氯沙坦对脓毒症小鼠急性肾损伤的影响及其与线粒体融合-分裂的关系

目的评价氯沙坦对脓毒症小鼠急性肾损伤的影响及其与线粒体融合-分裂的关系。方法 SPF级雄性C57BL/6J小鼠128只, 6～8周龄, 体质量20～25 g, 采用随机数字表法分为4组(n=32):假手术组(Sham组)、假手术+氯沙坦组(Sham+LOS组)、脓毒症相关性急性肾损伤组(SA-AKI组)及脓毒症相关性急性肾损伤+氯沙坦组(SA-AKI+LOS组)。采用盲肠结扎穿孔法建立小鼠脓毒症模型。Sham+LOS组及SA-AKI+LOS组分别于假手术或造模前3 d开始, 腹腔注射氯沙坦5 mg/kg, 1次/d, 连续3 d;Sham组及SA-AKI组腹腔注射等量溶剂。随机取20只小鼠, 观察术后7 d生存情况。于假手术或造模后24 h, 采用比色法测定血清BUN及Cr浓度, 采用ELISA法测定血清TNF-α、IL-6和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)浓度;取肾组织, HE染色后光镜下观察病理学结果, 并行肾小管损伤评分, 采用荧光素酶法测定ATP含量, 采用JC-1法测定线粒体膜电位(MMP)水平, 采用Western blot法检测动力相关蛋白1(Drp1)及线粒体融合蛋白2...     

BNIP3L与脓毒症相关性脑病小鼠海马线粒体功能障碍的关系

目的评价BCL2/腺病毒E1B19 kDa蛋白相互作用蛋白3(BNIP3L)与脓毒症相关性脑病(SAE)小鼠海马线粒体功能障碍的关系。方法 SPF级C57BL/6雄性小鼠180只, 6～8周龄, 体质量20～25 g, 采用随机数字表法分为4组(n=45):对照组(C组)、假手术组(Sham组)、SAE组和SAE+BNIP3L激动剂卡非佐米组(SC组)。采用盲肠结扎穿孔术制备脓毒症模型。SC组术后2 h腹腔注射卡非佐米2 mg/kg。各组取20只小鼠, 观察7 d生存情况。术后1周时, 取8只生存的小鼠进行水迷宫实验。其余小鼠术后24 h时处死, 取海马组织, 采用免疫荧光法测定海马组织BNIP3L表达, Western blot法测定线粒体BNIP3L表达, 并观察线粒体超微结构。采用荧光素-荧光酶发光法测定线粒体ATP含量, 荧光分光光度法测定线粒体膜电位(MMP)。结果与C组和Sham组比较, SAE组生存率降低, 逃避潜伏期延长, 目标象限停留时间和穿越原平台区域次数减少, 海马线粒体BNIP3L表达下调, MMP和线粒体ATP含量降低(P<0.05), 海马组织BNIP...     

吸入高浓度氢气对脓毒症小鼠急性肾损伤及线粒体动力学的影响

目的评价吸入高浓度氢气对脓毒症小鼠急性肾损伤(AKI)及线粒体动力学的影响。方法雄性C57BL/6J小鼠128只, 6～8周龄, 体质量20～25 g, 采用随机数字表法分为4组(n=32):假手术组(Sham组)、假手术+氢气组(Sham+H组)、脓毒症AKI组(S-AKI)和脓毒症AKI+氢气组(S-AKI+H组)。采用盲肠结扎穿孔法建立小鼠脓毒症模型。Sham+H组和S-AKI+H组于假手术或造模后1和6 h时分别吸入67%氢气+33%氧气1 h。取20只小鼠观察造模后7 d的生存情况。于造模后24 h时, 取血标本, 采用比色法测定血清BUN和Cr浓度;取肾组织, HE染色后进行肾小管损伤评分, 采用ELISA法测定肾组织TNF-α、IL-1β和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的含量, 采用分光光度法测定SOD和过氧化氢酶(CAT)的活性, 采用Western blot法测定动力相关蛋白1(Drp1)和线粒体融合蛋白2(Mfn2)的表达水平。结果与Sham组比较, S-AKI组生存率降低, 血清BUN和Cr浓度、肾小管损伤评分、肾组织TNF-α、IL-1β和HMGB1含量升高,...     

吸入高浓度氢气对脓毒症小鼠心肌损伤及线粒体生物合成的影响

目的评价吸入高浓度氢气对脓毒症小鼠心肌损伤及线粒体生物合成的影响。方法清洁级健康雄性C57BL/6J小鼠128只, 6～8周龄, 体质量20～25 g, 采用随机数字表法分为4组(n=32):假手术组(Sham组)、假手术+氢气组(Sham+H组)、脓毒症组(Sep组)和脓毒症+氢气组(Sep+H组)。采用盲肠结扎穿孔术建立小鼠脓毒症模型。Sham+H组和Sep+H组分别于术后1和6 h时吸入67%氢气1 h。每组随机取20只小鼠, 观察术后7 d生存情况。剩余小鼠于术后24 h时取血液标本, 采用ELISA法测定血清TNF-α、IL-1β、cTnI和CK-MB浓度;取心肌组织, HE染色后进行心肌病理评分, 采用荧光分光光度法检测线粒体膜电位(MMP), 萤光素酶法检测ATP含量, Western blot法测定过氧化物酶体增殖活化受体γ共激活因子-1α(PGC-1α)、核呼吸因子2 (NRF2)、线粒体转录因子A(TFAM)的表达。结果与Sham组比较, Sep组生存率降低, 血清TNF-α、IL-1β、cTnI和CK-MB浓度和心肌病理评分升高, MMP和ATP含量降低, 心肌组...     

NLRP3在小鼠脓毒症相关性脑病中的作用及其与小胶质细胞焦亡的关系

目的评价核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)在小鼠脓毒症相关性脑病中的作用及其与小胶质细胞焦亡的关系。方法 SPF级健康雄性C57BL/6J小鼠24只, 6～8周龄, 体质量18～22 g, 采用随机数字表法分为3组(n=6):假手术组(Sham组)、脓毒症相关性脑病组(SAE组)和脓毒症相关性脑病+NLRP3抑制剂MCC950组(SAE+MCC950组)。采用盲肠结扎穿孔法制备小鼠脓毒症相关性脑病模型。SAE+MCC950组小鼠造模后1 h时腹腔注射MCC950 20 mg/kg, 余组注射等容量生理盐水。造模后1 d时行旷场实验, 记录站立次数和中央区停留时间;造模后2～3 d行新物体识别实验, 记录探索指数。造模后3 d行为学实验结束后, 处死小鼠取脑海马组织, 采用Western blot法检测NLRP3的表达, 采用免疫荧光技术计数NLRP3与小胶质细胞特异性离子钙结合衔接分子1(Iba-1)共表达细胞, 采用ELISA法检测caspase-1活性、IL-1β和IL-18含量。结果与Sham组比较, SAE组和SAE+MCC950组站立次数减少, 中央区停留时间缩...     

氢吗啡酮通过调节雷帕霉素靶蛋白介导的自噬改善脓毒症性脑病的研究

目的探讨氢吗啡酮对脓毒症性脑病的影响,以及氢吗啡酮对脓毒症性脑病的神经保护与雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路介导的自噬的关系。方法无特定病原体(SPF)级健康雄性C57BL/6小鼠160只,8~10周龄,体重20~25 g,采用随机数字表法分为4组(n=40):假手术组(Sham)、脓毒症性脑病组(SAE)、脓毒症性脑病+氢吗啡酮组(SAE+HP)、脓毒症性脑病+氢吗啡酮+mTOR激动剂MHY1485组(SAE+HP+MHY)。采用盲肠结扎穿孔法(CLP)建立脓毒症模型,SAE+HP组于模型建立30 min后给予氢吗啡酮0.1 mg/kg,SAE+HP+MHY组于模型建立前1 d腹腔注射MHY148510 mg/kg,持续2 d,模型建立30 min后给予氢吗啡酮0.1 mg/kg。记录术后8 d生存情况。术后24 h处死小鼠,采用苏木精-伊红(HE)染色观察海马组织病理学结果,采用酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测海马组织白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测海马组织自噬相关蛋白p-mTOR、mTOR、微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ/LC3-Ⅰ、与B淋巴细胞瘤-基因2相互作用的肌球蛋白样螺旋蛋白(Beclin-1)的表达,免疫荧光染色观察海马组织LC3阳性细胞。CLP术后4~8 d行Morris水迷宫实验,记录逃避潜伏期和目标象限停留时间。组间比较采用单因素方差分析。结果SAE组海马组织IL-1β、IL-6、TNF-α水平高于Sham组[(231±20)ng/L比(111±15)ng/L、(191±20)ng/L比(55±3)ng/L、(351±20)ng/L比(80±6)ng/L,F=139.942、274.485、1055.362,P<0.05];SAE组p-mTOR/mTOR比值高于Sham组(1.412±0.057比0.313±0.046,F=1341.453,P<0.05),SAE组Beclin-1蛋白表达水平低于Sham组(0.332±0.021比0.976±0.053,F=755.084,P<0.05),SAE组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达高于Sham组(0.942±0.03比0.344±0.022,F=226.552,P<0.05),差异均有统计学意义;SAE组海马神经元退行性改变,细胞核固缩、深染,免疫荧光染色SAE组海马CA1区神经元LC3荧光强度低于Sham组(6.15±2.12比17.5±3.07,F=56.020,P<0.05);SAE组小鼠逃避潜伏期延长,目标平台停留时间缩短[逃逸潜伏期:5 d(F=32.947),6 d(F=33.322),7 d(F=41.888),8 d(F=44.685);目标平台停留时间(F=16.210,P<0.05)],差异有统计学意义。SAE+HP组IL-1β、IL-6、TNF-α水平低于SAE组[(161±15)ng/L比(231±20)ng/L、(95±12)ng/L比(191±20)ng/L、(200±12)ng/L比(351±20)ng/L,F=48.244、104.252、257.444,P<0.05];SAE+HP组p-mTOR/mTOR比值低于SAE组(0.869±0.064比1.412±0.057,F=238.676,P<0.05),SAE+HP组Beclin-1表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值高于SAE组(0.788±0.039比0.332±0.021、1.513±0.055比0.942±0.039,F=625.670、163.195,P<0.05);SAE+HP组海马神经元退行性病变改善;SAE+HP组LC3荧光强度高于SAE组(22.5±4.5比6.2±2.1,F=66.306,P<0.05),差异均有统计学意义,SAE+HP组小鼠认知功能改善。MHY1485逆转了SAE+HP组氢吗啡酮的神经保护作用。结论氢吗啡酮通过抑制mTOR信号通路,促进自噬,从而减轻脓毒症性脑病。     

富氢液对创伤性颅脑损伤大鼠急性肺损伤的影响及Nrf2/HO-1信号通路在其中的作用

目的评价富氢液对创伤性颅脑损伤(TBI)大鼠急性肺损伤的影响及核因子E2相关因子2/血红素氧合酶-1(Nrf2/HO-1)信号通路在其中的作用。方法成年雄性SD大鼠48只, 体重220～250 g, 采用随机数字表法分为4组(n=12):假手术组(S组)、TBI组(T组)、TBI+富氢液组(T+H组)和TBI +富氢液+鸦胆子苦醇组(T+H+B组)。采用控制型皮质撞击损伤法制备TBI模型。T+H+B组于造模前10 d开始隔天腹腔注射Nrf2抑制剂鸦胆子苦醇0.4 mg/kg;T+H组和T+H+B组于造模后1和6 h时腹腔注射富氢液10 ml/kg。造模后24 h时, 收集支气管肺泡灌洗液(BLAF)测定蛋白浓度, 取右颈总动脉血和肺组织, 采用ELISA法测定血清和肺组织TNF-α、IL-10和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的水平, 测定肺组织湿重/干重(W/D)比值, HE染色后观察肺组织病理学结果并进行评分, 采用Western blot法检测肺组织核Nrf2、总Nrf2和HO-1表达, RT-PCR法检测肺组织HO-1 mRNA表达。结果与S组相比, T组和T+H组BALF蛋白...     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂丙戊酸对脓毒症相关性脑病小鼠认知功能的影响

目的探讨组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂丙戊酸(VPA)对脓毒症相关性脑病(SAE)小鼠认知功能的影响。方法采用盲肠结扎穿孔法(CLP)建立SAE模型。成年雄性C57BL/6小鼠36只随机均分为三组:假手术+生理盐水组(Sham组)、CLP+生理盐水组(CLP组)及CLP+VPA组(VPA组)。术后15d起每日腹腔注射生理盐水10ml/kg或VPA 100mg/kg,连续注射14d。术后29d行Morris水迷宫测试。术后33d行空间探索实验,记录探索时间。行为学测试后取小鼠海马组织,采用Western blot法检测HDAC1、HDAC2及Caspase-3的含量,ELISA法检测IL-1β的含量。结果与Sham组比较,CLP组探索时间明显缩短,HDAC2、Caspase-3及IL-1β含量明显增高(P0.05);与CLP组比较,VPA组小鼠探索时间明显延长,HDAC2、Caspase-3及IL-1β含量明显降低(P0.05);各组HDAC1含量差异无统计学意义。结论 VPA改善SAE小鼠认知功能的损伤,这可能与降低海马中HDAC2、Caspase-3及IL-1β含量有关。     

海马神经细胞线粒体通透性转换孔在富氢液减轻大鼠全脑缺血再灌注损伤中的作用

目的 评价海马神经细胞线粒体通透性转换孔(mPTP)在富氢液减轻大鼠全脑缺血再灌注损伤中的作用.方法 雄性SD大鼠72只,体重250 ～ 300 g,采用随机数字表法,将其随机分为6组(n=12):假手术组(S组)、缺血再灌注组(IR组)、生理盐水组(NS组)、富氢液组(H组)、苍术苷组(A组)和富氢液+苍术苷组(HA组).采用四血管阻塞法建立大鼠全脑缺血再灌注模型,缺血15 min后恢复灌注.H组和HA组于再灌注即刻腹腔注射富氢液5 ml/kg,其余组腹腔注射等容量生理盐水;A组和HA组于再灌注前10 min行侧脑室注射苍术苷15 μl,NS组和H组侧脑室注射等容量生理盐水.再灌注24h时行神经行为学损伤评分后各组随机处死8只大鼠,迅速断头,分离海马神经细胞线粒体,采用分光光度计法测定mPTP的开放程度,Rhodamine123法测定线粒体膜电位.再灌注72 h时各组处死4只大鼠,取海马组织,光镜下观察CA1区病理学结果,计数该区神经细胞存活数.结果 与S组比较,其余组再灌注24h时行为学损伤加重,mPTP活性升高,线粒体膜电位降低(P＜0.05);与IR组比较,H组和HA组再灌注24h时行为学损伤减轻,mPTP活性降低,线粒体膜电位升高(P＜0.05);与H组比较,HA组行为学损伤加重,mPTP活性升高,线粒体膜电位降低(P＜0.05).再灌注72 h时HA组较IR组神经细胞存活数增加(P＜0.05),H组海马CA1区神经元损伤较IR组、NS组、A组和HA组减轻.结论 富氢液可减轻大鼠全脑缺血再灌注损伤,其机制与抑制海马神经细胞mPTP开放,减少线粒体膜电位降低,从而维持线粒体功能有关.     

鞘内注射人羊水外泌体对小鼠神经病理性痛的影响

目的评价鞘内注射人羊水外泌体对小鼠神经病理性痛的影响。方法清洁级健康雄性昆明小鼠18只, 7～8周龄, 体质量30～35 g, 按照随机数字法分为3组(n=6):假手术组(Sham组)、坐骨神经选择性损伤组(SNI组)和坐骨神经选择性损伤+人羊水外泌体组(SNI+hAF exo组)。采用坐骨神经选择性损伤法制备小鼠神经病理性痛模型。另取3只小鼠, 制备神经病理性痛模型;于造模后1、2和3 d时, 鞘内注射PKH-26标记的人羊水外泌体7 μl;给药结束后10 h处死小鼠, 荧光显微镜下观察损伤侧腰膨大脊髓背角摄取人羊水外泌体情况。于造模后第1、2和3天, SNI+hAF exo组鞘内注射1 μg/μl人羊水外泌体7 μl, Sham组和SNI组鞘内注射PBS 7 μl。分别于造模前1 d和造模后1、3、5、7 d时测定机械缩足反应阈(MPWT)。造模后7 d痛阈测定结束后处死小鼠取同侧脊髓腰膨大, 采用Western blot法检测损伤侧脊髓CD11b、IL-1β和IL-10的表达。结果荧光显微镜下可见, 神经病理性痛小鼠损伤侧腰膨大脊髓背角可以摄取羊水外泌体。与Sham组比较, SN...     

自噬在氢气减轻脓毒症小鼠心肌损伤中的作用

目的评价自噬在氢气减轻脓毒症小鼠心肌损伤中的作用。方法清洁级健康雄性C57BL/6J小鼠192只, 6～8周, 体质量20～25 g, 采用随机数字表法分为6组(n=32):假手术组(Sham组)、假手术+氢气组(Sham+H2组)、脓毒症组(S组)、脓毒症+氢气组(S+H2组)、脓毒症+巴佛洛霉素组(S+BafA1组)和脓毒症+氢气+巴佛洛霉素组(S+H2+BafA1组)。采用盲肠结扎穿孔(CLP)法制备脓毒症模型。Sham+H2组、S+H2组及S+H2+BafA1组于CLP后1和6 h吸入2%氢气1 h。S+BafA1组和S+H2+BafA1组于CLP后1 h腹腔注射巴佛洛霉素A1 1 mg/kg。每组随机取20只小鼠, 记录CLP后7 d的生存情况。于CLP后24 h处死小鼠, 光镜下观察心肌组织病理学改变, 进行病理学评分, ELISA法检测血清cTnI浓度, 采用Western blot法检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)和P62表达水平, 计算LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值。结果与Sham组比较, S组生存率降低, 血清cTnI浓度和心肌组织病理学评分升高, 心肌组织P62表达上调...     

白芦藜醇对小鼠脓毒症相关性脑病炎性损伤的保护作用

目的 探讨沉默信息调控因子1 (sirtuin 1,Sirt1)的天然激动剂白芦藜醇(resveratrol,Res)对脓毒症相关性脑病(sepsis-associated encephalopathy,SAE)炎性损伤的保护作用.方法 采用盲肠结扎穿孔(cecal ligation and puncture,CLP)方法制作脓毒症小鼠模型,18只C57B/L小鼠按随机数字表法分为3组,每组6只:假手术组(Sham组)、CLP脓毒症模型组(CLP组)以及CLP+Res注射组(Res组).术后24 h脑组织取材,末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的缺口末端标记法(terminaldeoxynucleotidyl transferase mediated nick end labelling,TUNEL)观察细胞凋亡情况;分离皮质和海马,采用实时定量聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)分别检测Sirt1、含热蛋白结构域NOD样受体家族蛋白-3(NLR family pyrin domain containing-3 protein,NALP3)和白细胞介素(interleukin,IL)-1β的mRNA含量.结果 TUNEL染色后电镜下观察,海马Res组阳性细胞数量少于CLP组,凋亡细胞多集中于海马CA1区.Res组小鼠海马和皮质的Sirt1 mRNA的相对表达水平分别为4.62±0.64和4.60±0.61,显著高于Sham组和CLP组(P＜0.01).Res组海马和皮质的NALP3相对表达水平分别为0.86±0.26和0.94±0.35,显著低于CLP组(P＜0.05);与Sham组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).Res组海马的IL-1β mRNA相对表达水平为0.57±0.17,显著低于Sham组和CLP组,差异有统计学意义(P＜0.01);Res组皮质的IL-1β mRNA相对表达水平为1.61±0.44,与Sham组和CLP组相似,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 SAE时IL-1β在海马区引起的炎性损伤较皮质区明显,Sirt1激动剂白芦藜醇对SAE炎性损伤具有保护作用.     

丹酚酸B对脓毒症小鼠血管平滑肌细胞炎症反应的影响：circACTA2在其中的作用

目的评价丹酚酸B(Sal B)对脓毒症小鼠血管平滑肌细胞(VSMC)炎症反应的影响及circACTA2在其中的作用。方法在体实验:健康雄性C57BL/6小鼠81只, 6～8周龄, 采用随机数字表法分为3组(n=27):假手术组、脓毒症组和Sal B组。采用盲肠结扎穿孔法制作脓毒症模型。模型制备成功后, Sal B组腹腔注射Sal B 7 mg/kg, 1次/d, 连续2 d。每组随机取20只小鼠用于造模后7 d内测定SBP、DBP、MAP、全血乳酸(Lac)浓度, 记录生存情况。造模后48 h时每组随机取7只小鼠, 取动脉血管组织, 采用免疫荧光染色法测定IL-1β表达, 分别采用Western blot法和qRT-PCR法测定IL-1β、TNF-α、IL-6及其mRNA的表达, 采用qRT-PCR法测定circACTA2的表达。细胞实验:小鼠动脉VSMC培养后, 采用随机数字表法分为6组(n=3):对照组(C组)、LPS组、Sal B组、si-circACTA2+C组、si-circACTA2+LPS组和si-circACTA2+Sal B组。LPS组采用LPS(终浓度1 μg/ml...     

盐酸戊乙奎醚预处理对小鼠反复缺血?再灌注脑损伤时细胞外信号调节激酶1/2的影响

目的探讨盐酸戊乙奎醚预处理对小鼠反复缺血-再灌注(ischemia reperfusion, IR)脑损伤时细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)的影响。方法 SPF级成年C57BL/6J小鼠96只,6～8周龄,体重16～25 g,按照随机数字表法分为三组:盐酸戊乙奎醚组(PHC组)、IR组和假手术组(Sham组),每组32只。Sham组腹腔注射等容量生理盐水,30 min后分离双侧颈总动脉但不夹闭;IR组腹腔注射等容量生理盐水,30 min后分离并夹闭双侧颈总动脉,建立反复IR脑损伤模型;PHC组腹腔注射盐酸戊乙奎醚1.0 mg/kg,30 min后采用双侧颈总动脉夹闭术建立反复IR脑损伤模型。采用Morris水迷宫实验评估术前及术后学习记忆能力,随后处死小鼠,留取海马组织并测定其湿/干重比(W/D)。采用伊文斯蓝(EB)法检测血脑屏障的通透性。采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)测定海马组织ERK1/2 mRNA表达量,Western blot法测定海马组织磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白含量。结果与Sham组比较,术后3、7 d IR组逃避潜伏期和游泳距离明显延长(P0.05)。与IR组比较,术后3、7 d PHC组逃避潜伏期和游泳距离明显缩短(P0.05)。与Sham组比较,IR组海马组织W/D和脑组织EB含量明显升高P0.05)。与IR组比较,PHC组海马组织W/D和脑组织EB含量明显降低(P0.05)。与Sham组比较,IR组海马组织ERK1/2 mRNA表达量和p-ERK1/2蛋白含量明显升高(P0.05)。与IR组比较,PHC组海马组织ERK1/2 mRNA表达量和p-ERK1/2蛋白含量明显降低(P0.05)。结论盐酸戊乙奎醚预处理可通过抑制海马组织ERK 1/2激活而减轻小鼠反复缺血-再灌注脑损伤并改善其学习记忆能力。     

DNA甲基转移酶在脓毒症小鼠急性肺损伤中的作用

目的评价DNA甲基转移酶在脓毒症小鼠急性肺损伤中的作用。方法健康雄性C57BL/6小鼠48只, 6～8周龄, 体重20～25 g, 采用随机数字表法分为4组(n=12):假手术组(Sham组)、假手术+DNA甲基转移酶抑制剂组(Sham+5-Aza组)、脓毒症组(Sepsis组)和脓毒症+DNA甲基转移酶抑制剂组(Sepsis+5-Aza组)。采用盲肠结扎穿孔(CLP)法制备脓毒症小鼠急性肺损伤模型。于CLP后24 h时处死小鼠取肺组织, 提取DNA利用比色法测定全基因组DNA甲基化水平, 提取RNA采用实时荧光定量PCR法检测DNA甲基转移酶(DNMTl、DNMT3a、DNMT3b)的mRNA表达, 确定肺湿重/干重比值, HE染色观察肺组织病理学结果, 采用ELISA法测定IL-6、TNF-α、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、MDA含量、SOD和过氧化氢酶(CAT)活性。结果与Sham组比较, Sepsis组和Sepsis+5-Aza组小鼠CLP后24 h时肺组织全基因组甲基化水平升高, DNMT1和DNMT3a的mRNA表达上调, 肺组织病理学损伤评分和肺湿重/干重比值升高, ...     

甲酰基肽受体1促进创伤性脑损伤后小胶质细胞诱导的神经炎症

目的观察模式识别受体在创伤性脑损伤(TBI)后炎性反应中的作用, 并探讨可能的调控机制。方法将成年C57小鼠按照随机数字表法随机分为假手术组(Sham组)和TBI组, 每组各3只, 分别将Sham组正常皮层组织和TBI后3 d损伤周围皮层组织进行转录组测序分析;将小鼠随机分为Sham组和4个不同时间点TBI组(术后6 h、1 d、3 d和7 d), 每组各6只, 通过蛋白质印迹法(Western blot)和免疫荧光检测Fpr1的表达变化情况;然后将小鼠随机分为Sham组、TBI组、TBI+溶剂组和TBI+HCH6-1(Fpr1抑制剂)干预组, 每组各6只, 通过Western blot、脑含水量测定和行为学检测等实验评估各组炎性反应和神经功能等。两组比较采用t检验;多组间比较采用单因素方差分析。结果 TBI组损伤周围皮层组织Fpr1的蛋白表达水平在第3天高于Sham组最显著(相对表达量为2.480±0.331, t=7.757, P<0.01), 且主要表达于小胶质细胞。TBI+HCH6-1(Fpr1抑制剂)干预组中炎症分子IL-1β、IL-18、TNF-α、Caspase-1...     

脑组织IL-6在小鼠心肌梗死后认知障碍中的作用

目的评价脑组织IL-6在小鼠心肌梗死后认知障碍中的作用。方法选取SPF级健康雄性C57/BL6J小鼠40只, SPF级健康雄性IL-6Rαflox/flox:CAMKⅡCre(IL-6RαNKO)小鼠40只, 9月龄, 体质量34～39 g, 采用随机数字表法, 将上述小鼠分别分为2组(n=20):假手术组(Sham组、IL-6RαNKO-Sham组)和心肌梗死组(MI组、IL-6RαNKO-MI组)。采用结扎冠状动脉左前降支制备心肌梗死模型。心肌梗死模型制备后28 d, 采用心脏超声评估心脏功能, 采用巴恩斯迷宫评估认知功能。随后处死小鼠, 取脑组织, 采用免疫荧光染色法检测海马CA3区IL-6、c-Fos、小胶质细胞活化标志物离子钙结合衔接分子(Iba1)、星形胶质细胞活化标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达水平。透射电镜观察突触结构, 计数突触数量, 测定突触后致密区(PSD)厚度。结果与各假手术组相比, 心肌梗死组射血分数和短轴缩短率降低, 左室收缩末期内径升高(P<0.05)。与Sham组相比, MI组巴恩斯迷宫潜伏期延长, 海马CA3区IL-6、c-Fos、GFA...     

基于RNA-seq的脓毒症相关性脑病小鼠海马转录组分析及竞争性内源性RNA调控网络的构建

目的采用转录组测序技术(RNA-seq)筛选脓毒症相关性脑病(SAE)小鼠海马差异表达的长链非编码RNA(lncRNA)及mRNA, 构建竞争性内源性RNA(ceRNA)调控网络。方法清洁级健康雄性C57BL/6小鼠10只, 6～8周龄, 体质量20～25 g, 采用随机数字表法分为2组(n=5):假手术组(Sham组)和脓毒症组(Sepsis组)。Sepsis组采用盲肠结扎穿孔(CLP)法制备小鼠脓毒症模型, Sham组只开腹不进行盲肠结扎和穿孔。分别于术前1 d及术后3 d时行Morris水迷宫实验和条件恐惧实验检测小鼠认知功能。随后Sham组随机处死3只小鼠, Sepsis组处死认知功能测试最差的3只小鼠, 取海马组织, 通过BGISEQ-500平台行转录组测序, 得到差异表达的mRNA和lncRNA, 测序结果通过深圳华大基因科技服务有限公司提供的Dr.Tom平台行可视化分析, 利用Cytoscape软件构建ceRNA调控网络。结果与Sham组比较, Sepsis组逃避潜伏期延长, 靶向限停留时间百分比和僵直时间百分比降低(P<0.05)。转录组数据分析共获得差异表达的l...     

富氢液对大鼠全脑缺血-再灌注损伤后XIAP和Smac的影响

目的探讨富氢液对大鼠全脑缺血-再灌注损伤后X连锁凋亡蛋白抑制剂(XIAP)和第2个线粒体源胱天蛋白酶激活剂(Smac)的影响。方法成年雄性SD大鼠30只,随机均分为三组:假手术组(S组)、缺血-再灌注组(IR组)和富氢液组(H组)。采用经食管起搏诱发室颤建立大鼠全脑缺血模型。H组于再灌注即刻和6h时腹腔注射富氢液5ml/kg,IR组同时腹腔注射等容量生理盐水。再灌注24h行神经功能缺损评分(NDS评分)后处死,应用HE染色,光镜下观察海马CA1区病理学改变,计数海马CA1区锥体细胞,Western blot法检测脑组织中caspase-9,XIAP和Smac的蛋白表达,免疫组化法检测海马CA1区caspase-3的表达。结果与S组比较,IR组NDS评分明显降低,海马CA1区正常锥体细胞数明显减少(P0.05),再灌注24hXIAP表达减少,Smac和caspase-9表达明显增加(P0.05);与IR组比较,H组大鼠神经功能损伤明显减轻,海马CA1区正常锥体细胞数明显增加(P0.05),再灌注24hXIAP表达增加,Smac和caspase-9表达明显减少(P0.05)。结论富氢液能有效减轻大鼠全脑缺血-再灌注损伤,其机制可能是促进XIAP和抑制Smac表达,提高XIAP/Smac比值,从而发挥脑保护的作用。     

富氢液联合浅低温对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响

目的 观察富氢液联合浅低温对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响.方法 雄性SD大鼠50只,周龄9～10周,体重250～300 g,随机分为5组(n=10):假手术组(S组)、脑缺血再灌注组(IR组)、富氢液组(H组)、浅低温组(M组)、富氢液+浅低温组(HM组).IR组、H组、M组和HM组采用结扎双侧颈总动脉的方法制备大鼠脑缺血再灌注模型,缺血15 min,再灌注6 h.H组和HM组于再灌注即刻腹腔注射富氢液5 ml/kg,其余3组腹腔注射等容量生理盐水.同时S组、IR组和M组维持直肠温37～38 ℃;M组和HM组于15 min内将直肠温降至32～34 ℃,并维持6 h.再灌注6 h时处死大鼠,取一侧海马组织,分别行尼氏染色和HE染色,光镜下观察病理学结果;取另一侧海马组织,采用Western blot法测定CA1区HO-1表达、MDA和TNF-α的含量.结果 H组、M组和HM组病理学损伤较IR组减轻,其中HM组减轻最明显.与S组比较,IR组、H组、M组和HM组海马HO-1表达上调,MDA和TNF-α的含量增加(P＜0.05);与IR组比较,H组、M组和HM组海马HO-1表达上调,MDA和TNF-α的含量降低(P＜0.05);与H组和M组比较,HM组海马HO-1表达上调,MDA和TNF-α的含量降低(P＜0.05);H组和M组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 富氢液联合浅低温可减轻大鼠脑缺血再灌注损伤,可能与上调海马HO-1的表达,降低MDA和TNF-α的含量有关.