17β-雌二醇对大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的诱导调控

背景：研究发现骨髓间充质干细胞上存在雌激素受体,雌激素通过调节骨髓间充质干细胞的增殖、分化特性发挥促成骨作用。目的：观察17β-雌二醇对骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的诱导作用,并探讨其作用机制。方法：在基础成骨诱导培养基培养的第3代大鼠骨髓间充质干细胞中分别加入0（对照组）,0.001,0.01,0.1nmol/L17β-雌二醇干预。Elisa法检测培养的骨髓间充质干细胞分泌Ⅰ型胶原的水平,RT-PCR及Western blotting法分别检测Runx2因子mRNA及蛋白水平。结果与结论：与对照组比较,在给予0.001,0.01,0.1nmol/L17β-雌二醇干预后第5天,骨髓间充质干细胞Ⅰ型胶原表达显著升高（P〈0.05）,第7天仍旧呈高表达（P〈0.05）。同时,在17β-雌二醇干预的第5,7天,Runx2因子mRNA及蛋白表达水平随17β-雌二醇浓度的增加而升高（P〈0.05）,并呈剂量依赖性。表明17β-雌二醇可诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞转化,其可能通过上调Runx2因子表达发挥促成骨作用。     

雌激素、促性腺激素与大鼠成骨细胞雌激素受体β的表达

目的:观察不同剂量雌激素,卵泡雌激素及黄体生成素对大鼠成骨细胞雌激素受体β表达的影响。方法:实验于2004-02/08在哈尔滨医科大学第二临床医学院科研中心完成。①取三四个月龄雌性Wistar大鼠28只用于大鼠成骨细胞体外培养。采用二次酶消化、反复贴壁法分离纯化培养大鼠成骨细胞。观察其形态、改良钙钴法碱性磷酸酶染色,培养上清碱性磷酸酶、骨钙素测定来鉴定成骨细胞。②取2代培养的成骨细胞用无血清培养基培养24h,分为10组:对照组,1×10-10,1×10-8,1×10-6mol/L17β-雌二醇组,10,100,1000U/L黄体生成素组,1×10-7,1×10-6,1×10-5g/L卵泡刺激素组。每组3个孔。对照组加入基础培养基,其他各组分别加入相应终浓度药物,培养24～48h。大鼠成骨细胞雌激素受体表达阳性细胞数检测应用免疫组织化学法测定,以细胞浆有棕黄色颗粒沉积为阳性。成骨细胞雌激素受体β表达检测应用半定量免疫印渍酶促底物染色法以及化学发光法,以A值越高,说明雌激素受体β表达越多。结果:①成骨细胞形态及特征性鉴定:成骨细胞随培养时间的延长,细胞呈指数增长,分泌碱性磷酸酶和骨钙素,碱性磷酸酶染色阳性率为90%,表现出旺盛的分泌功能。②成骨细胞雌激素受体表达阳性细胞数检测结果:不同剂量卵泡刺激素组和黄体生成素组对雌激素受体表达无明显影响;雌激素1×10-8mol/L组和1×10-6mol/L组显著高于对照组[(90.95±5.89),(95.12±6.17),(81.44±5.37)个数/100个细胞,t=2.95,P<0.05;t=3.50,P<0.01]。③成骨细胞雌激素受体β表达结果:不同剂量卵泡刺激素及黄体生成素对雌激素受体β的表达无明显影响;随雌激素浓度的增加成骨细胞雌激素受体β表达呈上升趋势。结论:雌激素能促进成骨细胞雌激素受体β的表达,且表现出剂量依赖性。而黄体生成素、卵泡刺激素对雌激素受体β表达无直接影响。     

雌激素与雌激素受体对血管内皮细胞一氧化氮生成的影响

目的探讨雌激素及其受体对血管内皮细胞一氧化氮表达的影响. 方法采用无酚红的 1 640培养基培养大鼠血管内皮细胞,给予不同浓度的 17β雌二醇( 17β-E2)用贴块法和无酚红的 1 640培养基建立肺血管内皮细胞模型,观察不同浓度的 17β-E2(伴或不伴有雌激素受体拮抗剂 tamoxifen)作用下血管内皮细胞一氧化氮合酶( nitric-oxide synthase,NOS)的活性及一氧化氮的产量. NOS的活性用血红蛋白酶法检测, Griess 法检测一氧化氮的产量,放射配体结合分析法检测血管内皮中的雌激素受体. 结果一定浓度的 17β-E2作用 8～ 24 h血管内皮细胞一氧化氮的产量显著增加 [1 nmol/L, 10 nmol/L , 17β-E2同对照组相比 (t=1.221;P< 0.05)]; NOS活性显著增加( t=1.722, P< 0.05, t=3.680- 4.174, P< 0.01);放射配体结合分析法在血管内皮中检测到雌激素受体;雌激素受体拮抗剂能显著抑制雌激素的上述作用. 结论 17β雌二醇能通过雌激素受体途径增强血管内皮细胞的活性,这是雌激素对动脉粥样硬化防治作用的机制之一.     

雌激素对成骨细胞血管内皮生长因子表达的影响

背景:在众多的血管生长因子中,血管内皮生长因子是最有力的血管生成因子,它具有促进血管内皮细胞分裂、增殖,细胞质钙化聚集并能诱导血管生成等作用,且对于成骨细胞、破骨细胞的增殖、分化及功能活性具有重要调节作用.目的:观察雌激素对成骨细胞上血管内皮生长因子表达的影响.方法:取新生48 h大鼠颅盖骨,酶解消化得到成骨细胞,并进行体外培养.采用RT-PCR法测定10-10,10-8,10-6,10-4 mol/L17β-雌二醇作用成骨细胞后血管内皮生长因子mRNA的表达.结果与结论:RT-PCR检测结果显示,血管内皮生长因子mRNA在原代成骨细胞内稳定表达;半定量分析证实,不同浓度17β-雌二醇组间血管内皮生长因子mRNA的表达量呈现一定规律,随着17β-雌二醇浓度的升高,血管内皮生长因子mRNA的表达量逐渐增加,10-6mol/L左右时,血管内皮生长因子mRNA的表达量最高,超过此剂量,血管内皮生长因子的表达下降.提示雌激素促进成骨细胞上血管内皮生长因子的表达上调,并存在剂量依赖性.     

雌二醇与孕激素对人成骨细胞护骨素基因作用的比较

背景: 护骨素是一种由成骨细胞表达的蛋白, 可抑制破骨细胞分化和活化。目的: 观察比较 17 β- 雌二醇与孕激素对人成骨细胞护骨素基因表达的调控作用。设计: 对比观察。单位: 中南大学湘雅二医院代谢内分泌研究所。材料: Ⅳ型胶原酶( Sigma 公司), 胎牛血清(Gibico 公司), MEM(Sigma公司), 骨钙素放射免疫法测定试剂盒(Dia2Sorin 公司)。方法: 实验于 2003- 01/2006- 03 在中南大学湘雅二医院代谢内分泌研究所完成。采用正常人髂前上棘松质骨进行成骨细胞的提取和培养, 人成骨细胞用 17β- 雌二醇与孕酮干预, 采用 Northern 杂交检测护骨素mRNA 表达及酶联免疫吸附法检测护骨素蛋白质表达。主要观察指标: ①人成骨细胞鉴定。②Northern 杂交分析 17β- 雌二醇、孕酮对人成骨细胞护骨素 mRNA 表达的影响。③酶联免疫吸附分析17β- 雌二醇、孕酮对人成骨细胞护骨素蛋白质分泌的影响。结果: ①人成骨细胞鉴定: 人成骨细胞分泌的碱性磷酸酶活性为(74.3±4.7) U/g; 培养上清液中骨钙素浓度为(3.84±0.39) μg/L。表明分离培养的人成骨细胞具有成骨细胞的特性。②Northern 杂交分析 17β- 雌二醇、孕酮对人成骨细胞护骨素 mRNA 表达的影响: 人成骨细胞对照组护骨素 mRNA 表达条带弱, 与对照组相比, 1×10-10, 1×10-9, 1×10-8 mol/L17β- 雌二醇干预组护骨素 mRNA 表达条带逐渐增强; 与 0 h 相比, 干预12, 24 及 48 h 护骨素 mRNA 表达逐渐增强; 孕酮对人成骨细胞护骨素mRNA表达无影响。③酶联免疫吸附分析 17β- 雌二醇、孕酮对人成骨细胞护骨素蛋白质分泌的影响: 与对照组比较, 1×10 -10, 1×10-9, 1×10-8 mol/L雌二醇组护骨素蛋白质分泌增加[(0.64 ±0.14), (1.27±0.26), (2.34±0.35),(3.62 ±0.23) μg/ L, P < 0.01]。与对照组相比, 1×10-8 mol/L 17β- 雌二醇干预 12, 24, 48 h, 护骨素蛋白质分泌增加[(0.62±0.12)比(1.30±0.30),(3.07±0.14), (3.50±0.33) μg/L, P < 0.01]。1×(10-10～10-8) mol/L 孕酮干预 12～48 h 对成骨细胞护骨素蛋白质表达无影响(P > 0.05)。结论:17β- 雌二醇促进人成骨细胞护骨素基因表达, 孕酮对其无影响,表明雌激素与孕激素对骨代谢有不同的调节机制。     

雌激素、促性腺激素与大鼠成骨细胞雌激素受体β的表达

目的：观察不同剂量雌激素，卵泡雌激素及黄体生成素对大鼠成骨细胞雌激素受体β表达的影响。方法：实验于2004-02／08在哈尔滨医科大学第二临床医学院科研中心完成。①取三四个月龄雌性Wistar大鼠28只用于大鼠成骨细胞体外培养。采用二次酶消化、反复贴壁法分离纯化培养大鼠成骨细胞。观察其形态、改良钙钴法碱性磷酸酶染色，培养上清碱性磷酸酶、骨钙素测定来鉴定成骨细胞。②取2代培养的成骨细胞用无血清培养基培养24h，分为10组：对照组，1&;#215;10^10，1&;#215;10^-8，1&;#215;10^-6mol/L 17β-雌二醇组，10，100，1000U／L黄体生成素组，1&;#215;10^-7,1&;#215;10^-6，1&;#215;10^-5g／L卵泡刺激素组。每组3个孔。对照组加入基础培养基，其他各组分别加入相应终浓度药物，培养24-48h。大鼠成骨细胞雌激素受体表达阳性细胞数检测应用免疫组织化学法测定，以细胞浆有棕黄色颗粒沉积为阳性。成骨细胞雌激素受体β表达检测应用半定量免疫印渍酶促底物染色法以及化学发光法，以A值越高，说明雌激素受体β表达越多。结果：①成骨细胞形态及特征性鉴定：成骨细胞随培养时间的延长，细胞呈指数增长，分泌碱性磷酸酶和骨钙素，碱性磷酸酶染色阳性率为90％，表现出旺盛的分泌功能。②成骨细胞雌激素受体表达阳性细胞数检测结果：不同剂量卵泡刺激素组和黄体生成素组对雌激素受体表达无明显影响；雌激素1&;#215;10^-8mol／L组和1&;#215;10^-6mol/L组显著高于对照组[(90．95&;#177;5．89)，(95．12&;#177;6．17)，(81．44&;#177;5.37)个数／100个细胞，τ=2．95，P&;lt;0．05；τ=3．50,P&;lt;0．01]。③成骨细胞雌激素受体β表达结果：不同剂量卵泡刺激素及黄体生成素对雌激素受体β的表达无明显影响；随雌激素浓度的增加成骨细胞雌激素受体β表达呈上升趋势。结论：雌激素能促进成骨细胞雌激素受体β的表达，且表现出剂量依赖性。而黄体生成素、卵泡刺激素对雌激素受体β表达无直接影响。     

血管内皮生长因子在人胃癌SGC-7901细胞中的表达及雌激素对其影响

目的研究血管内皮生长因子（VEGF）在人胃腺癌SGC-7901细胞系中的表达情况及雌激素对其的影响。方法选择人胃腺癌SGC-7901细胞系为研究对象,分别加入不同浓度的E2或三苯氧胺,同时设空白对照组。采用免疫细胞化学SABC法检测细胞VEGF蛋白表达;采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）检测各组细胞培养上清液中VEGF蛋白分泌含量的变化。结果 SGC-7901细胞培养液中可检测到高浓度VEGF表达,加入雌二醇培养48h后,培养液中VEGF浓度明显高于对照组（P〈0.05）;不同浓度雌二醇组分别加三苯氧胺培养48h后,VEGF浓度有一定程度下降。结论人胃腺癌细胞SGC-7901细胞系存在VEGF表达,雌激素可促进其表达。     

异欧前胡素对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响

背景:植物雌激素有防治绝经后妇女骨质疏松的作用已得到公认,其作用机制之一是促进了成骨细胞的增殖与分化.目的:观察香豆素类植物雌激素异欧前胡素体外对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响.设计、时间及地点:对比观察实验,于2006-09/2007-12在河北医科大学药学院完成.材料:出生24 h内SD大鼠,异欧前胡素为中国药品生物制品检定所产品.方法:采用改良组织块法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞,将异欧前胡素以1×10-5～1×10-9 mol/L浓度加入细胞培养体系,以未加入药物为空白对照组.作用24,48,72 h后,以MTT法检测成骨细胞的增殖情况,以对硝基苯二钠基质动力学法测定细胞内碱性磷酸酶的活性,以改良Lowry法测总蛋白水平.主要观察指标:成骨细胞的增殖率和碱性磷酸酶活性.结果:大鼠成骨细胞在不同浓度异欧前胡素中培养24 h,未观察到促增殖作用.培养48 h后,开始出现促增殖作用增强,有效浓度为1×10-9～1×10-8 mol/L.培养72 h后,继续有促增殖作用,有效浓度为1×10-8～1×10-7 mol/L.大鼠成骨细胞在不同浓度异欧前胡素存在下培养48 h,未观察到促分化作用,培养72 h后,开始出现促分化作用,有效浓度为1×10<'-6>～1×10-5 mol/L,其他浓度作用不明显.结论:异欧前胡素体外能促进大鼠成骨细胞的增殖与分化.     

雌二醇与孕激素对人成骨细胞护骨素基因作用的比较

目的:研究比较17β-雌二醇(17β-E2)与孕激素对人成骨细胞护骨素(Osteoprotegerin,OPG)基因表达的调控作用。方法:人成骨细胞用17β-E2与孕酮(Progesterone,P)干预,采用Northern杂交检测OPGmR NA表达及ELISA检测OPG蛋白质表达。结果:17β-E2干预12～48h可促进人成骨细胞OPGmRNA表达,并呈剂量依赖性(P<0.05)。17β-E2促进人成骨细胞OPG蛋白质分泌也呈剂量依赖性(10-10ME2组为1.27±0.26ng/ml,10-9ME2组为2.34±0.35ng/ml,10-8ME2组为3.62±0.23ng/ml,与对照组0.64±0.14ng/ml相比,P<0.01)。其中,10-8M17β-E2干预12～48h促进OPG蛋白质分泌(12h组为1.30±0.30ng/ml,24h组为3.07±0.14ng/ml,48h组为3.50±0.33ng/ml,与对照组0.62±0.12ng/ml相比,P<0.01)。10-10～10-8M的P干预12～48h对成骨细胞OPGmRNA和蛋白质表达无影响(P>0.05)。结论:17β-E2促进人成骨细胞OPG基因表达,P对其无影响,表明雌激素与孕激素对骨代谢有不同的调节机理。     

三氧化二砷对慢性粒细胞白血病患者骨髓间质干细胞整合素-β_1表达的影响研究

目的体外观察不同浓度三氧化二砷(ATO)对慢性粒细胞白血病(CML)患者骨髓间质干细胞(BM-SCs)整合素-β1表达水平及生长的影响,探讨ATO对CML患者BMSCs可能发生的作用及相关机制。方法抽取慢性期CML患者骨髓液,分离单个核细胞行BMSCs体外培养,取第3、4代BMSCs,用不同浓度ATO处理,48h后提取总RNA,逆转录-聚合酶链反应法检测整合素-β1 mRNA表达水平,72h后观察BMSCs形态。结果 ATO可抑制CML患者BMSCs体外生长,并呈浓度依赖性;对照组BMSCs整合素-β1基因表达水平为0.123±0.041,BM-SCs在1.0μmol/L及2.5μmol/L浓度ATO作用下整合素-β1表达升高,分别为0.658±0.129和0.426±0.090,5.0μmol/L浓度ATO可明显抑制整合素-β1表达(0.041±0.020)。结论不同浓度ATO对BMSCs整合素-β1表达存在不同影响,对整合素-β1表达变化的干预有可能成为该类疾病新的治疗靶向。     

雌激素与雌激素受体对血管内皮细胞一氧化氮生成的影响

目的：探讨雌激素及其受体对血管内皮细胞一氧化氮表达的影响。方法：采用无酚红的1640培养基培养大鼠血管内皮细胞，给予不同浓度的17β—雌二醇(17β—E2)用贴块法和无酚红的1640培养基建立肺血管内皮细胞模型，观察不同浓度的17β—E2(伴或不伴有雌激素受体拮抗剂tamoxifen)作用下血管内皮细胞一氧化氮合酶(nitric-oxide synthase，NOS)的活性及一氧化氮的产量。NOS的活性用血红蛋白酶法检测，Griess法检测一氧化氮的产量，放射配体结合分析法检测血管内皮中的雌激素受体。结果：一定浓度的17β—E2作用8～24h血管内皮细胞一氧化氮的产量显著增加[1nmol／L，10nmol／L，17β—E2同对照组相比(t=1．221；P&;lt;0．05)]；NOS活性显著增加(t=1．722，P&;lt;0．05，t=3．680—4．174，P&;lt;0．01)；放射配体结合分析法在血管内皮中检测到雌激素受体；雌激素受体拮抗剂能显著抑制雌激素的上述作用。结论：17β—雌二醇能通过雌激素受体途径增强血管内皮细胞的活性，这是雌激素对动脉粥样硬化防治作用的机制之一。     

Brca-1基因调控神经干细胞移植治疗脑梗死

背景:最近国际上有人推测神经前体细胞和神经细胞的增殖受到Brca-1基因调控.目的:观察Brca-1基因调控神经干细胞移植对SD大鼠急性缺血性脑梗死模型影响.方法:参照Longa等线栓法建立SD大鼠急性脑梗死模型.应用立体定位法,分别向模型大鼠病侧脑室内注射PBS溶液、常规培养的神经干细胞、10-5 mol/L 17β-雌二醇培养的神经干细胞.采用动物行为学评分评价模型动物不同时间点的神经功能缺损;激光共聚焦显微镜观察神经干细胞Nestin表达;TTC染色测定不同时间点脑梗死体积变化;光镜和电镜分别观察脑梗死区病理变化.免疫组织化学法检测NSE和GAFP表达.结果与结论:①17β-雌二醇培养组动物神经功能恢复程度优于常规培养组(P < 0.05).②激光共聚焦显微镜显示脑缺血再灌注组和空白干预组在4 d时荧光强度最强,7 d时荧光表达减弱,17β-雌二醇培养组也是在4 d时表达最强,但是持续表达高强度的时间长,7 d时仍能见到较强的荧光表达.③17β-雌二醇培养组脑梗死体积明显缩小,与脑缺血再灌注组和空白干预组相比差异有显著性意义(P < 0.05).④17β-雌二醇培养组细胞移植治疗7 d神经元基本无肿胀,核仁清晰,染色质分布均匀,大部分毛细血管形态正常.⑤17β-雌二醇培养组NSE和GFAP表达的阳性结果也高于常规培养组.结果表明用雌激素干预Brca-1基因表达的神经干细胞移植后治疗效果好于常规培养的神经干细胞.     

间充质干细胞移植减轻大鼠盐酸吸入性肺损伤

目的 研究骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对大鼠盐酸吸入性肺损伤的作用与机制.方法 本实验于复旦大学附属中山医院实验研究中心进行.改良贴壁法分离培养Sprague-Dawley (SD)大鼠BMSCs.24只SD大鼠随机(随机数字法)分为3组(n=8):对照组,损伤组和移植组.损伤组和移植组气道内滴注盐酸(1.2 ml/kg,pH=1.5),对照组则滴入等量磷酸缓冲盐溶液(PBS),用动脉血气、肺组织湿干比和病理改变评价模型是否成功建立.移植组于颈外静脉注射5×106个BMSCs,其他2组注入0.5 ml的PBS.移植6h后行动脉血气分析,酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清和支气管肺泡灌洗液(BALF)的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)和白介素-10 (IL-10)质量浓度,观察肺组织病理改变和测定肺组织湿干比.体外实验中,BMSCs与损伤肺细胞或正常肺细胞于Transwell体系共培养36 h,观察损伤肺影响BMSCs迁移情况;另取BMSCs与损伤肺细胞昆合培养或于Transwell中培养,正常肺细胞或损伤肺细胞单独培养作对照,6h后检测上清液中TNF-α、IL-6和IL-10质量浓度.用方差分析比较多组间的差异,独立样本t检验比较两组间差异.结果 BMSCs移植改善了肺损伤大鼠的低氧血症(P＜0.01)和肺组织损伤,降低了肺组织湿干比(P＜0.01),降低了血清和BALF的TNF-α水平(P＜0.05;P＜0.01),升高了血清和BALF的IL-10质量浓度(P＜0.01),对IL-6水平无明显影响(P＞0.05).体外实验中,BMSCs向损伤肺迁移明显多于向正常肺迁移(P＜0.01),BMSCs与肺细胞接触或不接触的共培养均降低了上清液TNF-α质量浓度(P＜0.01),升高了IL-10质量浓度(P＜0.01),对IL-6质量浓度无影响(P＞0.05).结论 BMSCs移植可以减轻大鼠盐酸吸入性肺损伤,可能机制为干细胞通过旁分泌途径下调炎症反应.     

大鼠延髓内雌激素β受体表达变化对延髓神经元结构和功能的影响

目的:研究三羟基异黄酮与17-β雌二醇对大鼠延髓雌激素β受体表达的影响,探讨雌激素作用神经系统的机制。方法:30只去卵巢SD大鼠,随机分为去卵巢组(A组)、雌二醇组(B组)和三羟基异黄酮组(C组),手术后10d起分别皮下注射生理盐水0.1mL/d,17-β雌二醇20μg/(kg·d)、三羟基异黄酮200μg/(kg·d);10只假手术组(D组)大鼠,只切开腹膜不切除卵巢,手术后10d起每只动物皮下注射生理盐水0.1mL/d。各组动物连续用药6周后观察结果。结果:①血清雌二醇的浓度:A组(9.44±6.04)ng/L和C组(7.03±5.65)ng/L显著低于D组(19.41±8.37)ng/L,差异有非常显著性意义(t=2.97,3.77,P<0.01,),B组(15.52±8.54)ng/L与A组比较显著升高(t=2.74,P<0.01),而与D组比较差异无显著性意义。②A组与D组比较大鼠延髓ER-β免疫阳性细胞数量下降、阳性细胞总面积和平均吸光度降低(P<0.01)。切除卵巢后补充17-β雌二醇和三羟基异黄酮的大鼠延髓雌激素β受体表达明显增加,与A组比较延髓雌激素β受体免疫阳性细胞数量增加、阳性细胞总面积和平均吸光度升高(P<0.01),而与D组比较无统计学意义。结论:三羟基异黄酮和17-β雌二醇对延髓ER-β的表达有明显的调节作用,可能通过这一途径影响着延髓神经元的结构和功能。     

高迁移率族蛋白-1对骨髓间充质干细胞分泌胰岛素样生长因子-1水平及凋亡的影响

目的:探讨高迁移率族蛋白-1(HMGB1)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)分泌胰岛素样生长因子-1(IGF-1)水平及凋亡的影响。方法:体外分离和培养昆明小鼠BMSCs,用流式细胞术检测第3代BMSCs表面抗原CD34、CD44的表达率。给予不同浓度HMGB1(0、12.5、25、50、100ng/mL)干预后,ELISA法检测上清液中IGF-1的浓度,流式细胞术检测BMSCs的凋亡率。结果:体外培养的第3代贴壁细胞表面抗原CD44表达率为96.7%,CD34表达率为1.1%;24h后上清液中IGF-1的浓度25、50、100ng/mL组与0ng/mL组间差异均有统计学意义(P<0.05)。48h后上清液中IGF-1的浓度12.5、25、100ng/mL组与0ng/mL组间差异均有统计学意义(P<0.05)。72h后各浓度组BMSCs凋亡率:50、100ng/mL组与0ng/mL组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:适当浓度的HMGB1(25ng/mL)可促进BMSCs分泌IGF-1;较高浓度的HMGB1(≥50ng/mL)可明显诱导BMSCs凋亡。     

17β-雌二醇对大鼠肺泡巨噬细胞溶菌酶分泌的影响

[目的]探讨17β-雌二醇对肺泡巨噬细胞（AM）溶菌酶分泌的影响及机制.[方法]采用火箭电泳法观察大鼠AM分泌的溶菌酶活性.[结果]17β-雌二醇对大鼠AM溶菌酶有显著促进作用（P〈0.01）,蛋白激酶C抑制剂H-7能部分取消该作用.[结论]17β-雌二醇具有促进AM分泌溶菌酶的作用,其细胞内信号转导途径可能与蛋白激酶C有关.     

海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊化大鼠卵巢激素分泌细胞异体移植对垂体形态学的影响

目的:已有研究证实海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊对机体无明显毒副作用且生物相容性好,应用这一技术包裹细胞,可明显延长异体内移植物的存活时间.将海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊化大鼠卵巢细胞体外培养后进行异体移植,观察其治疗卵巢功能丧失模型大鼠的可行性及垂体形态学变化.方法:实验于2006-03/2007-09在首都医科大学生殖医学研究中心完成.①实验动物:30只Wistar雌性大鼠,随机分为正常对照组,卵巢摘除组,微囊移植组,每组10只.实验过程中对动物处置符合动物伦理学要求.②实验方法:卵巢摘除组:无菌条件下切除双侧卵巢:微囊移植组:海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠生物膜包裹传至P2代的大鼠卵巢细胞,制成微囊体外培养,收集24 h培养液以检测雌二醇分泌状态;将微囊化的卵巢细胞移植入已行双侧卵巢切除术的大鼠腹腔.用阴道涂片观察大鼠动情周期恢复情况.术后40 d麻醉后处死动物,放射免疫法检测血清雌二醇质量浓度,垂体组织常规石蜡包埋,连续切片,分别进行苏木精-伊红染色和雌、孕激素受体免疫组织化学染色.LEICA Q500IW自动图像分析仪对垂体细胞的面积,雌、孕激素受体吸光度值进行定量测定.结果:①放射免疫法检测培养液显示,微囊化的卵巢激素分泌细胞具有继续合成和分泌雌二醇的功能.②检测血清中雌二醇质量浓度结果显示,卵巢摘除组明显低于正常对照组和微囊移植组,差异具有显著性意义,正常对照组和微囊移植组之间差异无显著性.⑤动情周期未恢复.④苏木精-伊红染色可见卵巢摘除组大鼠垂体中有大量阉割细胞,平均面积＞180 μm2,与卵巢摘除组比较,微囊移植组大鼠垂体中细胞平均面积和阉割细胞数目均显著减少.⑤垂体雌、孕激素受体免疫组织化学吸光度值结果显示,卵巢摘除组明显低于正常对照组和微囊移植组,差异具有显著性意义.结论:微囊化大鼠卵巢细胞异体移植后,可在受体大鼠体内继续合成和分泌雌二醇,并可以减少垂体内阉割细胞的形态和数目,提高垂体细胞雌激素受体和孕激素受体的表达,提示移植后细胞对垂体有反馈调节作用.     

原代成纤维细胞和纤维肉瘤细胞自分泌转化生长因子β1浓度检测及对转化生长因子β1增殖的调节

背景:体外实验常采用外源性转化生长因子β1刺激来观察细胞增殖变化,易忽略细胞本身自分泌转化生长因子β1的影响。目的:检测原代成纤维细胞和纤维肉瘤细胞(L929)自分泌转化生长因子β1的浓度和细胞增殖的变化。方法:Elisa试剂盒检测原代成纤维细胞和纤维肉瘤细胞各时相点细胞内和培养上清中生长转化因子β1水平。结果与结论:纤维肉瘤细胞内转化生长因子β1浓度随培养时间延长而升高,原代成纤维细胞内转化生长因子β1浓度随培养时间延长而降低;两种细胞培养上清转化生长因子β1浓度均随时间而上升,但纤维肉瘤细胞显著高于原代成纤维细胞(P<0.01),峰值时达到原代成纤维细胞的20倍;两种细胞增殖曲线在72h内均随时间而显著增高(P<0.01),同一时间点比较,纤维肉瘤细胞明显高于原代成纤维细胞。提示自分泌转化生长因子β1具有促进细胞增殖的作用,不同的自分泌水平可能是影响原代成纤维细胞这种正常细胞和纤维肉瘤细胞肿瘤细胞对于外源转化生长因子β1反应不同的重要原因。     

氟维司群可导致血清雌二醇检测的假阳性

目的:大量研究表明,氟维司群是一种新型的雌激素受体(ER)拮抗剂,该药对ER(+)的绝经后晚期乳腺癌病人有良好的治疗效果。氟维司群在化学分子结构上与雌二醇非常相似。本研究旨在观察使用氟维司群治疗的绝经后晚期乳腺癌病人血清中雌二醇的浓度。方法:使用直接化学发光法及高效液相色谱–质谱法(HPLC-MS)测定ER(+)绝经后晚期乳腺癌病人使用氟维司群治疗前1天及治疗后2周血清雌二醇浓度,并检测氟维司群稀释液中的雌二醇浓度。结果:使用氟维司群治疗后,直接化学发光法检测的血清雌二醇浓度明显升高,且氟维司群稀释液中也能检测出处于较高水平的假阳性雌二醇。结论:使用直接化学发光法测量的氟维司群稀释液中可以出现雌激素假阳性结果。     

雌激素和黄体酮对人外周血爆式红系形成单位(BFU-E)生长的影响

作者随机采集了年龄在28～38岁的5位健康女性和3位健康男性的外周血,作爆式红系形成单位(BFU-E)培养,并观察17-β雌二醇、黄体酮和前列腺素E_1(PGE_1)在体外对BFU-E 生长的影响。连续观察8周,发现女性外周血BFU-E 数变化大,而男性无显著变化;女性的差异与月经周期有关,月经周期开始时,BFU-E 数非常低,在第14天达高峰。BFU-E 培养的同时,作血清17-β雌二醇、黄体酮浓度检测,可见雌激素水平最高时BFU-E 数也最高,但血清激素水平与BFU-E 数无关。体外实验发现,17-β雌二醇