梅毒螺旋体TpN15重组抗原的克隆与表达

目的：用基因工程技术表达梅毒螺旋体TpN15重组抗原，为进一步研制梅毒螺旋体疫苗和ELISA诊断试剂盒奠定基础。方法：采用PCR技术扩增梅毒螺旋体TpN15基因，进行T-A克隆及测序，然后亚克隆到原核表达载体中，以亲和层析法纯化重组蛋白。结果：成功地构建了pET32-TpN15重组表达载体，TpN15重组蛋白在大肠杆菌BL21中得到稳定表达。结论：梅毒螺旋体TpN15基因在大肠杆菌中的成功表达为临床检测梅毒感染的新方法和梅毒螺旋体疫苗的研制奠定了基础。     

酶切与PCR联用合成梅毒抗原TpN17全长DNA及其表达活化和ELISA检测

目的在大肠埃希菌中重组表达梅毒密螺旋体TpN17抗原，用其建立梅毒诊断血清学方法。方法酶切与PCR联用。合成全长TpN17基因，亚克隆后克隆到pET-HIS质粒并转化到大肠杆菌BL21株中表达。亲和层析纯化。纯化rTpN17包被微孔板，ELISA方法检测临床8份梅毒阳性血清和4份阴性血清。结果获得了重组表达并纯化的TpN17，ELISA检测结果表明重组蛋白能被梅毒患者阳性血清所识别．特异性100％．灵敏度100％。结论证明了该重组蛋白具有良好的免疫反应性，可用于梅毒感染的血清学检测。     

酶切与PCR联用合成梅毒抗原TpN17全长DNA及其表达活化和ELISA检测

目的在大肠埃希菌中重组表达梅毒密螺旋体TpN17抗原，用其建立梅毒诊断血清学方法。方法酶切与PCR联用。合成全长TpN17基因，亚克隆后克隆到pET-HIS质粒并转化到大肠杆菌BL21株中表达。亲和层析纯化。纯化rTpN17包被微孔板，ELISA方法检测临床8份梅毒阳性血清和4份阴性血清。结果获得了重组表达并纯化的TpN17，ELISA检测结果表明重组蛋白能被梅毒患者阳性血清所识别．特异性100％．灵敏度100％。结论证明了该重组蛋白具有良好的免疫反应性，可用于梅毒感染的血清学检测。     

梅毒螺旋体嵌合抗原的重组克隆与表达

目的 连接梅毒螺旋体特异抗原TpN17和TpN15的基因，克隆并表达此嵌合抗原。方法 PCR分别克隆TpN17和TpN15的基因，利用T4 DNA连接酶将二者连接在一起并插入到pRSET B质粒中，在BL21(DE3)菌株中用IPTG诱导表达。结果 连接的TpN17—15基因，测序结果与GenBank数据吻合。结论 SDS—PAGE电泳中显示表达的目的蛋白与预期的蛋白分子量一致。     

梅毒螺旋体TpN15-47融合基因原核表达系统的构建

目的构建梅毒螺旋体TpN15-47融合基因及其原核表达系统。方法分别克隆TpN15和TpN47基因,利用T4连接酶构建TpN15-47融合基因,常规方法构建其原核表达系统。采用SDS-PAGE检测目的重组蛋白TpN15-47表达情况。结果连接的TpN15-47基因测序分析表明,插入的基因片段为TpN15-47融合基因,与GenBank报道相同。目的重组蛋白TpN15-47表达产量约为细菌总蛋白85.79%,主要以包涵体形式存在。结论所构建的原核表达系统能高效地表达TpN15-47融合蛋白,为后期梅毒螺旋体基因疫苗和临床检测试剂盒的研制奠定了基础。     

梅毒螺旋体多表位抗原的改构及在双抗原夹心检测梅毒抗体中的应用

[目的]研制用于包被和标记重组梅毒螺旋体表位抗原，建立双抗原夹心酶联免疫检测梅毒抗体。[方法]利用计算机Godlkey软件分析梅毒螺旋体基因，确立优势抗原表位(rTpN17-TpN15-TpN42-TpN47)，并分别克隆表达四个抗原，然后将四个抗原串联成一个嵌合表达蛋白用于包被，在此抗原的末端连接4个赖氨酸，作为辣根过氧化物酶标记用梅毒抗原，建立双抗原夹心检测梅毒抗体。[结果]在一端连接4个赖氨酸梅毒抗原活性高于未加赖氨酸的抗原，梅毒抗原标记辣根过氧化物酶的ELISA双抗原夹心法与TPHA法阳性符合率为97．5％，特异性明显好于TRUST、间接ELISA法。[结论]改进的梅毒抗原标记辣根过氧化物酶用于双抗原夹心检测梅毒抗体获得了满意的结果。     

梅毒螺旋体基因重组抗原及其血清学诊断研究进展

梅毒是由梅毒螺旋体也称苍白密螺旋体（Treponemapallidum,Tp）感染引起的传染性强、危害较大的人类性传播疾病。长期以来由于Tp人工培养困难,致使以Tp抗原为基础的血清学研究受到严重制约。随着Tp全基因序列的解释,为基因工程制备Tp抗原开辟了广阔的空间。当前,Tp重组抗原的基因研究已由单基因发展到多表位嵌合基因,部分基因已通过原核生物成功表达,解决了Tp血清学研究的抗原瓶颈问题,使之在血清学检测中得到广泛应用。我们就与血清学诊断相关的Tp基因重组抗原的特性及其临床运用作一综述。     

梅毒螺旋体TPN17重组抗原的表达及其在献血筛查中的应用

梅毒是严重危害人类健康的疾病之一。近年来,梅毒的发病率呈上升趋势,在一些高危人群中更为严重。检测感染者血清梅毒螺旋体抗体是诊断梅毒螺旋体感染的主要方法。常用的方法有性病实验室研究试验(VDRL)、荧光螺旋体吸收试验(FTA-ABS)和梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA),近年来国外开始采用酶联免疫吸附实验方法(ELISA)检测血清梅毒螺旋体抗体［1］。建立检测梅毒螺旋体抗体的关键是制备特异的梅毒螺旋体抗原。梅毒螺旋体不能体外培养,获得其自然抗原通常是从完整梅毒螺旋体中分离其抗原成分,制备相当困难［2］。因此,用基因工程方法表达梅毒螺旋体蛋白抗原是制备特异抗原的有效途径。TPN17蛋白(Treponema pallidum 17 kilodalton protein, TPN17抗原)是梅毒螺旋体重要的结构蛋白之一,在梅毒螺旋体感染免疫中具有重要作用。笔者用基因工程表达梅毒螺旋体的TPN17抗原,并建立了检测梅毒螺旋体抗体的ELISA方法。现将结果报告如下。     

梅毒螺旋体嵌合抗原的克隆表达及其临床应用

目的 在大肠埃希菌中表达梅毒螺旋体Tp15—17嵌合抗原,用于临床检测梅毒感染。方法 利用PCR法从Tp全基因组中分别扩增目的基因Tp15和Tp17,用T4DNA连接酶连接后,克隆进表达载体pGEX-6P-1中,构建重组质粒pGEX-6P-1＋Tp15-17,在大肠埃希菌中表达重组Tp嵌合蛋白,重组蛋白经亲和层析柱纯化后包被微孔板,初步建立间接ELISA法检测血清中的抗Tp抗体。结果 重组嵌合抗原获得了高效表达,免疫印迹试验显示重组抗原具有很强的抗原性。用重组嵌合抗原建立间接ELISA法,对梅毒螺旋体抗体阳性参比血清及梅毒患者血清的检测符合率100％。结论 重组梅毒螺旋体嵌合抗原Tpl5—17能够作为梅毒螺旋体诊断性ELISA抗原。     

多表位融合蛋白对减少梅毒抗体测定假反应性的作用

目的针对梅毒低流行率人群,采用多表位融合片段策略以提高苍白密螺旋体(Tp)筛查试验的特异度,减少Tp假反应性结果。方法通过原核表达系统获得包含Tp47蛋白多个优势B细胞表位的多表位融合蛋白。随后将该多表位融合蛋白作为抗原用于建立双抗原夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)法并检测96份梅毒阳性血清(1≤S/CO≤10)。将梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)结果作为标准,将多表位融合蛋白的灵敏度和特异度与Tp47蛋白进行比较。结果多表位融合蛋白双抗原夹心ELISA法检测的灵敏度和特异度分别为90.32%和94.12%,Tp47蛋白双抗原夹心ELISA法检测的灵敏度为93.55%,特异度较低,为79.41%。多表位融合蛋白双抗原夹心ELISA法与TPPA结果的符合率为91.67%,高于Tp47蛋白的88.54%。结论多表位融合蛋白可有效提高梅毒血清学诊断的特异度。该研究为开发新一代具有较高特异度的梅毒诊断方法提供了思路。     

肇庆市居民颈椎病流行病学调查

目的 :调查肇庆市居民颈椎病发病情况及相关问题。方法 :通过分层随机抽样选择该市区18～70岁居民5000人为研究对象 ,入户或至单位询问调查。结果 :该市居民颈椎病发病率为8.11% ,男女差异无显著性 ,随着年龄的增长 ,发病率逐渐增加。经多因素分析 :体位姿势不正确、情绪紧张、潮湿、疲劳是发病的主要诱因。结论 :该病严重影响肇庆市居民的健康 ,做好防治应从早做起 ,综合防治。     

中国人四肢瘫日常生活能力评定量表的信度研究

目的研究四肢瘫日常生活能力评定量表评测四肢瘫患者的重测信度及观察者间信度。方法由1位评定者应用四肢瘫日常生活能力评定量表对20例四肢瘫患者进行评定,评定后1周内再次对该患者进行评定;另1位评定者在第1位评定者初次评定后2 d内对该患者进行评定。结果第1位评定者两次评定总分的组内相关系数为0.994(P<0.01);第1位评定者与第2位评定者评定总分的组内相关系数为0.971(P<0.01)。结论四肢瘫日常生活能力评定量表具有良好的重测信度及观察者间信度。     

护理干预对提高中风患者生活质量的效果观察

目的探讨提高中风患者生活质量的护理方法。方法将50例中风患者随机分为对照组23例和实验组27例,对照组给予针灸内科常规护理,实验组在此基础上给予心理护理和康复训练。结果两组患者治疗护理后日常生活活动(ADL)能力和贝克抑郁量表(BDI)评分均有好转,但实验组疗效明显优于对照组(P<0.05)。结论实施针对性心理护理和康复训练可明显提高中风患者的治疗效果。     

Determination of loss of quality of life

Physiatrists are a valuable resource in legal settings, where assessment of functional capacity to perform work and of future medical needs must be determined. Physiatrists help determine what future medical care is needed to restore and maintain an individual at the maximum level of life function. This article focuses on the use of a quality of life (QOL) rehabilitation model, rather than a medical model, for enhancing functional performance, modifying environments, and facilitating patient coping. We discuss use of the QOL model to describe and influence a patient's physical, psychological, cognitive, vocational/economic, and social/leisure domains.     

缺血性脑卒中患者血浆内皮素和心钠素含量的相关性探讨

本文监测了３３例缺血性脑卒中患者血浆中内皮素 (ＥＴ)和心钠素 (ＡＮＰ)的含量变化及其相关关系并进行分析 ,以探讨其在缺血性脑卒中发病过程中的作用及其相关关系。１资料与方法１．１一般资料本文选择缺血性脑卒中患者３３例 ,均为我院住院病人。年龄４１～８３岁 ,平均６０．３岁 ;病程３ｈ～３个月 ,其中１周内３０例 (９０% )。３３例患者中腔隙性脑梗塞１３例 (梗塞面积≤１５ｍｍ２) ,单发性梗塞９例 (梗塞面积＞１５ｍｍ２) ,多发性梗塞１１例 (梗塞面积＞１５ｍｍ２,且病灶在两个以上者 )。梗塞部位包括脑叶、基底层、脑干 (脑…     

胰腺癌治疗的Cochrane系统评价证据

目的评价胰腺癌治疗的Cochrane系统评价证据,以及纳入系统评价的临床随机对照试验（RCT）的方法学质量。方法检索Cochrane Library数据库（2009年第4期）中有关胰腺癌治疗的系统评价,并运用RewMan5.0.21对所纳入研究的偏倚进行评估。结果共检索到胆道支架置入术姑息治疗梗阻型胰腺癌的系统评价、放化疗治疗不能手术的进展期胰腺癌的系统评价共2篇系统评价,共纳入79个RCT。依照Cochrane协作网推荐的质量评价方法,对所纳入RCT的偏倚进行评估,表明均存在不同程度的偏倚,方法学质量普遍较低。结论 Cochrane系统评价是公认的最高质量的研究证据,但目前缺少足够强度的证据来支持胆道支架置入术姑息治疗梗阻型胰腺癌的疗效。其他治疗手段的疗效如胰腺癌围手术期的营养支持治疗等还需要通过进一步的完成系统评价来评估。建议推行临床试验透明化,实施临床试验注册制度以及按照CONSORT声明严格规范RCT的报告,以便于总结胰腺癌治疗的临床证据。     

韶关市农村留守儿童孤独感状况调查

目的了解广东省韶关市农村地区留守儿童孤独感现状及其影响因素。方法对韶关市某地区两所农村小学3～6年级学生中的489名留守儿童采用儿童孤独量表和自编调查表进行问卷调查。结果17．6％留守儿童存在孤独感，不同性别孤独感发生率无差异性，不同年龄及不同年级间孤独感发生率差异均有极显著性（P〈0.01）；随年级增加，孤独感发生率呈下降趋势（X^2趋势=5．970，P〈0.05）。留守儿童孤独感与健康状况、学习成绩、学习困难程度、父母教育方式、父母间关系和老师教育方式等因素显著相关（P〈0.01～0．05）。结论农村地区留守儿童中存在一定程度的孤独感问题，老师和家长应以正确的态度和方法对待留守儿童，以减少其孤独感的发生。