细胞角蛋白-20基因在大肠癌患者外周血中表达的初步研究

目的 检测大肠癌患者外周血CK-20mRNA并评价其临床意义。方法 应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肿瘤细胞株及大肠癌患者外周血CK-20mRNA。结果 大肠癌细胞株CK-20mRNA阳性;前列胀癌、肾癌、乳腺癌等肿瘤细胞株及20例健康志愿者外周血未见CK-20mRNA的表达。51例大肠癌患者外周血中25例CK-20mRNA表达阳性,阳性卑为49.0％。大肠癌患者外周血CK-20mRNA的表达与临床分期关系为:A期14.3％(1/7)、B期25.0％(3/12)、C期55.0％(11/20)、D期83.3％(10/12);其中C、D期与A、B期相比有显著性差异(P<0.01)。结论 CK-20mRNA可以作为对大肠癌血行转移进行早期诊断的生物学标志物,并能监测大肠癌的疗效。     

鼻咽癌患者外周血中CK20 mRNA的表达及其临床意义

目的研究鼻咽癌(NPC)患者外周血中CK20mRNA表达并探讨其临床意义。方法采用巢式逆转录和多聚酶链反应方法,对NPC伴颈淋巴结转移组19例和NPC颈部淋巴结无转移组13例(共计32例)CK20mRNA表达进行检测。CT证实两组患者均无远处转移病灶。对照组1为8例非肿瘤患者外周血;阳性对照分别为B95-8细胞株和NPC组织。结果NPC伴颈淋巴结转移组CK20mRNA阳性表达率为21.1%(4/19),颈部淋巴结无转移组为7.7%(1/13),两组间阳性表达率比较差异无显著性意义(P>0.05)。CK20mRNA阳性表达与鼻咽癌国际抗癌联盟分期无关。对照组1均为阴性表达。结论NPC患者外周血中CK20mRNA的阳性表达作为NPC细胞血行播散的指标可能是有价值的,有助于评估NPC患者的预后。     

细胞角蛋白19、20 mRNA定量在检测结肠癌患者外周血微转移中的应用

目的探讨细胞角蛋白19、20（CK19、20）mRNA表达在诊断结肠癌患者外周血微转移中的作用。方法随机选择和收集36例结肠癌患者、34例结肠良性疾病患者及32名健康献血员外周血，用荧光定量逆转录-聚合酶链反应（FQ—RT-PCR）测定CK19、20mRNA含量。结果CK19、20mRNA在结肠良性疾病组外周血均未见表达。在健康献血员组只有1例CK19表达阳性，CK20均为阴性。在结肠癌组，CK19检测阳性率为58．3％（21／36）；CK20阳性率为36．1％（13／36）；CK19、20联合检测阳性率为77．8％（28／36）。结肠癌组与结肠良性疾病组或献血员组之间比较，CK19、CK20在外周血表达差异均有显著性（P〈0．05）。结合临床资料分析，结肠癌患者外周血CK19、CK20mRNA阳性表达和淋巴结转移、Dukes分期关系密切（P〈0．05），而与肿瘤类型及分化程度无关（P〉0．05）。结论CK19、20mRNA可作为检测结肠癌外周血微转移的标志物，两者联合检测可提高检出率。     

实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测结肠癌患者血CK19 mRNA水平及其意义

目的:了解结肠癌患者外周血CK19mRNA的水平,探讨其临床意义。方法:采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应,检测结肠癌患者75例、炎症性肠病(IBD)患者30例、健康志愿者41例外周血CK19mRNA的水平。结果:75例结肠癌患者外周血CK19mRNA的水平为(12600±73100)copies/mL,其中39例阳性,阳性率为52%。健康志愿者未检测到CK19mRNA。CK19mRNA水平与肿瘤病理分期和分化程度相关;CK19mRNA阳性组中CK19蛋白阳性者显著多于CK19mRNA阴性组(P<0.05)。结论:外周血CK19mRNA可作为结肠癌辅助诊断指标,定量检测外周血CK19mRNA有助于结肠癌微转移的监测。     

CK19mRNA敏感监测乳腺癌血行微转移的前瞻性研究

目的 探讨细胞角蛋白19信使核糖核酸(CK19mRNA)监测乳腺癌血行微转移的敏感性和特异性 方法 以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测106例乳腺癌患者外局血单个核细胞(PBMC)中CK19mRNA的表达情况。结果CK19mRNA特异性强,敏感性为1／105。乳腺癌患者CK19mRNA的阳性检出率为(97／106)91.5％,比病理确诊转移提高22.6％。结论 CK19mRNA作为辅助指标,能间接早期监测乳腺癌的血行微转移     

细胞角蛋白19、20 mRNA定量在检测结肠癌患者外周血微转移中的应用

目的探讨细胞角蛋白19、20(CK19、20)mRNA表达在诊断结肠癌患者外周血微转移中的作用。方法随机选择和收集36例结肠癌患者、34例结肠良性疾病患者及32名健康献血员外周血,用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)测定CK19、20 mRNA含量。结果CK19、20 mRNA在结肠良性疾病组外周血均未见表达。在健康献血员组只有1例CK19表达阳性,CK20均为阴性。在结肠癌组,CK19检测阳性率为58.3%(21/36);CK20阳性率为36.1%(13/36);CK19、20联合检测阳性率为77.8%(28/36)。结肠癌组与结肠良性疾病组或献血员组之间比较,CK19、CK20在外周血表达差异均有显著性(P<0.05)。结合临床资料分析,结肠癌患者外周血CK19、CK20 mRNA阳性表达和淋巴结转移、Dukes分期关系密切(P<0.05),而与肿瘤类型及分化程度无关(P>0.05)。结论CK19、20 mRNA可作为检测结肠癌外周血微转移的标志物,两者联合检测可提高检出率。     

乳腺癌外周血骨桥蛋白、细胞角蛋白19及粘蛋白1检测及临床意义

目的 应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测乳腺癌患者外周血单个核细胞中骨桥蛋白(OPN)mRNA、细胞角蛋白19(CK19)mRNA、粘蛋白1(MUC1)mRNA的表达,探讨联合检测OPN、CK19、MUC1在诊断乳腺癌微转移中的应用价值.方法 应用RT-PCR技术检测41例乳腺癌患者外周血中靶基因的表达,并...     

评价反转录多聚酶链反应检测大肠癌患者血清人端粒酶反转录酶mRNA表达的敏感性及特异性：对照组比较

目的：评价反转录多聚酶链反应检测大肠癌患血清人端粒酶反转录酶mRNA的可行性研究。方法：收集2004—01／11解放军第二军医大学长海医院肿瘤内科和普外二科54例各期大肠癌患外周静脉血，采用反转录多聚酶链反应方法检测血清中人端粒酶反转录酶mRNA的表达，并与同期20例炎症性肠病患及20例健康作对照。分析其敏感性和特异性。结果：①血清中人端粒酶反转录酶mRNA表达的敏感性：大肠癌患63％(34／54)，炎症性肠病患10％(2／20)，健康对照0。②特异性：相对于炎症性肠病组，特异性为94％(34／36)，相对于健康对照组特异性为100％(34／34)。结论：反转录多聚酶链反应方法从血清中检测人端粒酶反转录酶mRNA是足够敏感的，并具有相对特异性。尽管结果产生于初步的实验条件下，但是为从肿瘤患其他体液中扩增出肿瘤信使RNA提供了新的思路。     

胃癌患者外周血CK20 mRNA的表达及临床意义

目的探讨胃癌患者外周血中CK20 mRNA的表达水平及与临床病理因素的相关性,评价其在微转移中的诊断意义。方法运用巢式逆转录-聚合酶链反应检测46例胃癌患者外周血CK20 mRNA的表达情况,并以20例慢性胃炎患者和20例健康志愿者作对照。结果胃癌组外周血CK20 mRNA阳性表达率为60．8％（29／46）,而慢性胃炎组和健康志愿者组均表达阴性,差异均有统计学意义（P〈0.0001）;胃癌组CK20 mRNA的阳性表达率与胃癌分化状态、TNM分期和有无淋巴结转移相关（均P〈0．05）,而与年龄、性别、肿瘤大小和浸润深度无关。结论胃癌患者外周血中CK20 mRNA的阳性表达可作为胃癌早期诊断及微转移的判断指标,可对临床分期、预后判断和治疗起指导作用。     

逆转录—聚合酶链反应—酶联夹心杂交法定量检测IL—6mRNA

目的：建立一支高灵敏度、高特异性、精确、简便的逆转录－聚合酶链反应－微孔板酶联夹心杂交技术定量检测人IL－6mRNA的方法。方法：从人外周静脉血单个核细胞提取总RNA，进行RT－PCR扩增，PCR产物经热变性后与检测探针一起加入已包被捕获探针的微孔板内进行夹心杂交，用链亲和素－辣根过氧化物酶（SAV－HRP）及底物系统检测杂交信号。结果：该方法检测IL－6mRNA的灵敏度明显高于逆转录－聚合酶链反应－琼脂糖凝胶电泳；特异性高，RT－PCR和酶联夹心杂交均无非特异性阳性信号出现；重复性良好。结论：本方法操作简单、灵敏度高、特异性强、结果数据化，适合于细胞因子mRNA的定量检测。     

食管癌患者外周血CK20-mRNA的表达及意义

目的 探讨逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测外周血中细胞角蛋白20mRNA(CK20-mRNA)的表达对诊断食管癌微转移的意义.方法 采用RT-PCR方法 检测53例食管癌患者、10例食管良性病变及20例健康体检者外周血CK20-mRNA,并进行比较.结果 食管良性病变对照组和健康对照组的外周血中均未检测出CK20-mRNA阳性表达;42例无远处转移食管癌患者外周血CK20-mRNA表达阳性率为40.48%(17/42),11例远处转移者CK20-mRNA表达阳性率为81.82%(9/11),两者差异有显著性意义(P<0.05).结论 CK20-mRNA是检测食管癌外周血微转移的良好的分子标志物,其表达与食管癌TNM分期关系密切.     

血尿细胞角质蛋白20的表达

目的探讨血尿患者尿脱落细胞细胞角质蛋白20（CK20）的表达及其意义。方法采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）对47例首发症状为血尿的尿路移行细胞癌患者、18例以血尿就诊的非泌尿系肿瘤患者以及10例健康志愿者尿脱落细胞CK20的表达进行检测。结果47例尿路移行细胞癌中有38例脱落细胞CK20阳性，对照组无CK20阳性表达。结论检测尿脱落细胞CK20表达，对诊断尿路移行细胞癌敏感性和特异性高，可作为血尿患者筛选尿路移行细胞癌的方法之一。     

手术操作与胃癌微转移的关系

目的探讨手术操作与胃癌微转移的关系。方法采用巢式逆转录-聚合酶链式反应（RT—PCR）技术检测70例胃癌病人手术前、后外周血细胞角蛋白（CK20）mRNA及癌胚抗原（CEA）mRNA的表达情况，并以20例健康志愿者作为阴性对照组，以10例胃癌组织作为阳性对照组。结果CK20mRNA及CEAmRNA在术前阳性表达率分别为32．9％和51．4％，而术后二者的阳性表达率分别为62．9％和70．0％，术后阳性率明显高于术前（X^2=12．62、5．06，P〈0．05）。20例健康志愿者无1例阳性表达。结论手术操作可以促使胃癌发生微转移。     

实时荧光定量RT-PCR检测血液肿瘤细胞株PAX5 mRNA表达

目的　建立实时定量逆转录 聚合酶链反应(RT PCR)检测6个血液肿瘤细胞株中PAX5和CD19的 mRNA相对表达量。方法　一系列稀释的反转录自NAMALWA细胞株总RNA的cDNA被用于构建PAX5、CD19 和GAPDH扩增的标准曲线。实验证实靶基因(PAX5和CD19)与管家基因(GAPDH)的扩增效率一致,因此可 以用比较循环数(Ct)法对PAX5和CD19的表达进行相对定量。结果　在NAMALWA(B细胞系)细胞株中, PAX5和CD19mRNA相对表达量分别为2.35%和2.52%;而在其他T细胞和髓系细胞株中几乎不表达。结论 　本研究中所建立的实时定量RT PCR能简单、快速、方便地对PAX5和CD19mRNA表达水平进行定量,且适 用于对大量、不同种血液恶性肿瘤患者进行观察研究。     

CK20 mRNA和hTERT mRNA在大肠癌围手术期血行微转移中的转录特征

目的 探讨细胞角蛋白20(CK20)mRNA和人端粒酶催化亚单位(hTERT)mRNA作为大肠癌围手术期血行微转移标志物的价值.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测40例大肠癌患者术前、术中及术后外周血CK20 mRNA和hTERTmRNA的表达,并对不同分化程度、不同Dukes分期的大肠癌患者CK20 mRNA和hTERT mRNA的表达进行比较.结果 40例大肠癌患者外周血CK20 mRNA和hTERT mRNA的表达率,术前分别为47.5%(19/40)和45.0%(18/40),术中为70.0%(28/40)和70.0%(28/40),术后为10.0%(4/40)和32.5%(13/40).除术后hTERT mRNA阳性率与术前无显著差异(P＞0.05)外,术中外周血CK20 mRNA、hTERT mRNA阳性率和表达强度(与内参照β-actin比值)均显著高于术前(P＜0.01,P＜0.05),术后明显低于术前和术中(P＜0.01).hTERT mRNA在低分化肿瘤的表达明显高于高、中分化组(P＜0.05),而CK20mRNA在低分化肿瘤的表达强度低于高、中分化组(P＜0.01).大肠癌围手术期Dukes B期和C D期之间CK20 mRNA和hTERT mRNA均无显著性差异(P＞0.05).结论 大肠癌患者围手术期血行微转移的发生几率较高,病理分化程度低者更易发生,但与Dukes分期无明显相关,CK20 mRNA和hTERT mRNA联合检测对大肠癌血液微转移具有较高的敏感性和特异性,是判断围手术期血行微转移的良好标志物.     

血尿细胞角质蛋白20的表达

目的探讨血尿患者尿脱落细胞细胞角质蛋白20(CK20)的表达及其意义。方法采用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)对47例首发症状为血尿的尿路移行细胞癌患者、18例以血尿就诊的非泌尿系肿瘤患者以及10例健康志愿者尿脱落细胞CK20的表达进行检测。结果47例尿路移行细胞癌中有38例脱落细胞CK20阳性,对照组无CK20阳性表达。结论检测尿脱落细胞CK20表达,对诊断尿路移行细胞癌敏感性和特异性高,可作为血尿患者筛选尿路移行细胞癌的方法之一。     

RT-PCR检测结直肠癌患者外周血中细胞角蛋白20 mRNA的表达

目的：检测结直肠癌患者外周血中细胞角蛋白20（CK20）mRNA的表达．并探讨其临床价值。方法：应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应，检测59例结直肠癌患者、12例原发性肝癌患者和26例对照者外周血中CK20mRNA的表达。结果：对照者及原发性肝癌患者外周血中CK20mRNA均为阴性表达。结直肠癌患者外周血中CK20mRNA阳性表达率为5913％。结直肠癌患者外周血中CK20mRNA的阳性表达率在不同肿瘤病理分化程度中差异无显著性，而在不同Dukes分期和有无淋巴结转移及远处转移患者间差异有显著性（P〈0.05）。结论：检测结直肠癌患者外周血中CK20mRNA的表达可作为预测肿瘤微转移的评估指标，可监测患者病情变化，识别高危人群，并有助于结直肠癌微转移的判断及鉴别原发性肝细胞肝癌和结直肠癌肝转移。[著者文摘]     

影响巢式RT—PCR反应效果的因素分析

目的：探讨癌基因研究中影响巢式反转录聚合酶链式反应（巢式RT－PCR）扩增效果的因素。方法：以巢式RT－PCR法检测5例大肠癌患者门静脉血和54例卵巢者及10例发科良性肿瘤患者骨髓中细胞角化蛋白基因－19（CK－19)m RNA的表达，并对实验方法进行了改良和优化。结果：大肠癌中有54.5%检得CK－19阳性，卵巢癌中有63.0%检得CK－19阳性；10例妇科良性肿瘤无CK－19表达。结论：经过上述三方面措施改良后的巢式RT－PCR能够用来检测恶性肿瘤患者CK－19mRNA的表达，，因而成为监测这类肿瘤患者造血有就血液和不系中癌细胞分布情况的一种有效的分子生物学手段。     

以LacZ基因标记的大鼠微量残留白血病细胞的分布研究

目的 了解微量残留白血病（ＭＲＬ）在体内的分布状态。方法 利用携带外源性标志基因ＬａｃＺ的白血病细胞株ＬＴ１２ｎｌ建立了ＢＮ大鼠ＭＲＬ模型。应用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）及巢式ＰＣＲ方法,结合Ｘ－ｇａｌ染色法,细胞形态学及病理形态学方法检测ＢＮ大鼠ＭＲＬ阶段白血病细胞中的特异性标志基因ＬａｃＺ。