抗氧化蛋白Prx1在口腔黏膜白斑中的表达

目的检测抗氧化蛋白Prx1和DNA氧化损伤标记物8-OHdG在口腔黏膜白斑中的表达,探讨Prx1在口腔黏膜白斑中的作用。方法选择40例口腔黏膜白斑,包括单纯增生10例,白斑伴上皮轻度异常增生15例,白斑伴上皮中度异常增生15例,正常口腔黏膜10例。采用免疫组织化学染色方法,分别检测Prx1、8-OHdG在黏膜中的表达。结果口腔黏膜白斑伴上皮中度异常增生组Prx1和8-OHdG染色的MOD值均高于正常组、白斑单纯增生组、白斑伴上皮轻度异常增生组,且差异有统计学意义(P0.01)。结论 Prx1与口腔黏膜白斑的发病有关,口腔黏膜白斑的发生可能与氧化损伤有关。     

Prx1 overexpression in human oral leukoplakia

目的 检测抗氧化蛋白Prx1和DNA氧化损伤标记物8-OHdG在口腔黏膜白斑中的表达,探讨Prx1在口腔黏膜白斑中的作用.方法 选择40例口腔黏膜白斑,包括单纯增生10例,白斑伴上皮轻度异常增生15例,白斑伴上皮中度异常增生15例,正常口腔黏膜10例.采用免疫组织化学染色方法,分别检测Prx1、8-OHdG在黏膜中的表达.结果 口腔黏膜白斑伴上皮中度异常增生组Prx1和8-OHdG染色的MOD值均高于正常组、白斑单纯增生组、白斑伴上皮轻度异常增生组,且差异有统计学意义(P<0.01).结论 Prx1与口腔黏膜白斑的发病有关,口腔黏膜白斑的发生可能与氧化损伤有关.     

Prx1敲除对4NQO诱导的小鼠舌癌前病变细胞增殖及转录因子Ets1表达的影响

目的 检测核增殖抗原Ki67和转录因子Ets1在4-硝基喹啉-1-氧化物(4NQO)诱导的Prx1+/+和Prx1+/-小鼠舌癌前病变模型中的表达,探讨Prx1敲除对小鼠舌癌前病变细胞增殖及转录因子Ets1表达的影响.方法 实验分为Prx1+/+阴性对照组、Prx1+/+4NQO组、Prx1+/-阴性对照组、Prx1+/-4NQO组.在实验过程中对照组小鼠给与蒸馏水,实验组小鼠给与4NQO饮用水,第16周末处死小鼠,取舌组织,用于HE染色及Ki67和Ets1免疫组织化学染色.结果 在4NQO的诱导下,成功构建鼠舌癌前病变模型.组织学检查发现在第16周末,实验组小鼠舌黏膜上皮表现为单纯增生或不同程度的异常增生.免疫组化结果显示,与对照组正常舌黏膜相比,Ki67、Ets1在Prx1+/+ 4NQO组舌癌前病变中表达明显增高(P<0.01).Prx1敲除导致Prx1+/-4NQO组舌黏膜上皮中Ki67、Ets1表达明显降低(P<0.01).结论 Prx1对细胞增殖有促进作用,可能通过调控转录因子Ets1在口腔癌前病变发生发展中发挥重要作用.     

RB1CC1在人和小鼠口腔癌发生发展中表达的比较研究

目的:比较视网膜母细胞瘤RB1-诱导卷曲蛋白1(RB1CC1)在人和小鼠正常口腔黏膜、上皮异常增生组织及口腔鳞状细胞癌中的表达,并探讨其在口腔癌发生发展过程中的作用。方法:采用免疫组化和RT-PCR检测人及小鼠在正常口腔黏膜、上皮异常增生、高分化鳞癌原发灶组织中RB1CC1蛋白及基因的表达情况。结果:RB1CC1蛋白在人上皮异常增生组、高分化鳞癌组的阳性表达高于正常组(P<0.05);RB1CC1蛋白在鼠正常组、异常增生组、高分化鳞癌组阳性表达逐渐增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。人RB1CC1 mRNA的表达量在异常增生组与高分化鳞癌组无明显差异,正常口腔黏膜组均高于异常增生组与高分化鳞癌组(P＜0.05);小鼠RB1CC1 mRNA的表达量在正常口腔黏膜组与异常增生组、高分化鳞癌组差别无统计学意义。结论:RB1CC1表达在人和小鼠相似, RB1CC1可能参与了口腔鳞癌的早期癌变过程。     

大鼠舌白斑癌变过程中线粒体琥珀酸脱氢酶活性变化的研究

目的:探讨大鼠口腔癌变过程中线粒体琥珀酸脱氢酶(Succinate dehydrogenase,SDH)的活性变化及其生物学意义.方法:2×10-5 4-硝基喹啉-1-氧化物(4NQO)饮水喂养Wistar大鼠9~32周建立大鼠舌癌变模型,提取30例大鼠舌癌变过程不同病理阶段的舌背组织线粒体,酶标仪检测SDH酶活性的变化.结果:在大鼠舌白斑癌变过程中,线粒体SDH活性呈逐渐下降趋势,其中,重度异常增生、鳞癌组织中SDH酶活性显著低于正常黏膜(P<0.05). SDH的基因表达及酶活性变化趋势较为一致. 结论:SDH酶活性和mRNA表达水平的下降与口腔癌发生发展相关,三羧酸循环在口腔黏膜癌变过程可能起到重要作用.     

PTEN、p53在口腔黏膜白斑和口腔鳞癌组织中的表达及意义

目的:探讨抑癌基因PTEN、p53在口腔黏膜白斑(oralleukoplakia,OLK)和口腔鳞癌(oralsquamouscellcancer,OSCC)组织中的蛋白表达及意义。方法:应用免役组化S-P法检测10例正常口腔黏膜、25例口腔黏膜白斑(其中白斑伴上皮异常增生15例,白斑不伴上皮异常增生10例)及32例口腔鳞癌组织中抑癌基因PTEN和p53的蛋白表达情况,分析两者之间的相互作用关系及其在口腔鳞癌发生、发展过程中的作用。结果:正常口腔黏膜和白斑不伴上皮异常增生组织中PTEN蛋白全部阳性表达;白斑伴上皮异常增生组织中PTEN蛋白阳性表达率为93. 3%;OSCC组织中PTEN蛋白的阳性表达率为71. 9%,其中高、中、低分化OSCC组织中PTEN蛋白的阳性表达率分别为85. 7%、75%和33. 3%,统计学分析表明PTEN在OSCC组织中的蛋白表达与组织分化程度明显相关(P<0. 05)。正常口腔黏膜组织中p53蛋白阴性表达;白斑组织中p53蛋白的阳性表达率为48%;OSCC组织中p53蛋白的阳性表达率为56. 3%,其中高、中、低分化OSCC组织中p53蛋白的阳性表达率分别为57. 1%、58. 3%和50%,统计学分析表明p53在OSCC组织中的蛋白表达与组织分化程度无明显相关(P>0. 05)。p53阴性表达的14例OSCC组织中有5例PTEN也阴性表达。结论:OSCC组织中PTEN和p53蛋白异常表达,说明PTEN和p53基因突变或缺失     

细胞角蛋白19和间隙连接蛋白43在4-亚基硝氧喹啉诱发大鼠舌黏膜癌变过程中表达的研究

目的 研究4-亚基硝氧喹啉（4NQO）诱发大鼠口腔黏膜癌变过程中细胞角蛋白19（CK19）和间隙连接蛋白43（Cx43）的表达,探讨口腔黏膜癌变过程中CK19与Cx43的相关性。方法 利用4NQO诱导SD大鼠的口腔黏膜癌变,运用免疫组织化学的方法检测CK19、Cx43在口腔黏膜癌变过程中各阶段的动态变化。结果 在大鼠正常舌黏膜组织中,CK19阳性染色的细胞散在分布于黏膜基底层;随着大鼠舌黏膜上皮异常增生程度的增加,CK19表达于黏膜基底上层;在口腔鳞状细胞癌（OSCC）组织中,CK19阳性染色细胞分布在黏膜各层。CK19在正常舌黏膜、轻度上皮异常增生、中度上皮异常增生、重度上皮异常增生、OSCC组织中阳性表达率分别为30.00%、50.00%、58.33%、80.00%、91.67%,差异有统计学意义（P<0.05）。在正常舌黏膜中Cx43蛋白主要表达于大鼠舌黏膜上皮细胞的细胞膜上,上皮的基底层、棘层和颗粒层呈阳性染色。随着大鼠舌黏膜上皮异常增生程度的增加,Cx43的表达明显下降。Cx43在正常舌黏膜、轻度上皮异常增生、中度上皮异常增生、重度上皮异常增生、OSCC组织中阳性表达率分别为100.00%、85.71%、66.67%、40.00%、33.33%,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 在大鼠舌黏膜癌变过程中,CK19蛋白表达水平随病变程度加重显著升高,提示CK19与口腔上皮细胞的癌变有关;Cx43蛋白表达水平随病变程度加重显著下降,Cx43表达下降是口腔黏膜癌变的早期事件。CK19与Cx43蛋白表达呈负相关,CK19和Cx43的联合检测对OSCC的早期诊断有重要的作用,有利于提高OSCC早期诊断的灵敏度和特异性。     

P16在口腔白斑和鳞癌组织中的表达及其意义

目的探讨P16在口腔白斑癌变过程中的变化及其意义。方法免疫组化polymer法检测P16蛋白在口腔白斑和鳞癌组织中的表达情况。结果 P16蛋白在10例正常口腔黏膜组织、16例单纯增生性白斑、10例异常增生性白斑及30例口腔鳞癌组织中表达逐步下降,在正常口腔黏膜组织和单纯增生性白斑中表达强于异常增生性白斑组织和鳞癌组织（P〈0.05）,在异常增生性白斑中表达亦强于鳞癌组织（P〈0.05）。结论 P16蛋白表达下降可以作为口腔白斑癌变的指征之一。     

髓样来源的抑制细胞在舌癌小鼠中的表达及意义

目的 评价舌癌小鼠外周血和病变部位髓样来源的抑制细胞（MDSC）的变化及意义。方法 建立4NQO舌癌小鼠模型,观察MDSC细胞在外周血的表达,同时观察T细胞亚群的表达,评价MDSC细胞与T细胞亚群及CD4⁺/ CD8⁺比例变化的相关性。观察MDSC细胞在舌黏膜病变部位的表达,并检测舌组织精氨酸酶1（ARG-1）mRNA的表达。结果 4NQO小鼠外周血中MDSC比例随着肿瘤进展显著升高（P<0.01）,外周血中MDSC比例与相应CD3⁺CD8⁺T细胞的比例呈正相关,与CD4⁺/CD8⁺比呈负相关关系。4NQO小鼠异常增生区域的MDSC细胞较正常对照组有所增加,在舌癌组织内及与正常组织的交界处,均浸润了大量的MDSC细胞,而且ARG-1 mRNA水平显著升高（P<0.01）。结论 MDSC细胞在舌癌组织和外周血中的扩增可能是肿瘤进展的重要原因。MDSC细胞可能成为口腔癌免疫治疗的潜在靶点。     

CD147和Ki-67在口腔黏膜白斑和鳞癌组织中的表达及意义

目的：观察CD147和ki-67在口腔正常黏膜、白斑和鳞癌组织中表达的变化,阐明CD147在口腔癌发病机制中的作用。方法：采用免疫组织化学法检测10例正常口腔黏膜、20例白斑伴上皮异常增生上皮和40例鳞癌组织中CD147及Ki-67的表达变化。结果：CD147在正常黏膜阴性表达,白斑和鳞癌组上皮均显著表达CD147;正常组Ki-67表达主要位于上皮棘层,鳞癌组织中Ki-67阳性细胞分布广泛,有大部分侵入固有层中。结论：口腔黏膜发生癌前病变时,即出现CD147表达阳性,随着Ki-67阳性细胞数的增多,癌变细胞增殖不断加强,两者共同作用促进鳞癌的发展。     

烟草通过调控Prx1/Ets1结合抑制口腔白斑组织细胞凋亡

目的检测烟草对口腔白斑组织中细胞凋亡水平、α7nAChR、Ets1、抗氧化蛋白Prx1及MAPK信号通路相关蛋白表达的影响,验证Prx1与Ets1结合情况,探讨烟草对口腔白斑组织细胞的影响。方法选择32例临床口腔白斑组织标本,包括吸烟者口腔白斑组织12例,非吸烟者口腔白斑组织20例,正常口腔黏膜组织10例。采用TUNEL法检测口腔白斑组织细胞凋亡水平。采用免疫组化染色方法,检测Prx1、Ets1、α7nAChR及MAPK信号通路相关蛋白p-JNK、p-p38、p-ERK在口腔白斑组织中的表达。采用Duolink技术,在口腔白斑组织中检测Prx1与Ets1蛋白结合情况。结果口腔白斑组织中细胞凋亡指数显著高于正常对照组,口腔白斑吸烟组细胞凋亡指数显著低于非吸烟组。口腔白斑组织中Prx1、Ets1、α7nAChR及p-JNK、p-p38、p-ERK蛋白表达水平显著高于正常对照组,其中口腔白斑吸烟组Prx1、Ets1及α7nAChR表达显著高于非吸烟组,口腔白斑吸烟组p-JNK、p-p38蛋白表达水平显著低于非吸烟组。Prx1与Ets1在口腔白斑组织中存在结合。结论烟草可能通过诱导Prx1/Ets1结合调控MAPK信号通路相关蛋白的表达,抑制口腔白斑细胞凋亡。     

过氧化氢对小鼠口腔癌发病影响的实验研究

目的检测氧化应激相关基因Nrf2、GST-π、HO1在4NQO小鼠舌癌标本中的表达水平,分析氧化损伤对4NQO诱导的小鼠口腔癌的促进作用。方法 190只8周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为阴性对照组、阳性对照组、6%、15%和30%过氧化氢处理组。阴性对照组不做任何处理,其余4组以0.005%4NQO诱癌16周后,分别用水(阳性对照组)和6%、15%、30%的过氧化氢涂抹小鼠舌部,每周3次,共8周。第24周末处死全部动物,取舌组织进行组织病理学分析及免疫组化染色。结果在粘膜从正常到异常增生、再到癌变的过程中,Nrf2、GST-π和HO1的表达持续升高,并且30%过氧化氢组中重度异常增生和癌变的组织中上述三者的积分光密度值显著高于阳性对照组(P0.01);6%和15%组中,GST-π的积分光密度值均显著高于阳性对照组(P0.05),Nrf2和HO1的积分光密度值与阳性对照组无统计学差异。结论过氧化氢造成的氧化损伤进一步促进了4NQO小鼠口腔癌的发展。     

大鼠舌癌变过程中生存素、Bcl-2和p53蛋白的表达

目的 探讨生存素(survivin)蛋白在大鼠舌癌变过程中的表达及其与Bcl-2、p53蛋白表达的相关性.方法 0.002%4-硝基喹啉-1-氧化物(4一nitro-quinoline 1-oxide,4NQO)饮水喂养SD大鼠9～36周建立大鼠舌癌变模型,用免疫组化二步法检测60例大鼠舌癌变过程中生存素、Bcl-2及p53蛋白的表达.结果 36例止常组织中生存素蛋白表达仅1例,而11例异常增生组织中其表达为6例,11例口腔癌组织中其表达为10例.生存素蛋白在正常舌黏膜、异常增生黏膜及舌癌中的阳性表达差异有统计学意义(P<0.001),异常增生及口腔癌组织中生存素蛋白表达显著高于正常黏膜中的表达(P<0.01).在17例生存素蛋白表达阳性的大鼠舌组织中,Bcl-2蛋白阳性表达12例,p53蛋白阳性表达8例;生存素蛋白表达与Bcl-2、053蛋白表达呈正相关(P<0.01).结论 生存素蛋白的表达增高和口腔鳞状上皮的异常增生、癌变有关,提示生存素可能参与了口腔癌的发生、发展;生存素、Bcl-2及p53蛋白的表达可能在口腔癌的发生、发展中起协调作用.     

Prx1+骨骼干细胞的研究进展

配对相关同源基因1(paired related homeobox 1, Prx1/Prrx1/MHox）在胚胎肢芽和颅面发育中高表达,成体中的Prx1+细胞分布在长骨的骨膜、骨髓和颅骨的骨缝中,表现出间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）或骨骼干细胞（skeletal stem cells,SSCs）的特征。近期的研究显示,表达Prx1基因的骨骼干细胞（Prx1+ skeletal stem cells, Prx1+SSCs）参与了骨骼的创伤愈合和对机械应力的应答反应。同时,牙周膜中Prx1+细胞在牙周组织正常发育和缺损修复中发挥的作用也受到关注。该文回顾Prx1基因和Prx1+细胞的特征和功能,总结Prx1+SSCs对骨骼改建或修复的作用,有助于SSCs在调控颅面骨生长、促进牙槽骨再生中的深入研究。     

Homeobox C5 expression is associated with the progression of 4-nitroquinoline 1-oxide-induced rat tongue carcinogenesis

J Oral Pathol Med (2012) 41 : 470–476 Background: Aberrant expression of homeobox genes (HOX), normally required for the differentiation of a particular tissue, has been reported in several types of cancer, but poorly addressed in oral squamous cell carcinoma (OSCC). The present study investigated the expression of HOXC5 in OSCC and identified molecular biomarker whose expression is associated with the multistep oral carcinogenesis. Methods: The expression of HOXC5, proliferation cell nuclear antigen (PCNA), and Bcl‐2 was examined by RT‐PCR and Western blot analysis and confirmed by immunohistochemistry and transferase‐mediated dUTP nick end‐labeling (TUNEL) assay in a 4‐nitroquinoline 1‐oxide (4NQO)‐induced rat tongue carcinogenesis model. Results: Homeobox genes C5 was overexpressed in SCC tissues, but not in normal tissues by RT‐PCR and Western blot analysis. Along with the progress of multistep carcinogenesis, the levels of HOXC5 expression of mRNA and protein significantly increased during the dysplasia (moderate to severe dysplasia) when compared with normal and hyperplasia. The levels of PCNA and Bcl‐2 were sequentially increased from hyperplasia to dysplasia and SCC. By immunohistochemistry, HOXC5 expression was significantly increased in dysplasia, whereas PCNA expression was gradually increased during tongue carcinogenesis. TUNEL‐positive cells were increased until dysplasia, but reduced in SCC. Conclusions: These results indicate that overexpression of HOXC5 is correlated with oral carcinogenesis and strongly contributed to the development of OSCC. HOXC5 may be a useful biomarker and has an emerging therapeutic target of OSCC.     

iNOSmRNA在正常舌组织、舌白斑、舌鳞癌中的表达及意义

目的　探讨一氧化氮 (NO)在舌鳞癌发生中的作用。方法　原位杂交法检测体内合成NO的关键酶诱导型一氧化氮合酶 (induciblenitricoxidesynthase ,iNOS)mRNA在 1 0例舌正常组织、1 4例舌白斑、68例舌鳞癌中的表达。结果　iNOSmRNA在舌正常组织 ,舌白斑、舌鳞癌中的表达阳性率分别为 2 0 0 %、57 1 %、72 1 % ,各组别间差异均有显著性 (P <0 0 5)。结论　由iNOS诱导产生的NO可能在舌癌的发生中起着重要的作用     

饥饿条件下活性氧通过PINK1/Parkin通路调控人牙周膜细胞的线粒体自噬

目的 探究人牙周膜细胞（hPDLC）在饥饿条件下活性氧（ROS）与PINK1/Parkin通路介导hPDLC线粒体自噬的具体机制。 方法 分离培养正常牙周组织的hPDLSC,利用Earle’s平衡盐溶液（EBSS）模拟饥饿环境诱导hPDLC线粒体自噬,利用N-乙酰-L-半胱氨酸（NAC）抑制ROS生成以探讨ROS在hPDLC线粒体自噬的作用,利用环孢素A（CsA）抑制PINK1/Parkin通路以研究ROS与PINK1/Parkin通路在饥饿条件下激活hPDLC中的作用。采用流式细胞术及JC-1线粒体膜电位检测试剂盒,检测线粒体膜电位;采用透射电镜观察线粒体自噬体的生成及线粒体形态变化;采用线粒体红色荧光探针定位线粒体,溶酶体绿色荧光探针定位溶酶体;采用DCFH-DA ROS荧光探针检测ROS生成强度;采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测细胞中线粒体自噬基因（Tomm20、Timm23）及PINK1/Parkin通路的表达水平,采用蛋白质印迹 （Western blot）检测细胞中线粒体自噬蛋白（Tomm20、Timm23）及PINK1/Parkin通路蛋白表达水平。 结果 EBSS饥饿作用30 min后,诱导激活hPDLC线粒体自噬的作用最强,ROS表达增加,且线粒体自噬相关基因（Tomm20、Timm23）下调（P<0.001）,PINK1/Parkin通路表达上调（P<0.001）。NAC抑制ROS的产生后,自噬被抑制,同时Tomm20、Timm23表达上调（P<0.001,P<0.05）,PINK1/Parkin通路表达下调（P<0.001,P<0.05）。而当CsA抑制PINK1/Parkin通路表达时（P<0.05,P<0.05）,自噬被逆转,同时Tomm20、Timm23表达上调（P<0.001,P<0.01）。 结论 ROS在饥饿条件下主要通过PINK1/Parkin通路增强hPDLC线粒体自噬。     

实验性口腔白斑中成纤维细胞基因表达变化的研究

目的 探讨实验性口腔白斑中成纤维细胞的基因表达变化,以期为临床提供参考.方法 用4-硝基喹啉-1-氧化物诱发大鼠舌背部形成白斑,应用基因表达谱芯片技术分析其间质中成纤维细胞内上调的基因;同时应用成纤维细胞体外活化模型Nemosis进行90种细胞因子的抗体芯片检测,并将两者结合进行分析.结果 芯片结果显示白斑中成纤维细胞...