上海市浦东新区副溶血弧菌病原学与分子流行病学特征分析

目的 了解上海市浦东新区副溶血弧菌病原学与分子流行病学特征。 方法 运用玻片凝集法对505株副溶血弧菌菌株进行血清学分型,运用K-B纸片法对菌株进行12种抗生素药敏试验,同时对菌株基因组DNA经限制性内切酶NotⅠ酶切后进行脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)分子分型,利用BioNumerics Version 6.64 分析软件对图谱进行聚类分析,初步建立PFGE分子分型数据库。 结果 505株菌株中有117株血清型未能分型,O3:K6为患者分离株中的优势血清型,其中69.14%(56/81)的食物中毒分离株和61.87%(185/299)的散发病例分离株血清型为O3:K6型;监测食品分离株血清型分布呈现多样性,无优势菌株。99.41%(502/505)菌株对氨苄西林耐药。505株菌株共获得221个不同的PFGE带型,有26株PFGE未能分型。监测食品分离株的PFGE呈现遗传多样性,无优势带型,并且与散发及食物中毒患者分离株的PFGE带型不同。食物中毒与散发病例分离株的优势带型相同。耐2种或以上抗生素的菌株与其他菌株的PFGE型不相同,相同PFGE带型内的菌株血清型相同,不同时间、不同腹泻监测点之间存在完全相同PFGE条带。 结论 浦东新区未出现多重耐药菌株,存在多起疑似聚集性病例事件,但与监测食品分离株的遗传谱系关系较远。     

一种肺炎链球菌常见血清型多重PCR分型方案的评估

目的评估一种肺炎链球菌常见血清型多重聚合酶链反应(PCR)分型方案的分型能力。方法以传统荚膜肿胀试验为参考,采用多重PCR分型方案对50株肺炎链球菌进行血清分型。结果 50株肺炎链球菌经传统荚膜肿胀试验分为19F型9株、19A型9株、23F型9株、6A/B型9株、14型9株和15B/C型5株;而多重PCR分型方案结果为19F型8株、19A型10株、23F型9株、6A/B型9株、14型10株和15B/C型4株,2种方法符合率为96%,Kappa值为0.952。结论多重PCR分型技术与常规方法一致性好,具有简便、快速、成本相对较低等优点,能用于监测临床肺炎链球菌流行血清型。     

肺炎链球菌血清学、PFGE型别与流行和耐药的关联性分析

目的通过研究肺炎链球菌血清学、耐药脉冲均凝胶电泳(PFGE)关联性,完善和补充区域性肺炎链球菌传播及流行的鉴定标准和预警体系。方法随访调查2012-2015年四川省泸州市人民医院肺炎链球菌流行性,并通过免疫学、血清生化和分子生物学手段鉴定和分析肺炎链球菌的感染特性,进一步分析细菌种类及耐药的相关性。结果 (1)流行发现,儿童(≤14岁)患者的比例(68.3%)明显高于青少年及成人(14岁)患者(31.7%),无性别差异;7种血清分型结果中,19型占比最高(66.67%),13型和15型最少。(2)血清型与耐药相关分析,发现血清3型的耐药率最高。(3)PFGE带型与耐药相关分析,17种PFGE带型,总耐药率达到75.83%,其中5种药物耐药及SPS16.CN011耐药比率最高。结论该院2012-2015年流行的肺炎链球菌主要发生于儿童(≤14岁)患者,PFGE型对肺炎链球菌的鉴别和诊断优于血清学方法;但对其耐药性分析发现,血清型与耐药性关联作用大于PFGE分型,这可能与细菌本身的致病物质荚膜抗原密切相关。     

78株儿童侵袭性肺炎链球菌分子流行病学调查

摘要 目的 了解南京地区小儿侵袭性肺炎链球菌的分子特征和对常用抗菌药物的耐药率。 方法 收集2009年1月-2016年12月来自儿童侵袭性肺炎链球菌病患者血液、脑脊液和胸腔积液的78株肺炎链球菌。用K-B纸片法和E-试验法测定其耐药率;PCR和肺炎链球菌荚膜型血清凝集法确定血清型;脉冲场凝胶电泳法分析各血清型菌株的基因组特征;多位点序列分型技术确定序列分型;PCR和凝胶电泳法检测主要的毒力基因。 结果 肺炎链球菌主要血清型及构成比为19F(20.51%)、19A(17.95%)、14(15.38%)、6B(14.11%)和23F(11.54%);对青霉素不敏感的IPD菌株为69.23%;共检出16种序列分型,毒力基因lytA、pavA、ply、psaA、spxB在各菌株中均为阳性。 结论 南京地区侵袭性肺炎链球菌血清型主要为19F、19A、14、6B和23F。儿童肺炎链球菌青霉素耐药性有上升趋势。序列分型表现具有多样性,流行序列分型、特定的血清型与抗生素耐药明显相关。     

肺炎链球菌呼吸道感染分离株的耐药性

目的：研究肺炎链球菌呼吸道感染分离株的耐药性及其传播情况。方法：肺炎链球菌分离株进行药物敏感试验和血清学分型,并结合BOX PCR、脉冲场电泳(pulse—field gel electrophoresis,PFGE)和青霉素结合蛋白基因(penicilin binding proteingene,pbp)指纹等分子生物学方法分析菌株间亲缘关系。结果：呼吸道感染分离株128株中有青霉素低度耐药株(penicillin intermediated Streptococcus pneurnoniae,PISP)10株,未发现青霉素高度耐药株(penicillin resistant Streptococcus pneumoniae,PRSP)。lll株存活菌株分属25种血清型,主要为23F、3、19F、14、9V、6A、6B等。9株存活PISP中有6种PFGE谱型,2株PFGE谱型相同菌株的耐药谱和血清型相仿;2株不同PFGE谱型菌株pbp指纹相似,对青霉素和头孢曲松敏感性相似;上述呼吸道感染分离PISP中未发现与世界主要流行耐药克隆代表株DNA指纹或pbp基因相似菌株。结论：上述肺炎链球菌呼吸道感染分离株青霉素耐药率尚低,存在青霉素耐药克隆和基因的传播,其中尚未发现世界主要流行耐药克隆。     

儿童鼻咽部肺炎链球菌携带株研究

目的了解武汉地区健康儿童肺炎链球菌带菌状况、耐药性、耐药基因及血清型流行情况。方法收集武汉地区2所幼儿园469名健康儿童的鼻咽拭子标本,分离鉴定肺炎链球菌,琼脂稀释法测定其对12种抗菌药物的MIC;PCR检测红霉素耐药基因ermB和mefA;“荚膜肿胀”试验进行血清学分型。结果469份鼻咽拭子标本共分离出116株肺炎链球菌,分离率为24.7%。存活的114株中,肺炎链球菌对青霉素的敏感率为51.8%(59/114),对红霉素的敏感率为13.2%(15/114)。99株红霉素耐药肺炎链球菌中,ermB基因总检出率为98.0%(97/99),其中30株(31.6%)同时具有ermB和mefA基因,2株红霉素低耐株仅检出mefA基因。血清分型涉及16个血清型、群,主要分布在19、23、6和14血清群。结论武汉地区肺炎链球菌耐药性高,多为多重耐药菌株,红霉素耐药基因主要为ermB,19、23、6血清群多重耐药株分布广泛。     

上海地区大环内酯类抗生素耐药肺炎链球菌的遗传学分析

目的 了解上海地区肺炎链球菌中大环内酯类抗生素高耐药菌株的同源性.方法 采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法对47株临床分离大环内酯类抗生素耐药肺炎链球菌(MRSP)进行同源性分析,并运用多位点序列分型(MIST)对其中6株多重耐药MRSP进行分子遗传学分析,结合血清分型推测其与国际流行克隆株的关系.结果 上海地区ermB和mefE基因阳性大环内酯类抗生素高耐肺炎链球菌中存在流行克隆A型(45%)、B型(17%).PFGE图谱A型的6株多重耐药MRSP菌株都属于亚洲流行克隆CC236(Taiwan19F-14 clone).上海地区发现一个新的MIST型别ST2116(15-16-19-15-6-20-125),推测其由CC236经基因水平交换进化而来.结论上海地区大环内酯类高耐肺炎链球菌的快速增加部分是由于耐药克隆株的播散所致.     

2016－2019年北京市海淀区沙门菌血清分布、分子分型及耐药性分析

  目的  分析北京市海淀区沙门菌血清分布、脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型和耐药情况,并找出其相关性,从而掌握海淀区沙门菌的流行特征和耐药现状。  方法  对2016 — 2019年北京市海淀区检出的76株沙门菌进行血清分型、PFGE分型和药敏试验。  结果  肠炎沙门菌菌株占比最高,为59.2%（45/76）;76株沙门菌经PFGE聚类分析得到35种带型,各带型之间相似度为48.7%～100.0%,其中,51株沙门菌聚集形成4个簇（带型相似度≥85%）;76株沙门菌药物敏感率最高的为亚胺培南100.0%（76/76）,中介率最高的为左氧氟沙星80.3%（61/76）,耐药率最高的为萘啶酸68.4%（52/76）;总体多重耐药率为52.6%（40/76）,呈现出27种多重耐药谱。  结论  2016 — 2019年北京市海淀区沙门菌血清型和PFGE带型一致性很高,同一血清型菌株PFGE带型相同或相似度很高。 相同血清型沙门菌,PFGE带型相同或成簇的菌株间耐药谱有很强的关联性。     

不同血清型肺炎链球菌对非β内酰胺类抗生素的耐药性

目的了解不同血清型的肺炎链球菌对非β内酰胺类抗菌药物的耐药特点。方法以2000—2002年于北京、上海和广州3所儿童医院门诊分离的625株肺炎链球菌为研究对象,应用简易棋盘式肺炎链球菌分型系统分析血清型;采用E试验(青霉素和红霉素)和K-B纸片扩散法(复方磺胺甲噁唑、四环素和氯霉素)检测菌株对抗菌药的敏感性。结果常见的血清型/群为19群、23群、6群和14型。常见血清型菌株对红霉素、四环素、复方磺胺甲噁唑不敏感率均明显高于其他少见血清型和不能分型组。青霉素不敏感菌(PNSP)对红霉素和复方磺胺甲噁唑的不敏感率明显高于青霉素敏感菌(PSSP);不能分型的PNSP对红霉素和复方磺胺甲噁唑的不敏感率也明显高于PSSP;19群的PNSP红霉素和四环素不敏感率明显高于PSSP,氯霉素耐药率明显低于PSSP;23、6、14和其他少见血清型/群菌株PNSP和PSSP之间,各抗菌药物不敏感率差异并无统计学意义。结论常见的19、23、6和14型/群肺炎链球菌对红霉素、复方磺胺甲噁唑和四环素耐药率高于其他少见血清型和不能分型菌株,PNSP与PSSP对部分非β内酰胺类抗生素不敏感率的差异可能与血清型分布有关。     

与肺炎链球菌血清型一致的PCR分型法的初步建立

目的建立与肺炎链球菌血清型一致的PCR分型方法。方法根据不同肺炎链球菌血清型特异的保守基因cps设计PCR引物,对肺炎链球菌血清型标准菌株DNA进行PCR扩增,分析PCR分型与血清型分型的一致性。结果 19个血清型的肺炎球菌标准菌株PCR分型结果显示,除10A血清型外,其余18个血清型均扩增出相应的血清型目标条带和肺炎链球菌cps基因条带。结论初步建立了与肺炎链球菌血清型一致的基因分型方法,有望对临床分离菌株进行快速检测并准确分型。     

Macrolide resistance and erythromycin resistance determinants among Belgian Streptococcus pyogenes and Streptococcus pneumoniae isolates

Resistance of streptococci to macrolide antibiotics is caused by target-site modification or drug efflux. The phenotypic expression of target-site modification can be inducible or constitutive. The prevalence of the three phenotypes among Belgian erythromycin-resistant Group A streptococci (GAS) and Streptococcus pneumoniae isolates was surveyed, their MICs for seven antibiotics were determined and the clonality of the isolates was explored. Of the 2014 GAS isolates tested 131(6.5%) were erythromycin resistant (MIC > 1 mg/L): 110 (84.0%) showed the M-resistance phenotype whereas the remaining 21 strains (16.0%) were constitutively resistant. No inducibly resistant strains were detected. Of 100 S. pneumoniae isolates, 33 were erythromycin resistant (MIC > 1 mg/L). In contrast to the GAS isolates, only 9.1% of the 33 erythromycin-resistant S. pneumoniae isolates showed the M-resistance phenotype. The presence of mefA/E and ermB genes in the M-resistant and constitutively and inducibly resistant strains, respectively, was confirmed by PCR analysis. Genomic analysis based on pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) using the restriction enzyme SfiI, revealed 54 different PFGE patterns among the 131 erythromycin-resistant GAS isolates, of which an M6 clone represented 16.0% of the strains; all other clones, exhibiting different M-types, represented <7% of the strains. The S. pneumoniae isolates also appeared to be polyclonally based, as determined by arbitrarily primed PCR. The macrolides miocamycin and rovamycin, the lincosamide clindamycin and the ketolide HMR 3647 showed excellent activity against the M-resistant GAS and S. pneumoniae strains.     

大连地区儿童肺炎链球菌耐药及血清分型研究

目的研究大连地区住院儿童感染肺炎链球菌（SP）的耐药性及其血清分型。方法 SP菌株均从5岁以下儿童患者鼻咽抽吸物中分离。血清分型通过多重PCR方法鉴定,药敏试验通过E-test方法来判断,而耐药基因ermB及mefA/E则由PCR方法来检测。结果从2010年7月到2013年6月,共分离得到131例SP。药敏结果显示所有的131例菌株对红霉素以及克林霉素全部耐药,大约有39.8%的菌株对青霉素G不敏感,而所有的菌株则均对左氧氟沙星和万古霉素敏感。此外,有129例（98.5%）属于多种耐药菌株。血清分型结果显示本地区SP血清型以19F（28.2%）、19A（19.1%）、6B（17.6%）及23F（14.5%）为主。且在这些血清型中的SP中,青霉素不敏感肺炎链球菌（PNSP）对阿莫西林、头孢曲松及头孢噻肟的不敏感性要显著高于青霉素敏感肺炎链球菌（PSSP）（P〈0.05）。7价疫苗（PCV7）和13价疫苗（PCV13）覆盖的血清型分别占68.7%和87.8%。此外,49株（37.4%）单独携带ermB基因,而82株（62.6%）同时携带ermB和mefA/E两种耐药基因。结论大多数分离的SP对青霉素G仍然相对敏感,所有菌株对左氧氟沙星和万古霉素敏感。本地区SP血清型以19F、19A、6B及23F为主。鉴于19A血清型的高流行率,引入PCV13更能有效地预防儿童肺炎链球菌的感染和控制耐药菌株传播。     

肺炎链球菌多重巢式荧光PCR分型方法的建立和应用

目的建立一种敏感且节省标本的多重巢式荧光PCR方法，用于临床标本中肺炎链球菌的分型。方法以检测肺炎链球菌种属（lytA基因）和20组常见血清型的引物和探针为基础，分别采用92株不同血清型的肺炎链球菌菌株和系列稀释的参考DNA模板，建立多重巢式荧光PCR方法。 评价该方法的特异性和敏感性，同时与荧光PCR方法进行比较。 将该方法用于14份肺炎链球菌培养阳性和30份肺炎链球菌培养阴性的临床标本的检测，评价实际应用效果。结果多重巢式荧光PCR与荧光PCR方法能准确鉴定/区分大部分菌株（90/92）的血清型。 前者的检测灵敏度为1～100 fg/μl，9种血清型的灵敏度高于荧光PCR方法（10～100 fg/μl）。 44份临床标本中，多重巢式荧光PCR与荧光PCR方法分别检测出34和31份阳性（P＝0.778），2种方法的DNA模板使用量分别为15 μl和66 μl。结论多重巢式荧光PCR比荧光PCR方法节省标本且更加灵敏。     

2007年重庆市人群沙门菌监测分析

目的对重庆市人群沙门菌感染进行监测并对监测分离的菌株进行耐药性和脉冲场凝胶电泳（PFGE）分子分型研究。方法明确监测病例定义,制定、实施监测方案,实验室分离、鉴定监测的沙门菌,利用K-B法对分离菌株进行药敏检测,并采用PFGE进行分子分型。结果2007年监测了835例病例,病例分布在9个区(县),其中监测沙门菌暴发疫情10起,病例175例。实验室共分离鉴定了79株12种沙门菌（11种血清型和1组B群）,全部菌株对至少一种抗菌素耐药, 9种（75%）对3种以上的抗菌素耐药,2种（16.67%）对6种抗菌素耐药,尤其是里定沙门菌、婴儿沙门菌及汤卜逊沙门菌耐药严重。沙门菌PFGE分型被分成9种14种亚型。结论重庆市2007年人群沙门菌分离株没有明显的优势流行株,同一事件中的沙门菌PFGE分型相同,分离株耐药情况严重,分离菌株的耐药谱和PFGE型也没有明显的联系。     

2015年北京市昌平区致泻性大肠埃希菌耐药性及脉冲场凝胶电泳分型研究

目的 了解2015年北京市昌平区致泻性大肠埃希菌耐药状况并对其进行脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型研究。方法 药敏实验按照美国临床实验室标准化协会（CLSI）推荐的K-B纸片法进行24种抗生素的敏感性分析;PFGE实验参照PulseNet PFGE实验方法。结果 药敏结果显示,致泻性大肠埃希菌对头孢比肟、亚胺培南完全敏感;对阿米卡星、妥布霉素、米诺环素耐药率极高,分别为94.6%、97.3%和97.3%。耐药谱分析显示,致泻性大肠埃希菌同时耐受抗生素种类为2～7种。PFGE分析发现,33株致泻性大肠埃希菌具有31种PFGE带型,菌株之间的相似系数为68.0%～100.0%,其中2株ETEC和2株EPEC有一致的PFGE带型。结论 昌平区引起腹泻的致泻性大肠埃希菌耐受抗生素的种类多、多重耐药严重且PFGE带型呈高度多态性。     

一起食源性疾病暴发中的副溶血性弧菌病原学分析

目的 分析2016年夏季宁波市一起食源性疾病暴发中副溶血性弧菌的病原学特征。方法 采用血清凝集方法对所有分离菌株进行血清学分型。采用PulseNet China网络实验室的标准方法,对所有分离菌株进行脉冲场凝胶电泳（pulsed-field gel electrophoresis,PFGE）分型,采用BioNumerics软件对菌株PFGE指纹图谱进行聚类分析;实时荧光PCR方法用于检测菌株的tdh、trh和tlh基因,MIC法检测菌株对10种抗生素的耐药性。结果 从腹泻患者粪便标本共分离到8株副溶血性弧菌。血清学分型鉴定为2株O3:K6型,6株O4:KUT型。所有菌株经SfiⅠ、NotⅠ酶切后分别分为3个和4个PFGE带型。VPAN11.ZJNB002/VPAS12.ZJNB002带型为最优势型,共4株细菌。副溶血性弧菌对10种选定的抗生素均敏感。结论 这是一起由混合血清型,并对应多种PFGE带型的多克隆副溶血性弧菌引起的食源性疾病暴发事件,应提高对多克隆副溶血性弧菌引起的混合感染性食物中毒的认识水平,防止漏检。未发现菌株对10种选定的抗生素产生耐药。     

Serotype distribution and antimicrobial resistance of Streptococcus pneumoniae isolates from pediatric patients in Singapore

One hundred eighty Streptococcus pneumoniae strains isolated from children at a pediatric hospital in Singapore from 1997 to 1999 were serotyped and their antimicrobial susceptibility patterns were determined. Sixty-three percent of the isolates were resistant to penicillin. Significantly large numbers of the strains investigated were resistant to trimethoprim-sulfamethoxazole (87.8%), tetracycline (71.7%), erythromycin (67.8%), and chloramphenicol (40%). Penicillin and multidrug resistance was mostly associated with the frequently isolated S. pneumoniae isolates of serotypes (serotypes 19F, 23F, 6B, and 14). Isolates of serotype 19F, the serotype most commonly encountered in Singapore (41.1%), had the highest prevalence of penicillin (78.4%) and multidrug resistance (94.6%). Most of the invasive S. pneumoniae isolates (8 of 17; 47. 1%) were of serotype 14.     

2007-2009年浙江省余姚市感染性腹泻沙门菌监测结果分析

目的了解浙江省余姚市感染性腹泻患者中沙门菌感染情况、血清分型以及各型对抗菌药物的敏感情况,为制定预防措施和临床治疗提供参考依据。方法采集感染性腹泻患者的粪便或肛试标本,依据GB/T 4789.4进行增菌、分离、生化鉴定、血清分型,药敏试验依据WS/T 125-1999测定。结果 719份腹泻患者粪便中检出沙门菌18株,检出率为2.5%。检出率最高的是O4群的鼠伤寒沙门菌,占50.0%;其次是O9群的肠炎沙门菌,占22.22%;阿汞纳、D群、C2群、阿伯丁和鸭沙门菌各1株。18株沙门菌均对头孢西丁、头孢他定、菌必治、氧氟沙星和亚胺培南敏感率为100%;检测发现有7株耐药菌,其中单耐药菌1株,多重耐药菌6株,而鸭沙门菌耐9种抗生素。结论 2007-2009年腹泻患者沙门菌检出率逐年下降,血清分型有其特点。多元耐药以鸭沙门菌明显,头孢类和喹诺酮类抗生菌对治疗沙门菌腹泻患者效果较好。     

2008－2017年鄂西北地区脑膜炎奈瑟菌药物敏感性及分子分型研究

目的 分析鄂西北地区2008 – 2017年分离到的72株脑膜炎奈瑟菌（Nm）的药物敏感性及分子分型特征。 方法 对Nm菌株进行生化鉴定和血清学分群,并采用荧光聚合酶链式反应进行基因分群,用K-B纸片和E-test检测试纸条进行药敏试验;选取部分菌株进行多位点序列分型（MLST）和脉冲场凝胶电泳（PFGE）。 结果 血清分群结果为B群14株、C群10株、W群3株、E群1株、不可分群44株。基因分群结果:B群33株、C群10株、W群3株、E群1株,其他及不可分群25株。70株Nm菌株对复方新诺明、萘啶酸、环丙沙星、米诺环素、氯霉素5种抗生素的敏感率分别为7.14%、21.43%、28.57%、98.57%和98.57%,对美罗培南、亚胺培南、阿奇霉素、头孢曲松、头孢噻肟、青霉素和利福平均敏感。17株菌株共有12种序列型别,其中12株菌株不能归入现有克隆群,其他5株属于CC4821（4株）和CC175（1株）。55株菌株分为48种不同的PFGE带型,带型相同的菌株其基因群亦相同。 结论 2008 – 2017年鄂西北地区分离的Nm菌株主要为B群;对复方新诺明、萘啶酸和环丙沙星具有较高的耐药性。MLST分型以CC4821为优势克隆。PFGE分型特征呈多态性,未出现优势带型。