缺失型α—地中海贫血中的基因诊断新技术研究

目的 建立诊断我国最常见的三种缺失型α-地中海贫血（α-地贫）,即东南亚型缺失（--^SEA)、右侧缺失（-α^3.7)和左侧缺失（－α^4.2)的PCR技术。方法 设计三组PCR引物,优化PCR反应条件,运用PCR、琼脂糖凝胶电泳、UVP凝胶成像技术,根据电泳图谱检测并诊断三种缺失型α-地贫。结果 成功地检测这三种缺失型的纯合子、杂合子或双重杂合子,结果与Southern blotting分析一致。完成42例α-地贫样本的基因诊断。结论 本研究所建立的检测α-地贫缺失型的技术,准确、简便、重复性好,便于推广应用。     

多重PCR检测缺失型α地中海贫血

目的　针对中国人常见的缺失型α地中海贫血建立一种快速、简便、可靠的多重聚合酶链反应 (PCR)基因诊断技术。方法　设计 4对引物 ,利用单管多重PCR方法进行扩增 ,同时检测 3种缺失型和正常的α2 珠蛋白基因。结果　成功检测出正常人及 3种缺失型的杂合子、双重杂合子 ;正常α2 基因的扩增片段为 180 0bp ,东南亚型缺失基因的扩增片段为 70 8bp ,右侧缺失基因的扩增片段为 2 0 2 2bp ,左侧缺失基因的扩增片段为 16 2 8bp , α3 .7/ SEA双重杂合子的扩增片段为 2 0 2 2bp和 70 8bp , α4.2 / SEA双重杂合子的扩增片段为 16 2 8bp和 70 8bp。结论　 790例标本的基因检测结果分析表明 ,该法快速、准确 ,可用于常规临床标本的检测。     

牛血清清蛋白在小鼠骨肉瘤模型PCR基因分型中的应用

摘要：目的：验证在PCR反应体系中加入牛血清清蛋白（BSA）可否提高小鼠骨肉瘤模型floxed Rb1基因杂合子和纯合子的检出率与准确率。 方法：以小鼠骨肉瘤模型子代小鼠基因组DNA为模板,进行Rb1基因的PCR基因分型。对在PCR反应体系中添加适量浓度(0.16 mg/mL)的BSA与不加BSA的PCR基因分型结果相比较。PCR引物序列涵盖Rb1基因外显子19两侧或3′端的LoxP序列。 结果：反应体系中添加BSA后,可成功获得PCR扩增条带：单一650 bp 或247 bp（野生型）、单一700 bp 或295 bp（floxed Rb1基因纯合型）以及650 bp和700 bp（或247 bp 和295 bp）混合条带（floxed Rb1基因杂合型）,而反应体系中未加BSA的则无PCR扩增条带产生。 结论：BSA可显著提高floxed Rb1基因的扩增效率,增加了该基因杂合子和纯合子的检出率并排除了假阴性结果,对于难以扩增的靶基因序列的PCR基因分型具有借鉴意义。     

广东佛山地区地中海贫血基因突变类型分析

目的：了解佛山地区α与β地中海贫血患者的基因突变类型,为开展佛山地区α与β地中海贫血的遗传咨询,产前诊断和预防计划提供参考。方法：回顾性分析2011年1月至2012年12月佛山市第二人民医院地中海贫血基因检测PCR阳性的351名患者的地贫基因突变类型。结果：351名地中海贫血患者中200名仅地中海贫血患者,其中东南亚型缺失（--^SEA）154例,右侧缺失（-^3.7）20例,左侧缺失（-^4.2）8例,缺失型HbH病（--^SEA／-^3.7）11例,缺失型HbH病（--^SEA／-^4.2）7例。136名β地中海贫血患者,其中CD41-42杂合子53例,ISV-Ⅱ-654杂合子38例,CD28杂合子16例,CD17杂合子13例,CD29杂合子3例,CD43杂合子3例,BE杂合子5例,CD41-42纯合子、CD17纯合子、CD71-72杂合子、CD41-42,ISV—Ⅱ-654双重杂合子、Int杂合子各1例,15名αβ复合型地中海贫血患者。结论：佛山地区的α地贫人群中东南亚缺失型占主导地位,而CD41—42突变与TSV-Ⅱ-654突变是β地中海贫血最常见的基因突变类型。     

β-地中海贫血复合缺失型α-地中海贫血双重杂合子的分子检测及血液学分析

本研究对β-地中海贫血复合缺失型α-地中海贫血双重杂合子进行分子检测及血液学表型分析，以了解其检出情况及基因分布状况。采用单管多重gap—PCR技术检测3种常见的缺失型α-地中海贫血基因；采用PCR结合反向点杂交法检测β-珠蛋白基因17个位点的18种突变；进行血细胞常规分析。结果表明：81例β-地中海贫血杂合子中有15例复合缺失型α-地中海贫血，占18．52％。共有9种基因型，包括6例（7．41％）β-地中海贫血杂合子携带α-地中海贫血-1基因（--^SEA／αα-）；8例（9．88％）携带α-地中海贫血-2基因，其中6例（7．41％）为右侧缺失型（-α^3.7／αα），2例（2．47％）为左侧缺失型（-α^4.2／αα）；1例（1．23％）携带缺失型HbH基因（--^SEA／-α^3.7）。β-地中海贫血复合缺失型α-地中海贫血双重杂合子的各项红细胞参数与单纯β-地中海贫血杂合子比较差异无显著性意义（P〉0．05）。结论：梧州市β-地中海贫血复合缺失型α-地中海贫血双重杂合子的发生率很高，而血液学指标缺乏特异性。采用gap—PCR作为临床上地中海贫血筛查的一线方法，可以有效减少β-地中海贫血复合α-地中海贫血双重杂合子漏检的可能，对遗传咨询和准确进行产前诊断具有重要意义。     

多重PCR用于缺失型α-地中海贫血的基因检测

为了探讨多重PCR技术在检测我国南方常见缺失型α—地中海贫血中的临床应用，观察缺失型α—地中海贫血的基因分布频率，采用单管多重DNA扩增的方法(M—PCR)对经血红蛋白定量分析初步诊断为标准型和静止型α—地中海贫血及血红蛋白H(HbH)病的145例患者进行基因检测。扩增产物经1．2％琼脂糖凝胶电泳，出现1．3及1．8kb条带者，提示为-^SEA／αα；1．6及1．8kb条带者为-α^4.2／αα；1．8及2．0kb条带者为-α^3.7／αα；1．3及1．6或2．0kb条带，提示为缺失型HbH病(-^SEA／-α^4.2或-^SEA／-α^3.7)。结果表明，145例受检者中发现100例-^SEA／αα(68．9％)，15例-α^3.7/ αα(10．3％)，8例-α^4.2/αα(5．52％)，2例-α^3．7／-α^4.2(1．38％)，-α^3.7及-α^4.2纯合子各1例(0．69％)；14例-SEA／αα(9．65％)，2例-SEA／-α^4.2(1．38％)；另有2例患者产前诊断证实为Bart水肿胎儿。结论：运用多重PCR技术可以准确、简便、快速地检测我国南方地区常见的-α^3.7、-α^4.2、-^SEA3种缺失型α-地中海贫血，这一技术对α—地中海贫血的大人群筛查及携带者的检出是一种较为理想的方法。     

缺失型α-地中海贫血的基因诊断新技术研究

目的建立诊断我国最常见的三种缺失型α-地中海贫血(α-地贫),即东南亚型缺失(--SEA)、右侧缺失(-α3.7)和左侧缺失(-α4２)的PCR技术。方法设计三组PCR引物,优化PCR反应条件,运用PCR、琼脂糖凝胶电泳、UVP凝胶成像技术,根据电泳图谱检测并诊断三种缺失型α-地贫。结果成功地检测这三种缺失型的纯合子、杂合子或双重杂合子,结果与Southern blotting分析一致。完成42例α-地贫样本的基因诊断。结论本研究所建立的检测α-地贫缺失型的技术方法,准确、简便,重复性好,便于推广应用。     

广东地区β地中海贫血复合缺失型α地中海贫血双重杂合子检出率

目的 研究广东地区β地中海贫血（地贫）杂合子复合α地贫双重杂合金的检出率。方法 采用反向点杂交法（RDB）诊断β地贫杂合子500例并进一步采用Gap-PCR法进行α地贫1基因检测,用α珠蛋白基因探针Southern印迹杂交限制性核酸内切酶酶谱分析法对其中400例β地贫杂合子中有26例合并α地贫2,其中17例为右侧缺失（αα／－α^3.7),9例为左侧缺失（αα/-α^4.2)。结论 广东地区β地贫杂合子复合α地贫1的检出率为8．6％,复合α地贫2的检出率为6．5％,其中复合右侧缺失型α地贫2的检出率为4．2％,复合左侧缺失型α地贫2的检出率为2．2％。     

多重聚合酶链反应对缺失型α地中海贫血的诊断

目的　探讨一种简便、快速可同时检测东南亚缺失 ( SEA)、右侧缺失 ( α3 .7)和左侧缺失 ( α4.2 )地中海贫血的多重聚合酶链反应 (PCR)技术。方法　采用单管四重聚合酶链反应 (PCR)技术。结果　正常等位基因的扩增产物为 1.8kb ,东南亚缺失基因 ( SEA/αα)的扩增产物为 1.8kb和 1.3kb。右侧缺失 ( α3 .7/αα)扩增产物为 2 .0kb和 1.8kb。左侧缺失 ( α4.2 /αα)扩增产物为 1.8kb和 1.6kb。根据出现的不同条带还可判断杂合子和纯合子及缺失型HbH病。结论　本法简便、快速 ,可作为常规方法用于临床样品的分子筛查及产前诊断。     

PCR技术对α-地贫家系进行产前检测

目的：探讨PCR技术对α-地贫家系进行产前检测对优生优育的临床意义。方法：利用电泳和聚合酶链反应(PCR)技术，对筛查出的300例患者进行缺失型α-地中海贫血的产前诊断。结果：300例进行PCR诊断结果为：α地1杂合子140例，占46．7％；a地1纯合子24例，占8％。其中114对有不良孕产史的夫妇中有52对夫妇双方均α地1杂合子，占47％。HbH病患儿为α地1杂合子，其母也为α地1杂合子，其父α地1检测正常。结论：提示PCR技术用于α-地中海贫血的产前诊断，快速、准确。     

东南亚缺失型α地中海贫血的聚合酶链反应快速诊断技术及产前诊断

目的　针对东南亚缺失型α地中海贫血 (- - SEA)建立一种快速、简便的聚合酶链反应(PCR)基因诊断技术 ,并初步应用于高危胎儿的产前诊断。方法　采用跨越断裂点的PCR设计方案 ,其中一对引物用于扩增 - - SEA缺失基因 ,另一对引物设计在 - - SEA、-α3 .7、-α4 .2 的公共缺失区域 ,用于扩增正常的α珠蛋白基因 ,两对引物在单管中反应。用该方法对 8例高风险Bart’s水肿胎进行产前诊断。结果　 - - SEA缺失基因的扩增产物为 740bp ,正常等位基因的扩增产物为 10 5 2bp。进行产前诊断的 8例高风险Bart’s水肿胎 ,检出正常胎儿 3例 ,- - SEA杂合子 3例 ,HbBart’s水肿胎儿 2例。结论　该法快速、准确 ,可作为常规方法用于临床样品的分子筛查及Bart’s水肿胎和缺失型HbH病的产前诊断。     

孕妇血浆游离胎儿DNA中缺失型α-地中海贫血的检测

本研究旨在建立一种孕早期、简便、快速且无创伤性的检测胎儿常见缺失型α-地中海贫血突变的单管多重PCR技术,用于α-地中海贫血的产前诊断。选择50例妊娠14—20周的贫血孕妇,采用gap—PCR方案设计4组PCR引物单管多重PCR体系,快速地检测孕妇血浆游离胎儿DNA中缺失型α-地中海贫血。结果表明：在50例贫血孕妇血浆的游离胎儿DNA中检出5例α-地中海贫血,其中3例为东南亚型缺失^--SEA,2例为右侧缺失-α^3.7。结论：采用单管多重PCR检测技术能快速准确地检测出3种最常见缺失型α-地中海贫血,对于防止α-地中海贫血患儿出生、提高人口素质、减轻社会负担有重要意义。     

基因芯片检测缺失型α地中海贫血的研究

目的：建立基因芯片检测技术为缺失型α-地中海贫血基因检测诊断提供良好的方法。方法：应用基因芯片检测技术对515例深圳市人民医院进行产前检查及产前诊断的妇女进行筛查。结果：其中85例缺失型α-地贫诊断为：-^SEA型65例占12．62％，-α^3.7型14例占2．72％；-α^4.2型4例占0．78％；-^SEA／-α^3.7型2例占0．39％。结论：应用基因芯片检测技术检测缺失型α-地中海贫血的诊断比用传统方法如：southern杂交、跨越断裂点PCR方法更具备微量、高效、敏感、自动化等特点，更能准确地从分子水平诊断疾病，从而可代替传统检测方法成为筛查的常规方法。     

泰国缺失型α-地中海贫血基因诊断和误诊分析

目的探讨如何进行少见的α地中海贫血类型——泰国缺失型α地中海贫血1(泰国缺失型)的基因诊断和避免误诊方法。方法对8例泰国缺失型的误诊进行回顾分析,采用分析常规基因检测和泰国缺失型检测方法进行泰国缺失型基因诊断。结果 1例泰国缺失型复合左侧缺失型双重杂合子误诊为左侧缺失型纯合子;2例泰国缺失型复合右侧缺失型双重杂合子误诊为右侧缺失型纯合子;1例泰国缺失型复合Hbconstantsspring双重杂合子误诊为Hbconstantsspring纯合子;余下4例泰国缺失型杂合子误诊为正常。结论综合分析常规α地中海贫血基因检测和泰国缺失型检测结果,并结合患者的血液学参数、血红蛋白电泳能有效诊断泰国缺失型,避免误诊。     

跨跃断裂位点PCR检测α-珠蛋白生成障碍性贫血基因缺失及其临床应用

目的评价跨跃断裂位点PCR（GAP-PCR）法检测α-珠蛋白生成障碍性贫血基因缺失（-α^3.7，-α^4.2，-^SEA）的可行性，并进行初步临床应用。方法用GAP-PCR法检测158例临床疑诊为α-珠蛋白生成障碍性贫血病人血标本，用金标准Southern blot法进行盲法平行检测，评价前者方法学性能。结果GAP-PCR法检出α-珠蛋白生成障碍性贫血基因缺失阳性率为42．41％（67／158），其中αα／-^SEA为32．91％（52／158），-α^3.7／αα为6.96%（11／158），-α^4.2／αα为1．90％（3／158），-α^3.7／-^SEA为0．63％（1／158），与Southern blot法完全一致。GAP-PCR法检测敏感度、特异度和准确度均为100％。结论此法检测结果准确，操作简便，为α-珠蛋白生成障碍性贫血诊断和筛查的有效方法。     

海南昌江地区人群αβ复合型地中海贫血基因突变类型的研究

目的:研究海南昌江地区人群αβ复合型地中海贫血(地贫)基因突变类型及检出率.方法:采用膜反向杂交技术检测β地贫基因.用gap-PCR法检测三种常见α地贫缺失基因型:东南亚型缺失(--SEA)、右侧缺失(-α3.7)、左侧缺失(-α4.2),采用反向点杂交法检测3种常见的突变型α-地中海贫血基因(QSM、CSM和WSM).结果:海南昌江地区αβ复合型地中海贫血检出率高,在212例β地贫患者中检出复合α地贫的共102例,检出率为48.11%,β地贫杂合子复合-α4.2/α是本次研究中检出的主要复合型地贫类型,其次为-α3.7/αα,以轻型β地贫复合α地贫为主要突变类型.结论:海南昌江地区αβ复合型地贫检出率高.-α4.2/αα是本地区β地贫杂合子检出的主要复合α地贫基因型,其次为-α3.7/αα.准确诊断β地贫合并α地贫双重杂合子对本地人群正确进行遗传咨询和做好优生优育的准备都具有十分重要的意义.     

深圳地区异常血红蛋白病的分子特征与表型分析

目的分析深圳地区人群异常血红蛋白病的分子特征及血液学表型。方法收集我院20 734例毛细管电泳筛查样本,对其中检出有异常血红蛋白的样本采用Gap-PCR法、PCR-RDB法和DNA测序法进行地贫基因和异常血红蛋白基因分型鉴定,并分析红细胞参数。结果共检出17种异常血红蛋白,均为杂合子,检出率为0.405%(84/20 734);其中,检出2例Hb J-Bangkok复合--SEA杂合子,1例J-Wenchang-Wuming复合-α4.2杂合子,2例Hb Q-Thailand复合-α4.2杂合子,1例Hb Queens复合IVS-II-81杂合子,1例Hb Ube-2复合CD118杂合子,1例Hb E复合αWS杂合子,1例Hb E复合α3.7纯合子。除Hb E和Hb Q-Thailand外,其余异常血红蛋白类型的单纯杂合子血液学表型均正常;单纯Hb E杂合子、Hb E合并αWS杂合子和Hb Q-Thailand合并-α4.2杂合子对血液学表型影响较轻; Hb E复合-α3.7纯合子和Hb J-Bangkok复合--SEA杂合子表现为轻型地贫特征; Hb J-Wenchang-Wuming复合-α4.2杂合子、Hb Queens复合IVS-Ⅱ-81杂合子以及Hb Ube-2复合CD118杂合子的血液学表型正常。结论除Hb E和Hb Q-Thailand外,其他类型单纯杂合子血液学表型正常,合并地贫时可表现为贫血特征,贫血程度取决于合并的地贫类型。     

东南亚缺失型α地中海贫血的聚合酶链反应快速诊断技术及 …

目的 针对东南亚缺失型α地中海贫血建立一种快速,简便的聚合酶链反应（ＰＣＲ）基因诊断技术,并初步应用于高危胎儿的产前诊断。方法 采用跨越断裂点的ＰＣＲ设计方案,其中一对引物用于扩增－－＾ＳＥＡ缺失基因,另一对引物设计在－－＾ＳＥＡ,－α＾３．７,－α＾４．２的公共缺失区域,用于扩增正常的α珠蛋白基因,两对引物在单管中反应。     

罕见的血红蛋白H病同时合并异常血红蛋白Q和E家系分析

目的对广州市一个罕见的血红蛋白H病同时合并异常血红蛋白Q和E家系进行分析。方法采用美国HELENA公司全自动快速电泳分析系统测定血红蛋白（Hb）各种区带定量；同时进行异常Hb各项测定，包括吸收光谱试验、C结晶试验、溶解度试验、异丙醇试验、连二硫酸钠过筛试验、血红蛋白肽链裂解试验。首证者做了骨髓检查；4例均做外周血红细胞形态检查、常规血液检查、红细胞温育脆性试验、高铁血红蛋白还原试验、G6PD／6PGD酶比值法（紫外法）测定；α—THAL基因检测：多重PCR检测α—THAL基因缺失；β—THAL基因检测：DNA芯片反向点杂交（RDB）检测中国人较常见的18种β—THAL基因，鉴定β—THAL基因突变类型。结果父亲的α—THAL基因型：α^Qα^4.2／αα；β—THAL基因型：β^E／N；表现型：轻型β—THAL携带者合并异常HbQ和异常HbE多重杂合子；母亲的α—THAL基因型：α/--^SEN；β—THAL基因型：βN／βN。根据综合分析，母亲的表现型：轻型α—THAL复合轻型β—THAL携带者同时合并异常HbF持续增高症（HPFH）。首证者的α—THAL基因型：α^Qα^4.2／--^SEA；表现型：缺失型HbH—Q病；β-THAL基因型：βEM／βEM；表现型：βE纯合子。根据综合分析，为缺失型异常HbH合并异常HbQ和异常HbE多重杂合子。其弟的α—THAL基因型：α^Qα^4.2/--^SEA；β—THAL基因：βN/βN；表现型：缺失型异常HbH病。母亲及其小儿子均同时合并G6PD缺陷。结论广东省是α—THAL和β-THAL、异常HbE和异常HbQ以及G6PD缺乏症的发高区，从地域异常Hb的高发率上，HbE和HbQ是可能存在某种关联性，但是在非同源染色体上两种类型的异常Hb同时合并HbH病在一个个体上，实为罕见。本研究提示对其配偶的婚前检查尤为必要。     

用巢氏PCR检测防止香港型地中海贫血漏诊

目的探讨经α-地中海贫血基因诊断试剂盒检测为-α3.7/αα(右向缺失,静止型)的样本中是否携带anti4.2片段,以判断是否存在漏诊的香港型地中海贫血(HKαα)。方法设计HKαα和anti4.2片段的引物,用巢式PCR检测50例-α3.7/αα样本中是否存在anti4.2片段,并结合平均红细胞体积(MCV)及血红蛋白A2(HbA2)比较分析。结果巢式PCR结果表明,50例-α3.7/αα样本中存在8例为HKαα型,漏诊率为16%;且HKαα携带者的MCV明显高于-α3.7/αα携带者,差异有统计学意义(t=7.04,P0.05)。结论巢式PCR可鉴别HKαα与-α3.7/αα携带者,提高其检出率。