卡巴胆碱对脓毒症大鼠内脏组织缺血引起脂质过氧化损伤的作用研究

目的 探讨卡巴胆碱(CAR)对脓毒症大鼠脏器组织灌流和脂质过氧化损伤的影响.方法 雄性SD大鼠64只,采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备大鼠脓毒症模型.随机分为CAR处理组和CLP组,每组32只,术后即刻两组分别静脉注射CAR 10 μg/kg或等量生理盐水.每组16只用于观察12 h和24 h死亡率;其余16只于CLP后18 h测定平均动脉压(MAP)和肝、肾、空肠组织血流量;取血测定血浆丙氨酸转氨酶(ALT)和肌酐(Cr)水平;后处死动物,测定空肠组织二胺氧化酶(DAO)活性及肝、肾、空肠组织黄嘌呤氧化酶(XOD)活性、丙二醛(MDA)含量和组织含水量.结果 CAR组12 h和24 h死亡率分别为25.0%(4/16)和50.0%(8/16),显著低于CLP组[37.5%(6/16),75.0%(12/16),P均<0.05].CLP后18 h,两组MAP差异无统计学意义(P>0.05);CAR组肝、肾、空肠组织血流量均明显大于CLP组(P均<0.05),肾和空肠组织XOD活性、MDA含量及组织含水量显著低于CLP组(P均<0.05);脏器功能指标[ALT;(64.3±8.3)U/L,Cr:(96.4±7.0)μmol/L,DAO;(0.20±0.04)U/L]的改善程度也均显著优于CLP组EALT:(81.5±7.9)U/L,Cr:(117.1±6.7)μmol/L,DAO;(0.12±0.03)U/L,P均<0.053.结论 CAR能改善脓毒症大鼠内脏灌流、抑制氧自由基生成,减轻组织水肿和脏器功能损害.     

电针足三里穴对腹腔脓毒症大鼠肠缺血及氧自由基损伤的作用研究

目的 探讨电针足三里穴对脓毒症大鼠肠缺血和氧自由基损伤的保护作用.方法 采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备大鼠脓毒症模型.雄性Wistar大鼠32只,随机分为CLP+电针足三里(CLP/EA)组、CLP+假电针(CLP/SEA)组、迷走神经切断+CLP+SEA(VA/CLP/SEA)组、VA+CLP+EA(VA/CLP/EA)组,每组8只.EA组持续针刺双侧足三里穴30 min,刺激强度为2～3 mA,2～100 Hz;SEA组采用相同频率和强度刺激非经非穴(足三里外侧旁开0.5 cm)30 min;VA组于CLP前切断迷走神经.各组大鼠于CLP后6 h测定空肠黏膜血流量(JMBF),处死动物取空肠组织,测定丙二醛(MDA)含量、黄嘌呤氧化酶(XOD)和二胺氧化酶(DAO)活性及肠组织含水量.结果 与CLP/SEA组比较,CLP/EA组JMBF和DAO活性显著增加,XOD和MDA及肠组织含水量显著降低(P均<0.05);VA/CLP/SEA组和VA/CLP/EA组JMBF和DAO活性显著降低,XOD和MDA水平显著升高,且组织含水量明显高于CLP/EA组(P均<0.05).VA/CLP/EA组与VA/CLP/SEA组各指标均无明显差异(P均＞0.05).结论 电针足三里可显著增加CLP大鼠JMBF和DAO活性,减轻肠组织水肿和脂质过氧化损伤;切断腹腔迷走神经能减轻或消除电针的作用,增强小肠组织过氧化反应,加重肠组织水肿和黏膜细胞损害.电针足三里穴对肠缺血和氧自由基损伤的保护机制可能与兴奋胆碱能通路有关.     

腹腔感染性脓毒症可溶性髓样细胞触发受体(sTREM-1)与Janus激酶-信号转导和转录激活因子(JAK/STAT)通路的关系

目的 通过动物脓毒症模型探讨可溶性髓样细胞触发受体(sTREM-1)与Janus激酶-信号转导和转录激活因子(JAK/STAT)通路的关系.方法 采用盲肠结扎穿孔(CLP)法制作大鼠脓毒症模型,大鼠随机(随机数字法)分为正常对照组(n=6)、假手术组(n=24)、CLP组(n=48)、JAK 2抑制剂(AG 490)组(n=48)和STAT3抑制剂(雷帕霉素,RPM)组(n=48).留取外周血行流式细胞仪分析CD4+ CD25+ Treg细胞/CD4+T细胞比值.采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)测定肝组织sTREM-1 mRNA表达水平.结果 CLP后6h肝sTREM-1 mRNA表达即高于对照组和假手术组,且随时间变化逐渐升高.AG490组肝组织sTREM-1 mRNA的表达在术后6h、24 h(1.572±0.051,2.063±0.025)较同时间点CLP组(1.592±0.036,2.082±0.021)差异无统计学意义(P＜0.05),而在48 h和72 h AG490组肝组织sTREM-1 mRNA的表达(2.522±0.083,3.153±0.021)低于同时间点CLP组(2.592±0.055,3.204±0.013) (P＜0.05).术后6 h RPM组肝组织sTREM-1mRNA的表达(1.581±0.017)较CLP组差异无统计学意义(P＜0.05),而在术后24、48、72 h RPM组肝组织sTREM-1 mRNA的表达(1.486±0.019,1.263±0.011,1.115±0.022)显著低于同时间点CLP组肝组织sTREM-1 mRNA的表达(P＜0.05).结论 sTREM-1因子与JAK/STAT通路有关,阻断JAK/STAT通路能够抑制sTREM-1 mRNA的表达,减缓脓毒症炎症反应的进展.     

姜黄素对脓毒症大鼠肺组织高迁移率族蛋白B1 水平的影响

目的 观察姜黄素对脓毒症大鼠肺组织高迁移率族蛋白B1(HMGB1)水平和120 h 存活率的影响.方法 采用盲肠结扎穿孔术建立大鼠脓毒症模型.脓毒症大鼠随机分为对照组和姜黄素处理组,后者以100 mg/kg 剂量盲肠结扎穿孔术(CLP)后0、12、24、36、48 h 分别于腹腔注射姜黄素,观察姜黄素处理后脓毒症大鼠于CLP 后3、6、12、24、48、72 h 时间点肺组织HMGB1 的表达水平和盲肠结扎穿孔术后120 h 两组大鼠存活率的比较.结果 脓毒症大鼠经姜黄素处理后肺组织HMGB1 表达水平显著降低(P ＜0.05),术后120 h 存活率较对照组明显增高(61% vs.33%,P ＜0.05).结论 姜黄素能够降低脓毒症大鼠肺组织HMGB1 水平并提高存活率.     

芍药苷对实验性大鼠脓毒症肝损伤的保护作用

[目的]探讨芍药苷(paeoniflorin,PF)对实验性大鼠脓毒症急性肝损伤(acute liver injury,ALI)的保护作用.[方法]采用盲肠结扎穿孔(Cecal ligation and puncture,CLP)术诱导制作脓毒症大鼠急性肝损伤模型,将36只SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、PF干预组,每组12只.假手术组仅行开腹关腹术,模型组予CLP术,PF干预组大鼠在CLP术后立即予PF腹腔注射.观察造模处理后48 h内各组大鼠的生存情况,绘制生存曲线;检测各组血清谷丙转氨酶(ALT)水平;采用黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(SOD)活力,采用硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)含量;HE染色观察肝脏组织病理变化.[结果]假手术组生存率为100％,显著高于模型组生存率16.7％和PF干预组生存率66.7％(P＜0.05),而干预组生存率显著高于模型组(P＜0.05);与假手术组比较,模型组大鼠血清ALT水平显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05);与模型组比较,PF干预组大鼠ALT血清水平降低,差异有统计学意义(P＜0.05).与假手术组比较,模型组大鼠肝组织中MDA含量增加和SOD活性降低(P＜0.05);与模型组比较,PF干预组MDA含量降低,SOD活性增强,差异均具有统计学意义(P＜0.05).病理切片显示假手术组大鼠肝脏结构无明显改变,模型组肝细胞呈点灶状坏死、大量炎症细胞浸润,PF干预组病理损伤情况均较模型组明显改善.[结论]PF对CLP诱导的大鼠脓毒症ALI具有一定的保护作用,其机制可能是抗氧化反应.     

卡巴胆碱对烧伤休克犬肠内补液时肠组织缺血／再灌注损伤的影响

目的 探讨卡巴胆碱(CAR)对烧伤休克期肠内补液时肠缺血/再灌注损伤的保护作用.方法 18只成年雄性Beagle犬被随机分为3组,每组6只.采用凝固汽油燃烧法造成50%总体表面积(TBSA)Ⅲ度烧伤模型.伤后无治疗(不补液组)或于伤后30 min开始从十二指肠造口分别输入葡萄糖-电解质溶液(GES组)或含CAR的GES(20 μg/kg CAR溶于GES,GES/CAR组),伤后8 h内输液量依据Parkland公式计算.检测伤前和伤后1、2、4、6、8 h小肠黏膜血流量(IMBF)及血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量.伤后8 h处死动物,取空肠组织用干湿重法测定小肠组织含水量;并测定一氧化氮合酶 (NOS)、丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)、黄嘌呤氧化酶(XOD)水平.结果 各组伤后IMBF均显著降低,TNF-α显著升高;伤后4 h起GES组IMBF显著高于不补液组,6 h后显著低于GES/CAR组(P均<0.01);不补液组与GES组TNF-α含量差异无统计学意义,但伤后2 h和4 h均显著高于GES/CAR组(P均<0.01).伤后8 h GES组NOS、MDA、MPO和XOD均显著高于不补液组,而GES/CAR组分别比GES组低26.0%、17.1%、50.0%和19.2%,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01).GES/CAR组肠组织含水量也显著低于GES组(P<0.01).结论 CAR能有效减轻烧伤犬肠内补液时肠组织缺血/再灌注损伤,机制可能与增加肠黏膜血流,抗炎和抑制XOD活性,减少炎症因子和氧自由基生成有关.     

脓毒症大鼠肝脏缺氧诱导因子-1α的表达及其与肝脏损伤的关系

目的 分析脓毒症大鼠肝脏缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)水平的表达、血清乳酸水平、转氨酶水平及肝脏病理损伤的变化;探讨HIF-1α与乳酸、肝脏转氨酶及病理损伤是否存在相关性.方法 将清洁SD大鼠150只分为正常组50只,假手术组50只,盲肠结扎术(CLP)手术组50只.CLP组于手术成功后的第6、12、24、48及72小时分别取10只处死,并于每个时间点取10只正常组大鼠和10只假手术组大鼠作为相应时间点的对照.在各时间点取肝脏组织进行病理学分析,测定血HIF-1 α、乳酸及转氨酶水平.比较各时间点血乳酸、转氨酶及HIF-1α水平的表达是否存在差异,并探讨HIF-1α与肝脏损伤指标及病理变化间的联系.结果 CLP组大鼠肝细胞6h组开始出现损伤,12 h、24h和48 h损伤逐渐加重,损伤在CLP后48 h最重;CLP组6h、12 h和24 h HIF-1α水平的表达与正常组和假手术组相比明显增高,差异有统计学意义(P＜0.05);CLP 12 h和24h乳酸、ALT及AST水平均明显升高,与正常组和假手术组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);HIF-1α水平与乳酸水平、血清ALT水平均存在正相关性(r值分别为0.631、0.436,P＜0.05).结论 脓毒症大鼠血HIF-1α与乳酸及谷丙转氨酶水平存在相关性,与肝脏病理损伤时间基本相同,HIF-1α可作为预测脓毒症肝脏损伤的主要指标.     

血必净对鲍曼不动杆菌脓毒症大鼠肝脏组织翻译控制肿瘤蛋白表达的影响

目的 探讨血必净对鲍曼不动杆菌脓毒症大鼠肝脏组织翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)表达的影响.方法 健康清洁级成年雄性Wistar大鼠42只,随机取6只大鼠作为对照组;余36只按随机数字表法均分为脓毒症组和血必净组.通过腹腔注射鲍曼不动杆菌悬液制作脓毒症模型,30 min后血必净组尾静脉注射血必净注射液.脓毒症组和血必净组于制模后6、12和24 h随机取6只大鼠,处死取肝脏组织标本,苏木素-伊红(HE)染色,观察肝脏组织病理学改变;免疫组化法分析肝脏组织TCTP表达阳性细胞;蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测肝细胞TCTP的表达.结果 HE染色显示,脓毒症组肝脏炎性受损,血必净组肝组织炎性损伤较脓毒症组减轻.免疫组化结果显示,与对照组比较,脓毒症组6、12和24 h TCTP阳性细胞表达评分(分)明显升高(7.33 ± 0.82、10.67±1.21、7.67±1.21比2.50±1.05,均P＜0.05);与脓毒症组比较,血必净组6、12和24 h肝组织TCTP阳性细胞表达评分(5.83±0.75、7.50±1.05、5.67±1.37)均降低(均P＜ 0.05).Western blotting结果显示,与对照组比较,脓毒症组6、12和24hTCTP表达量明显增加(1.94±0.59、3.20±0.72、1.96±0.55比0.93±0.24,均P＜0.05);与脓毒症组比较,血必净组6、12和24 h TCTP表达量(1.38±0.36、2.03±0.49、1.30±0.30)明显降低(均P＜0.05).结论 血必净有利于减轻鲍曼不动杆菌脓毒症大鼠肝脏的炎性损伤,其机制可能与降低肝细胞表达TCTP有关.     

卡巴胆碱对大鼠烫伤休克期肠内补液时肠道的影响

目的 研究拟胆碱药卡巴胆碱对大鼠烫伤休克期肠内补液时肠道局部炎症反应和肠组织损伤的影响,为烧伤休克胃肠道补液研究提供依据.方法 38只雄性Wistar大鼠,采用沸水法(100℃,10 s)造成背部35%TBSAⅢ度烫伤.随机分为不复苏组(单烫组,n=8)、葡萄糖-电解质溶液(glucose electrolyte solution)复苏组(GES组,n=10)、卡巴胆碱治疗组(CAR组,n=10)和GES+卡巴胆碱复苏组(GES/CAR组,n=10).两液体复苏组大鼠在烫伤后30 min将GES经十二指肠造口匀速泵入,按Parkland公式设定补液速率,即烫伤后第一个24 h补液总量4 ml·1%TBSA-1·kg-1,前8 h匀速补一半.CAR组和GES/CAR组大鼠在伤后30 min将CAR以60μg·kg-1溶于0.5 ml生理盐水中一次注入十二指肠.所有大鼠在烫伤后4 h处死,取空肠组织测定一氧化氮合酶(N0s)、一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量和髓过氧化物酶(MPO)活性,同时测定血浆二胺氧化酶(DAO)活性,采用组间方差分析统计比较各组上述指标的差别.结果 GES组的肠组织NOS、NO、TNF-α、MPO和血浆DAO水平与单烫组差异无统计学意义;GES/CAR组各指标较GES组均明显降低[NOS(1.276±0.39I vs.(1.818±0.436),P＜0.01;NO(0.925±0.402)vs.(1.561±0.379),P＜0.01;TNF-α(0.87±0.13)vs.(1.94±0.47),P＜0.01;MPO(0.465±0.092)vs.(0.832±0.214),P＜0.01;DAO(0.732±0.192)vs.(1.381±0.564),P＜0.01],CAR组各指标也较单烫组和GES组明显降低(P＜0.05或P＜0.01).结论 卡巴胆碱能减轻烫伤休克大鼠肠内液体复苏时的肠道局部炎症反应和组织损伤,其作用机制可能与其兴奋胆碱能神经N受体,抑制促炎因子释放的作用有关.     

卡巴胆碱复合膳食纤维对颅脑损伤后大鼠肠机械屏障保护作用的研究

目的 探讨早期灌胃给予卡巴胆碱复合膳食纤维对弥漫性颅脑损伤后大鼠肠黏膜机械屏障的影响。方法采用Marmarou模型制备方法造成成年雄性Wistar大鼠弥漫性颅脑损伤,造模后成活的大鼠随机分为4个实验组:生理盐水组(NS组,n=32)、卡巴胆碱组(CAR组,n=32)、膳食纤维组(DF组,n=32)、卡巴胆碱复合膳食纤维组(CAR+DF组,n=32)。另设只切开头皮的假手术组(对照组,n=20)。对照组自由饮水,实验组从造模成功后2 h开始灌胃,分别给予生理盐水、卡巴胆碱(100μg·kg-1·12h-1)、膳食纤维(8g·kg-1·d-1)、卡巴胆碱+膳食纤维,于伤后6、12、24、48 h活杀取材,检测血浆中二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)活性、D-乳酸含量,并观察小肠绒毛病理学改变。结果 成功制备弥漫性颅脑损伤大鼠模型,弥漫性颅脑损伤后大鼠肠黏膜固有层水肿,炎性细胞浸润,部分黏膜上皮细胞变性、坏死、脱落,绒毛变短,在12 h损伤最重。CAR组、DF组及CAR+DF组肠绒毛较NS组恢复快,表现为炎症、水肿减轻,肠绒毛高度增加,并且血浆中DAO活性及D-乳酸含量低于NS组,但至伤后48 h均并未恢复至对照组水平。CAR组、DF组与CAR+DF组比较,除6 h CAR组D-乳酸含量较CAR+DF组低且差异有统计学意义(P<0.05)外,CAR组、DF组及CAR+DF组6~48 h DAO活性、D-乳酸含量及肠绒毛高度均无统计学差异(P均>0.05)。结论 弥漫性颅脑损伤后早期灌胃给予卡巴胆碱、膳食纤维、卡巴胆碱复合膳食纤维可减轻肠黏膜损伤,保护肠黏膜机械屏障,但本实验中卡巴胆碱复合膳食纤维与单药应用比较并未显现出明显优势。