实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测结肠癌患者血CK19 mRNA水平及其意义

目的:了解结肠癌患者外周血CK19mRNA的水平,探讨其临床意义。方法:采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应,检测结肠癌患者75例、炎症性肠病(IBD)患者30例、健康志愿者41例外周血CK19mRNA的水平。结果:75例结肠癌患者外周血CK19mRNA的水平为(12600±73100)copies/mL,其中39例阳性,阳性率为52%。健康志愿者未检测到CK19mRNA。CK19mRNA水平与肿瘤病理分期和分化程度相关;CK19mRNA阳性组中CK19蛋白阳性者显著多于CK19mRNA阴性组(P<0.05)。结论:外周血CK19mRNA可作为结肠癌辅助诊断指标,定量检测外周血CK19mRNA有助于结肠癌微转移的监测。     

Prp19干涉导致细胞染色体错误排列及有丝分裂前中期阻滞

目的:验证针对实验室前期筛选到的新有丝分裂期调控分子候选蛋白mRNA前体剪切因子19(pre-mRNA processing factor 19,Prp19)功能和查明作用机制。方法:采用多个靶向不同序列的siRNA在He La细胞中敲低Prp19,应用流式细胞术检测Prp19敲减对细胞周期进程的影响。采用Time-lapse成像技术进一步明确Prp19干涉对细胞分裂的影响。采用冷处理实验观测Prp19干涉对微管与着丝粒连接的影响。应用AnnexinⅤ-FITC细胞凋亡检测和Caspase 3、PARP免疫印迹实验检测Prp19干涉对细胞凋亡的影响。结果:流式细胞术检测结果表明,Prp19干涉导致有丝分裂期阻滞。Time-lapse成像动态观测发现Prp19干涉导致细胞前中期阻滞和染色体错误排列。冷处理实验结果表明干涉Prp19损害了微管与着丝粒的连接。AnnexinⅤ-FITC细胞凋亡检测以及Caspase 3、PARP免疫印迹检测结果显示Prp19干涉导致肿瘤细胞凋亡。结论:Prp19是细胞有丝分裂正常进程中不可或缺少的蛋白质,抑制Prp19可能对抗有丝分裂的抗肿瘤药物研发提供新的策略。     

孕产妇微小病毒B19的基因检测与感染情况分析

目的:了解广州地区孕产妇对人类微小病毒B19(HPV-B19)的易感性、感染率及母胎垂直传播等情况,指导HPV-B19病毒相关疾病的诊治及优生优育工作.方法:采用聚合酶链式反应技术PCR对1257例孕产妇静脉血、142例HPV-B19阳性孕产妇分娩的胎儿脐血和126例正常人静脉血进行HPV-B19基因检测.结果:孕产妇感染率为25.3%,明显高于正常对照组的感染率(3.2%)(P＜0.05),同时,142例阳性孕产妇分娩的胎儿脐血中均检测出HPV-B19基因.结论:检测结果提示孕产妇对HPV-B19有易感性,其感染率为25.3%,并且HPVB19感染存在母胎垂直传播的情况,HPV-B19病毒可自由地通过胎盘屏障,进入羊膜腔,可致胎儿先天性感染,引起胎儿子宫内死亡、习惯性流产、胎儿水肿和贫血.     

消化系统恶性肿瘤患者血清CA19-9检测的临床意义

方法 :用ACS :180化学发光分析仪测定 2 12例糖类抗原CA19 9。目的 :探讨CA19 9在消化系统恶性肿瘤与良性疾病中的临床意义及价值。结果 :恶性病组血清CA19 9分别与正常组相比差异非常显著 (P <0 .0 0 1) ,良性病组血清CA19 9分别与正常组相比无差异 (P >0 .1) ,恶性病组血清CA19 9分别与良性病组相比差异显著 (P <0 .0 5 )。结论 :血清CA19 9含量测定胰腺癌的阳性率 87.9% ,肠癌阳性率 60 .5 % ,肝癌阳性率 5 9.6% ,胃癌阳性率 44 .7% ,说明CA19 9含量测定对诊断胰腺癌和肠癌具有特异性的临床价值。并且提示CA19 9测定可作为鉴别胃癌与慢性胃炎 ,肝癌与慢性肝炎的实验参考指标。     

人CCL19基因重组腺病毒载体的构建及其在A549细胞中的表达

目的:构建人CCL19重组腺病毒,在肺癌细胞株A549中验证其表达情况.方法:通过pAdeasy-1系统,获得重组腺病毒Ad-CCL19颗粒,测定病毒滴度.RT-PcR和Western blot分别检测转染A549细胞内CCL19 mRNA和蛋白质的表达.结果:经PCR、双酶切鉴定及测序分析,重组腺病毒构建成功;效价为1.2×1011 pfu/mL;感染后A549细胞中CCL19mRNA和蛋白质均有表达.结论:成功构建CCL19重组腺病毒栽体,并可在A549细胞中有效表达,为进一步研究CCL19的功能奠定了基础.     

血清肿瘤标志物联合检测在胰腺癌诊断中应用

目的:探讨血清肿瘤标志物癌胚抗原(careinoembryonie antigen,CEA)、癌抗原19-9(carbohydrate antigen,CA19-9)和细胞角蛋白19片段(cytokeratin一19 fragments.CKl9)联合检测在诊断胰腺癌中的价值.方法:检测50例确诊胰腺癌患者(胰腺癌组)及150例健康体检者(对照组)外周血清中CEA、CAl9-9与CK19 3种肿瘤标志物水平.并对结果进行分析.结果:胰腺癌组血清中CEA、CA19-9与CK19含量高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01).单项检测时CEA、CA19-9与CK19的敏感度分别为56.0%、72.0%和74.0%,特异性分别为75%、78%和88%;联合检测时敏感度为93.0%,特异性为100%.结论:CEA、CA19-9与角蛋白CK19联合检测敏感度和特异性均高于单项检测,联合检测较单项血清标志物检测能提高胰腺癌的诊断率.     

微小病毒B19感染可能是过敏性紫癜的病因

目的:探讨人类微小病毒(human parvovirus)B19感染与过敏性紫癜的关系.方法:对26例过敏性紫癜患儿(病例组)分别利用酶联免疫吸附试验(enzyme-linkedimmunosorbent assay,ELISA)和PCR进行抗人类微小病毒B19-IgM和人类微小病毒B19-脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid,DNA)测定,另设28名健康儿童作为对照组.结果:病例组人类微小病毒B19-IgM或人类微小病毒B19-DNA阳性6例(23%),而对照组只有1例(4%)人类微小病毒B19-DNA阳性,两组差异有统计学意义(P＜0.05).结论:人类微小病毒B19感染与过敏性紫癜有一定关系,可能是其发病原因之一.     

血清肿瘤标志物CA19-9和CA125在胆管癌诊断中的价值

目的:探讨肿瘤标志物CA19-9和CA125在胆管癌诊断中的价值。方法:回顾性分析105例胆管癌患者CA19-9和CA125血清学水平,通过ROC曲线分析等探讨CA19-9和CA125在胆管癌中的价值进行评估。结果:CA19-9和CA125在胆管癌患者中明显升高;ROC曲线示:CA19-9诊断界值为73.25U/ml,敏感性和特异性分别为69.3%和87.7,CA125诊断界值为10.60 U/ml,敏感性和特异性分别为72.5%和60.0%,两者联合诊断的敏感性和特异性分别为87.6%和53.8%。结论:CA19-9和CA125在胆管癌的诊断和TNM分期中具有较大的临床价值,且CA19-9有更高的特异性和诊断效能。     

血管内皮生长因子mRNA表达及ARPE-19细胞增生与缺氧的诱导效应

目的:研究缺氧对人视网膜色素上皮细胞-19(ARPE-19)的增生和血管内皮细胞生长因子表达的诱导作用。方法:实验于2004-10/2005-12于南京医科大学生理学实验室完成。实验材料:ARPE-19细胞购自美国American Type Culture Collection。实验方法及分组:ARPE-19细胞被暴露在含体积分数为0.05的CO2和0.95的N2的缺氧培养缸中培养为缺氧组。同代同一培养瓶中传代的细胞在常氧情况下培养,作为正常对照组。实验评估:2,12,24,36h后,光镜下观察ARPE-19细胞形态学变化,采用四甲基偶氮唑盐法检测两组ARPE-19细胞增殖的情况;用半定量反转录聚合酶链反应检测两组ARPE-19细胞血管内皮细胞生长因子mRNA的表达。结果:①缺氧对ARPE-19细胞增殖的影响:ARPE-19细胞缺氧组2,12,24,36hA值均比正常组明显增高,除缺氧2h外,其他各时间点均能明显诱导ARPE-19细胞增殖(P<0.05)。②缺氧对血管内皮生长因子mRNA表达的影响:缺氧组血管内皮生长因子mRNA表达明显增高,缺氧2,12,24,36h血管内皮生长因子mRNA表达均高于正常对照组(1.567±0.080,1.868±0.176,5.061±0.407,1.748±0.277,0.603±0.017,P<0.05,n=8),并且呈时间依赖性,在24h达到表达最高峰。结论:缺氧可以促进ARPE-19细胞增殖和血管内皮生长因子mRNA表达增加,为研究缺血缺氧性视网膜疾病提供了一个新的思路,即控制缺氧造成的视网膜色素上皮细胞增殖和血管内皮细胞增殖对治疗缺血缺氧性视网膜疾病是绝对必要的。     

SAA、CRP在新型冠状病毒肺炎诊断中的价值

目的:探讨血清淀粉样蛋白A(SAA)、C反应蛋白(CRP)在新型冠状病毒肺炎(COVID-19)诊断中的价值。方法:回顾性分析2020年1月~6月本院COVID-19患者的临床资料,包括基本人口学特征、实验室检查结果和影像学检查结果,并与甲流组、疑似组、健康组进行比较分析。结果:COVID-19组患者SAA和CRP明显高于甲流组和疑似组(均P<0.05);COVID-19组SAA和CRP的阳性率显著高于疑似组(均P<0.01),且SAA的阳性率高于CRP;重型和危重型COVID-19患者的年龄、SAA、CRP、IL-6明显高于普通型(均P<0.05)。结论:COVID-19患者中升高的SAA和CRP,可作为COVID-19的早期诊断和辅助诊断的重要参考指标,值得临床进一步推广应用。     

精液细小病毒B19感染情况初探

目的 :探讨人细小病毒 (HPVB19)在男性精液中的感染情况。方法 :用HPVB19 PCR法对 46例健康已婚男性和 15例健康未婚男性精液进行检测。结果 :46例健康已婚男性精液HPVB19阳性率为 19 5 % ( 9/46 ) ,而未婚男性对照组阳性率仅为 6 6 % ( 1/15 ) ,但两组比较差异无显著意义 ( χ2 =0 378,P >0 0 5 )。结论 :精液中HPVB19感染是否可通过垂直传播方式引起孕妇胎儿宫内感染 ,仍有待进一步研究证实 ,应引起男性学专家的足够重视。     

Med19过表达慢病毒载体的构建及鉴定

目的:构建含Med19基因的过表达慢病毒栽体。方法:用PCR技术获得Med19基因片段,将其连接入酶切后的线性慢病毒栽体,转化感受态细胞进行PCR及测序鉴定。脂质体转染法共转染293T细胞,荧光显微镜及Western blot检测转染效率。包装成慢病毒,实时定量PCR检测病毒滴度。结果:成功获取Med19基因,测序证实所获取基因序列完全正确。荧光显微镜以及Western blot检测均证实pGC-FU-Med19携有正确的Med19基因,并能在293T细胞中表达。实时定量PCR检测病毒滴度为2×10~9TU/mL。结论:成功构建Med19基因慢病毒表达栽体,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。     

应用基因扫描方法快速检测EGFR基因19外显子缺失突变

目的:应用基因扫描法检测人表皮生长因子受体(EGFR)基因19外显子缺失突变.方法:(1)将EGFR基因19外显子缺失(delE746-A750)型及野生型基因分别克隆到T载体.并将含突变型基因及含野生型基因的载体按1:1、1:5、1:10、1:50、1:100、1:300的比例进行混合,用基因扫描法检测19外显子的缺失,以确定其灵敏度.(2)基因扫描法检测225例非小细胞肺癌患者的手术组织或穿刺标本:荧光标记EGFR基因19外显子的上游引物,PCR扩增目的片段,3100A测序仪进行基因扫描.Gene Scan Genotyper3.5软件分析结果.同时用直接测序法检测EGFR 19外显子的缺失突变.结果:(1)基因扫描法可测出1:100混合液中的突变型,灵敏度较高.(2)225例肺癌标本,可检测出27例(12.0%)缺失:直接测序法则检出25例(11.5%)缺失突变.结论:基因扫描法检测EGFR基因19外显子的缺失,方法简便,成本低廉,敏感度高,可查出1%的突变.     

乳腺癌外周血角蛋白-19的检测及其临床意义

目的:研究反转录酶链聚合反应(RT-PCR)检测乳腺癌患者外周血角蛋白-19(Keratin-19,CK-19)的临床意义.方法:2002年9月-2003年10月,共入选53例乳腺癌患者.分别在术前、术后、第1次化疗结束后以及术后9～12个月,应用反转录酶链聚合反应(RT-PCR) 检测血中的CK-19.结果:53例乳腺癌患者中,Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期患者CK-19阳性率分别为8.7%,31.82%,71.43%.手术后复查,Ⅱ期患者增加1例.经第1次化疗后,各期原CK-19阳性患者分别减少为2例、3例和2例.结论:运用反转录酶链聚合反应(RT-PCR)检测外周血CK-19敏感性高、特异性好,能成为乳腺癌的一个很好的预后指标,同时亦可用于对化疗的评估.     

长期输血的重型β地中海贫血患儿RH因子与临床输血有效性研究

目的:探讨长期输血的重型β地中海贫血(地中海贫血)患儿不规则抗体的产生情况及其与患儿RH因子基因型和地中海贫血基因突变位点之间的关联性,为地中海贫血患儿临床安全有效输血治疗提供新的实验依据。方法:收集246例在本院定期输血的重型β地中海贫血患儿外周血,抽提基因组DNA,运用PCR-SSP法检测患儿Rh因子(C/c、E/e)的基因型,用血型血清学方法筛选不规则抗体并鉴定它们的抗体类型,PCR体外扩增结合DNA芯片反向点杂交技术分析患儿的地中海贫血基因型。结果:246例患儿RH因子基因型主要为Ce/Ce(143/246,58.1%)、CE/ce(59/246,24%)、c E/c E(14/246,5.7%)、Ce/ce(12/246,4.9%);不规则抗体的阳性率为7.7%(19/246),其中抗-E 7例(7/19),抗-c 5例(5/19),抗-C 2例(2/19),抗-E/抗-c 2例(2/19),抗-e 1例(1/19),抗-D抗体2例(2/19);19例不规则抗体阳性患儿中,RH因子的基因分型为:Ce/Ce 11例(11/19),CE/ce 2例(2/19),c E/c E 2例(2/19),Ce/ce 2例(2/19),c E/ce 2例(2/19);19例不规则抗体阳性患儿地中海贫血基因突变位点分别为:CD41-42M 13例(13/19),CD71-72M 2例(2/19),IVS-II654M 3例(3/19),-28M 1例(1/19)。结论:长期输血治疗的地中海贫血患儿不规则抗体的产生与RH因子的基因型、患儿的地中海贫血基因突变位点可能具有关联性,本研究对于有效预防地中海贫血患儿红细胞同种免疫反应,提高其临床输血的有效性与安全性具有一定的意义。     

微波消融治疗肺小结节临床分析

目的:探讨微波消融术对19例肺结节患者的疗效以及并发症的影响。方法:回顾性分析19例肺小结节患者通过微波消融治疗的疗效结果以及并发症发生率的随访资料。结果:术后随访时间一年,19例患者均获得随访,19例患者病灶完全消融,无复发案例,22个结节中出现6个空洞样改变,16个纤维灶改变;19例患者中8例出现气胸,4例痰中带血,1例肺部感染,经治疗症状已改善。结论:微波消融治疗肺部小结节的临床疗效满意,病灶完全消融率高,且术后并发较少,安全性较高,值得在临床推广使用。     

多发性骨髓瘤患者骨髓瘤细胞中miRNA-19a的表达水平及其对骨髓瘤细胞相关特性的影响

目的:检测mi R-19a在人多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞株LP-1和U266中的表达水平,研究mi R-19a对多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266细胞增殖、侵袭、凋亡的影响。方法:应用RT-PCR检测mi R-19a在多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266中的表达水平;CCK8检测mi R-19a对多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266增殖的影响;Transwell方法检测mi R-19a对多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266细胞侵袭影响;流式细胞术检测mi R-19a对多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266细胞凋亡的影响。结果:mi R-19a在多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266中表达;mi R-19a促进多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266的增殖,促进多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266的侵袭,抑制多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266的凋亡。结论:mi R-19a在多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266中表达明显增加,且促进骨髓瘤细胞的增殖、侵袭及抑制骨髓瘤细胞的凋亡。     

细胞角蛋白19与胰腺干细胞

目的:综合分析细胞角蛋白19与胰腺干细胞的关系。资料来源:应用计算机检索Medline及Ovid2000-01/2006-05有关细胞角蛋白19与胰腺干细胞关系的文献,检索词"Cytokeratin,Pancreas,Stem cells,Marker,Differentiation"并限定文章语言种类为English。资料选择:对检索到的细胞角蛋白19与胰腺干细胞关系的相关信息进行整理,选取针对性强的文章,同一领域的文献则选择近期发表或权威杂志的文章。资料提炼:共检索到86篇相关文献,其中35篇文章符合要求,排除51篇。资料综合:胰腺干细胞具有多向分化功能,细胞角蛋白19在胰腺干细胞中有阳性表达,是胰腺干细胞的分子标志物,这对进一步了解胰腺干细胞的生物学特性,对胰腺干细胞的分离、纯化及转型定向分化为胰岛细胞具有重要意义,胰腺干细胞的移植为糖尿病的治疗开辟了道路。结论:胰腺干细胞在分化过程中有细胞角蛋白19表达,细胞角蛋白19是胰腺干细胞的标志物。     

Galectin3、Cytokeratin19在甲状腺良恶性乳头状病变中的表达及临床意义

目的:探讨甲状腺良恶性乳头状病变中galectin3、cytokeratin19(CK19)的表达及对其鉴别诊断价值。方法:应用免疫组织化学EnVision法对65例甲状腺乳头状癌及其癌正常甲状腺组织,14例甲状腺腺瘤,25例结节性甲状腺肿,8例淋巴细胞性甲状腺炎中galectin3、CK19的表达情况进行检测。结果:galectin3、CK19在甲状腺乳头状癌组织中表达的阳性率分别为92.3%(60/65)、100%(65/65),在癌旁正常甲状腺组织中表达均为阴性,甲状腺良性病变中的表达很低且呈弱阳性。结论:galectin3、CK19在甲状腺乳头状癌中有很高的表达,对判断甲状腺良恶性乳头状病变有一定的应用价值,可作为识别甲状腺乳头状癌细胞的特异标志。     

肿瘤型M2丙酮酸激酶与癌类抗原19-9联合检测在胰腺癌诊断中的应用

目的:探讨肿瘤型M2丙酮酸激酶(TumorM2-PK,TuM2-PK)、糖类抗原19-9(CA19-9)在胰腺癌中的表达特性。方法:采用ELISA法分别检测50例胰腺癌患者、35例胰腺炎患者及80名健康体检人血中TuM2-PK、CA19-9含量。结果:胰腺癌患者血中TuM2-PK、CA19-9值分别是(164.9±41.3)U/mL、(630.1±200.3)U/mL。在胰腺癌的诊断中单独检测时TuM2-PK、CA19-9敏感性分别为75%、74.5%,特异性分别为90%、85%,联合测定敏感性、特异性分别达到82.3%、100%。结论:联合检测TuM2-PK、CA19-9有助于提高对胰腺癌诊断的特异性和敏感性。