微管干预剂对大鼠缺氧心肌细胞能量生成的影响

目的 了解缺氧条件下微管干预剂对大鼠心肌细胞能量生成的影响。方法 常规分离、培养大鼠心肌细胞，分为单纯缺氧组、缺氧＋秋水仙碱（微管解聚剂）组及缺氧＋5、10、15 mmol／L紫杉醇（微管稳定剂）组。每组细胞加入刺激剂后，缺氧培养0．5、1．0、3．0、6．0、12．0、24．0h。采用锥虫蓝染色检测细胞死亡率，常规比色法检测细胞肌酸激酶（CK）活性，高效液相色谱法检测细胞腺苷三磷酸（ATP）及腺苷二磷酸（ADP）含量。结果 （1）缺氧＋秋水仙碱组及缺氧＋15mmol／L紫杉醇组细胞培养1．0～24．0h死亡率均高于单纯缺氧组（P〈0．01）；缺氧＋5、10mmoL／L紫杉醇组6．0～24．0h时均低于单纯缺氧组（P〈0．05）。（2）缺氧＋秋水仙碱组培养1．0～12．0h时CK活性均高于单纯缺氧组（P〈0．01）。0．5～12．0h时，缺氧＋15mmoL／L紫杉醇组CK活性均高于单纯缺氧组（P〈0．01）；缺氧＋5、10mmol／L紫杉醇组低于单纯缺氧组（P〈0．05或P〈0．01）。（3）缺氧＋5mmol／L紫杉醇组培养0．5～6．0h ATP含量[（49．9±2．8）、（40．7±2．0）、（25．8±1．9）、（19．1±1．2）μg／10^6个细胞]高于单纯缺氧组[（42．9±5．8）、（29．5±1．8）、（18．2±0．9）、（14．1±0．7）μg／10^6个细胞，P〈0．05或P〈0．01]。0．5～12．0 h时，缺氧＋秋水仙碱组低于单纯缺氧组（P〈0．01）；缺氧＋15mmol／L紫杉醇组低于单纯缺氧组及缺氧＋10mmol／L紫杉醇组（P〈0．01）。各组ADP含量变化趋势与ATP相反。结论 微管解聚剂和高浓度微管稳定剂可使缺氧心肌细胞ATP含量锐减。适宜浓度的微管稳定剂在缺氧早期可促进心肌细胞能量生成，对心肌具有保护作用。     

微管解聚剂在缺氧早期大鼠心肌细胞线粒体损害中的作用

目的了解微管解聚剂在缺氧早期大鼠心肌细胞线粒体损害中的作用。方法常规方法分离培养Wistar乳鼠心肌细胞，分为正常组、微管解聚组（培养液中加入4μmol／L秋水仙碱）、缺氧组、缺氧解聚组（4μmol／L秋水仙碱联合缺氧处理）。分别采用激光共聚焦显微镜检测4组细胞线粒体分布情况，透射电镜观察线粒体形态变化，生物氧耗呼吸仪检测呼吸调节比（RCR），高效液相色谱仪检测腺苷三磷酸（ATP）含量。缺氧组及缺氧解聚组所设时相点为缺氧后10、20、30、60min。结果正常组线粒体呈粒状、排列规则，微管解聚组较之发生轻微改变：缺氧20、30、60min，缺氧解聚组线粒体分布的无规律性及形态结构损害均较缺氧组严重；细胞RCR分别为1．58±0．37、1．51±0．32、1．12±0．11，明显低于缺氧组3．85±0．56、2．98±0．44、1．79±0．73（P〈0．01）；ATP含量分别为（419±83）、（326±73）、（295±58）ng／mg，亦明显低于缺氧组（475±68）、（397±59）、（336±67）ng／mg（P〈0．01）。结论微管解聚剂可加重缺氧引起的心肌细胞线粒体分布紊乱和形态结构损害，以及线粒体呼吸功能和能量代谢障碍，它在线粒体缺氧损害机制中具有重要作用。     

热休克蛋白90对大鼠缺氧心肌细胞丝氨酸苏氨酸蛋白激酶表达的影响

目的探讨内源性热休克蛋白90（HSP90）在缺氧心肌细胞丝氨酸苏氨酸蛋白激酶（AKT）相关信号通路中的作用。方法建立新生Wistar大鼠心肌细胞缺氧模型，将细胞分为正常组、缺氧组、加入HSP90特异性阻断剂格尔德霉素后再缺氧组（格尔德霉素＋缺氧组）。于缺氧后1、3、6、12、24、48h用噻唑蓝法检测心肌细胞的活力；缺氧24h，原位缺口末端标记法检测心肌细胞凋亡指数（AI）；缺氧1、3、6、12、24h，蛋白质印迹法检测大鼠心肌细胞中内源性HSP90及AKT表达水平。结果（1）缺氧24、48h，缺氧组、格尔德霉素＋缺氧组细胞活力均较正常组明显下降（P〈0．05）；格尔德霉素＋缺氧组细胞活力缺氧12h即开始明显下降，缺氧48h时明显低于缺氧组（P〈0．05）。（2）缺氧24h，缺氧组细胞AI为（10．7±1．2）％，明显高于正常组[（1．9±0．3）％．P〈0．05]；格尔德霉素＋缺氧组细胞AI为（26、3±5．3）％，明显高于缺氧组（P〈0．01）。（3）缺氧12h，缺氧组心肌细胞内源性HSP90及AKT表达水平高于正常组与格尔德霉素＋缺氧组；缺氧24h，缺氧组有所下降．格尔德霉素＋缺氧组则下降更明显。结论内源性HSP90对维持心肌细胞的活力有重要作用．缺氧心肌细胞AKT表达水平可受内源性HSP90表达水平的影响。     

全身麻醉对剖宫产产妇分娩新生儿的影响

目的探讨剖宫产产妇实施全身麻醉对新生儿的影响。方法选择全身麻醉或硬膜外阻滞下行择期剖宫产产妇各30例，分别组成全身麻醉组和硬膜外阻滞组。全身麻醉组产妇先后静脉注射异丙酚2mg／kg、琥珀胆碱1．5mg／kg、并给予气管插管。麻醉维持：40％笑气＋60％氧气＋0．5MAC异氟醚，及维库溴铵0．08mg／kg，硬膜外阻滞组产妇应用1．73％碳酸利多卡因4ml＋5ml＋5ml（含1：200000肾上腺素）椎管内注入。两组分别于胎儿娩出后立即抽取新生儿脐动脉血进行血气分析，并记录两组新生儿出生后1d～5d的新生儿神经行为评分（NBNA）：新生儿行为能力、被动肌张力、主动肌张力、原始反射、一般状态。结果①血气分析：全身麻醉组新生儿pH值、二氧化碳分压（PaCO2）、氧分压（PO2）、动脉氧饱和度（SaO2）及碳酸氢根（HCO3^-）分别为7．21±0．08、（56．1±16．5）mmHg、（23．1±11．0）mmHg、（29．9±20．6）％、（19．1±3．4）（mmoL／L）。硬膜外阻滞组新生儿分别为7．37±0．06、（51．3±9．7）mmHg、（17．5±6．9）mmHg、（21．8±12．7）％、（21．6±3．3）（mmoL／L）。②NBNA：全身麻醉组第1d，2d，3d，5d的NBNA分别为（36．1±2．8）、（37．0±5．1）、（38．3±2．3）、（38．7±2．3）分。硬膜外阻滞组分别为（37．2±2．5）、（38．7±1．9）、（39．1±4．5）、（39．2±5．1）分。两组各项评分比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论剖宫产产妇采用常规剂量药物实施全身麻醉对新生儿安全无明显影响。     

依那普利拉对严重烫伤大鼠早期心肌损害的防治作用

目的了解依那普利拉对烧伤后早期心肌损害的防治效果。方法将60只SD大鼠制成30％TBSAⅢ度烫伤模型，分为单纯烫伤组（30只，伤后常规补液）和依那普利拉组（30只，伤后立即一次性腹腔注射依那普利拉1mg／kg并行常规补液）。另取6只大鼠不致伤作为正常对照组。检测正常对照组及2组烫伤大鼠伤后1、3、6、12、24h血清心肌肌钙蛋白I（cTnI）的含量、心肌型肌酸激酶同工酶（CK—MB）的活性，并观察心肌组织病理学变化。结果（1）单纯烫伤组大鼠伤后各时相点cTnI、CK—MB均显著高于正常对照组（P〈0．01）。依那普利拉组伤后各时相点cTnI为（1．32±0．12）-（2．47±0．22）μg／L，均显著低于单纯烫伤组[（6．42±0．96）-（15．10±3．69）μg／L，P〈0．01]；其各时相点CK—MB活性为（438±68）-（5569±322）U／L，亦均低于单纯烫伤组[（2556±74）-（8047±574）U／L，P〈0．05或P〈0．01]。（2）与正常对照组比较，单纯烫伤组伤后出现心肌细胞浊肿、间质血管扩张充血、炎性细胞浸润等病理改变；依那普利拉组病变程度较之减轻。结论大鼠严重烫伤后早期心肌组织受损明显，依那普利拉能显著减轻这些损害。     

半肝血流完全阻断无血肝切除术的临床研究

目的探讨半肝血流完全阻断下无血肝切除术的临床意义。方法对两组各14例原发性肝癌患者分别施行半肝血流完全阻断无血肝切除术（A组）和全肝入肝血流阻断肝切除术（B组）,比较两组患者术中肝血流阻断时间、术中出血量、肝切除体积、术后肝功能恢复情况、并发症发生率等指标。结果两组在肝血流阻断时间和肝切除体积无显著差异的条件下,A组的术中出血量平均为（296±240）ml,B组平均为（582±497）ml,两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。术后第1、3、7天血清前白蛋白水平A组为（164±39）mg／L、（111±17）mg／L和（104±23）mg／L,显著高于B组的（134±34）mg／L、（90±22）mg／L和（82±35）mg／L（P〈0．05）,两组其他观察指标差异无统计学意义（P〉0．05）。结论半肝血流完全阻断无血肝切除术能显著减少肝切除术中出血量及肝功能损害。     

比较缺血后处理和缺血预适应对大鼠离体心的保护作用

目的比较缺血后处理和缺血预适应对离体大鼠心脏缺血再灌注损伤的保护作用并探讨其机制。方法大鼠随机分为4组：停灌／再灌组（I／R）；预适应组（IPC）；后处理组（Post-con）；预适应加后处理组（IPC＋Post-con），行Langendorff心脏灌流。观测血流动力学，心肌梗死面积，CK、LDH、SOD、MDA，超微结构，细胞凋亡，bcl-2和bax的表达。结果与I／R比较，IPC、Post-con和IPC＋Post-con均能显著减小梗死面积（分别为：46．34±2．80，24．20±2．31、24．40±2．39、25．58±3．15，P〈0．01），减少凋亡指数（分别为：1．84±0．44，1．02±0．41、1、10±0、37、0．96±0．27，P〈0．05），且3组之间指标差异无统计学意义（P〉0．05）。结论IPC和Post-con均能改善心脏缺血再灌注后的梗死面积，抗凋亡，但两者联合应用并不能产生更好的保护效果。     

膀胱出口部分梗阻大鼠逼尿肌胆碱能和肾上腺素能受体变化的研究

目的观察大鼠膀胱出口部分梗阻后不同时间逼尿肌胆碱能（M）、肾上腺素能β及α1受体的变化。方法40只大鼠分为对照组、假手术组、梗阻2周组和梗阻5周组,每组10只。放射配基法测定逼尿肌M、β及α1受体密度和平衡解离常数。离体逼尿肌条拉力实验观察梗阻2周和5周后逼尿肌对氯化氨甲酰胆碱和异丙肾上腺素产生的收缩和舒张反应。结果4组M受体密度分别为（121．87±15．32）、（122．34±26．56）、（138．66±24．16）和（131．54±23．09）fmol／mg,β受体密度分别为（83．18±7．51）、（82．20±6．24）、（92．21±6．53）和（86．32±5．02）fmol／mg。梗阻组M受体和β受体密度与对照组及假手术组相比,差异有统计学意义（P〈0．05）,梗阻5周组较2周组降低（P〈 0．05）。4组α1受体密度分别为（30．08±3．51）、（31．07±2．99）、（29．56±3．21）和（28．31±1．16） fmol／mg,梗阻组与对照组及假手术组相比,差异无统计学意义（P〉0．05）。对照组M、β、α1受体平衡解离常数分别为（2．18±0．13）、（5．63±0．44）、（4．68±0．34）mmol／L,假手术组分别为（2．54±0．96）、（5．74±0．41）、（4．79±0．42）mmol／L,梗阻2周组分别为（2．22±0．36）、（5．66±0．32）、（4．56±0．33）mmol／L,梗阻5周组分别为（2．32±0．25）、（5．56±0．19）、（4．55±0．18）mmol／L,组间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。氯化氨甲酰胆碱和异丙肾上腺素引起逼尿肌条的收缩和舒张均呈浓度依赖性反应（P〈0．05）。结论大鼠膀胱出口部分梗阻后可能引起逼尿肌M、β及α1受体的改变,导致膀胱功能变化。     

低温氧合血微流量持续灌注保存大鼠心脏的效果

目的探讨低温氧合血微流量持续灌注保存大鼠心脏的效果。方法切取Wistar大鼠心脏，随机分为3组，实验组的心脏以4℃氧合血微流量（1ml／h）持续灌注低温保存10h；对照组的心脏以4℃St．Thomas液微流量持续灌注低温保存10h；单纯冷保存组的心脏以4℃St．Thomas液单纯浸泡保存10h。保存后的鼠心用Langendorff装置灌注，生物机能实验系统测定血流动力学指标；高效液相色谱仪测定心肌细胞的ATP含量；光镜和电镜观察心肌组织和线粒体的形态学改变。结果在再灌注30min时，实验组的左心室收缩压（LVSP）为（38．25±3．84）mm Hg，左心室发展压（LVDP）为（32．54±4．01）mm Hg，左心室压力微分（±dp／dt）为（1080±123）mm Hg／s；对照组的LVSP为（34．48±4．68）mm Hg，LVDP为（19．27±4．63）mmHg，±dp／dt为（935±196）mmHg／s；单纯冷保存组的LVSP为（32．14±4．95）mmHg，LVDP为（16．99±4．85）mmHg，±dp／dt为（825±302）mmHg／s，实验组的上述血流动力学指标优于对照组和单纯冷保存组（P〈0．05）。实验组心肌细胞的ATP含量为（1．759±0．502）μmol／L，对照组的ATP为（1．453±0．573）μmol／L，单纯保存组的ATP为（1．059±0．463）μmol／L，实验组的ATP含量明显高于对照组和单纯冷保存组（P〈0．05）。实验组的心肌组织和细胞超微结构的变化轻于对照组和单纯冷保存组。结论低温氧合血微流量持续灌注能改善大鼠心脏的保存效果。     

恶性梗阻性黄疸经皮肝穿刺胆管内外引流术前后T淋巴细胞亚群、肿瘤坏死因子变化及其意义

目的探讨经皮肝穿刺胭管内外引流术对恶性梗阻性黄疸（MOJ）患者免疫功能的影响。方法将我院2000年11月至2007年3月收治的108例恶性肿瘤致梗阻性黄疸患者按胆汁引流途径分成2组：外引流组52例，内引流组56例。分别于术前1d、术后1周检测肝功能、血清肿瘤坏死因子（TNF-α）及细胞金疫功能指标，观察各指标术前术后的变化，与健康对照组进行比较。结果外、内引流总胆红素（TBIL）分别由术前（344．55±106．57）、（322．20±111．51）／μmolL降为术后1周的（291．57±104．47）、（284．73±105．96）／／L，两组总胆红素均较术前明显下降（P〈0．05），两组间差异无统计学意义（P〉0．05）。TNF-α在外、内引流组分别由术前的（109．59±20．96）、（110．99±17．25）ng／L降为术后的（105．33±20．60）、（84．93±14．44）ng／L，内引流组较术前显著改善（P〈0．01）；内引流组患者术后外周血T淋巴细胞亚群（TLS）CD4^＋、CD3^＋、CD4^＋／CD8^＋值较术前明显增高，术后CD8^＋则明显低于术前（P〈0．05）；而外引流组TNF-α及外周血CD4^＋、CD3^＋、CD8^＋、CD4^＋／CD8^＋与术前比较，差异无统计学意义（P〉0．05），两组问存在明显差异。结论经皮肝穿刺胆道引流术是治疗恶性肿瘤致梗阻性黄疸有效的方法；恶性肿瘤致梗阻性黄疸时全身免疫功能低下，胆道内引流后细胞免疫功能显著改善。     

PI3K/Akt信号通路在乳化异氟醚预先给药减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用

目的 评价磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/Akt)信号通路在乳化异氟醚预先给药减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用.方法 Wistar乳鼠60只,乳鼠心肌细胞于24孔培养板原代培养后,采用缺氧2 h复氧2 h建立缺氧复氧模型.乳鼠心肌细胞随机分为6组,每组8孔,正常对照组(C组):按正常条件继续培养4 h;A/R组:制备缺氧复氧模型;EI组:于细胞缺氧前即刻在培养液中加入乳化异氟醚,终浓度为1.68 mmol/L;EI+wortmannin(PI3K特异性抑制剂)组(EIW组):于细胞缺氧前即刻在培养液中加入乳化异氟醚和wortmannin,终浓度分别为1.68 mmol/L和100 nmol/L;wortmannin组(W组):于细胞缺氧前即刻在培养液中加入wortmannin,终浓度为100 nmol/L;脂肪乳组(F组):与细胞缺氧前即刻在培养液中加入30%脂肪乳,终浓度为0.05%.复氧2 h时,取细胞培养上清液测定乳酸脱氢酶(LDH)活性、肌钙蛋白I(cTnI)浓度,心肌细胞匀浆后测定超氧化物歧化酶(SOD)活性与丙二醛(MDA)含量,并测定心肌细胞磷酸化Akt(p-Akt)的表达水平.结果 与C组比较,其余5组上清液LDH活性、cTnI浓度和心肌细胞MDA含量升高,心肌细胞SOD活性降低(P<0.05);与A/R组比较,EI组和EIW组上清液LDH活性、cTnI浓度和心肌细胞MDA含量降低,心肌细胞SOD活性升高,F组除心肌细胞SOD活性升高外(P<0.05),其余指标差异均无统计学意义(P>0.05),W组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);与EI组比较,EIW组、W组和F组上清液LDH活性、cTnI浓度和心肌细胞MDA含量升高,心肌细胞SOD活性降低(P<0.05).C组、EIW组、H/R组、F组和EI组心肌细胞p-Akt表达水平依次升高(P<0.05).结论 乳化异氟醚预先给药减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤可能与进一步激活PI3K/Akt信号通路有关.     

PE P-1-血红素加氧酶-1融合蛋白预处理对L02肝细胞缺氧复氧损伤的影响

目的：评价细胞穿透肽PEP-1介导血红素加氧酶-1（HO-1）预处理对L02肝细胞缺氧复氧损伤的影响。方法利用基因工程手段表达和纯化融合蛋白PEP-1-HO-1（PEP-1-heme oxy-genase-1,PEP-1-HO-1）。使用人肝细胞株（HL-7702）建立培养人肝细胞缺氧复氧模型。按实验需要以10％新生牛血清的DMEM液静置培养L02肝细胞,将细胞进行随机分为7组：A组,正常对照组（常规培养）;B组,缺氧复氧组（缺氧复氧组细胞缺氧18 h,复氧6 h）;C组,PEP-1-HO-1预处理组,按PEP-1-HO-1浓度分为5亚组（C1,0．125μmol/L;C2,0．25μmol/L ;C3,0．5μmol/L;C4,1．0μmol/L;C5,2．0μmol/L,缺氧前以PEP-1-HO-1融合蛋白预处理2 h,缺氧18 h,复氧6 h）。复氧结束后,收集各组细胞及培养液上清,检测MDA、LDH、AST、ALT含量及SOD活性。结果缺氧复氧组较正常对照组相比,MDA、LDH、AST及ALT水平明显升高（P＜0．05）,而 SOD 水平下降（P＜0．05）;PEP-1-HO-1预处理组与缺氧复氧组相比,预处理组能明显降低MDA、LDH、AST及ALT水平（P＜0．05）,使得SOD水平上升（P＜0．05）,且在一定浓度下与剂量呈正相关。结论 PEP-1-HO-1融合蛋白预处理可减轻细胞缺氧复氧损伤。     

PKC在缺氧预处理和去甲肾上腺素预处理减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用

目的 评价蛋白激酶C(PKC)在缺氧预处理和去甲肾上腺素预处理减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用.方法 原代培养乳鼠心肌细胞,随机分为6组(n=25):对照组(Ⅰ组)常规培养;缺氧复氧组(Ⅱ组)细胞缺氧3 h,复氧1 h;缺氧预处理组(Ⅲ组)缺氧20 min,复氧20 min后制备缺氧复氧模型;去甲肾上腺素预处理组(Ⅳ组)细胞经终浓度为10-7 mol/L去甲肾上腺素孵育30 min后,去除去甲肾上腺素,再行缺氧复氧;H7+缺氧预处理组(Ⅴ组)细胞经终浓度为5×10-5 mol/L的H7孵育10 min后,去除H7,其余操作同Ⅲ组;H7+去甲肾上腺素预处理组(Ⅵ组)细胞经终浓度为5×10-5 mol/L的H7(PKC活性抑制剂)孵育10 min后,去除H7,其余操作同Ⅳ组.复氧结束后,测定心肌细胞存活率、培养液乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)活性和心肌细胞MDA含量和SOD活性.结果 与Ⅰ组比较,Ⅱ组细胞存活率和SOD活性降低,LDH、CK的活性及MDA含量升高(P＜0.01).与Ⅱ组比较,Ⅲ组和Ⅳ组细胞存活率和SOD活性升高,LDH、CK活性及MDA含量降低(P＜0.01).与Ⅲ组比较,Ⅴ组细胞存活率和SOD活性降低,LDH、CK活性及MDA含量升高(P＜0.01).与Ⅳ组比较,Ⅵ组细胞存活率和SOD活性降低,LDH、CK活性及MDA含量升高(P＜0.05).结论 PKC激活参与了缺氧预处理与去甲肾上腺素预处理减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤.     

血红素加氧酶-1对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的影响

目的 探讨血红素加氧酶-1(HO-1)对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的影响.方法 新生SD大鼠8只,日龄1～3 d,原代培养心肌细胞,随机分为4组:正常对照组(C组)常规培养8 h;缺氧复氧组(HR组)采用缺氧2 h,复氧6 h的方法制备心肌细胞缺氧复氧模型;血晶素组(Hemin组)缺氧前24 h及缺氧即刻,培养基中加入Hemin,终浓度为20 μmol/L;血晶素+锌原卟啉组(Hemin+ZnPP组)缺氧前24 h及缺氧即刻培养基中同时加入Hemin及ZnPP,终浓度均为20 μmol/L.各组细胞均接种于35 mm培养皿(2 ml/皿)或50 ml培养瓶(3 ml/瓶),每组45皿和3瓶.于复氧结束后采用蛋白印迹法测定心肌细胞HO-1表达,台盼蓝染色法测定心肌细胞存活率,应用全自动生化分析仪测定细胞培养液乳酸脱氧酶(LDH)活性,超声破碎细胞离心后取上清,采用硫代巴比妥酸法测定细胞MDA水平,黄嘌呤氧化酶法测定细胞SOD活性.结果 与C组比较,其余3组培养液LDH活性、心肌细胞MDA水平及HO-1表达升高,心肌细胞存活率及SOD活性降低(P＜0.05).与HR组比较,Hemin组培养液LDH活性、心肌细胞MDA水平降低,HO-1表达、心肌细胞存活率及SOD活性升高(P＜0.05),Hemin+ZnPP组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).HR组和Hemin+ZnPP组细胞缺氧复氧损伤明显,Hemin组细胞缺氧复氧损伤减轻.结论 HO-1可减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤.     

不同时间的缺血预处理对肝硬化大鼠缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨缺血预处理(IPC)对肝硬化大鼠缺血再灌注损伤(I/R)的保护作用,并寻找对肝硬化I/R保护作用的最佳有效时间窗和理想方案.方法 通过构建正常大鼠及肝硬化大鼠模型,以正常肝脏I/R(A组)和正常肝脏10-10 min-IPC方案(B组)为对照组,肝硬化组则分别施行单纯I/R(C组)、5-10 min(D组)、8-10min(E组)、10-10 min(F组)及15-10 min(G组)的IPC方案,每组18只,分别在术后1 h、4 h及24 h三个时间点采静脉血,检测血清ALT、AST、LDH及肝组织中MDA、MPO、NO、SOD水平,评价肝功能及肝脏组织炎性浸润及抗损伤程度.结果 肝脏缺血30 min后肝脏功能受损明显,表现为各组的ALT、AST、LDH水平升高,尤以再灌注4 h时显著(P<0.05),但经过缺血预处理后,各IPC组中的NO、MDA、MPO及SOD水平亦显著高于其对应的I/R组,以E组的差别有显著意义(P<0.05).结论 10-10 min的IPC方案对于正常肝脏I/R确有保护作用,而8-10 min的IPC方案能最有效地启动对肝硬化大鼠肝脏I/R的保护作用.     

PEP-1-血红素加氧酶-1融合蛋白转导对大鼠H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤的影响

目的 探讨PEP-1-血红素加氧酶(HO)-1融合蛋白转导对大鼠H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤的影响.方法 构建含人HO-1基因的原核表达质粒pETl5b-PEP1-hHO-1,质粒转化后诱导目的 蛋白PEP-1-HO-1表达.用含15%胎牛血清高糖DMEM培养基培养H9c2心肌细胞,随机分为4组(n=4):正常对照组(C组)常规培养;缺氧复氧组(H/R组)细胞缺氧22 h,复氧8 h;低浓度融合蛋白组(L-HO组)缺氧前用终浓度为1.0 μmol/L PEP-1-HO-1融合蛋白孵育细胞;高浓度融合蛋白组(H-HO组)缺氧前即刻用终浓度为2.0 μmol/L PEP-1-HO-1融合蛋白孵育细胞.复氧结束后收集细胞及培养液上清,采用2,4-二硝基苯肼显色法检测培养液乳酸脱氢酶(LDH)活性,硫代巴比妥酸比色法检测细胞MDA含量,黄嘌呤氧化酶法检测细胞SOD活性.结果 与C组比较,H/R组、L-HO组、H-HO组心肌细胞SOD活性降低,MDA含量升高,培养液LDH活性升高(P＜0.05);与H/R组比较,L-HO组和H-HO组心肌细胞SOD活性升高,MDA含量降低,培养液LDH活性降低(P＜0.05);与L-HO组比较,H-HO组心肌细胞SOD活性升高,MDA含量降低,培养液LDH活性降低(P＜0.05).结论 PEP-1-HO-1融合蛋白转导入大鼠H9c2心肌细胞可减轻细胞缺氧复氧损伤.     

抗氧化剂对去卵巢大鼠骨生物力学和血清生化指标的影响

目的 研究抗氧化剂VitC、VitE及还原璎谷光甘肽(GSH)不同配伍用药方法 对去卵巢骨质疏松症大鼠骨生物力学及血清生化指标的影响,探讨抗氧化剂不同方案对去卵巢大鼠骨质疏松症的治疗作用.方法 4个月龄雌性SD大鼠70只,随机取50只行双侧卵巢切除术,20只行假手术.3个月后随机从手术组和假手术组各取10只大鼠检测体质量、子宫湿蕈、左侧股骨及腰椎骨密度、生物力学特性和血清生化指标Ca<'2+>、肌肝(Cr)、碱性磷酸酶(ALP)水平,以确定骨质疏松模型建立成功.确定模型建立成功后,其余动物分为A(假手术)、B(去卵巢生理盐水对照组,OVX control)、C(VitC+VitE)、D(GSH)、E(VitC+VitE+GSH)五组,每组10只.VitC[750 mg/(kg·d)]、GSH[125 mg/(kg·d)]腹腔注射,VitE[250 mg/(kg·d)]灌胃,模型组每天以生理盐水腹腔注射.3个月后,检测各组动物左侧股骨及第5腰椎生物力学特性和血清生化指标. 结果 检测骨质疏松模型实验中,模型组动物同假手术组相比,体质量明显增加,子宫萎缩,子宫湿重显著降低,左侧股骨及腰椎骨密度明显降低,左侧股骨生物力学最大载荷显著降低,血清Ca<'2+>、ALP、Cr水平升高.抗氧化剂治疗3个月后,与模型组相比,治疗组D、E组左侧股骨最大载荷、弹性载荷以及第5腰椎最大载荷均明显增加;血清ALP各组均显著降低;超氧化物歧化酶(SOD)、谷光苷肽过氧化物酶(GSH-Px)水平和血清抑制OH<'->能力D、E组显著升高;丙二醛水平C、D组显著降低;各组血清Ca<'2+>水平无明显改变. 结论 抗氧化刺崩药组合GSH和GSH+VitC+VitE能明显改善骨生物力学最大载荷和弹性载荷及血清抗氧化指标抑制OH<'->能力、SOD和GSH-Px,对骨质疏松具有较显著改善作用.     

Effect of Pharmacologic Preconditioning with Tetrandrine on Subsequent Ischemia/Reperfusion Injury in Rat Liver

The effect of tetrandrine (TET) pretreatment of Wistar rats subjected to warm hepatic ischemia/reperfusion (I/R) was investigated. After 50 minutes of ischemia in the left and median lobes of the liver and 24 hours of reperfusion (I/R group), the rats were killed. The TET+I/R group rats were pretreated with TET (50 mg/kg body weight IP) 30 minutes prior to the onset of ischemia. Blood samples were taken for measurement of alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), and lactate dehydrogenase (LDH). Tissue was taken from the ischemic lobes for measurement of superoxide dismutase (SOD), malonyldialdehyde (MDA), and myeloperoxidase (MPO); determination of the wet/dry weight (W/D) ratio; and histologic studies. The results showed that ALT, AST, and LDH levels in serum were increased in the I/R group; tissue MDA generation, MPO activity, and the W/D ratio were also increased, accompanied by decreased SOD activity. The serum ALT, AST, and LDH levels, as well as the tissue MPO level and W/D ratio, were lower in the TET+I/R group than in the I/R group; and the SOD level was higher in the TET+IR group than in the I/R group. Moreover, the serum ALT and AST, tissue MDA, and W/D ratio in the TET+I/R group were higher, and the SOD was lower than in the sham group. The histologic examination showed protection against liver damage in the TET+I/R group. The results demonstrated that pretreatment with TET could somewhat protect the liver against I/R injury but does not prevent it. The simultaneous decrease of both lipid peroxide generation and polymorphonuclear neutrophil infiltration in the ischemic liver may explain the acquisition of tolerance following administration of TET.     

丙泊酚对小鼠肝脏缺血再灌注损伤后氧化应激和炎症的影响

目的研究丙泊酚对小鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用及其作用机制。方法 40只健康雄性C57小鼠随机分为假手术组(Sham)、肝脏缺血再灌注损伤组(IRI)、地塞米松组(DEM,5 mg/kg)和丙泊酚组(PPF,20 mg/kg),每组10只。用无创血管夹夹闭左、中叶肝蒂构建70%肝脏缺血再灌注损伤模型。再灌注6 h后,检测血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)和核因子κB(NF-κB)水平;评估肝脏过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、超氧化物歧化酶(SOD)活性,MDA含量和病理形态;并检测血清和和肝脏肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和白介素6(IL-6)的m RNA表达。结果 IRI组ALT、AST和LDH水平分别为(395.12±35.81)U/L、(155.37±19.22)U/L和(776.32±59.27)U/L而PPF组血清中ALT、AST和LDH表达水平分别为(144.81±14.22)U/L、(55.13±6.71)U/L和(439.27±45.12)U/L,较IRI组均明显降低(P0.05)。此外,与IRI组相比,PPF组NF-κB、MDA、TNF-α、IL-1β和IL-6的表达水平均明显降低(P0.05),肝脏病理损伤程度明显减轻,CAT、GPx和SOD活性均明显增高(P0.05)。结论丙泊酚对肝脏缺血再灌注损伤有保护作用,其作用机制与丙泊酚减轻炎症反应和抑制氧化应激相关。