下调胰岛素样生长因子抑制miR-767-5p的表达对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间充质转化的影响

目的 研究抑制miR-767-5p对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间充质转化（EMT）的影响。方法 体外培养乳腺癌细胞，将miR-767-5p inhibitor和inhibitor-NC转染到乳腺癌细胞中。细胞分为3组：空白对照组（Control组），miR-767-5p inhibitor组和inhibitor-NC组，采用CCK-8法、Transwell法、划痕实验检测miR-767-5p抑制剂对乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。Western blot检测迁移相关蛋白基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9的表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-767-5p和胰岛素样生长因子-1(IGF1)的靶向结合作用。RT-qPCR和Western blot实验检测IGF1 mRNA和蛋白的表达水平。采用Western blot检测EMT相关蛋白的表达水平。结果 CCK-8实验结果显示，与Control组和inhibitorNC组相比，miR-767-5p inhibitor组显著抑制MCF-7细胞的增殖（P <0.05）。Transwell实验结果表明，与Contr...     

槐耳颗粒对索拉非尼耐药的肝细胞癌细胞凋亡的影响研究

目的 探讨槐耳颗粒对索拉非尼耐药的肝细胞癌(HCC)细胞生长的抑制作用及其分子机制。方法 利用梯度浓度槐耳颗粒处理HCC细胞,分析槐耳颗粒对索拉非尼耐药的HCC细胞增殖、迁移和侵袭的效果。采用生物信息学手段分析微小RNA-31-5p(miR-31-5p)与sprouty相关EVH1域蛋白1(SPRED1)的可能互作关系。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测HCC细胞中miR-31-5p、SPRED1的表达;采用CCK-8、克隆形成、划痕愈合、Transwell以及流式细胞术实验分别检测细胞活力、增殖、迁移、侵袭和凋亡;采用RNA免疫沉淀(RIP)实验和双荧光素酶实验验证miR-31-5p与SPRED1的结合关系。结果 槐耳颗粒可以显著抑制索拉非尼耐药的HCC细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡。生物信息学分析发现miR-31-5p在HCC中高表达,而槐耳颗粒可以下调miR-31-5p的表达,抑制索拉非尼耐药的HCC细胞的增殖和转移,并诱导细胞凋亡;miR-31-5p可靶向抑制SPRED1的表达。SPRED1在HCC中表达下调,过表达SPRED1可以逆转miR-31-5p过...     

lncRNA PCAT19靶向miR-769-5p促进口腔鳞癌HSC3细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探讨lncRNA PCAT19对口腔鳞癌HSC3细胞增殖、迁移和侵袭的影响及潜在的分子机制。方法 收集45例口腔鳞癌患者癌组织和癌旁组织，qRT-PCR法检测组织中PCAT19和miR-769-5p表达。体外培养HSC3细胞，转染PCAT19小干扰RNA或miR-769-5p模拟物、或共转染PCAT19小干扰RNA与miR-769-5p抑制剂后，CCK-8法和单克隆实验检测细胞增殖；划痕实验检测细胞迁移；Transwell实验检测细胞侵袭；蛋白质印迹法检测细胞中E-cadherin和N-cadherin蛋白表达；双荧光素酶报告基因实验验证PCAT19和miR-769-5p的调控关系。结果 口腔鳞癌组织中PCAT19表达高于癌旁组织，miR-769-5p表达低于癌旁组织（P <0.05）。干扰PCAT19或过表达miR-769-5p后，HSC3细胞OD值、克隆形成数、划痕愈合率、侵袭数、N-cadherin蛋白表达降低，E-cadherin蛋白表达升高（P <0.05）。PCAT19靶向负调控miR-769-5p。下调miR-769-5p逆转了干扰PCAT19对HSC3...     

LncRNA OIP5-AS1靶向miR-511-3p抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响

目的研究LncRNA OIP5-AS1对肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响以及作用机制。方法采用qRT-PCR法检测OIP5-AS1和miR-511-3p的表达量;采用MTT法检测细胞增殖;采用Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭;蛋白免疫印迹法检测CyclinD1、MMP-2蛋白表达量;双荧光素酶报告实验检测OIP5-AS1和miR-511-3p的靶向关系。结果与正常细胞肺上皮细胞BEAS-2B相比,肺癌细胞A549、NCI-H23和NCI-H2170中OIP5-AS1表达显著增加,miR-511-3表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);敲低OIP5-AS1或者过表达miR-511-3p显著抑制了肺癌细胞A549的增殖、迁移和侵袭;OIP5-AS1可以靶向负调控miR-511-3p的表达,抑制miR-511-3p可以部分回复敲低OIP5-AS1对肺癌细胞A549的增殖、迁移和侵袭的影响(P<0.05)。结论 LncRNA OIP5-AS1通过靶向调控miR-511-3p的表达抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-195-5p过表达对前列腺癌PC3细胞增殖、侵袭的影响

目的探究miR-195-5p过表达对前列腺PC3细胞增殖和侵袭的影响。方法采用miR-195mimic转染前列腺癌PC3细胞,RT-PCR检测miR-195-5p和血管内皮生长因子A(vascular endothelial cell growth factor A,VEGFA)的表达,预测miR-195-5p和VEGFA的靶向关系,采用双荧光素酶实验证明miR-195-5p和VEGFA的靶向关系,利用免疫蛋白印迹检测VEGFA表达情况,CCK8方法检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果 miR-195 mimic能促进PC3细胞miR-195-5p的表达水平,降低VEGFA的mRNA水平、VEGFA野生质粒的荧光素酶活性、PC3细胞增殖速度和细胞侵袭数,且miR-195-5p有VEGFA的结合位点,pc-VEGFA能升高PC3细胞VEGFA的蛋白表达水平,减弱miR-195 mimic对VEGFA表达的抑制作用,显著促进细胞增殖和侵袭能力,同时减弱miR-195 mimic对细胞增殖和侵袭能力的抑制作用。结论 miR-195-5p通过下调VEGFA的表达以抑制前列腺癌PC3细胞增殖和侵袭能力。     

miR-320a靶向FOXQ1抑制结肠癌细胞增殖和侵袭的分子机制

目的探讨miR-320a在人结肠癌细胞中的生物学行为,并初步阐明miR-320a对癌基因FOXQ1的靶向调控机制。方法采用qRT-PCR检测结肠癌细胞中miR-320a和FOXQ1的表达;用miR-320a mimics转染结肠癌细胞株HTC-116;采用CCK-8法、克隆形成试验检测miR-320a对结肠癌细胞增殖的影响,采用Transwell小室分析miR-320a对结肠癌细胞侵袭能力的影响;双荧光素酶报告基因和Western Bloting验证miR-320a对FOXQ1的靶向调控作用。结果 QRT-PCR结果显示miR-320a mimics明显上调miR-320a在HCT-116细胞中的表达;CCK-8法和克隆形成试验显示上调miR-320a表达显著抑制结肠癌细胞增殖;Transwell试验表明上调miR-320a可抑制HCT-116结肠癌细胞侵袭;蛋白印迹实验显示上调miR-320a降低FOXQ1蛋白在结肠癌细胞中的表达,双荧光素酶报告基因试验进一步确认miR-320a可以调控FOXQ1的表达。结论过表达miR-320a可以抑制结肠癌细胞增殖、侵袭,这种抑制作用是通过靶向调控FOXQ1来实现的。     

miR-135b-5p调控TIMP3的表达对鼻咽癌细胞迁移和侵袭的影响

目的探讨miR-135b-5p对鼻咽癌细胞增殖、侵袭、转移的影响及其可能的机制。方法使用Lipofectamine-2000将miR-135b-5p siRNA转染至SUNE-1细胞,并将NC siRNA转染至SUNE-1细胞中作为对照组。实时定量PCR检测NP69、CNE-1、SUNE-1、C666-1细胞系及鼻咽癌组织中miR-135b-5p及TIMP3的表达水平。双荧光素酶报告基因检测miR-135b-5p及TIMP3的调控关系,免疫蛋白印迹实验检测TIMP3蛋白的表达含量,CCK-8实验检验SUNE-1细胞的增殖能力,Transwell实验检验SUNE-1细胞的迁移及侵袭能力。miR-135b-5p的表达与鼻咽癌(NPC)患者的临床病理学参数之间的关联。结果 miR-135b-5p在CNE-1、SUNE-1、C666-1细胞系及鼻咽癌组织中表达含量均上升,并且在SUNE-1细胞系中其的表达水平最低;双荧光素酶报告基因结果显示:抑制miR-135b-5p表达可显著增高SUNE-1细胞中TIMP3的荧光素酶活性;抑制miR-135b-5p表达后,TIMP3蛋白的表达相应上调,同时削弱了SUNE-1细胞增殖、迁移、侵袭能力。同时收集整理NPC患者相关临床资料进行对比分析,结果发现miR-135b-5p的表达与NPC的病理分期相关以及淋巴结转移情况呈正相关。结论抑制miR-135b-5p的表达可抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移和侵袭,并靶向上调TIMP3的表达。     

miR-625靶向HMGA1对食管癌细胞生物学行为的影响及机制

目的分析miR-625靶向高迁移率族蛋白A1(HMGA1)对食管癌细胞生物学行为的影响及机制。方法收集2018年3月—2019年3月经手术切除的食管癌组织及癌旁组织(距癌组织≥5 cm)标本,体外培养食管癌细胞系(KYSE150、KYSE30、ECA109、EC9706)和正常食管上皮细胞HET-1A,采用RT-qPCR检测不同组织和细胞中miR-625的表达。将miR-625 mimic、miR-625 inhibitor转染ECA109细胞,采用CCK-8实验、流式细胞仪、Transwell小室实验和划痕实验检测miR-625对ECA109细胞增殖、周期、侵袭和迁移的影响,Western blot检测增殖、侵袭和迁移相关蛋白的表达。经生物信息学软件在线预测miR-625靶基因,通过RT-qPCR、Western blot及双荧光素酶报告基因检测验证靶向关系。同时干预miR-625和HMGA1,检测ECA109细胞增殖、周期、侵袭和迁移。结果 miR-625相对表达量,食管癌组织低于癌旁组织,食管癌细胞系KYSE150、KYSE30、ECA109、EC9706低于正常食管上皮细胞HET-1A(P0.05)。与mimic NC组比较,miR-625 mimic组miR-625相对表达量、处于G1期细胞比例及p21、E-cadherin表达升高,细胞增殖、侵袭、迁移能力及处于S期细胞比例、Cyclin D1、N-cadherin、Vimentin表达降低(P0.05);miR-625 inhibitor组可逆转上述作用(P0.05)。miR-625与HMGA1 3'端非编码区存在结合位点。与mimic NC组比较,miR-625 mimic组细胞中相对荧光素酶活性和HMGA1表达降低(P0.05)。与pcDNA3.1-HMGA1组比较,miR-625+HMGA1组HMGA1表达及细胞增殖、侵袭、迁移能力降低,处于G1期细胞比例升高(P0.05)。结论 miR-625在食管癌中低表达,miR-625过表达可靶向HMGA1抑制食管癌细胞的增殖、侵袭与迁移。     

miRNA-192-5p在多发性骨髓瘤中的表达水平及其调控机制研究

目的探讨miR-192-5p在多发性骨髓瘤中的表达水平及其调控机制。方法选取骨髓瘤细胞株U266作为研究对象,利用荧光定量PCR检测多发性骨髓瘤细胞中miR-192-5p的表达水平;使用生物信息学网站预测miR-192-5p潜在靶基因USP1并利用双荧光素酶报告实验验证其靶向关系;利用细胞转染实验对多发性骨髓瘤细胞株进行miR-192-5p mimics、miR-192-5p inhibitor及相关对照组的细胞转染,采用CCK-8法和流式细胞仪分别检测转染后细胞的增殖和凋亡情况;利用Western blot检测转染后细胞中USP1蛋白表达水平。结果qRT-PCR结果显示,转染后多发性骨髓瘤细胞中miR-192-5p表达水平低于正常骨髓细胞(P<0.01);CCK-8细胞增殖实验、细胞划痕实验、Transwell体外侵袭转移实验和流式细胞仪检测实验结果显示,过表达miR-192-5p抑制骨髓瘤细胞的增殖、迁移、侵袭,促进骨髓瘤细胞的凋亡;靶基因预测及验证实验结果显示USP1是miR-192-5p的靶基因,miR-192-5p的表达可以显著降低骨髓瘤细胞中USP1蛋白的表达。结论miR-192-5p在多发性骨髓瘤中可能作为抑癌基因发挥作用,通过靶向作用于USP1抑制多发性骨髓瘤的发展。     

长链非编码RNA KCNQ1OT1靶向调控miR-218-5p对结肠癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨长链非编码RNA KCNQ1重叠转录物1(lncRNA KCNQ1OT1)调控micro RNA-218-5p(miR-218-5p)对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响及其可能机制。方法:收集2019年1月至4月在宜昌市第一人民医院行根治性结肠癌切除术的30例肿瘤组织和相应的癌旁正常组织。采用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测lncRNA KCNQ1OT1,miR-218-5p在结肠癌组织、癌旁正常组织、5种结直肠癌细胞系(HCT-116,SW480,SW620,DLD-1,HT29)及正常结肠上皮细胞系CCD841中的表达水平;干预结肠癌细胞系HCT-116和SW480中lncRNA KCNQ1OT1和miR-218-5p的表达,采用CCK-8法检测结肠癌细胞的增殖,Transwell法检测结肠癌细胞的迁移和侵袭;采用流式细胞术检测细胞周期分布及细胞凋亡率;用Starbase数据库预测lncRNA KCNQ1OT1的靶向miRNA,并用qRT-PCR、双荧光素酶报告基因法验证lncRNA KCNQ1OT1与miR-218-5p的靶向关系。结果:与癌旁正常组织和正常结肠上皮细胞系相比,结直肠癌组织和结直肠癌细胞系中lncRNA KCNQ1OT1的表达水平显著上调,miR-218-5p的表达显著下调(P<0.05);过表达lncRNA KCNQ1OT1促进SW480细胞的增殖、迁移和侵袭,且减少处于G0/G1期的细胞比率,抑制细胞凋亡;在结直肠癌组织中lncRNA KCNQ1OT1的表达水平与miR-218-5p的表达水平呈负相关(r^2=0.437,P<0.001);双荧光素酶报告基因法分析证实lncRNA KCNQ1OT1能特异性结合miR-218-5p,并能降低其表达;过表达miR-218-5p抑制HCT-116细胞的增殖、迁移和侵袭,增加处于G0/G1期的细胞比率,促进细胞凋亡,且miR-218-5p的表达可以抑制由lncRNA KCNQ1OT1过表达引起的细胞增殖、迁移和侵袭能力的增加及凋亡的减少。结论:LncRNA KCNQ1OT1通过靶向调控miR-218-5p表达影响结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭,促进结直肠癌的发展。     

Retracted Article: MicroRNA-1271 modulates hepatitis B virus replication,cell proliferation and apoptosis in hepatitis B virus-related hepatocellular carcinoma by targeting SIRT1

Chronic hepatitis B virus (HBV) infection is a leading cause of hepatocellular carcinoma (HCC). Certain studies have revealed that microRNAs play crucial roles in HBV-related HCC. The aim of this study was to investigate the effects of microRNA-1271 (miR-1271) on HBV replication, cell proliferation and apoptosis in HBV-related HCC. The expression of HBV DNA and miR-1271 was detected by quantitative real time-polymerase chain reaction (qRT-PCR). The mRNA and protein levels of SIRT1 were detected by qRT-PCR and western blot analysis, respectively. HBV replication was assessed by the expression of HBV DNA and the levels of HBsAg and HBeAg. Cell proliferation was assessed by cell counting kit-8 (CCK-8) and 5-bromo-2-deoxyuidine (BrdU) assay, and apoptosis was evaluated by flow cytometry assay, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and the activity of caspase-3. The relationship between miR-1271 and SIRT1 was predicated by online software and confirmed by dual-luciferase reporter assay, RNA immunoprecipitation (RIP) and pull-down assay. We first found that the expression of miR-1271 was downregulated and SIRT1 was upregulated in both HBV-related HCC tissues and cells. Overexpression of miR-1271 inhibited HBV replication and cell proliferation whilst promoting apoptosis in HBV-related HCC cells. Subsequently, SIRT1 was identified as a target of miR-1271. Moreover, overexpression of SIRT1 reversed the effects of miR-1271 overexpression on HBV replication, cell proliferation and apoptosis in HBV-related HCC cells. In conclusion, our study demonstrated that miR-1271 inhibited HBV replication and proliferation and promoted apoptosis of HBV-related HCC cells via targeting SIRT1, which might contribute to the diagnosis and therapy of HBV-related HCC.

MiR-1271 suppressed HBV-related HCC cells development by downregulating SIRT1.     

miR-203a-3p 靶向GLS1 调控HCC 细胞增殖、迁移、侵袭的机制研究

目的　探究微小核糖核酸（microRNAs, miRNA, miR）-203a-3p 对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其潜在分子机制。方法　采用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRTPCR）检测HCC 细胞、人正常肝细胞以及临床HCC 组织中miR-203a-3p 相对表达;采用细胞增殖实验、细胞划痕实验和Transwell 实验分别检测miR-203a-3p 对HCC 细胞增殖、迁移、侵袭的影响;生物信息学网站预测miR-203a-3p 的潜在靶基因（GLS1）,双荧光素酶实验进行验证;探究HCC 细胞对谷氨酰胺的依赖性及抑制谷氨酰胺酶1(glutaminase 1,GLS1) 对HCC 细胞增殖、迁移、侵袭的影响;蛋白免疫印迹（Western blot）实验检测Wnt/β-catenin 信号通路关键蛋白β-catenin,p-GSK-3β 和c-Myc 表达。结果　HCC 癌组织中miR-203a-3p（0.32±0.07）表达明显低于癌旁正常组织（1.02±0.03）,差异有统计学意义（t ＝ 41.105,P ＜ 0.001）;HCC 细胞HepG2（0.34±0.05）,HCCLM3（0.58±0.06）,Huh7（0.43±0.05）,Hep3B（0.29±0.04）中miR-203a-3p 相对表达水平明显低于人正常肝细胞LO2（1.01±0.02）中miR-203a-3p 表达,差异有统计学意义（F ＝ 119.080,P ＜ 0.001）。与Blank 组相比,miR-203a-3p 过表达组HCC细胞增殖（0.61±0.05 vs 1.24±0.06）, 迁移率（21.43%±2.01% vs 60.22%±3.14%） 及侵袭能力（76.54±13.56 vs221.06±16.54）均明显降低,差异有统计学意义（t ＝ 14.849,13.900,10.562,均P ＜ 0.001）。GLS1 是miR-203a-3p的靶基因,miR-203a-3p 靶向负调控GLS1 表达。HCC 细胞中GLS1 高表达呈现高酶活性,HCC 细胞对谷氨酰胺存在明显依赖性。GLS1 抑制组α-KG,谷氨酸水平均较Blank 组和siRNA-NC 组明显降低,差异有统计学意义（F ＝ 64.754,35.627,均P ＜ 0.001）。GLS1 抑制组细胞增殖（0.59±0.04）、迁移率（30.15%±1.02%）和侵袭能力（69.59±15.74）较Blank 组明显降低（1.29±0.07,59.67%±1.45%,202.14±13.52）,差异均有统计学意义（t ＝ 16.499,16.278,11.215,均P ＜ 0.001）。miR-203a-3p 过表达和GLS1 表达抑制明显抑制了Wnt/β-catenin 信号通路关键蛋白β-catenin,p-GSK-3β 和c-Myc 的表达,差异均有统计学意义（t ＝ 11.129 ～ 28.213,均P ＜ 0.001）。转染GLS1 可逆转miR-203a-3p 对HCC 细胞生物学行为及Wnt/β-catenin 信号通路关键蛋白表达的抑制作用。结论　HCC 中miR-203a-3p 显著低表达,其过表达能够抑制HCC 细胞的增殖、迁移和侵袭,可能与GLS1 调控谷氨酰胺代谢及miR-203a-3p 靶向GLS1调控Wnt/β-catenin 信号通路活性有关。     

破骨细胞外泌体miR-183-5p靶向程序性细胞死亡因子4促进肺腺癌细胞增殖及侵袭

目的 探讨破骨细胞来源外泌体(osteoclast-derived exosomes)中miR-183-5p靶向程序性细胞死亡因子4(programmed cell death 4, PDCD4)对肺腺癌侵袭增殖的影响。方法 利用RAW264.7细胞诱导分化破骨细胞并提取外泌体,透射电镜及粒度仪对其进行鉴定。将外泌体与A549细胞共培养,通过CCK8法检测细胞活性,观察miR-183-5p对A549细胞增殖的作用;检测A549细胞周期分布,观察miR-183-5p对细胞周期的作用;利用Transwell侵袭实验,观察miR-183-5p对A549细胞侵袭能力的作用。Western blotting检测PDCD4、周期蛋白D1(Cyclin D1, CCND1)和周期蛋白依赖性激酶4(cyclin dependent kinase, CDK4)相对表达,观察miR-183-5p靶蛋白表达情况及其对A549细胞侵袭、增殖的影响。结果 外泌体呈边缘透亮清晰的椭圆形囊泡状结构,粒径分布范围30-200nm左右,荧光探针发现外泌体能够较快的被肺腺癌细胞A549摄取,并且共培养后A549细胞中miR-183-5p表达水平明显增高(p<0.01)。miR-183-5p高表达可以明显促进A549细胞的侵袭、细胞增殖和周期(p<0.05)。A549细胞中miR-183-5p过表达后,PDCD4表达降低,同时CCND1、CDK4也高表达(p<0.05)。结论 破骨细胞来源的外泌体与A549细胞共培养可提高细胞中miR-183-5p的表达,miR-183-5p通过靶向抑制PDCD4表达可促进肺腺癌细胞侵袭、增殖和迁移能力。     

干扰lncRNAXIST通过上调miR-429抑制涎腺腺样囊性癌细胞生长并提高顺铂敏感性

目的 探究长链非编码RNA（lncRNA）X非活性特异转录本（XIST）对涎腺腺样囊性癌（SACC）细胞生长及顺铂（DDP）化疗敏感性的调节作用及其机制。方法 培养人SACC细胞系SACC-83、腺样囊性癌-2（ACC-2）和正常下颌下腺细胞HSG,建立DDP耐药SACC-83/DDP细胞。使用脂质体2000转染试剂分...     

miR-27a通过调控Sprouty2促进胰腺癌细胞PANC-1的生长

目的探讨miR-27a在胰腺癌细胞生长过程中的作用及相关机制。方法应用RT-PCR检测胰腺癌组织中miR-27a的表达水平;应用CCK-8生长曲线和软琼脂克隆形成实验检测miR-27a对胰腺癌细胞PANC-1生长能力的影响;应用双荧光素酶报告基因实验和Westernblot筛选miR-27a的靶基因。结果 (1)相比较于癌旁正常胰腺组织,胰腺癌组织中miR-27a表达显著上调;(2)抑制胰腺癌细胞PANC-1内源性miR-27a能够显著下调癌细胞的生长活性;(3)miR-27a能够直接调控Sprouty2基因3'UTR中的MRE序列;(4)抑制PANC-1细胞内源性miR-27a能够显著上调Sprouty2蛋白35%。结论 miR-27通过调控胰腺癌细胞PANC-1中Sprouty2蛋白表达发挥癌基因功能。     

MicroRNA-199a-3p在肾癌中的表达及作用

目的检测microRNA-199a-3p（miR-199a-3p）在肾癌细胞株和组织中的表达情况并探究miR-199a-3p在肾癌细胞中的作用。方法利用实时定量RT-PCR检测miR-199a-3p在肾癌细胞和组织中的表达水平;利用miR-199a-3p模拟物转染肾癌细胞786-0上调miR-199a-3p后,通过CCK-8、克隆形成、Transwell以及细胞周期检测来探究其在肾癌细胞中的作用。结果 miR-199a-3p在肾癌细胞中明显低表达,在78%（14/18）的肾癌组织中亦明显低表达;上调miR-199a-3p可显著抑制肾癌细胞的增殖、存活和侵袭并能诱导细胞周期G1期阻滞。结论我们的研究显示在肾癌中miR-199a-3p明显低表达并参与肾癌的发生、发展,这表明miR-199a-3p具有作为肾癌诊断和治疗靶点的潜能。     

miR-505-3p 对胃癌细胞增殖、克隆形成及迁移、侵袭的影响及机制研究

目的 检测胃癌组织及细胞中miR-505-3p 表达,并探究其对胃癌细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭的影响及潜在分子机制。方法 利用实时荧光定量PCR 实验（qRT-PCR）检测胃癌组织、癌旁正常组织及胃癌细胞和人正常胃黏膜细胞中miR-505-3p 相对表达;构建miR-505-3p 过表达、c-MYC 过表达和敲低表达细胞系,通过CCK-8 法,克隆斑点形成实验、Transwell 侵袭/ 迁移实验检测miR-505-3p 和c-MYC 对胃癌细胞增殖、克隆形成及迁移、侵袭的影响;裸鼠皮下成瘤实验验证miR-505-3p 对裸鼠肿瘤生长的影响;双荧光素报告实验验证miR-505-3p 和c-MYC 的靶向关系,并探究其两者间的表达调控作用;Western blot 检测miR-505-3p 和c-MYC 对Wnt/β-catenin 通路关键蛋白表达的影响。结果 临床胃癌组织中miR-505-3p 表达水平较正常癌旁组织显著下调（0.92±0.37 vs 1.74±0.59）,差异有统计学意义（t=3.723,P ＜ 0.01）。胃癌细胞系MGC803（1.12±0.35）,AZ521（2.31±0.24）和HGC-27（2.28±0.43）中miR-505-3p 相对表达较人正常胃黏膜细胞系GES1（4.62±0.79）明显降低,差异有统计学意义（F=26.109,P ＜ 0.001）。miR-505-3p 过表达组细胞增殖（0.92±0.27）、克隆形成（51.67±21.75）、迁移（43.25±15.47 ）、侵袭（38.53±14.76）能力较NC组（1.85±0.34,128.36±36.42,100.08±2.12,100.12±1.94）明显降低,差异均有统计学意义（t=3.131 ～ 7.166,均P ＜ 0.05）;miR-505-3p 过表达抑制了裸鼠生长。c-MYC 是miR-505-3p 的靶基因,miR-505-3p 靶向负调控c-MYC。c-MYC 过表达组细胞增殖（2.72±0.68）、迁移（147.15±20.36）、侵袭（145.46±22.73）能力较NC 组（1.85±0.34,100.08±2.12,100.12±1.94）明显增高,差异均有统计学意义（t=2.455 ～ 4.456,均P ＜ 0.05）;c-MYC 过表达可逆转miR-505-3p 对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。miR-505-3p 过表达组Wnt（0.46±0.07 ）,β-catenin（0.50±0.05）蛋白相对表达水平明显低于NC 组（1.01±0.02,1.02±0.02）,差异均有统计学意义（t=8.139,7.342,均P ＜ 0.001）;过表达c-MYC 能够逆转miR-505-3p 对Wnt 和β-catenin 蛋白表达的抑制作用。结论 胃癌中miR-505-3p 显著低表达,其可通过靶向调控c-MYC 表达介导Wnt/β-catenin 信号通路激活进而发挥作用参与胃癌的发生发展过程。     

miR-34a通过调控YY1抑制肾癌细胞的增殖及侵袭

目的探讨miR-34a在肾癌组织中表达、miR-34a对人肾癌ACHN细胞增殖和侵袭的影响及调控机制。方法实时聚合酶链反应(PCR)检测miR-34a在20例肾癌及癌旁组织中的表达;采用脂质体转染法将miR-34a mimics转染入肾癌ACHN细胞中,试验分空白对照组、阴性对照组、miR-34a mimics转染组。实时PCR检测转染24 h后miR-34a表达量;噻唑蓝(MTT)试验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;Transwell及Matrigel检测细胞侵袭能力;实时PCR和蛋白质印迹(Western blot)技术检测转染后转录因子YY1表达水平。结果与癌旁组织相比,20例癌组织中miR-34a平均表达量为1.06±0.67,显著低于癌旁组织(1.62±0.83,P<0.01);转染后24 h,miR-34a mimics转染组的miR-34a表达量为157.04±13.01,较阴性对照组显著上调(P<0.01);miR-34a mimics转染组细胞增殖能力显著降低(P<0.01),细胞生长被阻滞在G0/G1期;细胞侵袭能力明显减弱(P<0.01);转染miR-34a mimics后YY1基因在mRNA表达无明显变化(P>0.05),蛋白水平下调。结论 miR-34a在肾癌中低表达,可能与肾癌的发生有关;miR-34a调控YY1的表达可能是抑制肾癌细胞生物活性的重要机制之一。     

Hsa-miR-145对人三阴性乳腺癌细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨Hsa-miR-145对人三阴性乳腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响,并初步分析其影响三阴性乳腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的可能机制.方法 运用脂质体介导的转染方法将miR-145阻遏物(miR-145 inhibitors)转染人三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231,以inhibitor negative control(inhibitor NC)作为阴性对照,通过MTT法和Transwell侵袭实验检测细胞的增殖能力和侵袭力;采用Transwell迁移实验及划痕试验检测细胞的迁移能力;利用生物信息学方法预测miR-145的靶基因,并对其靶基因进行基因功能分析.结果 (1)miR-145 inhibitors组细胞增殖活性明显高于inhibitor NC组(P<0.05);(2)划痕后miR-145 inhibitors组细胞迁移能力比inhibitor NC组明显增强(P<0.05);(3)Transwell侵袭及迁移实验均显示转染miR-145 inhibitors后,MDA-MB-231细胞的侵袭及迁移能力明显增强(P<0.01,P<0.05);(4)生物信息学方法预测miR-145的靶基因中,部分发挥了促进细胞增殖、侵袭及迁移的生物学功能.结论 (1)miR-145对人三阴性乳腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力可能存在负性调控作用;(2)miR-145可能通过多种靶基因发挥其对肿瘤的调控作用.