骨髓单核细胞移植对脊髓横断大鼠神经营养因子-3和突触素表达的影响

目的:探讨骨髓单核细胞(BMMNCs)移植对脊髓横断(SCT)大鼠脊髓组织中神经营养因子-3(NT-3)和突触素(SYN)表达的影响。方法:146只Winstar大鼠(SPF级,雌雄不限)随机分为3组:SCT组49只,建立SCT模型;实验组49只,建立SCT模型,给予BMMNCs移植治疗;假手术组48只,切除对应的椎板不损伤脊髓;各组大鼠分别于术后5、7、14和21d行后肢功能BBB评分,RT-PCR和免疫组织化学技术检测受损脊髓组织中NT-3和SYN的表达。结果:术后5、7、14和21d各时间点各组大鼠后肢BBB评分比较,SCT组和实验组均低于假手术组(P0.05),且SCT组更低于实验组(P0.05)。术后5、7、14和21d各时间点NT-3阳性细胞数及NT-3mRNA比较,SCT组和实验组均高于假手术组(P0.05),且SCT组更低于实验组(P0.05)。SYN阳性颗粒数及SYN mRNA比较,SCT组和实验组均低于假手术组(P0.05),且SCT组更低于实验组(P0.05)。结论:BMMNCs能够上调局部损伤脊髓NT-3和SYN的表达。     

静脉移植骨髓间充质干细胞对大鼠脊髓损伤后生长相关蛋白43、神经丝蛋白及巢蛋白的调节

目的:已证实骨髓间充质干细胞不仅具有向中胚层间质细胞分化的能力,在一定条件下或微环境中还能够向外胚层和内胚层细胞分化。为此观察静脉移植骨髓间充质干细胞对脊髓损伤后生长相关蛋白43、神经丝蛋白及巢蛋白的影响。方法:实验于2004-12在四川大学华西医院组织工程实验室完成。①实验动物:雌性SD大鼠66只,随机数字表法分为3组:细胞移植组、注射液对照组、模型对照组,22只/组。另取6周龄SD大鼠10只用于骨髓间充质干细胞的分离培养。②实验方法:应用密度梯度离心、贴壁培养和酶消化控制相结合,分离纯化鼠骨髓间充质干细胞。传至第6代在移植前1d予以BrdU标记,制成浓度约为2×109L-1细胞悬液。各组大鼠均建立脊髓损伤模型,造模后1周作尾静脉穿刺,细胞移植组注入骨髓间充质干细胞悬液1mL,注射液对照组注入等量的无血清低糖培养基,模型对照组未作处理。③实验评估:分别于细胞移植后2,3,6周取材,免疫组织化学检测骨髓间充质干细胞在损伤段脊髓的存活情况,观察损伤段脊髓内生长相关蛋白43、神经丝蛋白及巢蛋白的表达。结果:①骨髓间充质干细胞存活及计数:移植后2,3,6周BrdU阳性的骨髓间充质干细胞主要分布于损伤段及邻近节段脊髓内,计数分别为(9830±874)个,(8780±720)个,(5700±420)个,各占移植细胞总量的4.9%,4.4%,2.9%。②生长相关蛋白43及神经丝蛋白的表达:细胞移植后2,3,6周,细胞移植组生长相关蛋白43及神经丝蛋白的表达面积均明显高于其余两组(P<0.05)。③巢蛋白的表达:细胞移植后2,3周,细胞移植组的巢蛋白阳性细胞数均明显高于其余两组(P<0.05)。至第6周细胞移植组巢蛋白阳性细胞数明显降低(P<0.05),其余两组不表达。结论:脊髓损伤后静脉移植的骨髓间充质干细胞能向脊髓损伤灶内迁徙、存活,上调生长相关蛋白43、经丝蛋白及巢蛋白的表达。     

嗅鞘细胞移植脊髓全横断损伤大鼠大脑皮质运动区转化生长因子β表达的影响☆

背景:多项研究已证实嗅鞘细胞能促进脊髓损伤大鼠神经功能的恢复,但其分子机制还不清楚.目的:观察嗅鞘细胞移植对脊髓全横断大鼠大脑皮质运动区转化生长因子β mRNA表达的影响.方法:采用酶消化法培养GFP转基因小鼠嗅鞘细胞,制成细胞悬液.建立SD大鼠T9脊髓全横断模型,造模后分为假手术组、模型组和嗅鞘细胞移植组.应用RT-PCR方法检测各组大鼠大脑皮质运动区转化生长因子β mRNA的表达变化,用β-actin作内参.结果与结论:模型组大鼠造模后3 d大脑皮质运动区转化生长因子β mRNA的表达量高于假手术组(P < 0.05),造模后7,14,21和28 d回到假手术组水平.嗅鞘细胞移植后21 d,嗅鞘细胞移植组转化生长因子β mRNA的表达量低于模型组(P < 0.05).提示全横断脊髓损伤致大脑皮质运动区转化生长因子β mRNA早期表达上调,随后与假手术组相比无差别;嗅鞘细胞移植后期可逆转转化生长因子β mRNA的表达变化,有助于脊髓损伤的恢复.     

磁刺激对损伤大鼠脊髓组织巢蛋白表达的影响

目的研究磁刺激对损伤脊髓组织的中间丝蛋白——巢蛋白（nestin）表达的影响。方法46只Wistar大鼠随机分为假手术组（6只）、损伤组（20只）和治疗组（20只）。治疗组与损伤组用改良的Allen重物坠落法制作大鼠脊髓损伤模型。治疗组于术后24h开始给予磁刺激，频率为0．5Hz，75％的最大输出强度（峰值强度为1．9T），每天1次，每次30个脉冲，连续7d，损伤组无特殊处理。分别于术后24h、1周、4周和8周进行BBB（Basso Beatti and Bresnahan）行为学评分，应用免疫荧光组织化学法、半定量逆转录-聚合酶链式反应（RT—PCR）技术检测各时间点损伤脊髓组织中巢蛋白表达的变化。结果假手术组大鼠脊髓组织细胞中巢蛋白有微量表达，脊髓损伤后表达增加治疗组在损伤后1周、4周和8周巢蛋白表达均高于损伤组（P〈0．05）；治疗组在损伤后1周、4周和8周的行为学评分也均明显高于损伤组（P〈0．01）。结论磁刺激治疗后后损伤脊髓组织局部巢蛋白的表达增强，可促进大鼠损伤脊髓的再生修复和功能恢复。     

嗅鞘细胞移植脊髓全横断损伤大鼠大脑皮质运动区转化生长因子β表达的影响

背景：多项研究已证实嗅鞘细胞能促进脊髓损伤大鼠神经功能的恢复,但其分子机制还不清楚。目的：观察嗅鞘细胞移植对脊髓全横断大鼠大脑皮质运动区转化生长因子βmRNA表达的影响。方法：采用酶消化法培养GFP转基因小鼠嗅鞘细胞,制成细胞悬液。建立SD大鼠T9脊髓全横断模型,造模后分为假手术组、模型组和嗅鞘细胞移植组。应用RT-PCR方法检测各组大鼠大脑皮质运动区转化生长因子βmRNA的表达变化,用β-actin作内参。结果与结论：模型组大鼠造模后3d大脑皮质运动区转化生长因子βmRNA的表达量高于假手术组（P〈0.05）,造模后7,14,21和28d回到假手术组水平。嗅鞘细胞移植后21d,嗅鞘细胞移植组转化生长因子βmRNA的表达量低于模型组（P〈0.05）。提示全横断脊髓损伤致大脑皮质运动区转化生长因子βmRNA早期表达上调,随后与假手术组相比无差别;嗅鞘细胞移植后期可逆转转化生长因子βmRNA的表达变化,有助于脊髓损伤的恢复。     

神经干细胞移植影响脊髓全横断大鼠大脑运动皮质相关凋亡基因的表达

背景:多项研究已证实神经干细胞能促进脊髓损伤大鼠神经功能的恢复,但其分子机制还不清楚.目的:观察神经干细胞移植对脊髓全横断损伤大鼠大脑运动皮质相关凋亡基因Bax,Bcl-2和Caspase-3 mRNA表达的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-07/2008-12在昆明医学院神经科学研究所完成.材料:孕14-15 d绿色荧光蛋白转基因鼠5只,取其胚胎用于神经干细胞培养.清洁级健康成年雌性SD大鼠88只,随机分成3组:假手术组8只、模型组40只、细胞移植组40只.方法:模型组、细胞移植组大鼠建立T_9脊髓全横断脊髓损伤模型,假手术组只行T_8椎板切除.用DMEM/F12调整胎鼠神经干细胞密度为2×10~(10)L~(-1),吸取细胞悬液15 μL滴加到约2 mm~3大小的明胶薄片上,细胞移植组将此明胶薄片植入大鼠脊髓两横断面之间的间隙处.分别于细胞移植后3,7,14,21,28 d取材进行指标检测.主要观察指标:RT-PCR法检测大脑运动皮质Bax,Bcl-2和Caspase-3 mRNA表达的变化.结果:与假手术组比较,模型组各时间点Bax的表达均无明显差异(P>0.05),术后14,28 d Bcl-2的表达明显减少(P<0.05),术后3 d Caspase-3的表达明显升高(P<0.05).与模型组比较,细胞移植组在神经干细胞移植后3 d Bax的表达明显减少(P<0.05),移植后14,21 d Bcl-2的表达明显增高(P相似文献   

许旺细胞-海藻酸钠凝胶移植修复大鼠脊髓损伤

目的:观察许旺细胞-海藻酸钠凝胶移植对大鼠脊髓损伤后细胞凋亡、Bcl-2表达及下肢运动功能恢复的影响.方法:清洁级SD大鼠随机分为4组:正常对照组、单纯损伤组、许旺细胞组、许旺细胞海藻酸钠凝胶组.后3组制作脊髓全横断损伤模型.正常对照组、单纯损伤组不进行移植处理,许旺细胞组植入吸附许旺细胞悬液的明胶海绵块、许旺细胞-海藻酸钠凝胶组植入许旺细胞-海藻酸钠凝胶.分别于12 h,1,3,7,21 d对动物进行BBB评分后处死,取损伤区脊髓节段制成石蜡切片进行TUNEL、Bcl-2染色,观察脊髓内凋亡细胞、Bcl-2细胞的数量及分布变化.结果:正常对照组仅有少量淡染Bcl-2阳性细胞;单纯损伤组神经元Bcl-2免疫反应阳性细胞表达的高峰在第3天,14 d时Bcl-2免疫反应阳性细胞表达接近正常水平.许旺细胞-海藻酸钠凝胶移植后损伤脊髓细胞Bcl-2免疫反应阳性细胞表达具有显著增高(P＜0.05),7 d高度表达并持续2周以上.单纯损伤组脊髓内细胞凋亡最多,并于损伤后1,7 d形成两个高峰,多分布于白质中.许旺细胞-海藻酸钠凝胶组BBB评分较单纯损伤组及许旺细胞组明显提高(P＜0.05).结论:许旺细胞-海藻酸钠凝胶移植能抑制大鼠脊髓损伤后脊髓细胞凋亡、促进Bcl-2的表达,提高了脊髓运动功能的恢复,但未达到正常水平.     

嗅鞘细胞移植对脊髓损伤大鼠诱发电位的影响

目的:观察嗅鞘细胞移植对脊髓损伤大鼠感觉及运动诱发电位的影响,尝试用嗅鞘细胞移植修复脊髓损伤后受损的传导通路。方法:实验于2004-09/2006-07在西安交通大学口腔医学实验中心完成。①选取成年健康SD大鼠40只,取16只大鼠用于嗅鞘细胞的培养与纯化,剩余24只随机数字表法分为4组:假手术组、模型对照组、嗅鞘细胞移植组、DF12培养液组,6只/组。②模型对照组、嗅鞘细胞移植组、DF12培养液组采用脊髓横切法制作脊髓损伤模型,以T10为中心的后正中切口入路,切除T10全椎板及T9,T11的部分椎板,显露脊髓,以特制探针横预置3-0丝线于待损伤脊髓腹侧硬膜外,以剃须刀片于预置线头侧0.5mm(T10水平)将脊髓横断。假手术组仅切开T10全椎板及T9,T11的部分椎板,对脊髓未作横断处理。③造模后,嗅鞘细胞移植组以距脊髓断端1mm的平面与正中线交点为进针点,每一进针点按1.75mm,1.25mm,1.00mm,0.50mm4个不同深度分别注射嗅鞘细胞培养液0.5μL,注射速度0.1μL/min,每注射位点留针5min。DF12培养液组同法注射0.5μL无血清的D/F12培养液。假手术组、模型对照组未作处理。④术后8周,各组大鼠麻醉后使用DantecKeypoint型四导诱发电位肌电图仪测定感觉及运动诱发电位的潜伏期及波幅变化。结果:24只大鼠全部进入结果分析。①嗅鞘细胞移植术后大体观察:术后6周,嗅鞘细胞移植组双后肢拖步爬行、双侧膝踝关节处溃疡和压疮等失神经支配征象逐渐好转,股四头肌肌力明显恢复,拖步爬行现象改善;而模型对照组、DF12培养液组大鼠失神经支配征象无改善,假手术组未见异常。②术后8周感觉诱发电位检测结果:模型对照组、DF12培养液组均未引出感觉诱发电位波形。与假手术组比较,嗅鞘细胞移植组感觉诱发电位潜伏期明显延长[(2.640±0.294),(14.575±2.117)ms,P<0.01],波幅显著降低[(3.797±0.140),(0.403±0.078)μV,P<0.01]。③模型对照组、DF12培养液组均未引出运动诱发电位波形。与假手术组比较,嗅鞘细胞移植组运动诱发电位潜伏期明显延长[(5.825±0.350),(10.750±1.184)ms,P<0.01],波幅显著降低[(5.200±0.432),(0.10±0.001)μV,P<0.01]。结论:嗅鞘细胞移植治疗可以调节损伤脊髓的内在微环境,加强体感诱发电位和运动诱发电位的恢复表达,改善神经功能。     

神经干细胞及衍生支持因子在大鼠脊髓损伤后的变化

目的:神经干细胞及其支持因子均与中枢神经损伤后的神经再生有关.但目前有关神经干细胞及其衍生支持因子在体内和脊髓损伤后是否有变化的证据较少。观察神经干细胞及其衍生的神经干细胞支持因子在大鼠脊髓损伤后的变化规律.探讨它们之间的相互关系。方法:实验于2005-09/2006-03在南通大学神经科学研究所实验室完成,①实验材料:清洁级SD大鼠27只由南通大学实验动物中心提供,将12只大鼠分为假手术组和脊髓损伤组用于免疫组织化学.另15只用于RT-PCR检测.分为假手术组和脊髓损伤组.实验过程中对动物处置符台动物伦理学标准。②实验方法:按Allen重物打击法制备大鼠脊髓损伤模型,假手术组仪切除椎板,未行脊髓打击。用免疫组织化学方法鉴定脊髓组织中神经干细胞标志物nestin、胶质细胞标志物GFAP和神经干细胞衍生的神经干细胞支持因子阳性细胞在脊髓损伤后8.16 d的数量和形态变化;采用半定量RT-PCR检测神经干细胞衍生的神经干细胞支持因子mRNA在脊髓中的表达及损伤后4、8、12、16 d的变化。结果:①假手术组脊髓中央管附近出现巢蛋白阳性细胞脊髓损伤后8 d.巢蛋白阳性细胞增多,细胞变大.向外周迁移,并发出突起,以着力侧为著,胶质纤维酸性蛋白阳性细胞出现增多,并出现表达神经干细胞衍生的神经干细胞支持因子阳性类似神经元形态的细胞。脊髓损伤后16 d,nestin阳性细胞数量明显减少,以GFAP阳性细胞增生为主.神经干细胞衍生的神经干细胞支持因子阳性细胞少见。②RT-PCR检测神经干细胞支持因子mRNA在正常大鼠脊髓中有表达,脊髓损伤后4 d神经干细胞支持因子的mRNA表达上升.损伤8 d为高峰,16 d恢复到近正常水平。结论:①在正常大鼠脊髓中央管附近存在神经干细胞.在脊髓损伤后出现增殖,随后可能分化为神经胶质细胞。②在正常脊髓有神经干细胞支持因子表达.脊髓损伤后神经干细胞支持因子的mRNA表达随神经干细胞增殖和分化而增高和下降.两者在脊髓损伤修复中关系密切。     

血管内皮祖细胞移植治疗脊髓损伤的实验研究

目的 观察人的血管内皮祖细胞移植,对大鼠脊髓损伤的神经功能恢复的影响及移植细胞的存活和分化.方法 取由上海市发育生物学重点实验室提供的人血管内皮祖细胞,收集细胞悬液.将40只SD大鼠制备脊髓全横断模型,将存活的30只大鼠随机分为三组:假手术组(A组),10只,未做任何处理;手术/细胞组(B组),lO只,于距损伤区域1 cm椎管内注射7.5 μl,细胞总数为6×106个;手术/DMEM组(C组),10只,按B组方法注射等量DMEN.术后1、2,4、6和8周采用BBB后肢功能评分观察大鼠脊髓神经功能恢复情况,取出损伤的脊髓行免疫组织化学和原位杂交检测移植细胞在宿主脊髓内的存活和分化情况,再用SAS.1.3统计软件,分析行为学的变化,用秩和的Kruskal-Wallis Test和Nemenyi法检验,P<0.05为差异具有统计学意义.结果 BBB后肢功能评分显示术后各时间点A组与B、C组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),B组与C组比较,在2、4、6和8周显示B组明显优于C组,但明显低于A组,上述差异均有统计学意义(P<0.05).原位杂交和免疫组化检测显示移植的内皮祖细胞不仅能在宿主体内存活而且一些移植的细胞嵌合到宿主脊髓并分化为血管.结论 人内皮祖细胞移植后,能够在脊髓内存活、并分化为血管内皮细胞并能促进损伤脊髓功能的恢复.     

骨髓基质细胞移植促进脊髓全横断损伤区神经元轴突的再生变化

背景:近年来,部分学者证明骨髓基质细胞移植可促进轴突再生,改善脊髓损伤引起的运动功能障碍,但目前关于移植骨髓基质细胞如何促进轴突再生,移植细胞与再生轴突的关系尚不清楚.目的:通过免疫荧光组织化学和免疫电镜的方法,探讨移植骨髓基质细胞促进脊髓全横断损伤区轴突再生的机制.设计、时间及地点:随机对照动物实验,细胞学体内观察,于2006-03/2007-06在新加坡国立大学解剖系完成.材料:清洁级Wistar新生大鼠1只,用于骨髓基质细胞培养.清洁级成年雌性Wistar大鼠36只,无菌条件下显露、切断脊髓T_(10),制备脊髓全横断损伤模型.方法:通过传代法培养、纯化骨髓基质细胞.36只成年Wistar雌性大鼠随机投币法分为移植组和对照组,每组18只.移植组大鼠脊髓全横断损伤9 d后以1×10~(11)L~(-1)的密度移植骨髓基质细胞,缺损区5μL,损伤区上、下1 mm处各2.5 μL,对照组动物在相同部位注射等量DMEM完全培养基,注射速度1 μL/min.主要观察指标:①移植骨髓基质细胞存活、分化情况.②轴突再生情况.③移植组和对照组宿主自身的nestin、NF200、GFAP和CNP阳性细胞在脊髓损伤区存活情况.④内源性CNP阳性细胞和再生纤维关系.结果:骨髓基质细胞移植2周时,脊髓损伤区可见大量CFDA-SE标记的移植细胞,随时间延长,存活的移植细胞数目逐渐降低,考虑脊髓损伤区内大量的0×42阳性吞噬细胞,激活小胶质细胞及空洞可能影响移植细胞的存活.虽然骨髓基质细胞数目逐渐降低,骨髓基质细胞移植可促进损伤区轴突的再生,而且还可促进宿主自身的nestin、NF200、GFAP和CNP阳性细胞在脊髓损伤区存活.宿主自身CNP和许旺细胞促进损伤轴突的再生和髓鞘形成.结论:移植骨髓基质细胞移植可促进宿主自身CNP和许旺细胞在脊髓损伤区存活,后者具有促进损伤轴突再生和髓鞘形成的作用.     

嗅鞘细胞移植对脊髓全横断损伤大鼠大脑运动皮质胰岛素样生长因子1和睫状神经营养因子表达的影响

背景:多项研究已证实嗅鞘细胞能促进脊髓损伤大鼠神经功能的恢复,但其分子机制还不清楚.目的:观察嗅鞘细胞移植对脊髓全横断大鼠大脑运动皮质神经营养因子胰岛素样生长因子1和睫状神经营养因子mRNA表达的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-07/2008-12在昆明医学院神经科学研究所完成.材料:清洁级健康成年雌性SD大鼠88只,随机分成3组:假手术组8只、模型组40只、细胞移植组40只.另取新生一两天的GFP转基因小鼠5只用于分离培养嗅鞘细胞.方法:模型组、细胞移植组大鼠建立T9脊髓全横断损伤模型,假手术组仅行T8椎板切除.造模后,细胞移植组吸取嗅鞘细胞悬液15μL(约3×105个细胞)滴加到约2 mm3的明胶海绵上,将含有嗅鞘细胞的明胶海绵植入大鼠脊髓两横断面之间的间隙处.分别于移植后3,7,14,21,28 d取大脑运动皮质行RT-PCR检测.主要观察指标:采用免疫细胞化学法对培养的嗅鞘细胞进行鉴定,RT-PCR法检测大脑运动皮质胰岛素样生长因子1和睫状神经营养因子mRNA的表达变化.结果:培养的嗅鞘细胞p75-NGFR阳性率>90%,主要为双极细胞,突起较长.与假手术组比较,模型组术后3 d睫状神经营养因子表达明显升高,7,14,21 d降至无明显差异,至28 d明显降低(P<0.05);术后各时间模型组胰岛素样生长因子1的表达无明显差异(P>0.05).与模型组比较,移植后14 d细胞移植组胰岛素样生长因子1表达明显增多(P<0.05);移植后3 d睫状神经营养因子的表达明显减少(P<0.05),但移植后7,14,21 d表达逐渐回升,至28 d明显高于模型组水平(P<0.05).结论:嗅鞘细胞移植能够促进脊髓损伤修复,其机制可能与促进大脑运动皮质胰岛素样生长因子1 mRNA的表达上调,并在初期抑制睫状神经营养因子mRNA的表达有关.     

嗅鞘细胞移植脊髓损伤大鼠NG2的表达

背景: 对于脊髓损伤,目前临床尚无有效的治疗对策,近年来嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤修复取得了一定的进展.NG2是主要的硫酸软骨素蛋白多糖分子,对轴突有抑制作用.目的: 观察嗅鞘细胞移植对脊髓损伤大鼠NG2表达的影响,进一步分析嗅鞘细胞移植在修复脊髓损伤中的作用途径.方法: 将112只大鼠随机分为4组,空白组、模型组、嗅鞘细胞移植组及DF12组各28只.空白组仅切开T10全椎板及T9,T11部分椎板,对脊髓未作其他处理;其他3组应用脊髓横切法制作脊髓损伤动物模型.嗅鞘细胞移植组进行嗅鞘细胞移植,每侧断端植入20 000 cells;DF12组于相同部位注射DF12培养液.在大鼠脊髓损伤后1,3,7,14,28,42和56 d时,取材按照SP试剂盒的操作步骤检测NG2的表达.结果与结论: 空白组NG2呈低表达,在模型组、DF12组脊髓损伤24 h后损伤部位的NG2的表达开始升高,7 d时达到顶点,4周时NG2表达明显降低,6,8周时仅在局部有所表达.嗅鞘细胞移植组脊髓损伤1 d时NG2表达开始增加,主要在损伤部位,在各时间点与模型组、DF12组相比NG2表达水平明显降低,但高于空白组NG2各时间点的表达.提示嗅鞘细胞移植后NG2的表达水平降低,嗅鞘细胞具有抑制NG2表达的作用,可消除或减轻细胞外基质中对轴突有抑制作用的化学屏障,这可能是其治疗脊髓损伤促进轴突再生的机制之一.     

任务导向性康复训练对小鼠脊髓损伤后神经回路可塑性及前肢运动功能的影响

目的 探讨任务导向性康复训练对小鼠C₅脊髓损伤后神经回路可塑性及前肢运动功能恢复的影响。 方法 健康成年C75/BL小鼠21只随机数字表法分为假手术组、模型组、训练组,每组7只。模型组和训练组对C₅脊髓进行左背侧及背外侧束钳夹损伤,假手术组仅剔除椎板。术后4周,训练组接受左侧前肢任务导向性康复训练4周。术前,术后3 d、2周、4周、6周和8周行水平楼梯和圆筒攀爬探索测试。术后6周,采用生物素化葡聚糖胺(BDA)顺行示踪观察皮质脊髓束的轴突。术后8周,运动诱发电位检测左前肢的神经传导情况;免疫荧光双标BDA/神经元核特异蛋白(NeuN),观察病灶上段灰质前角内轴突出芽及与神经元的结构关系;免疫荧光双标NeuN/突触素I(Synapsin I),观察病灶处灰质前角内突触素的表达情况。 结果 术后8周,模型组P1、N1潜伏期长于假手术组(P < 0.05),训练组短于模型组( P < 0.05)。术后各时间点,与假手术组比较,模型组和训练组左前肢错误率升高,使用率下降( P < 0.05);与模型组比较,术后6周和8周,训练组左前肢错误率降低( P < 0.05),术后8周,训练组左前肢使用率升高( P < 0.05)。与模型组比较,训练组病灶上段灰质前角内轴突出芽增加,出芽轴突多与神经元共区域,Synapsin I表达增加( P < 0.05)。 结论 任务导向性康复训练能促进脊髓损伤后局部神经回路可塑性变化,改善前肢运动功能。     

表皮生长因子受体抑制剂AG1478对大鼠脊髓损伤后突触再生微环境的影响

目的:研究表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂AG1478对脊髓损伤后突触再生微环境的影响。方法:SD大鼠60只随机分为AG1478组、对照组和假手术组。AG1478组和对照组采用重物坠落打击法建立大鼠脊髓损伤模型,假手术组仅暴露硬脊膜,不损伤脊髓;AG1478组在脊髓损伤局部给予AG1478治疗,对照组和假手术均给予二甲基亚砜作对照治疗。于术后14及28 d,观察各组大鼠脊髓损伤后磷酸化表皮生长因子受体(pEGFR)、硫酸软骨素蛋白多糖(CSPGs)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、生长相关蛋白43(GAP-43)的表达;于术后1 d及1、2、4、6、8周,观察各组大鼠神经功能恢复和体重变化的差异。结果:AG1478组pEGFR、CSPGs和GFAP的表达明显低于对照组(P<0.01),而GAP-43的表达明显高于对照组(P<0.01)。AG1478组BBB评分明显高于对照组(P<0.01),且体重较对照组增加更明显(P<0.05)。结论:大鼠脊髓损伤后局部应用AG1478治疗可明显改善损伤突触再生微环境,促进脊髓损伤神经功能的恢复。     

骨髓单个核细胞移植治疗急性脊髓损伤

目的：研究已证实，各种干细胞移植治疗损伤脊髓，都可以一定程度的恢复脊髓中枢神经的功能。但对骨髓单个核细胞移植治疗损伤脊髓以及长期效果的研究少见。利用大鼠抽取新鲜分离的骨髓单个核细胞，将其移植入脊髓损伤大鼠模型，评价脊髓功能恢复情况、神经再生和新生血管形成及长期预后效果。 方法：实验于2005—10／2006-04在上海第二医科大学发育生物学研究中心实验室完成。实验室级别：生物安全一级。①实验材料：8周龄SD雌性大鼠，体质量200～220g，清洁级，由中国科学院实验动物中心提供，实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法：从大鼠胫骨及股骨采集骨髓细胞，密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞备用。制作大鼠脊髓损伤动物模型，将造模成功22只大鼠随机分成2组：模型＋细胞组（n=11）：脊髓完全横断T9-10后，椎管内注射骨髓单个核细胞：模型＋DMEM组（n=11）：脊髓完全横断T9-10后在损伤邻近区注射DMEM。假手术组（n=9）：仅剪除T9-10棘突和椎板后，不损伤脊髓，逐层缝合。③实验评估：采用原位杂交和免疫组织化学技术检测移植细胞在宿主脊髓内的存活情况，BBB评分评估大鼠脊髓神经功能恢复情况。 结果：①假手术组在术后各时间点观察中评分无明显差异，属评分正常。模型＋DMEM组评分为0分，其脊髓功能无明显恢复。模型＋细胞组在2，4，6，8周脊髓功能处于逐渐恢复的过程。与模型＋DMEM组及假手术组比较，差异有显著性意义（P〈0．01）。②原位杂交和免疫组织化学检测显示，移植的细胞能在宿主体内存活，并嵌合到宿主脊髓组织表达血管标志。 结论：骨髓单个核细胞移植后8周，不仅能够在损伤脊髓内存活，而且还能分化新生血管，促进脊髓功能的恢复。     

兔微囊化许旺细胞移植对脊髓损伤大鼠髓鞘结构再生的影响

背景:许旺细胞对周围神经的轴突生长和髓鞘的形成具有重要作用,许旺细胞是否能在脊髓中发挥同样的作用引起了大家的关注,微囊化技术作为一种有效的免疫隔离手段,能有效保持许旺细胞的活性,以发挥许旺细胞修复脊髓的作用.目的:将海藻酸钠微囊包被兔许旺细胞后移植于大鼠脊髓损伤处,观察移植后髓鞘结构的变化.设计、时间及地点:完全随机分组,对照动物实验,于2005-03/2008-02在南昌大学基础医学院完成.材料:取成年家兔坐骨神经干,利用反复差速贴附法体外培养许旺细胞,制备许旺细胞悬液及微囊化许旺细胞悬液.方法:SD大鼠146只,建立T_(10)脊髓右半横断损伤模型,随机分为单纯损伤组44只,细胞移植组44只,微囊化细胞移植组44只,正常对照组14只.术后1,3,7,14,28 d,各组每时相取8只大鼠(正常对照组取2只)灌注固定,脊髓组织做石蜡切片,行苏木精-伊红染色、Loyez氏法髓鞘染色.另外,各组于2,8周时相点各取2只大鼠灌注,脊髓组织固定,Epon816包埋,醋酸铀和柠檬酸铝双染,电镜观察.主要观察指标:观察损伤周围组织的神经元数量及存活情况变化,损伤侧脊髓白质髓鞘的结构变化.结果:脊髓损伤后1,3 d各组损伤侧脊髓神经元变性坏死,髓鞘数量减少、结构松弛,但细胞移植组和微囊化细胞移植组较少见.7 d各组髓鞘数量减少,结构破坏,微囊化细胞移植组较轻.14 d神经元数量增多,胞体增大,以微囊化细胞移植组明显.28 d微囊化细胞移植组神经元逐渐恢复,髓鞘结构渐趋完整、数量增加,与单纯损伤组、细胞移植组比较差异有显著性意义(P<0.01).8周时,微囊化细胞移植组见大部分髓鞘修复,可见新生髓鞘.结论:微囊具有免疫隔离作用,微囊化兔许旺细胞可促进大鼠脊髓神经元修复和轴突髓鞘化.     

骨髓间充质干细胞移植后大鼠脊髓损伤处多唾液酸神经细胞黏附分子的表达

目的:观察骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤对多唾液酸神经细胞黏附分子表达的影响及意义。方法:实验于2004-06/2005-06在中国医科大学实验动物中心完成。随机选择4只大鼠作骨髓间充质细胞的分离与培养,骨髓间充质干细胞传4代后大约长至60%汇合时,吸弃培养基,加入5溴脱氧尿嘧啶标记培养基。36只大鼠分成3组制作脊髓横断损伤模型:骨髓间充质干细胞移植组、磷酸盐缓冲液组、空白对照组,每组12只。制作大鼠脊髓损伤模型,于伤后立即移植骨髓间充质干细胞。应用免疫组化法观察细胞移植后7,14,28d不同时间点移植细胞的存活情况,苏木精-伊红染色及常规链酶亲和素-生物素-过氧化酶复合物免疫组化法检测5溴脱氧尿嘧啶和多唾液酸神经细胞黏附分子的阳性细胞表达。结果:40只大鼠中36只制作脊髓横断损伤模型,6只因感染死亡,给予补足。①骨髓间充质干细胞移植组5溴脱氧尿嘧啶阳性细胞在移植后第7天可检测到,呈棕黄色的核标记,临近损伤区阳性细胞增多,在向头尾端迁移过程中阳性细胞逐渐减少,切片中可见最远迁移至距离损伤区1.5cm。磷酸盐缓冲液组及空白对照组均未见阳性细胞。②骨髓间充质干细胞移植组在移植术后第7天可于近端检测到多唾液酸神经细胞黏附分子阳性表达的细胞;磷酸盐缓冲液组可见少量阳性细胞;空白对照组未见阳性细胞。棕色颗粒定位于神经元的胞质和胞膜。移植术后第14天,骨髓间充质干细胞移植组脊髓切片的阳性神经细胞数开始增多,与磷酸盐缓冲液组比较,差异显著(16.0±2.6,6.0±2.3,P<0.05)。移植术后第28天,骨髓间充质干细胞移植组脊髓切片的阳性神经细胞逐渐减少。结论:骨髓间充质干细胞在移植后可明显促进多唾液酸神经细胞黏附分子的表达,是修复脊髓损伤并参与突触重建的重要机制。     

人胚胎嗅鞘细胞与神经干细胞联合移植修复大鼠脊髓全横断损伤的研究

目的：探索人胚胎嗅鞘细胞（hOECs）与神经干细胞（hNSCs）联合移植修复大鼠脊髓全横断损伤的可行性。方法：制作Wismr大鼠脊髓全横断模型，9-10d后，分别将取材自人胎脑的hOECs和hNSCs移植到脊髓损伤处（联合移植组），并设hOECs移植组、hNSCs移植组和对照组，移植术后第1、2、4、6、8、10周进行BBB运动功能评分．取材行荧光化学（Hoechst33342）和免疫组织化学染色（P75、NF-200、GFAP、Synaptophysin）观察。结果：术后4-10周．hNSCs组、hOECs组和联合移植组的BBB评分较对照组明显提高（P〈0．05），其中，联合移植组的运动功能改善更显著。免疫组化染色显示，hNSCs可以在损伤脊髓内存活10周以上。并分化为神经元或星形胶质细胞．联合移植组和hOECs组P75染色呈阳性反应。hOECs与hNSCs联合移植可促进神经突触的形成，恢复神经元之间的联系。结论：hOECs和hNSCs联合移植可促进脊髓全横断损伤大鼠神经突触的再生．改善其肢体运动功能。     

经静脉移植人脐血间充质干细胞在鼠损伤脊髓的表达及神经功能修复

目的:采用Brdu免疫组化标记技术观察经静脉移植人脐血间充质干细胞进入损伤脊髓组织的表达情况,探讨其促进损伤脊髓神经功能恢复的作用。方法:实验于2003-10/2005-03在苏州大学生物技术研究所干细胞实验室完成。①选取健康成年Wistar大鼠60只,随机数字表法分为假手术组、模型对照组、干细胞移植组,20只/组。脐血标本来自苏州大学附属第一医院产科,产妇及其家属均签署知情同意书。②自脐带抽取新鲜脐带血50～60mL,分离培养人脐血间充质干细胞,调整细胞浓度为5×109L-1待用。在细胞移植前48h,体外进行Brdu标记。③模型对照组、干细胞移植组大鼠采用重物压迫法建立脊髓损伤模型。麻醉后取俯卧位,于T11节段处行背后方正中切口,剥离椎旁肌,咬除T11棘突及椎板,显露4mm×5mm硬脊膜,将55g重砝码放置于硬脊膜表面1min,然后逐层缝合伤口。假手术组仅显露硬脊膜,然后缝合伤口。④造模后5d,干细胞移植组大鼠自后肢大隐静脉缓缓注入人脐血间充质干细胞悬液0.2mL～0.3mL(1×106个)。模型对照组、假手术组给予等量生理盐水。⑤分别于细胞移植后1d、1,2,3周,采用BassoBeatlieBresnahan(BBB)评分法和斜板试验法测定各组神经功能情况。于细胞移植后1,3周制作冰冻切片,检测各组脊髓组织内脐血间充质干细胞的分布情况。结果:①神经功能检测结果:脊髓损伤细胞移植后3周内,模型对照组、干细胞移植组大鼠后肢运动功能均有所恢复,但干细胞移植组恢复较快,于术后1周BBB评分和斜板试验结果即明显优于模型对照组[(10.71±6.24),(5.13±3.36)分,t=2.39,P<0.05;(51.67±5.22),(46.63±3.72)度,t=3.39,P<0.01],并维持至术后3周[(17.29±4.03),(11.25±5.01)分,t=3.89,P<0.01;(65.77±8.06),(57.05±4.61)度,t=4.07,P<0.01]。②脊髓组织中人脐血干细胞的鉴定:假手术组、模型对照组脊髓组织中未见Brdu阳性表达区。干细胞移植组于移植后1周脊髓损伤区可见大量棕褐色Brdu阳性表达的人脐血间充质干细胞存在,并持续至移植后3周,而非损伤区则始终无阳性表达。结论:Brdu对脐血间充质干细胞具有良好的标记作用,经静脉移植的人脐血间充质干细胞能够进入脊髓损伤区,并可以促进损伤脊髓神经功能的修复。