CTLA4Ig转基因治疗器官移植排斥(文献综述)

T细胞活化所致的免疫排斥反应是器官移植的最大障碍.CD28-B7共刺激途径在T细胞活化中起主要作用,应用CTLA4Ig以封闭CD28-B7途径可明显延长移植器官的存活.本文综述CTLA4Ig转基因治疗的方法、效果及其机制.     

CTLA4Ig转基因治疗器官移植排斥

T细胞活化所致的免疫排斥反应是器官移植的最大障碍。CD28-B7共刺激途径在T细胞活化中起主要作用，应用CTLA4Ig以封闭CD28-B7途径可明显延长移植器官的存活。本文综述CTLA4Ig转基因治疗的方法、效果及其机制。     

人CD8+CD28-抑制性T淋巴细胞的体外扩增及其抗原特异性调节作用

目的 探讨在体外大量扩增CD8+CD28-抑制性T淋巴细胞(Ts细胞)的方法,并检验其免疫调节作用.方法 分离健康志愿者全血中CD8+T淋巴细胞,在含不同细胞因子和异体抗原提呈细胞(APC)的培养条件下进行体外扩增.应用流式细胞术对扩增过程中CD28 -细胞亚群的比例进行监测.分为3组进行混合淋巴细胞培养,反应细胞均为CD4+T淋巴细胞:B-APc组以来源于原致敏供者的APC作为刺激细胞,I-APC组以HLA-A、B、DR全错配的无关供者的APC作为刺激细胞,Dynabeads组以包被有抗CD3和CD28单克隆抗体的免疫微球Dynabeads作为刺激细胞;扩增后的Ts细胞作为第三方调节细胞加入混合淋巴细胞培养中,测定其对CD4+T淋巴细胞增殖的抑制作用.结果 在含白细胞介素2(IL-2)+ IL-7+ IL-15的培养条件下,CD8+T淋巴细胞培养后CD8+CD28-T淋巴细胞亚群的比例最高(P＜0.05).B-APC组不加入Ts细胞时,增殖的CD4+T淋巴细胞比例为66.7％,当加入的Ts细胞与反应细胞的比例分别为0.5∶1、0.1∶1和0.02∶1时,增殖的CD4+T淋巴细胞比例分别为16.5％、34.1％和62.6％.Ts细胞对CD4+T淋巴细胞的增殖有明显抑制作用,而在I-APC组和Dynabeads组中,此抑制作用不明显.结论 应用含IL-2+ IL-7+ IL-15的培养条件联合异体APC刺激可以在体外大量扩增Ts细胞,扩增所得Ts细胞在体外对供者CD4+T淋巴细胞的增殖有明显抗原特异性抑制作用.     

阻断CD28/B7和CD134/CD134L共刺激通路对心脏移植排斥反应的影响

CD134-CD134L(也叫OX40-OX40L)通路是活化T细胞进一步增殖、分化为效应细胞和记忆细胞所必需的共刺激信号,是T细胞介导的免疫应答的关键共刺激信号[1].CD134的表达不依赖CD28-B7信号,但是CD28-B7信号可以促进CD134的表达.同时CD28-B7信号和CD134-CD134L信号在时空表达上具有序贯性,分别作用于T细胞活化、增殖、分化的早期和晚期阶段[2,3].我们本文利用排斥反应强烈的不同种系间的心脏移植模型,观察单独和同时阻断CD28-B7和CD134-CD134L信号通路对抗排斥反应的效果.     

胃癌患者外周血调节性T细胞的变化及其意义

目的 探讨胃癌患者外周血中CD4+CD25+T淋巴细胞、CD8+CD28-T淋巴细胞比例的变化及其临床意义.方法 采用流式细胞技术检测30例胃癌患者外周血中CD4+CD25+T淋巴细胞、CD8+CD28-T淋巴细胞玎分比,对照组为30例慢件胃炎患者.结果 胃癌患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞占T淋巴细胞的百分比为8.7%±1.3%,与胃炎患者相比差异无统计学意义.胃癌患者外周血中CD8+CD28-调节性T细胞占T淋巴细胞的百分比为30.3%±3.3%,明显高于胃炎患者的20.3%±2.7%.外周血中CD4+CD25+T淋巴细胞、CD8+CD28-T淋巴细胞百分比与胃癌淋巴结转移、病理分型无明显相关性.结论 外周血中调节性T细胞在胃癌发展中可能发挥一定作用.     

基于协同刺激分子表达量建立慢性HBV感染患者T淋巴细胞免疫功能评价新体系的研究

目的 探讨慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染患者外周血T淋巴细胞CD28、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4（CTLA-4）、程序性死亡分子-1（PD-1）和T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3（Tim-3）的表达及意义.方法 连续收集2012年10月至2013年6月在苏州大学附属第一医院住院的慢性HBV感染患者102例,其中慢性乙型肝炎（CHB） 42例,乙型肝炎肝硬化30例,肝癌30例.另选30名健康体检者作为对照组.采用流式细胞术和定量聚合酶链反应（PCR）技术测定所有研究对象外周血T淋巴细胞表面CD28、CTLA-4、PD-1和Tim-3的表达量,并采用单因素方差分析和LSD-t检验比较各组间的差异.采用Spearman秩相关分析外周血T淋巴细胞表面CD28、CTLA-4、PD-1和Tim-3的表达量与HBV DNA载量、乙型肝炎e抗原（HBeAg）和丙氨酸转氨酶（ALT）之间的相关性.结果 慢性HBV感染患者CD4＋ CD28＋、CD8＋ CD28＋和CD4＋ CTLA-4＋的表达均低于健康对照人群,其中肝癌组的CD4＋ CD28＋表达量低于CHB组（t=2.373,P＜0.05）,肝硬化和肝癌组的CD8＋CD28＋表达量低于CHB组（t=4.324和4.088,P＜0.01）.CHB组CD8＋ PD-1＋、CD4＋ Tim-3＋和CD8＋ Tim-3＋的表达量高于肝硬化、肝癌以及健康对照组（t=3.051,3.130,3.121,3.254和3.723,P＜0.01）.相关性分析显示,CD8＋T淋巴细胞PD-1表达量与ALT水平、HBV DNA载量呈正相关（r=0.516和0.582,P＜0.01）;CD8＋T淋巴细胞Tim-3的表达量与ALT水平、HBV DNA载量也呈正相关（r=0.578和0.556,P＜0.01）.此外,CD8＋T淋巴细胞PD-1与Tim-3的表达量也呈一定的正相关（r =0.506,P＜0.01）.结论 HBV感染患者外周血T淋巴细胞表面分子异常表达与其免疫功能紊乱和疾病慢性化的发生和发展相关.     

小干扰RNA对大鼠T淋巴细胞CD28基因表达的抑制作用

目的探讨小干扰RNA(siRNA)对大鼠T淋巴细胞共刺激分子CD28基因表达及干扰后的T细胞的功能的影响。方法设计针对目标基因的siRNA,转染大鼠T淋巴细胞,逆转录-聚合酶链反应((RT_7PCR)方法检测CD28 mRNA水平,MLR检测转染后的T淋巴细胞的增殖能力,ELISA法检测细胞因子水平。结果siRNA转染大鼠T淋巴细胞后,抑制CD28分子的表达,半定量RT-PCR检测显示T淋巴细胞CD28的mRNA均有明显的下降,siRNA转染48 h后,siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3、siRNA-4组CD28基因表达均受到抑制,其抑制率最高为(88.56±4.70)%,T细胞增殖能力、IL-2,IFN-γ水平明显低于对照组。结论siRNA可以特异性抑制大鼠T淋巴细胞共刺激分子CD28基因的转录和表达,降低大鼠T细胞的增殖能力,抑制了IL-2,IFN-γ细胞因子的分泌水平。     

慢性乙型病毒性肝炎患者外周血T淋巴细胞亚群CD27和CD28的表达

目的分析慢性乙型病毒性肝炎患者外周血T淋巴细胞亚群CD27和CD28的表达,初步探讨其分化表型。方法采集分离健康人和慢性乙型病毒性肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC),利用多种荧光标记抗体标记细胞表面分子,再用流式细胞仪检测CD8 和CD4 T淋巴细胞表面CD27和CD28分子的表达。结果31例慢性乙型病毒性肝炎患者CD8 CD27 CD28 T细胞占CD8 T细胞(41.13±24.89)%,低于28例健康对照组的(71.93±14.47)%(P<0.05)。而CD8 CD27-CD28-T细胞占CD8 T细胞(42.16±10.98)%,显著高于健康对照组的(9.16±5.24)%(P<0.01)。慢性乙型病毒性肝炎患者CD4 CD27 CD28 T细胞(80.89±7.93)%和健康对照组(83.17±8.31)%比较,差异无统计学意义。结论健康人外周血T淋巴细胞以CD27 CD28 早期分化表型为主。而慢性乙型病毒性肝炎患者外周血中不同的亚群分化特征又有所不同,CD4 T淋巴细胞的分化表型仍然以CD27 CD28 早期分化表型为主,而CD8 T淋巴细胞中早期分化表型明显减少,晚期分化表型(CD27-CD28-)显著增加。     

2型糖尿病肾病患者外周血CD28/CTLA4共刺激分子的表达及其意义

目的:探讨2型糖尿病(T2DM)肾病患者外周血T细胞亚群、共刺激分子CD 28及细胞毒T淋巴细胞抗原(CTLA)4的表达及其临床意义。方法:选取2015年07月~2018年06月至我科室和内分泌科治疗的患者,根据尿微量清蛋白排泄率(UAER)将其分为DM组(T2DM无肾病,n=42)和DN组(T2DM合并肾病,n=40),同时选取健康人群40例作为对照(NC组)。采用流式细胞技术测定两组患者外周血T淋巴细胞上CD4、CD8的表达,并用流式细胞技术测定CD4^+、CD8^+T淋巴细胞表面CD28、CTLA4分子的表达。结果:三组外周血CD4^+和CD4^+/CD8^+按NC组-DM组-DN组顺序均呈显著递增趋势(P<0.01),CD3^+、CD8^+按照顺序呈显著递减趋势(P<0.01),且各组间差异明显(P<0.01);三组外周血CD4^+CD28^+、CD8^+CD28^+ T细胞按NC组-DM组-DN组顺序均呈显著递增趋势(P<0.01),CD4^+CTLA4+及CD8^+CTLA4+T细胞按照顺序呈显著递减趋势(P<0.01),且各组间差异明显(P<0.01)。结论:T2DM患者T细胞亚群失衡,其中合并肾病患者表达失衡更为严重,提示糖尿病肾病患者存在自身免疫调节异常。同时T2DM合并肾病患者外周血CD28和CTLA4表达也显著异于正常对照,提示共刺激分子可能参与了T2DM合并肾病的免疫功能紊乱。     

CTLA4Ig与CD40Ig局部共转染诱导异种大鼠移植肾免疫耐受的影响

CD28-B7和CD40-CD40L共刺激分子系统是T细胞依赖的免疫反应启动和维持所必不可少的基本信号系统.缺乏或阻断共刺激信号,将会引起T细胞的无反应性或细胞凋亡.我们用CTLA4Ig和CD40Ig双基因局部转染大鼠肾脏后进行异种移植,观察双基因局部共转染能否诱导移植肾免疫耐受.     

共刺激分子CD28/B7家族在抑制肝脏移植排斥反应中的研究现状及展望

1简介共刺激分子B7-CD28家族在T细胞的激活、形成免疫耐受有着重要的作用,他们不仅可提供激活T细胞的正性信号来刺激T细胞分泌细胞因子、促进T细胞分化,而且还可以提供限制、终止和/或减弱T细胞反应的负性信号[1、2]。人们研究利用B7-CD28家族的这一性质来对某些疾病进行治疗,例如:通过促进免疫反应来治疗病毒感染和肿瘤;通过抑制免疫反应来防治器官移植排斥反应和自身免疫疾病。在B7-CD28家族中,研究最深入的是B7-1和B7-2。他们具有两个受体:具有激活T细胞功能的CD28分子和具有抑制T细胞功能的细胞毒T淋巴细胞相关抗原4(cytotoxic…     

他克莫司对肝移植受者外周血T淋巴细胞亚群及共刺激分子表达的影响

目的 探讨他克莫司（FK506）对肝移植受者外周血T淋巴细胞亚群及其表面共刺激分子表达的影响。方法 采用荧光标记单克隆抗体和流式细胞技术，测定术后采用FK506治疗的肝移植受者（FK506治疗组）在用FK506后1、2、3、4周时的外周血T淋巴细胞亚群及其表面共刺激分子CD28、CD152和ICOS分子的表达情况，以健康志愿者（健康对照组）和患终末期肝脏疾病拟行肝移植者（肝病对照组）为对照。结果 CD3^＋T淋巴细胞在各组间的差异均无统计学意义（P〉0．05）。经FK506治疗后，肝移植患者的CD4^＋T淋巴细胞逐渐减少，CD8^＋T淋巴细胞逐渐增加，并恢复至健康对照组水平（P〉0．05）。FK506治疗组T淋巴细胞亚群表面CD28分子和ICOS分子表达逐渐下降，并明显低于健康对照组（P〈0．05），而CD152分子表达增加，且明显高于健康对照组（P〈0．05）；其ICOS分子表达水平的下降晚于CD28分子，CD4^＋CD28^＋T淋巴细胞、CD8^＋CD28^＋T淋巴细胞和CD4^＋ICOS^＋T淋巴细胞均呈现相近的变化规律。结论 FK506能迅速纠正移植受者T淋巴细胞亚群紊乱，并抑制正性共刺激分子CD28和ICOS的表达，促进负性共刺激分子CD152的表达。     

第三方未成熟树突状细胞负载异体抗原诱导免疫耐受的实验研究

目的观察第三方未成熟树突状细胞（imDC）负载同种异体抗原后对其免疫特性的影响。方法从健康足月新生儿脐血中分离单核细胞，采用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（rhGM-SCg）和重组人白细胞介素（rhIL）4联合培养7d，诱导其分化成imDC，并通过光学显微镜和扫描电镜观察细胞形态、检测细胞表型及混合淋巴细胞反应（MLR）；将培养的细胞与异体淋巴细胞抗原共同孵育，并给予共刺激分子阻断剂细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白（CTLA-4Ig）处理，检测抗原负载前后的细胞表型变化，通过MLR比较致敏前后T淋巴细胞增殖的能力。结果（1）培养后细胞具有典型的imDC特征，CD1α、CD83、CD80、CD86等成熟标志呈低表达，分别为21．42％、0．59％、5．39％、3．85％；人类白细胞DR抗原（HLA-DR）的表达率为60．66％，MLR结果提示其不能刺激同种异体T淋巴细胞增殖。（2）负载抗原后的DC表现出成熟特性，CD1α、CD83、CD80、CD86及HLA-DR表达明显增高，分别为65．51％、42．20％、56．45％、38．52％、76．44％（P〈0．05）；能够刺激T淋巴细胞增殖[刺激指数（SI）〉2．00]。（3）给予共刺激阻断剂CTLA-4Ig致耐处理后，SI由2．51下降到0．39。可明显抑制T淋巴细胞增殖。结论第三方imDC负载抗原后能表现出成熟特性；经CTLA-4Ig致耐处理，不能刺激未致敏T淋巴细胞增殖。有望诱导受体针对供者抗原的特异性免疫耐受。     

中央记忆T细胞和效应记忆T细胞亚群在肝癌患者外周血中分布特点分析

【摘要】 目的 研究肝癌患者外周血中CD45RO+记忆T细胞(memory T cells, Tm)表面标志CD45RO、CD62L和CCR7的表达,以了解CD45RO+CD62L+CCR7+T细胞(中央型记忆T细胞, central memory T cells,TCM)和CD45RO+CD62L-CCR7-T细胞(效应型记忆T细胞,effector memory T cells, TEM)亚群在肝癌患者外周血中的分布特点。方法〓获取正常人健康志愿者(正常对照组)28例和2011年8月至2013年8月的初诊慢性乙型病毒性肝炎患者(乙肝对照组)28例以及同期患有乙肝的肝癌患者(乙肝肝癌组)30例的外周静脉血,分离外周血单个核细胞(PBMC)。用多色流式细胞仪检测技术(polychromatic flow cytometry, PFC)检测外周血PBMC中记忆T淋巴细胞表面标志CD3、CD4、CD8、CD45RO、CD62L、CCR7的表达情况。结果〓乙肝肝癌组外周血PBMC中,CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞分别占外周血PBMC的比例显著高于乙肝对照组(28.15±12.32 VS 11.56±5.78,29.33±15.54 VS 13.11±6.64)(P<0.001,P=0.019);而较正常对照组无明显差异。乙肝肝癌组外周血PBMC的T淋巴细胞中CD4+TEM占CD4+T记忆淋巴细胞比例显著高于乙肝对照组、正常对照组(93.78±5.63 VS 75.82±19.74,93.78±5.63 VS 68.25±15.65)(P=0.001, P=0.018),而CD4+TCM则显著低于乙肝对照组、正常对照组(0.55±1.02 VS 4.87±6.28,0.55±1.02 VS 4.16±3.49)(P均小于<0.001)。三组的CD4+TEM记忆细胞占外周血PBMC中CD4+T记忆淋巴细胞的比例显著高于CD4+TCM记忆细胞占外周血PBMC中CD4+T记忆淋巴细胞的比例(91.78±5.63 VS 0.55±1.02,75.82±19.74 VS 4.87±6.28,68.25±15.65 VS 4.16±3.49)(P值均小于0.001)。乙肝肝癌组外周血PBMC的T淋巴细胞中CD8+TEM和CD8+TCM占CD8+T记忆淋巴细胞比例与乙肝对照组、正常对照组相比,差异均无显著意义。三组的CD8+TEM记忆细胞占外周血PBMC中CD8+T记忆淋巴细胞的比例显著高于CD8+TCM记忆细胞占外周血PBMC中CD8+T记忆淋巴细胞的比例(80.12±13.56 VS 3.25±2.47,79.21±11.34 VS 4.44±7.19,73.33±16.88 VS 2.66±3.10)(P值均小于0.001)。结论〓在乙肝肝癌组、乙肝对照组和正常对照组中,无论是CD4+T记忆淋巴细胞,还是CD8+T记忆淋巴细胞,均以TEM占绝大多数,而TCM比例很小。乙肝肝癌组中,CD4+TEM显著高于乙肝对照组和正常对照组,CD4+TCM显著低于乙肝对照组和正常对照组,而CD8+TEM和CD8+TCM则与乙肝对照组、正常对照组均无明显差异。     

T淋巴细胞在缺血-再灌注损伤中的重要作用

<正>缺血-再灌注损伤(IRI)可在多种临床环境(器官移植、分段切除)中发生,可以导致缺血器官功能障碍和衰竭。虽然先天性免疫反应在IRI中发挥重要作用,但是T淋巴细胞也参与IRI的发病过程,包括CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞、γT淋巴细胞等。尤其是抗原特异性T细胞群体,如效应性CD4+T淋巴细胞,包括辅助性T(T helper,Th)1细胞、Th17细胞、调节性T细胞(Treg),在IRI过程可通过抗原非依赖适应性反应激活炎症免疫反应,通过分泌细胞因子和表达共刺激分子,促进或抑制先天性免疫反应或促进组织修     

CD28/CTLA-4-B7家族T细胞协同刺激通路的研究进展

T淋巴细胞在大多数移植排斥反应过程中都占主导地位。阻断T细胞协同刺激通路有可能为临床治疗移植排斥带来希望。因此,探究T细胞协同刺激分子与移植排斥反应的关系便成为一大热点。近年来,新发现的T细胞协同刺激通路包括CD28/CTLA-4B7家族的ICOSB7h,PD1PD-L1/PD-L2,TNFTNFR家族的CD134CD134L,4-1BB4-1BBL,CD27CD70,LIGHTHVEM和CD30CD153等。上述通路和传统协同刺激通路一起构成一张复杂的调节网络,在T细胞激活过程中起着精细而灵敏的调节作用。现就ICOSB7h,PD1PD-L1/PD-L2等新发现的CD28/CTLA-4B7家族的T细胞协同刺激分子作一综述。     

肝癌细胞甲胎蛋白mRNA转染活化的B淋巴细胞诱导细胞毒性T淋巴细胞的抗肿瘤效应

目的 研究肝癌细胞AFP mRNA转染活化的B淋巴细胞诱导细胞毒性T淋巴细胞的抗肿瘤作用.方法 分离、纯化B淋巴细胞,重组人可溶性CIM0配体(sCD40L)活化人外周血B淋巴细胞;构建PGEM4Z/AFP/A64-EGFP质粒,加入T7RNA聚合酶,转录具有PolyA尾端的AFP mRNA;将提取的AFPmRNA电转染B淋巴细胞作为实验组,选取GAPDH mRNA转染者作为阴性对照组,未转染的B淋巴细胞作为空白对照组.检测各组B淋巴细胞表面抗原提呈细胞标记分子(CD19、CD20、CD21、CD40、CD80、CD83)及主要组织相容性抗原的表达情况;将3组B淋巴细胞与T淋巴细胞分别按1∶40,1∶20,1∶10和1∶5的比例混合培养、诱导、扩增抗原激活T淋巴细胞并测定吸光度值以检测T淋巴细胞增殖能力;以T淋巴细胞作为效应细胞,肝癌细胞系SMMC7721为靶细胞,检测T淋巴细胞对肝癌细胞的杀伤活性.两两比较采用配对t检验,多组比较采用单因素方差分析,方差不齐时采用Tamhane's T2检验.结果 实验组B淋巴细胞表面标志分子CD19、CD20、CD21、CD40、CD80和CD83的表达水平分别为74±11、78 ±8、80±10、90±11、82±6、56±5,显著高于阴性对照组的51±5、60±7、53±5、73±8、50±5、49±6,以及空白对照组的46±3、54±5、41±3、56±5、52±6、21 ±4(t =5.302、4.812、7.627、5.932、9.142、7.813,11.581、7.036、13.592、12.873、9.235、14.619,P＜0.01).实验组吸光度值显著高于阴性对照组和空白对照组(t=18.203、23.714、15.062、9.417,16.833、19.392、13.871、6.592,P＜0.01).当T淋巴细胞与肝癌细胞系SMMC7721按照40∶1、20∶1和10∶1的比例混合后,实验组B淋巴细胞诱导产生的T淋巴细胞对肝癌细胞的杀伤率分别为43％±4％、32％±4％和22％±3％,显著高于阴性对照组的15％±5％、7％±3％和6％±2％,以及空白对照组的7％±3％、8％±3％和9％±4％(t=9.141、13.272、11.901,14.372、12.835、9.507,P＜0.01).结论 肝癌细胞AFP mRNA转染的B淋巴细胞可有效诱导T淋巴细胞杀伤肝癌细胞.     

组织工程化肌腱对T淋巴细胞亚群及其受体的影响

目的：探讨组织工程化肌腱对T淋巴细胞亚群及受体的影响。明确其组织相容性,方法：采用3月龄法国罗曼鸡75只,随机分成五组,每组15只,手术造成足第3趾屈深肌腱2．5cm缺损后,分组。A组：未手术组,B组：自体肌腱移植组;C组：新鲜同种异体肌腱移植组;D组：梯度降解材料复合腱细胞移植组;E组、;衍生肌腱材料复合腱细胞移植组,检测CD4＋,CD8＋,CD28细胞阳性率及T淋巴细胞相关抗原受体（TCR）密度变化,通过刀豆蛋白（ConA)诱导的淋巴细胞转化试验,直接淋巴细胞混合培养试验及间接淋巴细胞混合培养试验,了解机体对肌腱细胞的免疫反应水平。结果：D,E组与B组比较,早期CD4＋,CD8＋ＴＣＲ轻度增高,２周后下降,无显著性差异（Ｐ＞０．０５）,C组CD4＋,CD8＋,CD28及TCR阳性率与D,E组比较,有显著性差异（P＜0．05）,结论：肌腱细胞为弱抗原细胞,抗原脱落或可溶性抗原分泌较少,组织工程化肌腱有良好的组织相容性。     

ICOS-ICOSL和CD28-B7共刺激信号对大鼠角膜移植排斥反应调控效应的比较

目的 观察阻断可诱导性共刺激分子及其配体(ICOS-ICOSL)或CD28-B7共刺激信号对大鼠角膜移植排斥反应的影响,并比较其差异.方法 制备腺病毒载体介导的诱导性共刺激分子融合蛋白(AdICOSIg)和腺病毒介导的细胞毒T淋巴细胞抗原4融合蛋白(AdCTLA4Ig).以DA大鼠为供者,Lewis大鼠为受者,进行角膜移植:受者分别接受经Adβ-Gal、AdICOSIg和AdCTLA4Ig转染的角膜移植,分别为局部Adβ-Gal组、局部AdICOSIg组和局部AdCTLA4Ig组;受者分别接受未经处理的角膜移植,并于移植前24 h腹腔注射Adβ-Gal、移植后48 h腹腔注射AdICOSIg或移植前24 h腹腔注射AdCTLA4Ig,分别为全身Adβ-Gal组、全身AdICOSIg组和全身AdCTLA4Ig组;以接受未经处理的角膜移植者为空白对照.术后每日于手术显微镜下观察移植角膜的透明度,以判断排斥反应的发生情况.基因转染后7 d,检测受者血清ICOSIg和CTLA4Ig的浓度以及抗腺病毒抗体水平.结果 空白对照组移植角膜存活时间为(13.1±0.3)d,局部AdICOSIg组、局部AdCTLA4Ig组和全身AdCTLA4Ig组移植角膜的存活时间长于空白对照组,分别为(14.2±0.8)d(P<0.05)、(15.8±0.6)d(P<0.01)和(22.7±4.3)d(P<0.01),局部AdCTLA4Ig组和全身AdCTLA4Ig组各有1例未发生排斥反应.全身AdCTLA4Ig组受者的血清CTLA4Ig浓度较高,其抗腺病毒载体抗体水平则较低.结论 CD28-B7与ICOS-ICOSL共刺激信号在免疫调节效应上存在差异,阻断CD28-B7信号所获得的延长移植角膜存活时间的效果优于阻断ICOS-ICOSL者.     

十色流式检测HIV/AIDS患者外周血中T淋巴细胞亚群及活化状态

目的建立十色流式方案检测HIV/AIDS患者外周血中T淋巴细胞亚群及活化状态。 方法按多色流式配色原则,初步确立抗人CD3、CD4、CD8、CD45RA、CD25、CCR7、CD28、CD38、HLA-DR抗体及7-AAD的配色方案。采用1例HIV/AIDS患者外周血PBMC标本进行最适电压调节、荧光补偿设定和FMO对照;设定条件后,检测5例HIV/AIDS患者的外周血样本。 结果建立检测人外周血中T淋巴细胞亚群及活化状态的最优十色流式染色方案,采用此方案检测5例HIV/AIDS患者外周血标本,分析T淋巴细胞各亚群比例及活化程度,发现不同细胞亚群中活化分子HLA-DR、CD38、CD28的表达模式存在显著差异。 结论十色流式方案可检测HIV/AIDS患者外周血中T淋巴细胞亚群及其活化状态操作简便,结果可靠。