应用全胚胎培养模型研究双酚A的胚胎毒性

目的：揭示双酚A（BPA）的发育毒性及其毒作用机制。方法：采用植入后全胚胎培养模型，将9．5d龄Wistar大鼠胚胎与含BPA的大鼠即刻离心血清共培养48h（BPA终浓度分别为0、20、40、60、80、100mg/L），观察双酚A对大鼠胚胎生长发育和组织器官形态分化的影响。结果：随着BPA剂量的增加大鼠胚胎在体外的生长发育受影响越严重，呈现出明显的剂量－效应及剂量－反应关系。最大无作用剂量为40mg/L，≥60mg/L的BPA可诱发卵黄囊生长和血管分化不良、生长迟缓及形态分化异常，严重者出现体位异常、神经系统、鳃弓发育异常及小眼、小肢芽等畸形。结论：较高剂量BPA对体外培养的大鼠胚胎具有一定的胚胎毒性。BPA对卵黄囊胎盘的结构和功能受损可能是其发育毒作用的重要基础之一。     

双酚A对大鼠胚胎毒性的时问-效应关系研究

目的探讨双酚A对大鼠胚胎毒性的时间一效应关系。方法采用全胚胎培养模型，对9，5d龄大鼠胚胎分别染毒双酚A(100mg／L)6，16，26，48h，观察体外培养胚胎生长发育的影响。结果双酚A对器官形成期的早期大鼠胚胎发育毒性具有明显的时间一效应关系。早期暴露6h对体外培养的大鼠胚胎的生长发育无不良影响，染毒16h即可影响大鼠胚胎的生长发育，染毒26h和48h对胚胎生长发育和形态分化均有明显的抑制作用。结论体外实验条件下，较高剂量的双酚A对大鼠胚胎具有一定的胚胎毒性，并具有时间一效应关系。BPA诱导的胚胎发育异常以发育迟缓为主。     

对-壬基酚体外发育毒性的时间-效应关系研究

目的 探讨对-壬基酚(4-NP)对大鼠胚胎毒性的时间-效应关系。方法 采用全胚胎培养模型，对9．5d龄大鼠胚胎分别染毒4-NP(50mg/L)6、16、26、48h，观察体外培养胚胎生长发育的影响。结果 4-NP对器官形成期的早期大鼠胚胎具有明显的时间-效应关系。早期暴露6h对体外培养的大鼠胚胎的生长发育无不良影响，染毒16h即可影响大鼠胚胎的生长发育，染毒26h和48h对胚胎生长发育和形态分化均有明显的抑制作用。光镜下发现只有染毒26h以上才出现卵黄囊及大鼠胚胎的鳃弓、心脏等处组织结构的改变。结论 体外实验条件下，较高剂量的4-NP对大鼠胚胎具有一定的胚胎毒性和致畸性。4-NP的毒性作用为慢性毒性作用。     

维生素C及E联合作用对体外大鼠胚胎中脑神经细胞分化和增殖的影响

目的:观察维生素C,维生素E和维生素C 维生素E联合后对胚胎中脑神经细胞生长发育的影响。方法:实验于2006-03/04在江苏大学医学院研究中心细胞培养室完成。采用16d大鼠胚胎中脑神经细胞体外培养方法,观察不同剂量的维生素C(5,10,25,50μmol/L),维生素E(10,25,50,100μmol/L)和维生素C、维生素E联合作用(维生素C25μmol/L 维生素E50μmol/L,维生素C50μmol/L 维生素E100μmol/L),培养10d后收集细胞,并利用图像分析细胞形态的变化、蛋白质、丙二醛含量及超氧化物歧化酶活性指标。结果:①维生素C、维生素E和维生素C 维生素E联合能促进体外培养中脑神经细胞突起生长,集落数增多。②与正常对照组比较,维生素C10,25μmol/L组、维生素E10,25,50μmol/L组、维生素C25μmol/L 维生素E50μmol/L组神经细胞总蛋白相对含量明显增加。③与正常对照组比较,维生素C10,25μmol/L组、维生素E25,50μmol/L组、维生素C25μmol/L 维生素E50μmol/L组神经细胞超氧化物酶活性增加,丙二醛含量降低。④维生素C50μmol/L组、维生素E100μmol/L组和维生素C50μmol/L 维生素E100μmol/L组超氧化物酶活性低于正常对照组,丙二醛含量高于正常对照组。结论:维生素C、维生素E和维生素C 维生素E联合剂量在一定范围内能够明显提高中脑神经细胞的抗氧化能力,同时能促进胚胎中脑神经细胞分化和增殖作用。     

骨髓间充质干细胞体外诱导分化为心肌样细胞的实验研究

目的探讨骨髓问充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）是否能体外诱导分化为心肌样细胞。方法用浓度梯度法分离和纯化Wistar大鼠MSCs，贴壁法培养，培养的第2代细胞分别用终浓度为0、0．1、1．0、10．0、50．0、100．0μmol／L的5-氮杂胞苷（5-azacytidine，5-aza）诱导分化，用光学显微镜观察细胞的形态并用免疫细胞化学方法鉴定细胞内的心肌肌钙蛋白I（cardiac troponin I，cTnI）。结果以终浓度10．0μmol／L 5-aza为诱导组，细胞从原来的梭形变为排列趋向较为一致的长梭形，且体积增大，诱导10d后，细胞内cTnI蛋白染色阳性。终浓度为0、0．1、1．0μmol／L组细胞形态变化不明显，细胞内cTnI染色阴性。终浓度为50．0、100．0μmol／L组细胞死亡。结论大鼠MSCs细胞可经5-aza诱导分化为心肌样细胞，且5-aza的最佳诱导浓度为10．0μmol／L。     

血小板活化因子受体拮抗剂的神经保护作用

目的：探讨血小板活化因子(platelet-activating factor，PAF)所致的神经元损伤是否通过PAF受体而起作用，PAF受体拮抗剂对神经元损伤是否具有保护作用。方法：实验于2003-05／2004-05在南京大学医学院附属鼓楼医院神经科研究室和美国约翰霍普金斯大学Dr．Tao实验室完成。使用原代野生型小鼠皮质神经元细胞培养系统；不同剂量PAF处理神经元细胞24h，并经PAF拮抗剂5μmol／L BN52021预处理；碘化物／钙黄绿素染色检测细胞凋亡，MTT法测定神经元生存能力。结果：0．3和0．6μmol／L PAF明显增加神经元细胞死亡率，0.01和0．10μmol／L增加死亡率不明显；PAF受体拮抗剂5μmol／L BN52021明显地抑制0．3μmol／L PAF所致的神经毒性。结论：PAF介导的神经元损伤是通过其受体而作用的，PAF受体拮抗剂对神经元损伤具有保护作用。     

稀土化合物氯化镧对脂多糖诱导小鼠巨噬细胞分泌-一氧化氮的影响

目的探讨氯化镧（LaCl3）由对脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）刺激小鼠巨噬细胞（RAW264．7）分泌一氧化氮（nitric oxide，N01的影响。方法RAW 264．7细胞随机分成四组：空白对照组（培养基中不含LaCl3和LPS），氯化镧组（含LaCk2．5，5，10，20μmol／L培养24h）、氯化镧＋LPS组（分别以含LaCl3 2．5、5、10、20μmol／L的培养基培养24h后．更换含LPS 1mg／L的培养基继续培养24h）及LPS组（含LPS 1mg／L的培养基培养24h）。采用硝酸还原酶法测定各组细胞培养液上清一氧化氮（NO）的含量。结果LPS组培养上清NO浓度为52．82±12．60μmol／L与空白对照组（2．90±2．36μmol／L）和LaCl3组[（6．50±4．67μmol／L、9．52±4．47μmol／L、11．14±7．42μmol／L、6．74±2．00μmol／L]比较有显著性差异（P〈0．05）；LaCl3＋LPS组NO的浓度分别为26．00±5．83μmol/L（2．5μmol／L LaCl3＋LPS）、29．86±7．26μmol／L（5μmol／L LaCl3＋LPS）、34．62±6．24μmol／L （10μmol／L LaCl3＋LPS），与LPS组相比显著减少（P〈0．05），20μmol／L LaCl3＋LPS）组NO的产生为45．61±6．68μmol／L与LPS组比较无显著性差异。结论一定浓度的LaCl3可抑制LPS诱导小鼠巨噬细胞产生NO的水平。     

联合使用1-磷酸鞘氨醇和溶血磷脂酸对小鼠卵母细胞体外成熟和受精后胚胎发育的影响

目的通过在成熟培养液中联合添加或单独添加1-磷酸鞘氨醇(S1P)和溶血磷脂酸(LPA)研究对小鼠卵母细胞体外成熟和受精后胚胎发育的影响,以期为优化人卵母细胞的体外成熟系统和提高体外胚胎发育率奠定实验基础。方法 (1)成熟培养液中单独添加50~2 000 nmol/L S1P或1~100μmol/L LPA,体外成熟后的卵母细胞体外受精,得到的胚胎观察并统计卵裂率、8-细胞率、囊胚率。(2)成熟培养液中联合添加不同浓度组合S1P和LPA,体外成熟后的卵母细胞体外受精,得到的胚胎观察并统计卵裂率、8-细胞率、囊胚率。(3)对各组体外成熟得到的卵母细胞进行免疫荧光法染色,以评估MⅡ期卵母细胞纺锤体的完整性。(4)对各组得到的数据应用卡方检验进行分析。结果添加100 nmol/L S1P组的成熟率(81.0%)和8-细胞率(81.9%)显著高于0 nmol/L和2 000 nmol/L组;添加30μmol/L LPA的成熟率(81.8%)和8-细胞率(81.5%)显著高于0μmol/L和100μmol/L组;500 nmol/L S1P+30μmol/L LPA组的成熟率(90.7%)显著高于100 nmol/L S1P组、30μmol/L LPA组合和不添加组;500 nmol/L S1P+30μmol/L LPA组的囊胚率(77.6%)显著高于100 nmol/L S1P组和不添加组。结论联合添加S1P和LPA可能要比单独添加更能促进小鼠卵母细胞成熟,虽然在正常纺锤体百分率方面没有显示出优势,但通过体外受精得到的胚胎得到了较高的囊胚发育率。     

氢醌对体外培养骨髓基质细胞核转录因子表达的影响

为了研究氢醌（hydroquinone，HQ）对细胞激活剂佛波酯（PMA）导致的骨髓基质细胞（BMSC）核转录因子表达的影响，并初步探讨其与苯的血液学毒性的关系。用体外培养法获得骨髓基质细胞，观察其形态学变化；分别用NF—κB P65免疫组织化学方法和TransAM P65试剂盒测定了用不同浓度的氢醌加激活剂PMA刺激后的骨髓基质细胞NF—κB蛋白表达和活性的动态变化。结果表明：各组细胞加入HQ后，与对照组相比，P65蛋白由细胞核转回至胞核周围的细胞浆，染色呈弱阳性；不同浓度的HQ作用不同时间后NF—κB活性测定结果与对照组间具有明显差异；各组之间相比，100μmol／L的HQ作用72小时对NF—κB的抑制作用最明显；而0．1μmol／L的HQ几乎无抑制作用。结论：HQ可抑制体外培养骨髓基质细胞核转录因子的激活，并且随HQ浓度和作用时间而增强，推测可能与苯的造血微环境毒性有关。     

叶酸对同型半胱氨酸所致人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的：通过培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell，HUVEC)，研究不同浓度的同型半胱氨酸(Hey)对内皮细胞损伤的影响，并观察叶酸的干预是否能够削弱Hcy对HUVEC的细胞毒作用。方法：将培养的HUVEC细胞分成8组，将其与不同浓度的Hcy(100，200，500，1000，2000μmol／L)和叶酸(100μmol／L)共同培养20h，分别利用MTT、苏木精-伊红染色和流式细胞仪技术观察HUVEC细胞的生长及凋亡情况。结果：HUVEC与不同浓度的Hcy培养20h后，细胞活力A值呈现剂量依赖性的降低，超过500μmol／L的Hcy对HUVEC已经形成了显著的抑制和毒性效应，滞留于G1期的细胞比例增加，由于对照组的56．3％上升至60．0％(Hcy100μmol／L)，63．1％（Hcy200μmol／L)，64．4％(Hcy1000μmol／L)，73．9％(Hcy2000μmol／L)；100μmol／L的叶酸能够在一定程度上抑制Hcy诱导凋亡的作用。结论：高浓度的Hcy具有内皮细胞毒作用，可以抑制细胞的生长并促进其凋亡，而叶酸则具有保护性。     

神经生长因子对大鼠胚胎脊髓神经细胞的作用

目的：研究神经生长因子(neumn growth factor，NGF)对大鼠胚胎脊髓神经细胞的作用。方法：在培养孕18d大鼠胚胎脊髓神经细胞中加入NGF，通过培养细胞并计数存活的脊髓神经细胞集落数，检测超氧化物歧化酶(supemxide dismutase，SOD)的活力、丙二醛的含量，并观察NGF对脊髓神经细胞生长发育的影响。结果：NGF可促进脊髓神经细胞分化、增殖。当NGF为10．0～100．0μg／L时SOD活力显著性高于正常对照组(P&;lt;0．01)，NGF为1．0～100μg／L时丙二醛含量没有明显变化，能维持丙二醛含量的平衡，当NGF浓度为200μg／L时丙二醛含量明显增高为(1．33&;#177;0．05)μmol／g与对照组(0.98&;#177;0．01)μmol／g比较，差异有显著性意义(F=6．89，P&;lt;0．05)，不能维持丙二醛含量的平衡。培养14d后脊髓神经细胞体较大、突起较长，脊髓神经细胞的数量也明显增高。结论：NGF能促进脊髓神经细胞生长发育，增加脊髓神经细胞的胞体和突起长度，增强脊髓神经细胞内SOD活力，丙二醛含量降低。     

稀土化合物氯化镧对脂多糖诱导小鼠巨噬细胞分泌-一氧化氮的影响

目的探讨氯化镧（LaCl3）由对脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）刺激小鼠巨噬细胞（RAW264．7）分泌一氧化氮（nitric oxide，N01的影响。方法RAW 264．7细胞随机分成四组：空白对照组（培养基中不含LaCl3和LPS），氯化镧组（含LaCk2．5，5，10，20μmol／L培养24h）、氯化镧＋LPS组（分别以含LaCl3 2．5、5、10、20μmol／L的培养基培养24h后．更换含LPS 1mg／L的培养基继续培养24h）及LPS组（含LPS 1mg／L的培养基培养24h）。采用硝酸还原酶法测定各组细胞培养液上清一氧化氮（NO）的含量。结果LPS组培养上清NO浓度为52．82±12．60μmol／L与空白对照组（2．90±2．36μmol／L）和LaCl3组[（6．50±4．67μmol／L、9．52±4．47μmol／L、11．14±7．42μmol／L、6．74±2．00μmol／L]比较有显著性差异（P〈0．05）；LaCl3＋LPS组NO的浓度分别为26．00±5．83μmol/L（2．5μmol／L LaCl3＋LPS）、29．86±7．26μmol／L（5μmol／L LaCl3＋LPS）、34．62±6．24μmol／L （10μmol／L LaCl3＋LPS），与LPS组相比显著减少（P〈0．05），20μmol／L LaCl3＋LPS）组NO的产生为45．61±6．68μmol／L与LPS组比较无显著性差异。结论一定浓度的LaCl3可抑制LPS诱导小鼠巨噬细胞产生NO的水平。     

胆固醇对离体培养胰岛素细胞活性的损害作用

目的 明确游离胆固醇对胰岛紊细胞的作用。方法 体外培养MIN6小鼠胰岛紊细胞，待细胞生长融合后，加入不同浓度的游离胆固醇作用24h，或用同一浓度的游离胆固醇作用不同时间。采用MTT法检测细胞的存活情况。结果 25μmol／L胆固醇作用24h可明显降低MIN6细胞的活性；100μmol／L胆固醇作用12h即可明显降低MIN6细胞的活性，作用24h可导致MIN6细胞死亡。结论 游离胆固醇可剂量依赖性和时间依赖性地降低胰岛紊细胞的活性，提示血液中游离胆固醇浓度升高在胰岛8细胞功能损害中具有一定的作用。     

阿魏酸钠对淀粉样β蛋白致神经细胞损伤的保护作用

目的：通过检测阿魏酸钠对联合培养的神经细胞和巨噬细胞中神经细胞的乳酸脱氢酶漏出量和微管相关蛋白-2的影响，观察阿魏酸钠对淀粉样B蛋白激活巨噬细胞引起神经细胞损伤的保护作用。 方法：实验于2004-05／12在锦州医学院药理实验室和解剖实验室完成。选择8～10周龄的小鼠进行巨噬细胞培养，出生两三天的大乳鼠进行神经细胞培养。单独培养的神经细胞和巨噬细胞：将加入10μmol／L淀粉样β蛋白和未加入淀粉样β蛋白的巨噬细胞上清液分别移入单独培养的神经细胞中，通过Hoechst33258染色检测神经细胞的凋亡百分比。联合培养的神经细胞和巨噬细胞：联合培养24h后，加入10μmol／L的淀粉样β蛋白，阿魏酸钠组同时加入不同浓度（10μmol／L，100μmol／L，500μmol／L）阿魏酸钠共孵育。48h后．采用免疫组织化学方法和乳酸脱氢酶检测试剂盒检测微管相关蛋白-2表达水平和乳酸脱氢酶漏出量。 结果：将淀粉样β蛋白激活的巨噬细胞上清液移入到单独培养的神经细胞48h后，可使凋亡神经细胞的百分比明显增加，从正常11.3％增加到74．0％．（P〈0．01）。在巨噬细胞和神经细胞联合培养中，淀粉样β蛋白组与空白对照组相比，乳酸脱氢酶漏出量明显增加，由375nkat／L增加到2859nkat／L，微管相关蛋白-2表达阳性的神经元数目相应减少，与淀粉样B蛋白组相比，阿魏酸钠（10μmol／L，100μmol／L，500μmol／L，1mmol／L）能显著地降低乳酸脱氢酶漏出量，使微管相关蛋白-2表达阳性的神经细胞数目明显增加，呈剂量依赖性（P〈0．05）。 结论：①淀粉样β蛋白是通过激活巨噬细胞，使其释放毒性物质，从而引起神经细胞的损伤。②阿魏酸钠对淀粉样β蛋白引起的神经细胞损伤具有保护作用.     

重氮法与钒酸盐氧化法测定血清胆红素的初步比较分析

目的：探讨重氮法与钒酸盐氧化法测定血清胆红素的差别。方法：从精密度、线性范围及回收率三个方面对两种方法测定血清胆红素的结果进行比较。结果：重氮法测定的总胆红素和直接胆红素的批间和批内CV％为1．33与1．36和3．1与3．4，线性范围为260μmol／L与μmol／L，回收率为99．3％和99．9％；钒酸盐法分别为1．30与1．24和2．95与3．31，520μmol／L与260μmol／L，99．8％和99．8％。结论：重氮法在精密度和线性范围两项指标上不如钒酸盐法，在回收率上两者均较好。     

白黎芦醇与5-氟尿嘧啶联用对人胃癌细胞增殖的影响

目的：体外观察药用植物中提取的白黎芦醇与5-氟尿嘧啶联用对人胃癌SGC7901细胞增殖的干预。 方法：实验于2003-04／2004-05在重庆医科大学完成。①实验设空白对照组、白藜芦醇治疗组、5-氟尿嘧啶治疗组、药物联合作用组。白藜芦醇（购自美国Sigma公司），配制成11．36mmol／L的储备液，4℃保存备用。5-氟尿嘧啶（南通精华制药厂生产）。人胃癌细胞株SGC7901（重庆医科大学病理生理教研室提供）。②人胃癌癌细胞株SGC7901接种于含体积分数为0．1新生牛血清的RPMI-1640培养液中进行培养，取对数生长期的SGC7901细胞制成5&;#215;10^7L^-1的悬液，每孔200μL加入96孔培养板中。③白藜芦醇治疗组按5个不同浓度分别加在96孔板内，每孔加药量20此，使白黎芦醇的终浓度为28．4，56．8，113．6，227．2，454．4μmol／L。同理5-氟尿嘧啶治疗组的终浓度为48，96．1，1922，384．4，768．8μmol／L。药物联合作用组分别加入白藜芦醇、5-氟尿嘧啶各100p,L，两药合用比例为1：1，每种单药剂量浓缩1倍。空白对照组则加入等量相同的培养液，不含任何药物。每种剂量3个平行孔。④采用四甲基偶氮唑盐法观察不同浓度白黎芦醇、5-氟尿嘧啶单独或联合应用对人胃癌SGC7901细胞生长的抑制作用，并利用中效原理判定两药合用的效果。 结果：①药物抑制率测定结果：随着药物浓度的增加，白黎芦醇、5-氟尿嘧啶单用及联合作用72h时对人胃癌SGC7901细胞的抑制率均相应增加。②白黎芦醇与5-氟尿嘧啶单用、联合作用72h时的回归方程及对SGC7901细胞中效剂量的测定结果：白黎芦醇与5-氟尿嘧啶各自单用时对SGC7901细胞的中效剂量分别为107．08μmol／L和180．06μmol／L；联合用药时为193．74μmol／L，其中白黎芦醇为71．98μmol／L，5-氟尿嘧啶为121．76μmol／L；白黎芦醇单用是合用的1．49倍，5-氟尿嘧啶单用是合用的1．48倍。对于SGC7901细胞，抑制效应大于0．85时合用指数〈1，即两药合用时产生协同作用。 结论：在体外联合应用白黎芦醇与5-氟尿嘧啶，两种药物很小剂量就能达到各自单用但需很大剂量时才能产生的效果。两药联合应用抑制效应大于0．85时能够产生协同作用。     

活血化瘀药对大鼠脑缺血再灌注血管源性脑水肿的影响

目的：探讨预防性应用活血化瘀药对大鼠脑缺血—再灌注所致血管源性脑水肿的作用。方法：大鼠138只单纯随机分为：对照组；假手术组；低剂量短时干预组；高剂量短时干预组；低剂量长时干预组和高剂量长时干预组，采用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞模型。测定大鼠神经功能缺损程度，检测脑水含量、血清及脑匀浆一氧化氮含量及光镜、电镜的病理改变。结果：药物干预组鼠神经功能缺损程度较对照组轻(P&;lt;0．01)，药物干预组血清一氧化氮含量：假手术组(106．5&;#177;7．5)μmol／L，低剂量短时干预组(94．6&;#177;7．9)μmol／L，高剂量短时干预组(104．7&;#177;6．1)μmol／L，低剂量长时干预组(104．6&;#177;5．6)μmol／L，高剂量长时干预组(112．6&;#177;9．3)μmol／L较对照组(85．7&;#177;6．1)μmol／L高，差异有显著性意义(t=-7．673～-2．832．P&;lt;0．05)，脑匀浆一氧化氮含量：假手术组(46．9&;#177;7．8)μmol／L，低剂量短时干预组(85．9&;#177;5．2)μmol／L，高剂量短时干预组(86．7&;#177;5．3)μmol／L，低剂量长时干预组(81．6&;#177;3．9)μmol／L，高剂量长时干预组(65．5&;#177;7．2)μmol／L较对照组(99．8&;#177;2．6)μmol／L低(t=7．011～20．361，P&;lt;0．01)，病理损害较对照组轻。结论：活血化瘀药能减少缺血再灌注大鼠脑的一氧化氮产生，降低血管源性脑水肿的程度，减轻神经细胞损伤，具有抗缺血再灌注损伤作用。     

酚噻嗪类光敏剂YWW007用于病原体灭活的毒性评价研究

目的探讨酚噻嗪类光敏剂YWW007应用于血液病原体灭活的安全使用剂量。方法细胞毒性试验:使用YWW007终浓度为1、4、12、20、40μmol/L培养基培养小鼠成纤维细胞,用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)方法检测细胞存活率;遗传毒性评价:采用YWW007终浓度为1、2、4、6、8、12μmol/L的培养基培养小鼠淋巴瘤细胞,用微孔板法做tk基因突变试验,计算平板效率、相对存活率以及TFT抗性突变频率等指标。结果当YWW007浓度达到40μmol/L时,具有明显的细胞毒性;而YWW007浓度为12、4、2和1μmol/L时,细胞存活率70%,提示细胞毒性轻微;YWW007浓度≤4μmol/L时,在含有和不含有代谢活化系统(S9)条件下,其突变频率(MF)值均未达到阴性对照组MF值的2倍,未见剂量-效应关系。结论 YWW007浓度≤4μmol/L为用于病原体灭活的安全剂量。     

兔骨髓源性神经干细胞体外分化为神经元样细胞的功能特性研究

目的：检测由骨髓源性神经干细胞诱导分化而成的神经元样细胞，能否分泌γ—氨基酸(γ—aminobutyric acid，GABA)神经生物活性物质成分，从而初步推断是否具有神经元的生化特征。方法：无菌条件下抽取新西兰大白兔骨髓，梯度密度离心分离获取骨髓基质细胞(bone marrow stroma cells，BMSCs)，在神经干细胞培养基及脑源性神经营养因子(BDNF)等条件下，于体外诱导分化为神经干细胞及神经元样细胞，采用免疫细胞化学方法进行鉴定，并应用高效液相色谱法(HPLC)检测GABA生物活性物质的含量。结果：BMSCs培养12d可见细胞大而圆，免疫细胞化学检测巢蛋白抗原阳性；培养20d可见具有长突起的神经元样细胞形成，神经元核蛋白免疫细胞化学检查阳性，HPLC检测骨髓源性神经元样细胞含有高浓度GABA神经递质成分。方差分析显示：随着BMSCs培养天数的增加，其所含的GABA浓度也渐增加，由每1&;#215;10^7细胞中(3．43&;#177;0．25)μmol／L增至(14．69&;#177;3．51)μmol／L(F=23．69，P=0．0014)。结论：兔BMSCs在体外条件下可以增殖分化，前期表达Nestin，分化的细胞则可表达NeuN特异性抗体，并含有高浓度的类GABA神经递质成分。     

浙江湖州地区健康成人血清尿酸参考范围的制定

目的了解湖州地区健康成人的血清尿酸水平并制定尿酸参考范围。方法用BS-300全自动生化分析仪检测10802；健康成人血清尿酸浓度，分析其与年龄、性别等因素的关系。结果1080名健康成人尿酸分布频数，以50μmol／L为组距，列频数表并制作直方图观察男女两组频数分布特征，发现男、女性血清尿酸浓度基本呈正态分布。结论适合湖州地区尿酸参考范围为：20～49岁，男性207．3～477．3μmol／L；女性157．4～388．6μmol／L；50～85岁，男性211．9～466．3μmol／L，女性175．8-439．2μmol／L。