荧光定量PCR测定HBV DNA的线性评价和临床可报告范围

目的探讨荧光定量PCR测定乙型肝炎病毒核酸(HBV DNA)检测系统的线性评价和临床可报告范围(CRR)。方法选取接近线性范围上限的患者标本(8.81E+08)IU/mL,用阴性标本进行系列稀释至比厂商声明的线性范围下限低一个数量级(8.81E+01)IU/mL,共制备8种浓度梯度的标本,每个标本重复测量3次,在一个分析批内完成,采用平均斜率法、美国临床和实验室标准化委员会EP 06-A指南方法和线性稀释回收法进行线性评价。在线性范围内选取3份高浓度患者标本,采用最大稀释度试验确定CRR。结果采用平均斜率法,相关系数(r)=0.999,斜率(b)=1.004(t=93.326,P=0.000),符合线性要求;按EP 06-A指南,经多项式回归分析,最适多项式为二次,二次多项式中每种浓度的线性偏差均小于允许误差0.4(log值);采用线性稀释回收法,r=0.999,b=0.993(t=75.82,P=0.000),符合线性要求,各浓度梯度的稀释回收量均≤±0.4(log值)。采用最大稀释度试验确定最大稀释倍数为1∶100 000。结论 HBV DNA在(8.81E+01)～(8.81E+08)IU/mL为临床可接受线性关系,CRR为(8.81E+01)～(8.81E+13)IU/mL。     

三种化学发光法检测新型冠状病毒（SARS-CoV-2）抗体试剂盒的临床应用评价

目的 评价三种新型冠状病毒（SARS-CoV-2）抗体化学发光试剂盒的检测性能,研究SARS-CoV-2 抗体检测的临床应用价值。方法 采用37 例临床确诊新型冠状病毒肺炎（COVID-19）患者恢复期血清样本和100 例对照患者血清样本,对三个不同厂家的化学发光新型冠状病毒抗体检测试剂盒进行评估。绘制ROC 曲线分析三种试剂的检测性能。利用Kappa 统计分析三种试剂的检测一致性。结果 对于IgM 抗体检测,试剂A 和试剂B 具有非常好的检测性能,尤其是试剂B 性能最优,临床敏感度为56.76%,临床特异度为99%;对于IgG 抗体检测,三种试剂均具有非常好的检测性能,三种试剂的临床特异度均为97.00%,而试剂C 的临床敏感度最高,为97.29%。对于IgM 抗体检测,试剂A 与试剂B 检测结果具有中度一致性（Kappa=0.508,P<0.05）,试剂C 与试剂B 检测结果仅具有微弱一致性（Kappa=0.065,P ≥ 0.05）;对于IgG 抗体检测,试剂A 与试剂C 检测结果具有高度一致性（Kappa=0.654,P<0.05）,试剂A 与试剂B 检测结果为弱一致性（Kappa=0.102,P ≥ 0.05）。结论 三种化学发光法SARS-CoV-2 IgM 和IgG 抗体检测试剂盒均具有一定的临床敏感度和特异度,但各厂家产品的检出一致性相差较大,因此产品性能的标准化和工艺标准化亟待解决。     

深圳地区异常血红蛋白病的分子特征与表型分析

目的分析深圳地区人群异常血红蛋白病的分子特征及血液学表型。方法收集我院20 734例毛细管电泳筛查样本,对其中检出有异常血红蛋白的样本采用Gap-PCR法、PCR-RDB法和DNA测序法进行地贫基因和异常血红蛋白基因分型鉴定,并分析红细胞参数。结果共检出17种异常血红蛋白,均为杂合子,检出率为0.405%(84/20 734);其中,检出2例Hb J-Bangkok复合--SEA杂合子,1例J-Wenchang-Wuming复合-α4.2杂合子,2例Hb Q-Thailand复合-α4.2杂合子,1例Hb Queens复合IVS-II-81杂合子,1例Hb Ube-2复合CD118杂合子,1例Hb E复合αWS杂合子,1例Hb E复合α3.7纯合子。除Hb E和Hb Q-Thailand外,其余异常血红蛋白类型的单纯杂合子血液学表型均正常;单纯Hb E杂合子、Hb E合并αWS杂合子和Hb Q-Thailand合并-α4.2杂合子对血液学表型影响较轻; Hb E复合-α3.7纯合子和Hb J-Bangkok复合--SEA杂合子表现为轻型地贫特征; Hb J-Wenchang-Wuming复合-α4.2杂合子、Hb Queens复合IVS-Ⅱ-81杂合子以及Hb Ube-2复合CD118杂合子的血液学表型正常。结论除Hb E和Hb Q-Thailand外,其他类型单纯杂合子血液学表型正常,合并地贫时可表现为贫血特征,贫血程度取决于合并的地贫类型。     

新生儿重型α地中海贫血1例报告及文献复习

目的对1例新生儿重型α地中海贫血案例进行报告分析。方法回顾性分析1例新生儿重型α地中海贫血的临床资料,并进行文献复习。结果患儿为早产儿、小于胎龄儿、低体重儿,肤色苍白,呼吸浅促,胎盘增厚,双肺呼吸音粗,可闻及湿罗音,全腹胀明显,肝肋下8.5 cm可扪及肿大,左足明显水肿。辅助检查提示中度贫血、黄疸、重度代谢性酸中毒、电解质紊乱、心包腔积液、先天性心脏病(卵圆孔未闭、动脉导管未闭、肺动脉高压)、肝脏弥漫性增大。血红蛋白分析:Hb Bart’s83.0%,Hb H 1.4%,Hb Epsilon 1.9%,Hb Gower 13.7%,Hb Portland 10.0%。地贫基因检测:基因型为--SEA/--SEA。孕母有合并妊娠期高血压病史,产前胎儿B超提示心包积液,胎心监测提示胎心减慢。结论患儿临床表现、体征及辅助检查符合Hb Bart’s胎儿水肿综合征(重型α地贫)特征。     

血红蛋白A_2筛查β地中海贫血的价值

目的评价全自动毛细管电泳法检测血红蛋白A2(Hb A2)在β地中海贫血(以下简称地贫)筛查中的价值,建立适合本实验室的Hb A2最佳截断值。方法收集本实验室2016年7月至2017年8月进行地贫筛查和基因诊断的外周血样本2 107例。以基因诊断结果为金标准,计算敏感性、特异性、阴性似然比和阳性似然比、尤登(Youden)指数等评价指标,绘制ROC曲线确定Hb A2筛查β地贫的最佳临界值。结果地贫基因检测阴性1 863例,β地贫携带者244例;Hb A2结果分别为(2.83±0.19)%和(5.38±0.63)%。Hb A2筛查β地贫ROC曲线下面积(AUC)为0.993,95%的可信区间0.980~1.000。以尤登指数最大值为最佳临界值,Hb A2最佳截断值为3.35%,敏感性为98.4%,特异性为99.5%,阴性似然比0.016,阳性似然比183.246,尤登(Youden)指数0.978。结论全自动毛细管电泳法检测Hb A2对筛查β地贫的价值较高,Hb A2的最佳截断值为3.35%。     

亲和层析法测定HbA1c的分析性能验证

目的 验证验证Primus Trinity Ultra2分析仪测定HbA1c的精密度、准确度、分析测量范围和抗干扰能力的可接受性。方法 参照美国临床与实验室标准化协会(CLSI)EP文件及相关文献对Primus Trinity Ultra2分析仪测定HbA1c的精密度、准确度、分析测量范围和抗干扰能力进行验证。结果 Trinity Ultra2分析仪检测HbA1c精密度的批内不精密度和总不精神度均小于厂商声明的不精密度值;Trinity Ultra2分析仪测定定值参考物的结果均在各自的验证区间;Trinity Ultra2分析仪在线性验证中,通过测定按一定比例稀释后的标本,得到了理论值与实测值间的回归方程,r2>0.95,a值在0.97~1.03的范围内;Trinity Ultra2分析仪有良好的抗黄疸、溶血、脂血、乳糜等干扰物质的能力。结论 Primus Trinity U1tra2分析仪亲和层析法的主要分析性能均达到厂商声明的性能和有关质量的要求,可满足临床需求。     

TINIA检测HbA_(1c)的性能评价及和IE-HPLC在HbE患者中的应用比较

目的评价免疫抑制比浊法(TINIA)检测糖化血红蛋白(HbA1c)的分析性能,与离子交换高效液相色谱法(IE-HPLC)检测HbA1c进行比对和偏倚评估,并评估血红蛋白(Hb)变异体E(HbE)对TINIA和IE-HPLC的影响。方法参考美国临床与实验室标准化协会(CLSI)发布的方法学评价系列文件(EP文件)及有关文献,对TINIA检测HbA1c的精密度、正确度、分析测量范围、分析干扰以及生物参考区间进行评价和验证,对TINIA与IE-HPLC检测Hb结构正常的血液样本和含HbE的血液样本进行对比分析和偏倚评估,分析患者平均血糖的相关性。结果 TINIA检测HbA1c的批内精密度2.08%,总不精密度2.94%;在HbA1c浓度为4.4%~18.3%范围内,理论值与实测均值呈线性相关(r=0.999 4);Hb、游离胆红素(FBiL)、结合胆红素(CBiL)、乳糜(CH)浓度分别为9.9~49.6μmol/L、65.6~328.0μmol/L、65.6~328.0μmol/L和3 000~12 000 FTU时,差异百分比均5%;厂商提供的参考区间(4.8%~5.9%)适用于临床实验室。对于Hb结构正常的血液样本,TINIA和IEHPLC的HbA1c检测结果差异无统计学意义(P0.05),两种方法的相关性良好(r2=0.999 2)。对于HbE浓度在5.4%~54.7%范围内的血液样本,TINIA的平均偏倚为-4.1%~1.9%,均5%,几乎不受HbE的干扰,HbA1c检测结果与平均血糖的相关性较好(r=0.998 8);当HbE6.4%时IE-HPLC检测HbA1c的实测值与理论值平均偏倚为5.7%~278.7%,差异百分比均5%,测定结果与预期理论结果有明显差异;两种方法检测结果差异有统计学意义(P0.01)。结论 TINIA检测HbA1c的分析性能符合临床测定的性能要求,不受HbE的干扰。当HbE6.4%时,IE-HPLC法检测HbA1c会受干扰,出现假性增高的情况。     

β-连环蛋白在铜绿假单胞菌感染时的调节作用

目的探讨在铜绿假单胞菌感染时β-连环蛋白(β-catenin)对细菌感染引起的炎性反应和细菌清除的调节作用。方法采用Western-blot和免疫荧光检测细菌感染前后β-catenin的表达;慢病毒感染后Western-blot检测β-catenin上调效果;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测促炎性因子的表达;平板计数检测荷菌量。结果在铜绿假单胞菌感染后,β-catenin在巨噬细胞和中性粒细胞中的表达呈现一过性上调后逐渐降低;β-catenin在细胞中抑制促炎因子的表达,并促进细菌清除。结论在铜绿假单胞菌感染时β-catenin抑制炎性反应并促进细菌的清除。     

α2珠蛋白基因突变IVS-Ⅱ-55(T→G)的临床表型分析

目的鉴定一种α2-珠蛋白基因突变类型,分析携带者的表型特征。方法收集5个携带α2-珠蛋白基因IVS-Ⅱ-55(T→G)杂合突变的婴幼儿先证者的家系和3例散发成人携带者的外周血样本进行血常规和血红蛋白电泳分析,并采用跨越断裂点聚合酶链反应(Gap-PCR)方法、PCR结合反向点杂交(PCR-RDB)法以及DNA测序方法进行珠蛋白基因缺失和突变的鉴定。结果 13例α2-珠蛋白基因IVS-Ⅱ-55(T→G)杂合突变携带者中,5例婴幼儿先证者的MCV和MCH均低于正常参考区间,表现为小细胞低色素轻中度贫血;成人(包括3例散发成人和5例家系中的成人携带者)中1例表现为小细胞低色素中度贫血,1例复合βCD27-28杂合突变表现为MCV 65 fL、MCH 20.3 pg,1例复合SEA-HPFH表现为MCV 81.9 fL、MCH 26.5 pg,其余MCV和MCH均正常; IVS-Ⅱ-55复合βCD27-28杂合突变的HbA_2为5.8%。IVS-Ⅱ-55复合SEA-HPFH的HbA_2为3.0%,Hb F为29.0%。单纯IVS-Ⅱ-55杂合子的HbA_2均正常。所有携带者均未见异常血红蛋白条带。结论单纯IVS-Ⅱ-55(T→G)杂合子的血液学表型正常,复合β地贫时表型与单纯β地贫类似。     

新型冠状病毒核酸检测的主要影响因素及控制措施

新型冠状病毒肺炎于2020年2月11日被世界卫生组织(WHO)命名为COVID-19(coronavirus disease 19)。自COVID-19疫情暴发以来,核酸检测作为病毒感染的直接证据在疾病的诊断、治疗和防控中起到关键作用。但因部分病例确诊前多次核酸检测均呈阴性,核酸检测结果的可靠性受到临床广泛质疑。这种“假阴性”结果除与检测方法的检出能力有关外,还与标本的采集、保存、运输以及疾病的进程和病毒特点密切相关。该文结合本实验室在核酸检测实践中遇到的一些实际问题,对影响核酸检测的分析前、中、后等多种因素进行分析和探讨,并提出提高核酸检测质量的具体措施。