。实验结束后 ,取血和肺组织行血浆P 选择素、肺组织MPO活性、肺毛细血管通透性和血液流变学检测。结果　 (1)肺损伤组各时相点血浆P 选择素、肺组织MPO活性、肺毛细血管通透性均较对照组显著增高 (P <0 0 1) ;丹参防治组较肺损伤组有所下降 ,以 4小时为甚 (P <0 0 1)。 (2 )肺损伤组血液流变学指标较对照组明显升高 (P <0 0 1) ;丹参防治组与肺损伤组比较 ,血液流变学指标有不同程度的降低 ,以高中切变率 ηb和ERI差异有显著 (P <0 0 5或P <0 0 1)。 结论　丹参通过改善血液流变性 ,抑制P 选择素介导的PMN的浸润发挥对肺损伤的保护作用     

参芪肝康片保护乙型肝炎病毒大鼠肝功能机制研究

目的探讨参芪肝康片抑制乙型肝炎病毒(HBV)致肝功能损伤及其机制。方法将60只SD大鼠分为对照组(未行任何处理)、乙肝病毒模型组(乙型病毒性肝炎模型)、拉米夫定组(拉米夫定处理)以及低、中和高剂量参芪肝康片组[分别将2.5、5.0和10.0 mg/(kg·d)剂量参芪肝康片处理],每组均含有10只SD大鼠。检测并比较各组大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)。蛋白质印迹法(Western blot)检测并比较各组大鼠半胱天冬酶-3(Caspase-3)和存活蛋白(Survivin)表达。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测Janus激酶(JAK)/信号转导与转录激活子(STAT)信号传导通路因子Janus酪氨酸蛋白激酶1(JAK1)、Janus酪氨酸蛋白激酶(JAK2)、信号转导及转录激活蛋白1(STAT1)和信号转导及转录激活蛋白3(STAT3)等基因信使核糖核酸(mRNA)表达。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。结果拉米夫定组及低、中和高剂量参芪肝康片组ALT、AST含量及Caspase-3蛋白表达、JAKl、JAK2、STAT1和STAT3等基因mRNA表达均显著低于乙肝病毒模型组[ALT分别为(75.15±7.17)、(125.13±11.28)、(90.52±8.85)、(71.53±6.29)IU/L比(172.73±22.60)IU/L,AST分别为(233.70±27.63)、(315.39±32.89)、(241.24±34.19)、(223.16±19.75)IU/L比(324.96±32.31)IU/L,Caspase-3蛋白表达分别为(0.15±0.01、0.30±0.06、0.20±0.05、0.14±0.03比0.33±0.07),JAK1分别为(1.34±0.17、1.99±0.22、1.50±0.19、1.35±0.15比2.10±0.27),JAK2分别为(1.72±0.16、2.69±0.22、2.11±0.24、1.61±0.18比3.11±0.56),STAT1分别为(1.80±0.24、2.75±0.20、2.11±0.15、1.66±0.11比3.08±0.41),STAT3分别为(1.82±0.27、2.68±0.41、2.30±0.31、1.62±0.15比3.06±0.44)],差异有统计学意义(F=126.230、97.122、82.431、77.123、62.348、138.766、118.933,P<0.05)。拉米夫定组及低、中和高剂量参芪肝康片组Survivin蛋白表达均显著高于乙肝病毒模型组(分别为0.52±0.07、0.22±0.04、0.42±0.03、0.61±0.10比0.19±0.03),差异有统计学意义(F=101.987,P<0.05)。结论参芪肝康片可能通过抑制JAK-STAT信号传导通路发挥对HBV致肝功能损伤保护作用。     

左卡尼汀对慢性肾衰竭大鼠心脏的保护作用

目的 观察左卡尼汀对慢性肾衰竭大鼠心脏病理变化的影响,并探讨其心脏保护机制.方法 55只雄性SD大鼠按数字随机法分为假手术组(n=10)、模型组(n=15)、左卡尼汀小剂量组(n=10)、中剂量组(n=10)和大剂量组(n=10).除假手术组外,其余各组大鼠行5/6肾切除术.造模后1周,各左卡尼汀组大鼠每日灌胃给药,剂量分别为300、600、900mg/kg.假手术组和模型组则每日予生理盐水灌胃,总疗程17周.观察大鼠24h尿蛋白量、肾功能、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛( MDA)、白介素6(IL-6)、三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)变化.实验结束时,测各组大鼠平均动脉压及心率,并通过心脏超声、全心/体质量比、光镜、透射电镜观察大鼠心脏病理变化.结果 (1)左卡尼汀小、中、大剂量组ATP(μmol/g体质量)(2.35±0.24,3.59±0.28,3.78±0.25)均显著高于模型组(1.61±0.12)(均P＜0.01).(2)心脏超声显示左卡尼汀大剂量组左心室后壁厚度(mm)小于模型组(3.74±0.23比4.18±0.48,P＜ 0.05).(3)左卡尼汀中、大剂量组全心/体质量比值(3.92±0.27,3.65±0.20)均显著低于模型组(3.99±0.27)(P＜ 0.01).(4)光镜下,HE染色显示模型组心肌细胞排列紊乱,心肌细胞肥大;Masson染色显示胶原组织明显增多,部分心肌组织被胶原组织取代,出现心肌间质纤维化.HE染色显示左卡尼汀中、大剂量组心肌细胞排列紊乱;Masson染色显示心肌组织周围胶原纤维增多,心肌间质纤维化,但病变程度和范围均明显减轻.左卡尼汀中、大剂量组心肌病理评分(7.14±1.07,6.13±0.99)均低于模型组(9.88±1.13)(P＜ 0.01).电镜下,模型组可见大片心肌纤维溶解,线粒体增多、肿胀、空泡化,膜断裂、基质加深,为典型的心肌肥厚表现.左卡尼汀治疗组呈剂量依赖性改善病理损害.(5)治疗17周时,左卡尼汀小、中、大剂量组IL-6 (ng/L)(261.86±13.18、240.12±18.70、233.34±36.88比596.64±81.41)和MDA (nmol/L)(15.23±2.01、12.41±0.60、10.97±1.90比21.84±2.71)显著低于模型组;SOD(U/ml)(51.20±6.11、58.51±5.52、60.63±6.94比32.01±5.69)则高于模型组,差异均有统计学意义(均P＜ 0.05).(6)各组大鼠心率差异无统计学意义;模型组和左卡尼汀各组收缩压、舒张压及平均动脉压比较,差异无统计学意义.结论 左卡尼汀可通过改善慢性肾衰竭大鼠的心肌能量代谢、微炎性反应及氧化应激,达到延缓慢性肾衰竭大鼠左心室肥厚、心肌间质纤维化的作用.