AZT对白血病细胞株KG-1a细胞增殖和端粒酶活性的影响

本研究探索端粒酶抑制剂3’-叠氮-2’,3’-脱氧胸腺核苷(AZT)对人急性髓系白血病细胞株KG-1a细胞增殖和端粒酶活性的影响。用MTT法检测不同浓度AZT分别作用24、48、72 h时KG-1a细胞增殖水平;流式细胞术检测AZT对KG-1a细胞周期及细胞凋亡的影响;TRAP-PCR-ELISA法检测细胞端粒酶活性;RT-PCR法检测细胞端粒逆转录酶(hTERT)mRNA的表达。结果表明,AZT能抑制KG-1a细胞增殖,抑制作用具有时间和浓度依赖性;随AZT浓度的增加,处于S期的细胞数目减少,G2/M期细胞数目增加,且出现凋亡峰;AZT作用后实验组细胞的端粒酶活性降低,hTERT-mRNA表达下降,下调程度与AZT浓度呈正相关。结论:AZT在体外能明显抑制KG-1a细胞增殖,并诱导其凋亡,其机制与降低端粒酶活性、下调hTERT mRNA表达有关。     

大黄素联合AZT对白血病KG-1a细胞的增殖及BCL-2、NF-κB、TGF-β表达的影响

目的:探讨中药大黄素(Emodin)和端粒酶抑制剂AZT(3'-azido-3'-deoxythymidine)联合应用对浓集白血病干细胞(concentrated leukemia stem cells,CLSC)的急性髓系白血病KG-1a细胞增殖及BCL-2、NF-κB、TGF-β表达的影响。方法:应用5-FU富集白血病KG-1a细胞中肿瘤样干细胞亚群并采用流式细胞术检测富集后CD34+CD38-亚群细胞;采用MTT法检测大黄素和AZT单用及联合应用对CLSC的生长增殖的影响;采用流式细胞术检测药物诱导CLSC的凋亡情况;采用RT-PCR及Western blot法分别检测NF-κB、BCL-2、TGF-βmRNA和蛋白表达变化。结果:大黄素和AZT联合后,细胞生长抑制明显大于大黄素和AZT单药组(P0.01),具有一定的时间和浓度依赖性;细胞凋亡比例均较各单药组增多,差异具有统计学意义(P0.01);NF-κB、BCL-2、TGF-βmRNA及蛋白表达在联合组比在各单药组表达量下降。结论:大黄素联合AZT具有协同抑制CLSC增殖并诱导其凋亡的作用,其机制可能与抑制BCL-2活化及降低NF-κB、TGF-β表达有关。     

RNAi-chk1在抑制小鼠Lewis肺癌细胞生长作用的实验研究

目的观察chk1-RNAi联合放疗对Lewis肺癌细胞的抑制及凋亡情况。方法以脂质体Lipofectimine-2000介导,将chk1-536的siRNA表达载体转染小鼠Lewis肺癌细胞株,将其分为空白对照组、错义序列组、siRNA组,2Gy照射组、2Gy照射+错义序列组、2Gy照射+siRNA组。应用MTT法检测转染细胞抑制率、流式细胞术分析转染siRNA后细胞的凋亡,并应用RT-PCR检测转染细胞chk1-mRNA表达水平。结果 chk1-siRNA转染联合辐射组的Lewis肺癌细胞,与对照组相比较生长增殖受抑制、细胞凋亡增加;MTT法检测和流式细胞术分析示:chk1-siRNA转染联合辐射组的Lewis肺癌细胞生长增殖受抑制,细胞凋亡增加(P<0.05);同时,RT-PCR法检测该组细胞中chk1mRNA表达量下降(P<0.05)。并且siRNA转染可增加2Gy照射引起的Lewis肺癌细胞凋亡。结论针对chk-1的RNAi可以提高Lewis肺癌细胞的抑制率及放疗引起的肿瘤细胞的凋亡,对肿瘤有治疗作用,与放疗有协同作用。     

siRNA介导低表达VEGF、SDF-1对 血管内皮细胞增殖和凋亡的影响研究

目的 研究小干扰RNA(siRNA)介导低表达基质细胞衍生因子-1(SDF-1)、血管内皮生长因子(VEGF)对血管内皮细胞增殖和凋亡的影响。方法 采用体外实验培养人血管内皮细胞,细胞分别经siRNA介导下调表达SDF-1、VEGF处理,随机分为空白对照组(未进行任何转染)、阴性对照组(转染非特异性对照)、转染SDF-1-siRNA组、转染VEGF165-siRNA组。各组分别经相应处理。通过免疫印迹法测定细胞SDF-1和VEGF165蛋白的表达水平,用MTT实验测定人血管内皮细胞增殖情况,用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果 空白对照组与阴性对照组SDF-1和VEGF165蛋白表达水平的比较,无显著差异(P 0. 05);相比空白对照组和阴性对照组,转染SDF-1-siRNA组细胞中SDF-1蛋白的表达水平显著下调(P 0. 01),VEGF165蛋白表达并无显著差异(P 0. 05);相比空白对照组和阴性对照组,转染VEGF165-siRNA组SDF-1和VEGF165蛋白表达水平均显著下调(P 0. 01);转染VEGF165-siRNA组SDF-1蛋白表达水平显著高于转染SDF-1-siRNA组,VEGF165蛋白表达水平显著低于SDF-1-siRNA组(P 0. 01)。空白对照组与阴性对照组细胞细胞凋亡率的比较,并无显著差异(P 0. 05);转染SDF-1-siRNA组、转染VEGF165-siRNA组细胞增殖抑制率和细胞凋亡率均显著高于空白对照组和阴性对照组(P 0. 01),转染VEGF165-siRNA组细胞增殖抑制率和细胞凋亡率均显著高于转染SDF-1-siRNA组(P 0. 01)。结论 SDF-1和VEGF165基因均可增强人血管内皮细胞增殖能力,阻滞细胞凋亡,从而参与糖尿病血管病变的病理过程,同时该病理过程中VEGF165具有调节SDF-1表达水平的作用。     

siRNA靶向沉默HIF-1a和RBM5过表达对前列腺癌PC3细胞生长抑制作用的体外研究

目的 观察采用RNA干扰抑制前列腺癌(PCa)PC3细胞中缺氧诱导因子-1a(HIF-1a)和上调RBM5表达水平对PC3细胞增殖和凋亡的影响。方法 运用PEI/RBM5/HA-HP载体(RBM5组)及siHIF-1a载体(si HIF-1a组)分别或联合(RBM5+siHIF-1a组)转染PC3细胞,以未转染细胞(空白对照组)和空载体细胞(阴性对照组)作为比较。采用噻唑蓝比色(MTT)法检测各组细胞增殖情况;流式细胞仪(FCM)检测各组细胞周期变化;原位末端标记(TUNEL)法检测各组细胞凋亡指数。结果 RBM5组、si HIF-1a组和RBM5+si HIF-1a的联合组均能不同程度的抑制PC3细胞增殖,使细胞周期停滞和促进细胞凋亡,但联合组作用更大,效果更好。联合组细胞增殖率是50.9%,与RBM5组的77.3%和siHIF-1a组的74.8%比较,差异有统计学意义(P0.05),与空白对照组的100%和阴性对照组的98.6%比较,差异有显著统计学意义(P0.01)。联合组对细胞周期和细胞凋亡的影响也明显优于单纯用药的两组,组间差异显著(P0.05),与空白对照组和阴性对照组比较,差异更显著(P0.01)。结论 si RNA靶向沉默癌基因HIF-1a或PEI/RBM5/HA-HP载体增强抑癌基因RBM5表达这两种方法均可抑制前列腺癌PC3细胞生长,但两者联合应用效果更好。     

槲皮素与FSCN1基因siRNA联合对卵巢癌生长抑制及免疫功能的影响研究

目的探讨槲皮素与FSCN1基因siRNA对卵巢癌细胞活力、凋亡及免疫功能的影响及机制。方法人卵巢癌SKOV3细胞分为空白对照组、NC组(转染阴性对照siRNA)、槲皮素组(50μmol/L的槲皮素处理细胞后瞬时转染阴性对照siRNA)、si-FSCN1组(细胞转染靶向抑制FSCN1的siRNA)和槲皮素+si-FSCN1组(50μmol/L的槲皮素处理细胞后瞬时转染靶向抑制FSCN1的siRNA),siRNA转染参照Lipofectamine TM 2000说明。各组细胞处理48 h,Western blotting检测FSCN1、β-catenin、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、Bax和血管内皮生长因子(VEGF)的蛋白表达;MTT检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 SKOV3细胞转染si-FSCN1后FSCN1蛋白表达明显降低,与空白对照组比较差异显著(P0.05)。槲皮素组和si-FSCN1组细胞活力及β-catenin、cyclin D1和VEGF的蛋白表达均显著低于NC组,高于槲皮素+si-FSCN1组,细胞凋亡率及Bax蛋白表达显著高于NC组,低于槲皮素+si-FSCN1组(P0.05)。结论槲皮素或FSCN1基因siRNA均能抑制卵巢癌细胞活力,诱导细胞凋亡,抑制免疫抑制因子VEGF表达,联合使用效果更强,机制与下调Wnt/β-catenin信号通路有关。     

沉默缺氧诱导因子-1α对卵巢癌化疗敏感性的影响

目的观察沉默缺氧诱导因子HIF-1α对卵巢癌细胞化疗敏感性的相关影响并探讨其机理。方法构建HIF-1α基因短发夹RNA真核表达质粒,并转染卵巢癌细胞SKOV3（人卵巢浆液性囊腺癌细胞株）。实验可分为空白组,非特异对照组（转染pNonspecific-siRNA,即SKOV3NS）,目的siRNA组（转染pHIF-siRNA,即SKOV3siRNA）3组,用RT-PCR及Western Blot法分别检测各组HIF-1α基因的mRNA和蛋白的表达水平。细胞经过20μmol/L顺铂作用后,用MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术（FCS）检测细胞凋亡率。结果 SKOV3siRNA转染组HIF-1α基因在mRNA水平和蛋白水平表达均明显降低,SKOV3siRNA组肿瘤细胞的生长抑制率和细胞凋亡率均明显增高（P〈0.05）。结论 RNA干扰技术沉默HIF-1α能够有效地抑制卵巢癌SKOV3细胞HIF-1α基因表达,增强其对化疗药物顺铂的敏感性。     

沉默SUV39H1基因对急性髓系白血病KG-1细胞凋亡的影响

摘要本研究旨在探讨沉默SUV39H1基因对急性髓系白血病细胞株KG-1增殖和凋亡的影响。将SUV39HIsiRNA经Lipofectamine…2000转染至KG-1细胞,应用MTS法检测细胞增殖率,观察sUV39111siRNA对KG-1细胞增殖的影响;流式细胞术分析细胞凋亡;Westernblot检测SUV39H1siRNA作用后P15和凋亡相关蛋白BCL-2、procaspase-9、procaspase-3、C-MYC的表达。结果表明,沉默SUV39H1基因可抑制细胞增殖,SUV39H1siRNA浓度为30、60、120、240nmol／L作用48h后,KG-1细胞的增殖率分别为（76．43±1．98）％、（51．31±1．84）％、（37．31±1．61）％、（18．94±3．22）％,差异具有统计学显著意义（P〈0．05）;SUV39HIsiRNA可上调P15基因的表达;SUV39H1siRNA可诱导细胞凋亡,30、60、120nmoL／LSUV39H1siRNA作用48h后,KG-1细胞凋亡率分别为（40．2±5．1）％、（56．8±4．8）％、（71．6±5．6）％,差异有统计学显著意义（P〈0．05）;抗凋亡相关蛋白BCL-2、procaspase-9、procaspase-3、C-MYC的表达减少。结论：SUV39H1siRNA能抑制KG-1细胞的增殖并诱导其凋亡,有望成为白血病治疗的-个新的靶点。     

siRNA干扰β-catenin基因表达情况与喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡和侵袭的关系

目的探讨小干扰RNA(siRNA)干扰β-链蛋白(β-catenin)基因表达对喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法前瞻性选取喉癌Hep-2细胞,随机分为空白对照组、阴性对照组和干扰组,其中干扰组转染靶向β-catenin的siRNA,阴性对照组转染空白siRNA。采用荧光定量PCR和Western-blot检测β-catenin mRNA和蛋白表达,MTT检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transell法观察细胞侵袭能力。结果干扰组β-catenin mRNA和蛋白相对表达量分别为(0.304±0.015)和(0.234±0.065),明显低于空白对照组和阴性对照组(P0.05);干扰组培养48 h和72 h吸光值分别为(0.721±0.250)和(0.942±0.321),明显低于空白对照组和阴性对照组(P0.05);干扰组细胞凋亡率为(19.10±1.24)%,明显高于空白对照组和阴性对照组(P0.05);干扰组穿膜细胞数为(22.41±3.25)个,明显低于空白对照组和阴性对照组(P0.05)。结论干扰β-catenin基因,可抑制喉癌Hep-2细胞增殖和侵袭,促进细胞凋亡。     

雷公藤内酯醇联合高三尖杉酯碱对KG-1α细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨低浓度雷公藤内酯醇(triptolide,TPL)联合高三尖杉酯碱(homoharringtonine,HHT)对KG-1α细胞增殖与凋亡的影响及其可能机制。方法:应用CCK-8法检测不同浓度TPL和HHT单用及联用对KG-1α细胞增殖的影响,并计算其药物联合作用指数(combined index,CI);甲基纤维素集落形成实验检测细胞集落形成能力;流式细胞术检测细胞表面分子、细胞凋亡率及细胞周期变化;Western blot检测Akt信号通路相关蛋白在TPL及HHT作用前后的表达情况。结果:KG-1α细胞高表达CD34CD123而CD38缺失;TPL及HHT单用对KG-1α细胞增殖抑制并具剂量依赖性(r=0.952,r=0.992);低浓度联合用药与单药对比,前者细胞增殖、集落形成率更低,而细胞凋亡率增高;CI值亦提示低浓度TPL联合HHT呈高度协同作用。低浓度TPL联合HHT作用KG-1α细胞后,P-Akt~(Ser473)、P-Akt~(Thr308)、BCL-2、PARP及Survivin蛋白表达降低而PARP裂解增加。结论:低浓度TPL联合HHT可通过PI3K/Akt信号通路及下游蛋白协同抑制KG-1α细胞增殖,并诱导其凋亡。     

利用siRNA靶向沉默Jeko-1细胞survivin mRNA基因的实验研究

本研究旨在探讨Survivin基因在淋巴瘤细胞中的生物学作用,为将来以Survivin为靶点治疗套细胞淋巴瘤提供实验室证据。体外化学合成针对survivin mRNA基因的siRNA片段,通过DMRIE-C转染Jeko-1细胞,以无关siRNA、未转染的细胞为对照,采用RT-PCR和Western blot方法检测siRNA的抑制效果,利用流式细胞术检测细胞的凋亡率,用CCK-8法检测转染24、48、72 h对细胞增殖的影响。结果表明,与未转染的空白组相比,siRNA转染Jeko-1细胞后24、48、72 h survivin mRNA的相对表达量分别为0.49±0.03、0.38±0.02和0.17±0.02;细胞增殖抑制率分别为(31.2±2.1)%、(43.3±3.4)%和(52.6±2.5)%;细胞凋亡率分别为(6.3±0.5)%、(13.5±1.1)%和(23.6±1.6)%;survivin蛋白表达水平逐步减低。结论:靶向survivin的siRNA能在体外特异性下调目的基因survivin mRNA和蛋白的表达,表现出抑制Jeko-1细胞增殖和促使其凋亡的生物学效应,survivin基因有望成为淋巴瘤治疗的一个药物靶点。     

特定沉默胶质瘤U251细胞株的PDGF-B基因对细胞凋亡和增殖的影响研究

目的利用RNA干扰基因治疗技术,特定沉默胶质瘤U251细胞株的血小板衍生生长因子B(PDGF-B)基因,观察其对U251细胞株细胞凋亡和增殖的影响。方法用血清培养液(含10%胎牛血清DMEM培养基)体外培养人U251脑胶质瘤细胞系。随机分为3组,第1组为实验组:转染siRNA的细胞,第2组为阴性对照组:转染空白质粒的细胞;第3组为空白对照组:细胞常规培养不予以干预。利用脂质体将siRNA转染进入U251细胞,在细胞内形成双链siRNA,识别并降解PDGF-B mRNA。通过RT-PCR检测U251细胞中PDGF-B基因mRNA的表达水平,Western blot检测PDGF-B的蛋白表达,MTT法检测U251细胞的增殖情况,流式细胞学对比检测3组细胞的凋亡情况。结果利用脂质体将靶向PDGF-B基因siRNA转染进入U251细胞,48 h后利用RT-PCR检测PDGF-B基因mRNA的表达,结果显示与阴性对照组和空白对照组对比,转染组PDGF-B基因mRNA表达水平明显下降;转染72 h后,Western blot检测显示siRNA转染组PDGF-B蛋白表达明显抑制(抑制率60%);MTT结果显示siRNA转染组U25细胞增殖较对照组明显降低;流式细胞学检测显示,与阴性对照组和空对照组相比,转染siRNA的细胞的实验组中,G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少,提示降低PDGF-B在胶质瘤细胞的表达,能够使细胞周期阻滞在G1期,从而抑制胶质瘤细胞的增殖,并促进细胞的凋亡。结论构建靶向胶质瘤细胞PDGF-B的RNA干扰质粒并转染人胶质瘤U251细胞株后,通过体外试验观察可明显抑制U251细胞株PDGF的表达,其所产生的RNA干扰效应对人胶质瘤U251细胞株有明显的生长的抑制和促进凋亡作用。     

c-Met siRNA对U87-EGFRvⅢ胶质瘤细胞凋亡和增殖的影响

目的:合成针对c-Met的小干扰RNA(siRNA),研究其对U87-EGFRvⅢ(表皮生长因子受体Ⅲ型突变体)胶质瘤细胞凋亡和增殖的影响.方法:用脂质体转染合成的c-Met siRNA入U87-EGFRvⅢ细胞,未转染组为对照组,荧光实时定量PCR和Western blotting分别检测c-Met基因和蛋白的表达,MTT和AnnexinV-FITC/PI法检测细胞增殖和凋亡情况.结果:c-Met siRNA明显抑制c-Met表达(P＜ 0.05);明显增加细胞凋亡率(P＜0.05).同时,c-Met siRNA单独或协同EGFRvⅢsiRNA可抑制胶质瘤细胞增殖(P＜0.05).结论:c-Met siRNA可抑制U87-EGFRvⅢ胶质瘤细胞增殖、诱导其凋亡,为研究c-Met基因在胶质瘤中的作用及其靶向联合治疗提供了理论基础.     

MYCT-1基因特异的siRNA对GES-1细胞凋亡，增殖及细胞周期的影响

目的探讨沉默MYCT-1基因对GES-1细胞凋亡、细胞周期及细胞增殖的影响。方法采用siRNA转染GES-1细胞后分别应用AnnexinV-FITC／PI双染流式细胞术检测其对细胞凋亡的影响,应用PI单染流式细胞术分析对细胞周期的改变,应用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测siRNA对细胞增殖的作用。结果siRNA转染GES-1细胞后,与对照细胞相比,细胞凋亡率明显增高（P〈0．05）;细胞增殖率降低（P〈0．05）,细胞周期检测表明细胞停滞于S期（P〈0．05）。结论MYCT-1基因维持一定的表达水平对于正常细胞生长调控是必需的,MYCT-1基因对细胞周期的调控主要体现在S期向G1期的转变过程。     

靶向survivin的siRNA并氟尿嘧啶转染对HepG2增殖影响

目的研究靶向survivin的小分子干扰RNA（siRNA）和氟尿嘧啶（5-FU）联用对肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用及对凋亡的影响。方法将HepG2细胞分为空白对照组、阴性对照组、5-FU处理组、siRNA转染组及5-FU＋siRNA转染组。转染采用脂质体法。采用RT-PCR法分别检测HepG2细胞survivin mRNA转录水平;MTT法分别检测靶向survivin的siRNA和5-FU对HepG2细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测HepG2细胞凋亡情况。结果 siRNA转染组、5-FU＋siRNA转染组survivin mRNA表达较空白对照组、阴性对照组、5-FU处理组明显下降（F=326.78,q=5.78～7.12,P〈0.05）。5-FU＋siRNA转染组细胞增殖抑制率为51.58%±1.35%,与其他各组相比明显增高（F=1 293.24,q=15.31～82.26,P〈0.01）。5-FU＋siRNA转染组与其他各组相比细胞凋亡率明显增高（F=13 568.68,q=110.47～327.16,P〈0.01）。结论将靶向survivin的siRNA和5-FU联合应用可以显著抑制肝癌细胞survivin基因表达,并协同抑制HepG2细胞增殖,共同发挥诱导细胞凋亡作用。     

急性白血病患儿血清转铁蛋白受体的表达变化及其机制研究

目的:研究急性白血病(AL)患儿血清转铁蛋白受体(serum transferrin receptor,s TFR)的表达变化及其相关作用机制。方法:选取2016年6月至2017年6月在我院接受治疗的46急性白血病患儿纳入AL组,并募集同期体检健康儿童40例纳入对照组。记录患者的相关临床资料,分析血清转铁蛋白受体与患者临床特征的相关性。KG-1a和TCHu147细胞的TFR基因经RNA干扰技术沉默后,采用MTT法、流式细胞术检测TFR基因对KG-1a细胞和TCHu147细胞增殖、细胞周期的作用。采用Western blot法检测白血病细胞经siRNA干扰后相关细胞周期蛋白水平。结果:AL组s TFR水平显著高于对照组(P 0. 05),外周血白血病细胞中TFR的mRNA水平及TFR蛋白表达量均高于对照组(P 0. 05)。s TFR水平与AL患儿的白细胞数、白血病细胞比例、白血病细胞绝对数、铁调素(Hepc)和危险等级等指标密切相关(P 0. 05)。经TFR siRNA干扰后的KG-1a和TCHu147细胞增殖能力则受到明显抑制(P 0. 05)。流式细胞术检测显示,转染TFR siRNA后,KG-1a和TCHu147细胞的G0/G1期比例分别为(62. 51±5. 39)%、(63. 37±4. 27)%,与对照组(空白对照和阴性对照)相比均显著增高(P 0. 05); KG-1a和TCHu147细胞的G2/M期的比例为(5. 74±1. 34)%、(7. 37±1. 56)%,与对照组(空白对照和阴性对照)相比均显著下降(P 0. 05)。TFR siRNA转染后的KG-1a和TCHu147细胞中Cyclin E和CDK2表达水平显著下降(P 0. 05); TFR siRNA转染后的KG-1a和TCHu147细胞中P27表达水平显著上升(P 0. 05)。结论:AL患儿外周血白血病细胞可合成较多的TFR蛋白,转运至细胞外后导致s TFR水平上升,通过下调TFR基因的表达能有效干扰白血病细胞分裂。     

DNMT1基因沉默对前列腺癌细胞增殖、 凋亡及GSTP1、SHOX2、DAPK甲基化状态的影响

目的探讨siRNA技术沉默DNA甲基转移酶1(DNMT1)基因表达对前列腺癌细胞(LNCap)增殖、凋亡的影响,初步分析其对谷胱甘肽S转移酶P1(GSTP1)、矮小同源盒基因2(SHOX2)、凋亡相关蛋白激酶(DAPK)甲基化状态的影响。方法体外培养人前列腺癌细胞LNCap、正常前列腺上皮细胞RWPE-1,采用实时荧光定量PCR(qRTPCR)及蛋白印迹(WB)检测细胞中DNMT1 mRNA及蛋白表达水平。实验分为3组:空白对照组(未经任何处理LNCap细胞); si-NC组(转染DNMT1阴性对照质粒的LNCap细胞); si-SH2B1组(转染si-DNMT1的LNCap细胞)。采用CCK-8法检测三组细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡水平。采用甲基化特异性PCR (MSP)检测GSTP1、SHOX2、DAPK基因甲基化状态; qRT-PCR与WB法分别检测各组LNCap细胞DNMT1、GSTP1、SHOX2、DAPK mRNA及蛋白表达情况。结果与正常组细胞相比,前列腺癌组细胞中DNMT1 mRNA及蛋白表达水平均显著升高(P 0. 05);si-DNMT1组DNMT1 mRNA及蛋白表达水平均显著低于空白对照组、si-NC组(P 0. 05);与空白对照组、si-NC组相比,si-DNMT1组LNCap细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、GSTP1、SHOX2、DAPK mRNA及蛋白表达水平均显著升高(P0. 05);与空白对照组、si-NC组相比,si-DNMT1组GSTP1、DAPK、SHOX2基因甲基化水平均显著降低(P 0. 05)。结论沉默DNMT1基因后可明显抑制LNCap细胞增殖并促使其凋亡,其可能通过逆转GSTP1、DAPK、SHOX2甲基化状态并上调其表达而发挥作用。     

HAX-1调控人宫颈癌Hela的细胞增殖

摘要:目的探讨造 血细胞特异性蛋白1(HS-1)相关蛋白X-1(HAX-1)对宫颈癌Hela细胞增殖的调控作用。方法以人宫颈.癌Hela细胞系为研究模型,采用脂质体介导法将HAX-1siRNAs和阴性对照siRNA转染Hela细胞并构建HAX-1沉跌细胞系 (HAX-1沉默组),以HAX-1高表达质粒和peDNA3.1空载质粒转染Hela 细胞并构建HAX-1过表达细胞系(HAX-1过表达组)。采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)和Western blot检测转染后Hela 细胞中HAX-1的表达情况;EdU试验检测转染后的 细胞增殖能力;MTT试验检测转染后的细胞活力;流式细胞术检测HAX-1对转染后Hela细胞周期和细胞凋亡的变化;RT-qPCR检测转染后Ki-67、c-Myc. .BCL-2/BAX 基因的表达水平。结果沉跌 HAX-1后,Hela细胞中HAX-I mRNA和蛋白质的 水平显著降低,而过表达HAX-1后,Hela细胞中HAX-I mRNA和蛋白质的水平显著升高,差异均有统计学意义( P<0.05)。过表达HAX-1后,HAX-1过表达组中EdU阳性细胞数目下降,细胞活力降低,G,期细胞比例增加,S期细胞比例降低,细胞凋亡 率上升,增殖相关基因Ki67表达降低, BCL-2/BAX基因显著降低(P<0.05),而HAX-1沉默组则具有相反的表现。结论HAX-1的表达抑制了Hela 细胞增殖,并通过BCL-2/BAX途径诱导其凋亡。     

miR-590-5p靶向TGF-β1/Smad3通路调控瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和侵袭的研究

目的 探讨miR-590-5p通过TGF-β1/Smad3通路调控瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和侵袭的作用。方法 获取瘢痕疙瘩成纤维细胞进行培养采用随机数字表法分组,分为空白对照组、空载体转染组、miR-590-5p mimic组、miR-590-5p inhibitor组、miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1共转染组,其中空白对照组不进行转染,空载体转染组转染空载体、miR-590-5p mimic组转染miR-590-5p mimic、miR-590-5p inhibitor组转染miR-590-5p inhibitor、miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1共转染组转染miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1。采用CCK-8试验检测各组细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell试验检测细胞侵袭能力,蛋白质印迹法检测TGF-β1、Smad3蛋白表达。结果 miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1共转染组细胞培养24、48和72 h时细胞增殖活力明显低于空白对照组、空载体转染组、miR-590-5p...     

沉默Caveolin-1基因对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨沉默 Caveolin-1（Cav-1）基因对人膀胱癌细胞株5637增殖和凋亡的影响。方法通过siRNA转染人膀胱癌细胞株5637（沉默组）,以转染 FAM-siRNA为阴性对照组,未转染细胞为正常对照组。Re-al-time PCR法检测Cav-1基因沉默的效率,CCK-8法检测各组细胞的增殖情况,流式细胞术检测各种细胞的凋亡情况。结果 siRNA转染可显著降低人膀胱癌细胞株5637中 Cav-1 mRNA 的表达水平。沉默组细胞的增强能力明显减低,而细胞凋亡率明显升高（均P＜ 0.05）。结论沉默Cav-1基因可抑制人膀胱癌细胞株5637的细胞增殖并促进细胞凋亡。