冷处理对单增李斯特菌生物膜形成能力的影响

目的研究冷处理对不同食品来源及不同血清型的单增李斯特菌生物膜形成能力的影响,为食品中单增李斯特菌的防治提供基础信息。方法使用结晶紫染色法对单增李斯特菌食品分离株在37 ℃、4 ℃冷胁迫及4 ℃冷适应条件下生物膜形成能力进行测定,并对代表菌株的生物膜相关基因hpt、luxS及sigB进行基因序列分析及表达量差异分析。结果37 ℃条件下,1/2c血清型单增李斯特菌生物膜形成能力较强,不存在生物膜形成能力弱株。 37 ℃条件下的生物膜形成能力强组（3株）以及中组（10株）菌株中,9株菌的hpt基因发生非同义突变。 冷处理条件下4株中组菌株中,1株菌的sigB基因表达量增多,3株菌的hpt基因表达量增多。结论单增李斯特菌生物膜形成能力与血清型相关,1/2c血清型菌株在37 ℃条件下具有较强生物膜形成能力。 hpt基因突变株在37 ℃下具有较强生物膜形成能力,冷处理使得病原菌生物膜形成能力降低,但hpt及sigB基因的过量表达会增强4 ℃条件下单增李斯特菌生物膜形成能力。     

单增李斯特菌1/2c血清型菌株生物膜形成能力的研究

目的 比较在不同压力条件下,单增李斯特菌1/2c血清型与其他血清型菌株生物膜形成能力,以了解单增李斯特菌1/2c血清型菌株的环境适应能力。方法 采用96孔培养板结晶紫染色法,检测不同温度、不同培养基、不同pH值条件下,单增李斯特菌1/2c血清型与其他血清型菌株的生物膜形成能力。结果 在25 ℃、TSB、10%TSB和pH 7~8条件下,1/2c血清型菌株生物膜形成能力强于其他血清型菌株(P0.05)。结论 在室温、富营养/低营养条件、中性略偏碱性环境中单增李斯特菌1/2c血清型菌株的生物膜形成能力强于其他血清型菌株,提示可能是食源性单增李斯特菌1/2 c血清型菌株分离率较高的原因之一,为该菌的预防控制措施提供了参考依据。     

萘啶酸耐药甲型副伤寒沙门菌gyrA基因突变的研究

目的研究绍兴地区萘啶酸耐药甲型副伤寒沙门菌gyrA基因突变情况。方法对52株甲型副伤寒沙门菌进行基因扩增,PCR产物纯化后进行双向测序,用OMIGA2.0软件对DNA回旋酶A亚单位序列进行分析比对,确定gyrA基因突变。结果萘啶酸耐药甲型副伤寒沙门菌在gyrAQRDR区域氨基酸残基83或87位点发生点突变;其中83位点发生突变51株,87位点发生突变1株;未发现两个位点同时突变菌株;gyrAQRDR区域其他部位未发现突变。结论gyrA基因83位点突变与甲型副伤寒沙门菌耐萘啶酸有直接关系,gyrA基因87位点单突变也可导致对萘啶酸耐药;绍兴地区近两年耐萘啶酸甲型副伤寒沙门菌菌株主要为83位点TCC→TTC(Ser→Phe)突变。     

单增李斯特菌前噬菌体的分布及遗传特征分析

目的 了解单增李斯特菌基因组中前噬菌体分布状况和基因组特征。方法 自公共数据库GenBank获得275株单增李斯特菌的全基因组序列，运用前噬菌体在线预测软件（PHASTER）对其携带的前噬菌体进行预测。并对预测的完整前噬菌体进行聚类分析、插入位点识别、噬菌体整合酶多态性分析。此外，通过比对耐药基因和毒力基因数据库，搜寻前噬菌体可能携带的耐药基因和毒力基因。结果 本研究发现99.3%的单增李斯特菌基因组含有前噬菌体序列，155株（56.4%）单增李斯特菌基因组预测到229个完整前噬菌体序列。所有完整前噬菌体聚集成4个群，进一步划分为10个簇。前噬菌体分群与其宿主菌所属家系具有较强的相关性，但与宿主菌来源无关。本研究识别到10个前噬菌体插入位点，其中lmot17(tRNAArg),lmot11(tRNASer)和comK是3个最常见的插入位点，lmo1263为新发现的插入位点。相同插入位点前噬菌体所携带整合酶氨基酸序列高度相似。此外，研究发现部分家系Ⅲ菌株和1株家系Ⅰ菌株的噬菌体中携带毒力相关蛋白E编码基因（virE），所有完整前噬菌体中未发现耐药基因。结论 单增李斯特菌普遍携带前噬菌体，...     

北京市昌平区食源性单增李斯特菌特征分析

目的 了解北京市昌平区食源性单增李斯特菌（Lm）的毒力基因携带情况、抗生素敏感性及分子特征。方法 对2010－2016年12类食品中分离的22株Lm进行血清型、毒力基因、抗生素敏感性、多位点序列分型（MLST）和脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析。结果 22株Lm分为5种血清型（以1/2c、3a血清型为主）;19种毒力基因携带谱（T1～T19）,毒力基因阳性数为6～12个;对氨苄西林、青霉素、美罗培南、复方新诺明、万古霉素和环丙沙星敏感,出现对四环素、红霉素耐药菌株;分为8个序列型（ST）（包括7个新型STA1～STA7）,STA3为主要型别;分为17种PFGE带型,其相似系数为63.5%～100.0%,PTⅠ为主要PFGE带型。结论 昌平区食源性Lm以1/2c、3a血清型为主,STA3为主要型别,PTⅠ为主要PFGE带型,其毒力基因的携带具有差异性,出现对四环素、红霉素耐药株,为食源性Lm的研究提供了参考。     

单增李斯特菌动物源性食品分离株对苯扎氯铵的抗性及分子特征分析

目的了解不同血清型、ST型单增李斯特菌动物源性食品分离株对苯扎氯铵抗性及携带耐消毒剂基因情况。方法采用多重PCR结合血清凝集法对单增李斯特菌动物源性食品分离株进行血清分型,用多位点序列分型(MLST)技术进行分子分型,用平板法检测苯扎氯铵对单增李斯特菌的最小抑菌浓度(MIC),使用PCR检测其耐消毒剂相关基因qacH、bcrABC、MdrL、emrE。结果58株单增李斯特菌动物源性食品分离株包含4种血清分型,以1/2a血清型为主;可分为2个谱系,10个克隆群(CC),ST9、ST8、ST87为主要序列型;8株菌株的苯扎氯铵MIC为15μg/mL,其中6株为1/2a血清型,5株序列型为ST8。48株菌株的苯扎氯铵MIC为10μg/mL。75.86%菌株携带MdrL基因,1.72%菌株携带qacH基因。未检出耐消毒剂基因bcrABC、emrE。结论单增李斯特菌动物源性食品分离株对苯扎氯铵的敏感性下降,其中血清型1/2a、序列型ST8的单增李斯特菌对苯扎氯铵的MIC值更高。     

4株单核细胞增生李斯特菌分子特征分析

摘要：目的?分析4株临床分离单核细胞增生李斯特菌菌株分子特征。方法?收集2018—2019年4株临床分离单核细胞增生李斯特菌菌株，用纸片扩散法检测菌株的药物敏感性；分别用PCR和多重PCR方法进行李斯特菌毒力岛(LIPI-1)、inlA、inlB基因扩增和血清分型；用多位点序列分型(MLST)和脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分子分型。结果?4株单核细胞增生李斯特菌分为1/2a-3a和1/2b-3b-7 2种血清型且对青霉素、氨苄西林等10种抗菌药物敏感；所有分离株均携带李斯特菌毒力岛LIPI-1(prfA、actA、plcB、plcA、hly、hly2、mpl)和inlA、inlB基因；PFGE和MLST将4株菌分为4个不同的脉冲场凝胶电泳分型和ST型，包括ST121、ST619、ST621以及1株新型ST1474。结论?4株单核细胞增生李斯特菌ST型菌株均为江苏地区首次检出，菌株的致病力与其携带的毒力基因有关。     

围产期李斯特菌感染6例的临床及分子特征

目的分析围产期李斯特菌感染6例的临床及其分子流行特征,为围产期李斯特菌感染的治疗、预防和控制提供参考依据。方法回顾性分析李斯特菌母婴感染病例的临床信息,对分离的病原菌进行血清学分型、脉冲场凝胶电泳分析、多位点序列分型及毒力基因检测。结果 6例孕妇出现发热、腹痛、胎动异常等症状;2例胎死宫内,4例新生儿出现胃肠炎、血流感染和脑膜炎等感染症状,其中1例新生儿出生2 d后死亡。6株产单核细胞李斯特菌有3种血清型(4b、1/2b和1/2a)、4种ST型(ST1、ST2、ST5和ST91)和5种PT型(pulsotype)。毒力基因(plcB、actA、hly、iap、prfA、inlA)检测均为阳性。结论 6例围产期李斯特菌感染病例症状较为严重,胎儿/新生儿预后差。分离的产单核细胞李斯特菌以血清型4b型和ST2型为主,携带6个毒力基因,致病力强。     

单增李斯特菌感染一例患者的病因溯源

目的对一例单增李斯特菌感染患者的致病因素进行调查和溯源分析。方法在现场流行病学调查的基础上,对患者、患者家庭食品、厨房用具等进行样本采集并进行单增李斯特菌的菌株分离鉴定。对分离菌株的6个毒力基因（prfA、plcB、hly、actA、iap、inlA）进行检测,使用脉冲场凝胶电泳（PFGE）和多位点序列分型（MLST）技术进行分子分型分析,对分离菌株进行同源性分析。结果19份样本中共分离出6株单增李斯特菌,1株来自患者,2株来自厨房环境用具样本（冰箱冷藏室内壁涂抹1份和小号菜板涂抹1份）,3株来自患者家庭中食物（分别是猪肝1份、甜玉米粒罐头1份和红焖牛肉罐头1份）。除冰箱冷藏室内壁涂抹和甜玉米粒罐头2个样本检出的菌株plcB毒力基因阴性外,另外5个毒力及其他菌株的所有毒力基因全部为阳性。分离菌株均为ST121型,PFGE带型100%一致。结论患者家庭厨房食用食物和环境皆被单增李斯特菌污染,引起交叉感染,致使患者感染发病。     

23株临床分离单核细胞增生李斯特菌菌株的分子特征

摘要:目的分析 23株临床分离单核细胞增生李斯特菌菌株的分子特征。方法收集 2013年3月至2021年5月南京鼓楼医院临床分离的23株单核细胞增生李斯特菌,通过全基因组测序技术分析菌株毒力基因、耐药基因、谱系、序列分析(ST)、克 隆群(CCs);采用多重PCR进行血清分型;采用E-Test 试验和纸片扩散法检测菌株药物敏感性。结果23 株菌株分属2个谱系,以谱系I为主,共12株(52.2%);分为8个ST分型,其中ST8为优势ST型,占39.1% ;分为7个CCs( CC87.CC1、CC3、CC5、 CC224、CC11和CC8),优势CC型为CC8,共9株(39.1%);所有分离株均携带李斯特菌毒力岛LIPI-I(ActA、hlyA、mpl .plcA、plcB和prfA)和inlA、inlB基因;23株菌株均检出fosX耐药基因,其中1株同时携帶tet(M)和dfrG耐药基因;血清群分为1/2a.1/2b及4b,以1/2a为主,共13株(56.5%);所有菌株对青霉素、氨苄西林、美罗培南和万古霉素等9种抗茵药物敏感,仅1株对复方新诺明和四环素耐药菌株。结论临床分离 单核细胞增生李斯特菌耐药性较低,并具有遗传多样性,携带多种毒力基因是其致病性重要因素。     

2011年北京市通州区分离单增李斯特菌的生物学及分子流行病学特征

目的 了解2007-2011年北京市通州地区食品及患者分离的单增李斯特菌的生物学和流行病学特征,为李斯特菌病的预防控制提供参考依据。 方法 对分离的单增李斯特菌进行6个毒力因子(prfA、actA、iap、hly、plcB、inlA)的检测、血清分型和脉冲场凝胶电泳分型。 结果 57株单增李斯特菌的6个毒力因子均为阳性,分为5种血清型,主要血清型为1/2a和1/2c型,PFGE分型分为19种带型,主要带型为GX6A16.CN0004。 结论 通州地区分离的单增李斯特菌全部携带6个主要毒力因子,分子型别呈现多态性。     

Serotypes of Haemophilus influenzae strains isolated from pediatric patients with respiratory tract infections

Capsular serotypes of 122 respiratory Haemophilus influenzae strains were identified utilizing antigenic examinations (Slide Agglutination Test [SAT] and counter immuno-electrophoresis [CIE]), and PCR method. Results of the two methods were compared to find disagreement. Clinical and bacteriological characteristics of encapsulated strains were analyzed. By utilizing PCR assay, 3 (2.5%) serotype b, 1 (0.8%) serotype f and 118 (96.7%) non-typeable strains were found among 122 tested strains. Discrepancy between the results of antigenic examinations and PCR assay was found in one strain. That strain gave positive results by antigenic tests with capsular type c antiserum but it was determined to be capsular type f by PCR. No serotype b- strain was detected. All the encapsulated strains displayed biotype I. All the serotype b strains produced beta-lactamase, but none of those was sulbactam/ampicillin and amoxicillin/clavulanic acid resistant. The serotype f strain was beta-lactamase non-producing ampicillin susceptible. The patients suffered from respiratory infections due to encapsulated strains displayed safe clinical manifestations and good clinical responses to antibiotic treatments using beta-lactams. In pre-vaccination era, PCR is considered to be a useful method for determination of serotypes of respiratory H. influenzae, which may contribute to reducing a possibility of clonal transmission of serotype b strains among children community, which is one of the potential risk factors for pediatric invasive infections.     

无乳链球菌的分子分型及耐药特征分析

目的了解北京一家三级医院临床分离无乳链球菌的血清型、耐药性、毒力基因的特征及多位点序列分型（MLST）特征。方法收集2018年一家医院住院患者分离到的无乳链球菌,通过聚合酶链式反应方法进行分子血清型分型和毒力基因检测,用MLST方法进行分子分型,通过VITEK 2药敏分析仪对菌株耐药性进行分析。结果该院2018年分离到31株无乳链球菌,MLST以序列分型（ST）10为主,占29.03%,其次为ST17、ST19、ST1、ST12、ST24和ST485,另有2株菌为新的ST;血清型分型以Ⅰb 为主,占45.16%,其次为Ⅲ、Ⅴ及Ⅰa型。 31株无乳链球菌中对氨苄西林、奎奴普汀、利奈唑胺和万古霉素全敏感,对四环素耐药率最高（64.52%）,其次为左氧氟沙星（58.06%）和克林霉素（38.71%）。 克林霉素耐药仅发现于Ⅰb 和Ⅴ型。本研究的31株无乳链球菌,hylB、cylE、cfb和lmb毒力基因检测均为阳性;毒力基因bac和fbsA在不同分型中携带率有差异,其中bac及fbsA在Ⅰb型中携带率较高。结论本研究基于MLST分型和血清分型,表明不同型别间耐药性和毒力基因的差异,提示Ⅰb和Ⅴ型的耐药性及Ⅰb型的毒力需要引起关注。     

118株单核细胞增生李斯特菌的毒力基因检测

目的 了解中国单核细胞增生李斯特菌(Lm)的毒力基因分布情况.方法 对Lm的6个毒力基因(hly、prfA、plcB、inlA、actA、iap)分别设计聚合酶链反应(PCR)引物,建立PCR检测方法.对hly、plcB、iap 3个基因的PCR方法进行了特异性试验.结果 对国内多个地区多种来源的118株Lm进行了PCR检测,结果表明除2株菌不含prfA基因外,其他菌株均包含6个毒力基因.PCR引物特异性试验结果表明hly、plcB、iap3个基因的PCR引物特异性良好,可用于Lm的鉴定.结论 Lm普遍具有毒力基因,具有潜在的爆发风险,应加强对其监测.     

Distribution and content of class 1 integrons in different Vibrio cholerae O-serotype strains isolated in Thailand

In this study, 176 clinical and environmental Vibrio cholerae strains of different O serotypes isolated in Thailand from 1982 to 1995 were selected and studied for the presence of class 1 integrons, a new group of genetic elements which carry antibiotic resistance genes. Using PCR and DNA sequencing, we found that 44 isolates contained class 1 integrons harboring the aadB, aadA2, blaP1, dfrA1, and dfrA15 gene cassettes, which encode resistance to gentamicin, kanamycin, and tobramycin; streptomycin and spectinomycin; beta-lactams; and trimethoprim, respectively. Each cassette array contained only a single antibiotic resistance gene. Although resistance genes in class 1 integrons were found in strains from the same epidemic, as well as in unrelated non-O1, non-O139 strains isolated from children with diarrhea, they were found to encode only some of the antibiotic resistance expressed by the strains. Serotype O139 strains did not contain class 1 integrons. However, the appearance and disappearance of the O139 serotype in the coastal city Samutsakorn in 1992 and 1993 were associated with the emergence of a distinct V. cholerae O1 strain which contained the aadA2 resistance gene cassette. A 150-kb self-transmissible plasmid found in three O1 strains isolated in 1982 contained the aadB gene cassette. Surprisingly, several strains harbored two integrons containing different cassettes. Thus, class 1 integrons containing various resistance gene cassettes are distributed among different V. cholerae O serotypes of mainly clinical origin in Thailand.