2007-2011年江苏省南京市细菌性痢疾病原学监测结果分析

目的 对江苏省南京市2007-2011年细菌性痢疾的血清群(型)分布、耐药谱、毒力基因携带情况及脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析,为江苏省南京市细菌性痢疾的防控提供依据。 方法 对从江苏省南京市2007-2011年各医院腹泻病患者中分离的75株志贺菌进行血清群(型)、耐药性和毒力基因检测,并进行PFGE分子分型。 结果 75株志贺菌包括宋内志贺菌54株(72.0%),福氏志贺菌21株(28.0%),除2010年福氏X型为优势血清型外,其余年份宋内志贺菌为优势血清群;75株菌普遍对氨苄西林、四环素和磺胺甲恶唑耐药,耐药率在61.1%~95.2%之间;三重及以上耐药菌株占所有测试菌株的88.0%;毒力基因ipaH、sen、set1、ial阳性率分别为100%、46.7%、24.0%、48.0%;福氏志贺菌优势毒力基因模式为Ⅰ型(66.7%),宋内志贺菌优势基因模式为Ⅶ型(61.1%)和Ⅳ型(25.9%);宋内志贺菌分为20个PFGE基因型,其中以S7、S8、S10三个带型为主,占宋内志贺菌的 53.7%;相似度>95%,可能来自于同一克隆系;福氏志贺菌分为17种带型,各带型较散在分布。 结论 江苏省南京市志贺菌流行菌群不断变迁,宋内志贺菌有取代福氏志贺菌成为流行菌群的趋势;多重耐药现象严重;福氏志贺菌优势毒力基因模式为Ⅰ型、宋内志贺菌为Ⅶ型和Ⅳ型;PFGE型别呈现多元化流行特点。     

福氏志贺菌Xv血清型聚合酶链反应鉴定方法的建立及应用

目的建立福氏志贺菌Xv血清型聚合酶链反应(PCR)鉴定方法。方法根据福氏志贺菌Xv血清型O抗结构,针对O抗合成基因wzx、7;8群抗原决定基因gtr X和MASF IV-1抗原决定基因opt,建立PCR扩增鉴定方法。并应用该方法对139株福氏志贺菌临床分离株进行血清型检测。结果建立一种福氏志贺菌Xv血清型PCR鉴定方法,该体系在一个反应中包括3对引物,Xv血清型PCR扩增全部为阳性,可将Xv血清型与目前已知的其他18种福氏志贺菌血清型完全区分。非福氏志贺菌菌属及腹泻相关菌属菌株检测结果发现无任何PCR扩增产物。对139株不同血清型福氏志贺菌临床分离株的鉴定结果显示,该方法可将Xv血清型鉴定,与血清凝集结果一致。结论本研究建立的福氏志贺菌Xv血清型PCR鉴定方法具有快速、特异的优点,可以用于检测和监测。     

中国福氏志贺菌前噬菌体分布与基因组进化研究

目的 前噬菌体是细菌基因组中重要可移动原件,在细菌毒力和宿主适应性方面发挥着重要作用。由噬菌体介导的福氏志贺菌血清型转化频繁发生,给志贺菌的监测、诊断和预防工作带来不便。为了探究我国福氏志贺菌基因组进化与其前噬菌体相关的血清型别转换之间的关系,利用生物信息学方法将前噬菌体在福氏志贺菌基因组中的分布与进化进行关联分析。方法 在中国17省（市、自治区）选取的294株福氏志贺菌具有丰富的血清型多态性。通过比较不同血清型福氏志贺菌基因组中原噬菌体及血清型转换噬菌体的覆盖度,统计分析其分布规律。结果 部分菌株可携带多种前噬菌体,同一种前噬菌体也可分布在不同血清型菌株中;部分菌株虽携带血清型转换噬菌体却并未发生血清型转换事件。不同血清型转换噬菌体在福氏志贺菌进化树中成簇出现,表明该部分菌株出现了血清型集中转换现象。结论 本研究有助于揭示前噬菌体的遗传多样性及与福氏志贺菌进化和血清型变异之间的关系,对预防和控制志贺菌的感染具有重要意义。     

中国福氏志贺菌优势序列型ST91获得SRL和Tn7多重耐药岛分析

目的分析中国福氏志贺菌优势序列型ST91(sequence type 91)中志贺菌耐药岛(Shigella resistance locus,SRL)和Tn7耐药岛的分布及变化情况。方法对包括14种血清型(1a[7株],1b[1株],1d[1株],2a[5株],2b[1株],3a[3株],3b[1株],4a[1株],4av[1株],4b[1株],X[9株],Xv[25株],Y[2株]和Yv[1株])和7种ST型(ST91[50株],ST109[1株],ST18[3株],ST142[1株],ST143[1株],ST103[2株],ST16[1株])的59株中国福氏志贺菌基因组中SRL、Tn7耐药岛的编码基因及核酸序列进行分析,并与参考菌株2002017和YSH600的SRL和Tn7岛进行比较。结果所有50株中国分离的福氏志贺菌ST91菌株,1株ST109和1株ST142菌株均携带SRL和Tn7岛。1株ST18菌株仅携带2个耐药岛的3个耐药基因。其他ST型菌株均未发现耐药岛。与参考菌株2002017相比,9株ST91菌株的SRL耐药岛发生了插入或缺失。其中,7株ST91菌株缺失了编码四环素耐药性的tet基因;1株ST91菌株缺失了编码β-内酰胺酶的oxa-1和编码氯霉素乙酰转移酶的cat基因;1株ST91的SRL岛上插入了1个编码广谱β-内酰胺酶的blaTEM-1基因。所有50株ST91、1株ST109和1株ST142菌株携带的Tn7岛的核酸序列和编码基因与参考菌株相比未发现差异。结论福氏志贺菌ST91型中国分离菌株均携带SRL和Tn7耐药岛。在SRL岛上发生了基因的插入和缺失。处于进化早期的ST18菌株,在获得耐药岛的过程中可能发挥了重要作用。     

2009-2014年浙江省余姚市志贺菌菌型分布及毒力基因分析

目的 了解近年来浙江省余姚市志贺菌菌型变化及毒力基因分布特征。方法 对2009-2014年监测到的82 株志贺菌进行血清分型,采用6对引物IpaH、ial、set1A、set1B、sen、virA分别对志贺菌中毒力相关基因进行检测。结果 2009-2014年共检出收集到志贺菌株82株,以宋内志贺菌(42.5%) 和福氏志贺菌(57.5%)为主。ipaH、ial基因的携带率为100%,set1A、set1B、sen、virA基因的携带率分别为79.3%、76.8%、96.3%和91.4%,set1基因在福氏志贺菌的携带率明显高于宋内志贺菌。结论 余姚市流行的志贺菌优势血清型每年都有变化,毒力相关基因不同菌型之间存在差异。     

福氏志贺菌O-抗原磷酸乙醇胺修饰特异抗血清的制备

目的 制备针对福氏志贺菌O-抗原磷酸乙醇胺（PEtN）修饰的抗血清。方法 用血清型Yv菌株036_Yv（O-抗原PEtN修饰）免疫兔子制备抗血清,用036_Yv 的宿主菌036（O-抗原无PEtN修饰）吸附后,制备针对O-抗原PEtN修饰的特异抗血清,并用135株福氏志贺菌检测血清的特异性。结果 制备的血清能够特异地与O-抗原存在PEtN修饰的福氏志贺菌发生凝集,效价为1:32;除了O-抗原携带PEtN修饰的福氏志贺菌血清型Xv,Yv和4av外,制备的血清不能与其他血清型发生交叉凝集,具有很好的特异性。结论 成功制备了针对福氏志贺菌O-抗原PEtN修饰的特异抗血清,可应用于痢疾检测和监测。     

氟喹诺酮耐药志贺菌中质粒介导qnr基因的检测

目的检测志贺菌对氟喹诺酮抗菌药物的耐药情况,探讨氟喹诺酮耐药与志贺菌携带质粒介导qnr基因的关系。方法用纸片扩散法对100株志贺菌（福氏志贺菌50株,宋内志贺菌50株）进行耐药性检测,聚合酶链反应（PCR）检测志贺菌质粒介导qnr基因并进行DNA测序,分析qnr基因的存在与药敏结果的关系。结果 100株志贺菌中有9株检出qnr基因,检出率为9%（9/100）,福氏志贺菌为4%（2/50）,宋内志贺菌为14%（7/50）;qnr基因阳性菌株对氧氟沙星的耐药率（11.1%）高于阴性菌株（5.5%）,但差异无统计学意义。qnr基因阳性菌株对5种氟喹诺酮药物的抑菌圈中位数比较均缩小。结论宋内志贺菌质粒介导氟喹诺酮耐药qnr基因的携带率明显高于福氏志贺菌;志贺菌若携带质粒介导qnr基因则会导致对氟喹诺酮药物的敏感性下降。     

多菌型副溶血性弧菌共感染引起集中事件调查分析

目的 分析一起副溶血性弧菌（VP）集中感染事件的菌株特征,明确该起感染事件的性质。方法 在2017年9月,广西某乡镇发生一起疑似食源性疾病暴发,现场采集13例患者肛拭子,分离到10株VP,利用O和K诊断血清对分离株进行玻片凝集实验分型,采用TaqMan水解探针荧光PCR检测分离株毒力相关tlh、tdh、trh和ORF8基因,并分别用Not Ⅰ和Sfi Ⅰ两种酶进行脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型,导入Bionumerics 6.6软件进行聚类分析。结果 10株VP有5种血清型,6株为O3∶K6,其余4株血清型分别为O4∶K8、O1∶KUT、O2∶KUT和O10∶K19。所有菌株tlh基因均呈阳性,而trh基因呈阴性;6株O3∶K6血清型菌株和1株O4∶K8血清型菌株tdh基因均呈阳性;其余3株tdh基因呈阴性。经Bionumerics 6.6软件聚类分析,Not Ⅰ和Sfi Ⅰ酶切PFGE有8种型别,同为O3∶K6血清型的6株菌可分为4种型别。综合以上3个指标进行分析,该事件分离的10株菌中仅2株菌完全相同。结论 该起集中暴发事件由多种血清、不同PFGE型别的致病和非致病性VP多菌型共感染引起。     

非O157产志贺毒素大肠埃希菌分离株血清型鉴定及主要毒力基因分析

目的 了解中国不同来源非O157产志贺毒素大肠埃希菌分离株血清型及主要毒力基因的流行情况。方法 采用O抗原基因簇特异性聚合酶链反应（PCR）结合全套O抗血清凝聚法确定O血清群,以PCR扩增和测序fliC基因确定H型;采用PCR方法对所有菌株进行stx1、stx2、eae及ehxA基因检测。结果 434株非O157 STEC分离株中,除不可分型菌株外,共检测出82种O血清群和28种H型,其中O20:H30、O2:H32和O2:H45为优势血清型。stx1、stx2和stx1+stx2 3种志贺毒素基因型的检出率分别为25.35%、64.98%和9.68%,而eae和ehxA基因的阳性率分别为3.92%和32.95%。仅15株菌同时携带3种毒力基因,且主要为血清型O26:H11的腹泻患者分离株。结论 我国非O157 STEC分离株血清型复杂多样,同时检测eae和ehxA基因对于发现高致病潜力的菌株具有重要参考价值。     

不同来源STECO157:H7生物学特性研究

目的 探讨浙江省产志贺毒素大肠埃希菌O157:H7菌株PFGE分型及携带毒力基因以及耐药情况.方法 菌株生化、血清鉴定按API 20E鉴定系统;大肠杆菌O157:H7诊断血清凝集试验;采用聚合酶链反应(PCR)法检测O、H抗原及毒力基因SLT1、SLT2、Hly、eaeA;STEC O157:H7分型用脉冲场凝胶电泳(pulse field gel electrophoresis,PFGE)方法进行;14种抗生素进行药敏试验采用K-B法.结果 5株可疑菌株经生化和血清鉴定符合O157:H7特性;毒力基因检测所有分离株SLT2、Hly、eaeA三种毒力基因均阳性而SLT1均阴性;脉冲场凝胶电泳分型结果显示,有2株菌PFGE电泳条带完全相同,其余3株菌电泳条带不同,5株菌共分为4个带型;经耐药性分析,菌株对头孢噻吩、头孢噻肟、庆大霉素、环丙沙星100%敏感;对复方新诺明、氨苄西林100%耐药.结论 STEC O157:H7菌株在浙江省一些地区存在,并且携带SLT2毒力基因,PFGE型别较多,同时也有人间感染病例的出现,提示应加强O157:H7监测力度,防止该菌在人间的感染和流行.     

浙江省宁波地区腹泻患者中副溶血性弧菌检测与分析

目的 了解腹泻患者中副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)携带、消长情况,建立分子溯源方法,发现流行优势型,分析疾病诱发因素,为控制副溶血性弧菌引起的食物中毒提供依据。 方法 腹泻患者中副溶血性弧菌分离采用筛检法;采用API生化鉴定系统进行菌株鉴定;用血清凝集试验对菌株进行血清分群;药敏试验采用K-B法;利用脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)进行分子分型;聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测细菌毒力基因。 结果 从6216份腹泻患者标本中检出副溶血性弧菌901株,占检出致病菌的63.45%。副溶血性弧菌生物学性状典型,对氨苄西林等青霉素类抗生素的耐药率高,但对其他大多数抗生素敏感。480株副溶血性弧菌分成6个血清群,O∶3血清群占72.71%,为流行优势群。根据PFGE图谱带型变化可分为19个不同的型别,其中食物中毒来源的菌株PFGE带型集中。tdh毒力基因阳性的副溶血性弧菌396株,阳性率为70.71%;trh毒力基因阳性的副溶血性弧菌79株,阳性率为14.11%;tdh、trh毒力基因均阳性的副溶血性弧菌18株,阳性率为3.21%;tdh阳性的副溶血性弧菌中有365株神奈川试验阳性,占73.14%。 结论 宁波地区腹泻患者由副溶血性弧菌引起的比例较高,O3血清群为优势血清群。PFGE分型方法准确性、特异性高、重复性好、结果容易判读,分型效果更为明显,食物中毒来源的菌株带型集中,可用于确定菌株间的聚集性关系,提示传染源和传播途径,明确食物中毒是否为同一起暴发事件。患者中分离到的副溶血性弧菌大多数为带毒株,具有致病能力,与海产品和环境株不同,可用-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类等抗生素作为临床治疗用药。     

Genetic analysis of serotype 23F Streptococcus pneumoniae isolates from several countries by penicillin-binding protein gene fingerprinting and pulsed-field gel electrophoresis

We characterized 21 strains of serotype 23F Streptococcus pneumoniae isolated in various countries with various levels of penicillin susceptibility by penicillin-binding protein (PBP) gene fingerprinting and pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). Pneumococci isolated in Israel, Hungary, Bulgaria, Slovakia, Rumania, France, the United States, Spain and Japan were included. These strains were classified into 12 and 18 groups by PBP gene fingerprinting and PFGE, respectively. Some of the pneumococci isolated in Spain, the United States and France appeared to be genetically related by PFGE, showed the same PBP gene pattern and had similar antimicrobial susceptibility patterns. One penicillin-susceptible Bulgarian strain, with a similar PFGE pattern but a different fingerprinting pattern, may be an ancestral recipient strain that became transformed into the resistant variants. Rumanian and Israeli strains were also genetically related by PFGE. These results indicate the existence of widely spread but related pneumococci in the world. PBP 2X gene profiles of pneumococci with MICs of 0.25 microg/ml were different from each other and from penicillin-susceptible pneumococci (PSP). PBP 2B gene profiles of these resistant strains were identical. PBP 2B gene profiles of pneumococci (penicillin MICs >/=0.5 microg/ml) were different from PSP. PBP gene profiles may not only be useful for genetic analysis but also for presumed penicillin susceptibility.     

应用脉冲场凝胶电泳技术对浙江省福氏4c型痢疾志贺菌的分型研究

目的 通过应用脉冲场凝胶电泳技术对浙江省痢疾志贺菌福氏4c(F4c)型菌株进行分子流行病学研究,耐药谱分析,为了解本地区菌型的变化提供资料.方法 60株F4c型志贺菌均按GB16002-1995标准鉴定分型并采用kirby-Bauer法检测其对13种抗生素的敏感性.参照美国疾病预防控制中心PulseNet USA的统一方法进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型并做同源性分析.结果 60株F4c型菌株都存在多重耐药,其中红霉素、利福平的耐药率最高,达100.0%,其次是奈定酸、氨苄西林、多西环素,耐药率均在96.2%以上;丁胺卡那、庆大霉素最敏感,其敏感率均在86.5%以上.脉冲场凝胶电泳分型60株试验菌株共分为24个型,1型36株占60.0%,且所有的暴发型菌株都为1型,2型2株占3.3%,其余22个型各为1株,各占1.7%.结论 F4c型志贺菌是2004年在浙江首次分离到,PFGE分型1型菌株占60.0%,有明显的优势,并且容易引起暴发,其余各型均为少见菌型.此次检测发现其多重耐药现象严重,这可能与浙江省F4c型菌痢病人迅速增多和高度散发有关,应引起临床和疾病控制部门的高度重视.     

105株志贺菌流行菌株的血清分型及耐药性分析

目的　调查志贺菌在上海地区流行的主要血清型和耐药性。方法　收集临床分离的志贺菌 1 0 5株进行生化鉴定、血清学分型和抗生素敏感性试验。结果　 1 0 5株志贺菌中 5 1株为宋氏志贺菌 ,占 4 8.6 % ;5 4株为福氏志贺菌 ,占 5 1 .4 % (包括 5株福氏变异株 ,占总数的 4 .7% )。宋氏志贺菌对抗菌药物的敏感率依次为氟喹诺酮类 1 0 0 %、头孢噻肟 94 .1 %。而福氏志贺菌对抗菌药物的敏感率依次为头孢噻肟 98.1 %、氟喹诺酮类70 %。结论　上海地区志贺菌感染以福氏志贺菌和宋氏志贺菌为主 ,福氏志贺菌中以福氏 2型为主 ,占 6 6 .7% ,其次为福氏 1型 ,占 2 0 .4 %。福氏志贺菌对各种抗生素耐药性有增高趋势 ,必须引起临床重视     

一起由两种血清型副溶血性弧菌引起的食物中毒调查

2009年8月,杭州市江干区报告了一起跨省旅游团的食物中毒,32名游客有10人发病,罹患率为31.2%。采集的10份病例肛拭,均检出O4:K8血清型副溶血性弧菌,其中5份肛拭同时检出O3:K6血清型副溶血性弧菌。两种血清型的副溶血性弧菌tdh毒力基因均为阳性。脉冲场凝胶电泳分型显示,同一血清型的菌株为高度相似克隆,同一样本不同血清型的菌株为不同克隆。     

耐喹诺酮铜绿假单胞菌药物作用靶位改变的研究

目的：探讨铜绿假单胞菌对喹诺酮类药物的耐药机制。方法30株对环丙沙星耐药的铜绿假单胞菌,采用 PCR方法扩增DNA解旋酶和拓扑异构酶Ⅳ的基因 gyrA,gyrB,parC和 parE,再测序查找是否存在位点突变,同时用脉冲场电泳（pulsed-field gel electrophoresis,PFGE）对菌株进行同源性分析。结果30株菌中,28株菌出现 gyrA基因扩增片段的137位点均有C→T突变,导致T83I改变;17株菌gyrB基因扩增片段的351位出现G→C突变,导致G466A改变;21株菌的 parC基因扩增片段的277位点有 C→U 突变导致 S87L 改变;2株菌 parE 基因在不同位点出现 C→U 突变,导致A425V和 A473V改变。30株菌可分为6个克隆,其中 A克隆4株,仅有 gyrA突变;B克隆7株,有 gyrA和 parC两种基因发生突变;C克隆3株,有gyrA和gyrB两种基因发生突变;D克隆14株,同时有 gyrA,gyrB和 parC三种基因发生突变;其他克隆2株,仅在 parE位点发生突变。结论该组菌株的靶位突变型与流行克隆型密切相关,同一流行型的菌株药物作用靶位的改变相同,并与环丙沙星的 MICs值的高低呈正比,突变基因数越多,MICs 值越高。4种基因中 gyrA基因突变频率最高,且该突变比其他靶位的突变对药物与靶位结合的影响更大,是需要关注的重点。     

细菌性痢疾病原菌血清分型及耐药性分析

目的了解本地细菌性痢疾（简称菌痢）流行的病原菌主要血清型及耐药性，为有效预防和控制菌痢提供依据。方法对近2年来肠道门诊和住院部腹泻患者的粪便标本共1617例进行细菌分离培养、生化鉴定、血清学分型及药敏试验。结果从1617例腹泻患者的粪便标本中共分离出志贺菌165株，分布4个菌群，其中B群（福氏志贺菌）88株，D群（宋内志贺菌）40株，C群（鲍氏志贺菌）21株，A群（痢疾志贺菌）16株，分型诊断检出13个血清型及亚型，以B群2a为主；志贺菌总体耐药率对萘啶酸耐药率最高，达90．0％以上，其次对氨苄西林、利福平、四环索、复方新诺明耐药率在70．0％～87．5％之间，对诺氟沙星耐药率在20．5％～31．3％之间；对头孢噻肟、庆大霉素、环丙沙星耐药率较低，在2．5％～6．8％之间。结论本地区菌痢流行的病原菌主要血清分型为B群2a，其次是D群;对多种抗生素耐药性有增高的趋势，应加强耐药性监测与防治。     

2007-2011年浙江省余姚市感染性腹泻志贺菌监测结果分析

目的 了解浙江省余姚市感染性腹泻患者中志贺菌感染状况。 方法 采集感染性腹泻患者的粪便或肛拭标本,进行增菌、分离、生化鉴定、血清分型、药敏试验和PCR毒力基因检测。 结果 2007-2011年共检验标本1360份,检出志贺菌36株,检出率为2.65%,其中福氏2a志贺菌4株,占11.11%;福氏2b志贺菌3株,占8.33%;福氏1d志贺菌11株,占30.56%;福氏Xv志贺菌12株,占33.33%;宋内志贺菌6株,占16.67%;检出的志贺菌对多种抗生素耐药。 结论 2007-2011年引起余姚市细菌性痢疾主要病原菌是福氏志贺菌,其次为宋内志贺菌;福氏志贺菌有多种血清型,其中Xv血清型分离率最高;药敏试验以氨基糖苷类、喹诺酮类及部分头孢类抗生素敏感性较好;毒力基因呈现多样性。