Prx1调控PINK1/Parkin介导的线粒体自噬在实验性口腔黏膜癌变中的作用

目的检测口腔黏膜癌变过程中线粒体自噬相关蛋白PINK1、Parkin表达变化及抗氧化蛋白Prx1对其调控作用,探讨Prx1在口腔黏膜癌变中的作用机制。方法利用4NQO化学诱导Prx1^+/+和Prx1+/-小鼠舌黏膜癌变模型,采用免疫组织化学染色及Q-PCR方法,检测PINK1、Parkin在小鼠舌正常黏膜、白斑、白斑伴上皮异常增生、鳞癌组织中的表达。结果在Prx1^+/+小鼠舌癌变模型中,PINK1、Parkin蛋白及mRNA表达在舌白斑及白斑伴上皮异常增生组织中显著高于正常黏膜及舌癌组织;与Prx1^+/+小鼠各组相比,Prx1敲除导致小鼠舌白斑、白斑伴上皮异常增生及舌癌中PINK1蛋白及mRNA表达明显降低;小鼠舌白斑及舌癌组织中Parkin mRNA表达显著升高。结论线粒体自噬参与了口腔黏膜癌变过程;Prx1可能通过调控PINK1/Parkin介导的线粒体自噬在其中发挥重要作用。     

烟草通过调控Prx1/Ets1结合抑制口腔白斑组织细胞凋亡

目的检测烟草对口腔白斑组织中细胞凋亡水平、α7nAChR、Ets1、抗氧化蛋白Prx1及MAPK信号通路相关蛋白表达的影响,验证Prx1与Ets1结合情况,探讨烟草对口腔白斑组织细胞的影响。方法选择32例临床口腔白斑组织标本,包括吸烟者口腔白斑组织12例,非吸烟者口腔白斑组织20例,正常口腔黏膜组织10例。采用TUNEL法检测口腔白斑组织细胞凋亡水平。采用免疫组化染色方法,检测Prx1、Ets1、α7nAChR及MAPK信号通路相关蛋白p-JNK、p-p38、p-ERK在口腔白斑组织中的表达。采用Duolink技术,在口腔白斑组织中检测Prx1与Ets1蛋白结合情况。结果口腔白斑组织中细胞凋亡指数显著高于正常对照组,口腔白斑吸烟组细胞凋亡指数显著低于非吸烟组。口腔白斑组织中Prx1、Ets1、α7nAChR及p-JNK、p-p38、p-ERK蛋白表达水平显著高于正常对照组,其中口腔白斑吸烟组Prx1、Ets1及α7nAChR表达显著高于非吸烟组,口腔白斑吸烟组p-JNK、p-p38蛋白表达水平显著低于非吸烟组。Prx1与Ets1在口腔白斑组织中存在结合。结论烟草可能通过诱导Prx1/Ets1结合调控MAPK信号通路相关蛋白的表达,抑制口腔白斑细胞凋亡。     

4-硝基喹啉-1-氧化物诱导大鼠舌癌过程中Notch1的表达特点

目的：研究 Notch1在大鼠舌癌模型发生发展过程中的表达变化。方法：将40只 SD 大鼠随机分为对照组（A 组10只）和实验组（B、C、D组各10只）,使用质量百分比浓度为0．004％的4-硝基喹啉-1-氧化物（4-nitroquinoline-1-oxide,4NQO）饮用水喂养实验组 SD大鼠,用蒸馏水喂养对照组 SD大鼠。B、C、D组分别于8、16、24周取大鼠舌体组织;A 组在8、16、24周同时各取3只、3只、4只作为正常对照。行常规组织学观察,并使用免疫组织化学法检测 Notch1在病变不同阶段的舌粘膜内的表达。结果：4NQO可以有效诱导大鼠舌黏膜鳞状细胞癌的发生。在不同的给药时间点,可以诱导大鼠舌黏膜产生不同程度的癌前病变。Notch1在正常舌黏膜、癌前病变、舌鳞癌中的表达逐渐增高（P＜0．01）。随着异常增生程度的增加,阳性表达部位逐渐由基底层向表层扩展,且 Notch1的膜型表达逐渐增多。结论：Notch1的高表达及其在细胞膜上的集中表达可能与舌癌的发生、发展过程相关。     

4NQO诱导大鼠舌黏膜癌变过程中HSF1的表达及意义

目的：探讨热休克因子1（ HSF1）在4?硝基喹啉?1?氧化物（4NQO）饮水法诱导大鼠舌黏膜癌变过程中的表达及意义。方法：80只Wistar大鼠随机分两组,实验组用0．001％～0．004％4NQO递增性喂养大鼠8～28周,对照组则用普通自来水喂养,分别于8、16、20、24、28周处死大鼠,通过大体标本、HE染色观察大鼠舌部组织学改变,同时采用免疫组化染色方法观察HSF1在大鼠舌癌变全过程的表达情况。结果：随4NQO作用时间延长和浓度递增,大鼠舌背后部黏膜相继出现颗粒状、白色斑块、疣状突起、菜花状新生物和溃疡状改变。诱导后8、16、20、24、28周,舌癌的发生率分别为0、20．0％、50．0％、66．7％、100％。HSF1在对照组大鼠舌背黏膜上皮中不表达或者微弱表达,而在实验组大鼠随着舌黏膜异常增生程度的增加,HSF1表达明显增强;在原位癌中,HSF1弥漫分布于整个癌巢中;在舌黏膜浸润癌中HSF1在癌上皮中表达有所降低,而在癌基质成纤维细胞中HSF1表达增强。结论：4NQO饮水法可诱导大鼠舌黏膜发生癌变,成功建立大鼠舌癌模型,同时HSF1在大鼠舌癌发生、发展过程中发挥重要作用。     

Krüppel-like factor 4在小鼠舌黏膜癌变过程中的表达

目的 检测Krüppel-like factor4 (KLF4)在小鼠舌黏膜癌变模型中的表达,探讨KLF4与口腔黏膜癌变的关系.方法 选用C57BL/6J小鼠75只,其中阴性对照组15只,饮用纯净水;实验组小鼠60只,饮用4-硝基喹啉-1-氧化物(4NQO)水溶液(50μg/ml).实验组分别在第8、12、16、24周末各处死15只小鼠,取舌组织,观察并记录标本的大体损害,将其固定在10％中性福尔马林溶液中,用于HE染色及KLF4免疫组织化学染色.结果 在4NQO的诱导下,成功构建了小鼠舌黏膜癌变模型.HE染色结果显示,随着4NQO处理时间的延长,小鼠舌黏膜病变逐步加重,呈现出从单纯增生、异常增生到癌的变化.免疫组化结果显示,KLF4在口腔癌变过程中呈现动态变化,与正常口腔黏膜上皮相比,KLF4在单纯增生、异常增生上皮中的表达没有明显变化,但在鳞癌中,KLF4的表达量明显下降,具有显著性差异(P＜0.01).结论 KLF4可能在口腔黏膜上皮癌变过程中发挥抑癌基因的作用.     

大鼠舌鳞癌诱变过程中MMP-3、TIMP-1的表达变化及相关性研究

目的:研究基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)在大鼠舌鳞癌诱变过程中转录水平表达变化及两者之间的相关性。方法:60只SD大鼠随机分为3组,每组20只,正常对照组,给予正常饮食;另2组每天喂养0.002%4-硝基喹啉-1-氧化物(4NQO),于16周和24周处死;16周组可见上皮异常增生,而24周组已经为舌鳞癌,分别选取8个标本作检测。各组利用定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测MMP-3、TIMP-1在不同病变时期舌组织中转录水平的表达变化。结果:MMP-3及TIMP-1的mRNA于正常对照组相对表达量较少,上皮异常增生组相对表达量较正常组显著增加,舌鳞癌组的相对表达量最高。MMP-3与TIMP-1的mRNA表达之间成显著相关性。结论:MMP-3与TIMP-1随癌变的发生表达显著上调,两者间平衡失调可导致舌鳞癌的发生及发展。     

4NQO饮水法诱发小鼠舌癌前病变模型建立的研究

目的：建立与人口腔癌前病变相似的动物模型。方法：采用0．001％4-硝基喹啉1-氧化物(4NQO)饮水法对Balb／c近交系小鼠进行诱发实验。16周和20周时处死小鼠，观察病变情况。结果：舌背黏膜癌前病变的总发病率为100％。16周时以轻度和中度异常增生为主；20周时以中度和重度异常增生为主。结论：4NQO饮水法的致病过程和组织病理学特征与人相似；0．001％4NQO饮用16～20周是舌癌前病变动物模型建立的理想时间。     

抗氧化蛋白Prx1在口腔黏膜白斑中的表达

目的检测抗氧化蛋白Prx1和DNA氧化损伤标记物8-OHdG在口腔黏膜白斑中的表达,探讨Prx1在口腔黏膜白斑中的作用。方法选择40例口腔黏膜白斑,包括单纯增生10例,白斑伴上皮轻度异常增生15例,白斑伴上皮中度异常增生15例,正常口腔黏膜10例。采用免疫组织化学染色方法,分别检测Prx1、8-OHdG在黏膜中的表达。结果口腔黏膜白斑伴上皮中度异常增生组Prx1和8-OHdG染色的MOD值均高于正常组、白斑单纯增生组、白斑伴上皮轻度异常增生组,且差异有统计学意义(P0.01)。结论 Prx1与口腔黏膜白斑的发病有关,口腔黏膜白斑的发生可能与氧化损伤有关。     

p16,p53,Ki67在口腔癌前病变表达及4年临床随访

目的 :研究 p16,p5 3 ,Ki-67蛋白表达与口腔癌前病变的关系。 方法 :采用免疫组织化学LsAB法对43例上皮异常增生 ( 2 0例轻度上皮异常增生 ,2 3例重度上皮异常增生 )和 2 0例正常口腔黏膜 p16,P5 3和Ki -67蛋白的表达进行研究 ,并对上皮异常增生患者实际癌变率做了 4年追踪。结果 :正常黏膜组 ,p5 3不表达 ,Ki -67少量表达 ,p16的阳性表达为 10 0 %。轻度上皮异常增生 ,p5 3 ,Ki-67少数表达 ,p16表达率为 86.96%。重度上皮异常增生 ,p5 3和Ki-67过度表达 ,p16表达明显下降 ,与正常黏膜 ,轻度上皮异常增生相比差异显著 (P <0 .0 5 )。p5 3和Ki-67蛋白过度表达而 p16呈低表达与实际口腔癌前病变癌变率有一定相关性。 结论 :口腔黏膜癌变是一个由量变到质变的过程 ,它们的调控基因 p16,p5 3 ,Ki -6发生了显著的变化 ,可能起着重要的调控作用。     

Ras gene mutation is not related to tumour invasion during rat tongue carcinogenesis induced by 4‐nitroquinoline 1‐oxide

J Oral Pathol Med (2011) 40 : 325–333 Background: The aim of this study was to investigate whether mutations in the genes H‐ras and K‐ras were related to the mechanism of invasion as a result of the immunoexpression of H‐Ras, Ki‐67, alpha‐smooth muscle actin (SMA) and vascular endothelial growth factor (VEGF) during 4‐nitroquinoline 1‐oxide (4NQO)‐induced rat tongue carcinogenesis. Methods: Male Wistar rats were distributed into three groups of 10 animals each and treated with 50 ppm 4NQO solution through their drinking water for 4, 12 and 20 weeks. Ten animals were used as negative control. Results: Although no histopathological abnormalities were induced in the epithelium after 4 weeks of carcinogen exposure, Ki‐67 was overexpresssed in the ‘normal’ oral epithelium. In pre‐neoplastic lesions at 12 weeks following carcinogen exposure, the levels of Ki‐67 were increased (P < 0.05) when compared to negative control. Ki‐67, alpha‐SMA and VEGF were also overexpressed in squamous cell carcinomas induced after 20 weeks of treatment with 4NQO. No significant statistical differences (P > 0.05) were found in H‐ras protein expression for all experimental periods evaluated that corresponded to normal oral mucosa, hyperplasia, dysplasia and squamous cell carcinomas. In the same way, no mutations in H‐ras or K‐ras genes were found. Conclusions: Our results support the idea that expression of Ki‐67 plays a crucial role during malignant transformation being closely related to neoplastic conversion of the oral mucosa cells. However, it seems that mutations in the ras genes are not involved to experimental tongue carcinogenesis induced by 4NQO.     

4NQO诱导小鼠舌癌前病变模型的研究

目的 使用4NQO诱导并建立C57BL/6J小鼠舌癌前病变模型.方法 46只6～8周龄C57BL/6J小鼠,随机取16只作为阴性对照,不做任何处理,分别于8、12、16周末处死.实验组30只饮用50μg/ml 4NQO水溶液,分别于8、12、16周末处死.处死前2小时腹腔注射BrdU (50mg/kg),肉眼及组织病...     

钟基因Per2和肿瘤相关钟控基因在金黄地鼠口腔颊黏膜癌变不同阶段的昼夜节律改变

目的 探讨钟基因Per2和钟控基因血管内皮生长因子（VEGF）、Ki67、c-Myc和P53在颊黏膜癌变不同阶段的昼夜节律变化规律以及与癌变发生发展的关系。方法 90只叙利亚金黄地鼠置于12 h光照和12 h黑暗交替环境中饲养,用二甲基苯并蒽（DMBA）涂抹颊黏膜建立金黄地鼠颊癌模型,分别在DMBA涂抹前,涂抹6周和14周后的24 h内的6个不同时间点处死动物,获取正常颊黏膜、癌前病变和癌症3个不同阶段昼夜6个不同时间的组织。经病理学检查确认后,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测各时间点Per2、VEGF、Ki67、c-Myc和P53 mRNA的相对表达量,并行余弦分析,以中值、振幅和峰值位相时为指标反映各基因表达的昼夜节律特征。结果 Per2、VEGF、P53和c-Myc mRNA在癌变3个阶段的表达均具有昼夜节律性（P<0.05）,而Ki67 mRNA仅在正常黏膜和癌前病变阶段的表达具有昼夜节律性（P<0.05）。Per2和P53 mRNA表达的中值随着癌症的发展而降低（P<0.05）,VEGF、c-Myc和Ki67 mRNA表达的中值随着癌症的发展而上升（P<0.05）;P53 mRNA的振幅随着癌症的发展而降低（P<0.05）,Per2、VEGF、Ki67和c-Myc mRNA的振幅在癌前病变和癌症阶段均高于正常组（P<0.05）;在癌前病变阶段,Per2、VEGF和c-Myc mRNA的峰值位相时较正常组提前,而Ki67和P53 mRNA的峰值位相时较正常组滞后。结论 随着癌症的发生和发展,钟基因Per2和肿瘤相关钟控基因VEGF、Ki67、c-Myc、P53表达的昼夜节律特征发生明显改变。     

4-硝基喹啉-1-氧化物诱导C57BL/6小鼠舌黏膜癌变的研究

目的 用4-硝基喹啉-1-氧化物（4NQO）诱导C57BL/6小鼠舌黏膜癌变。方法 将85只小鼠随机分为蒸馏水对照组（n=5）、1,2丙二醇对照组（n=5）、实验组（n=75）,分别给予蒸馏水、1,2丙二醇及4NQO溶液饮用。实验组小鼠再分为15笼,每2周处死一笼,对照组小鼠于28周处死。对小鼠进行称质量和大体观察及组织病理学检查。结果 实验组死亡1只。实验组小鼠体质量在24周后体质量较对照组明显降低（P<0.05）。实验动物的舌、口底、上颚、颊部共出现79处肉眼可见的病变,其中舌部病变70处（88.6%）。实验组动物在不同时间点黏膜病变不同,28周时均发生高分化鳞状细胞癌。对照组未见病变。结论 舌癌动物模型被成功建立。实验12~16周及20~28周可作为研究舌黏膜癌变早期和中晚期阶段的时间点。     

Myeloid-derived suppressor cells contribute to oral cancer progression in 4NQO-treated mice

Oral Diseases (2011) 18 , 67–73 Objective: Abnormal myelopoiesis especially the expansion of myeloid‐derived suppressor cells (MDSCs) is increasingly recognized as an important reason for the escape of tumor from immune surveillance. This study aims to investigate the role of this specific population of cells in oral cancer progression. Materials and Methods: 4‐Nitroquinoline 1‐oxide (4NQO) was used to induce oral cancer in C57BL/6 mice. The tongue mucosa was examined by hematoxylin and eosin staining. The distribution of MDSCs in the spleen and peripheral blood and T cell subsets in the spleen was analyzed by flow cytometry. The expression of MDSCs in the tongue tissues was investigated by immunohistochemical staining, and the expression of arginase‐1 (ARG‐1) and NOS‐2 in the tongue tissues was detected by real‐time PCR. Results: We found that during tumor progression, significantly increased frequency of MDSCs was observed in the spleens and peripheral blood of 4NQO‐treated mice, and the frequency of MDSCs in the spleens was positively correlated with systemic CD3⁺CD8⁺ T cells. Moreover, 4NQO‐treated mice showed significantly higher MDSCs infiltration and ARG‐1 mRNA level in the tumor site. Conclusions: Myeloid‐derived suppressor cells contribute to oral tumor progression and represent a potential target for immunotherapy of oral cancer.