神经干细胞移植对192-IgG-saporin阿尔茨海默病模型鼠基底前脑神经元p75NGFR阳性神经元和行为学的影响

背景:神经干细胞能够在体外持续扩增,具有较强的增殖能力和较强的可塑性,能够在成年宿主中枢神经系统中存活、迁移、分化以及与宿主组织整合较好.目的:分析神经干细胞移植对侧脑室注射192-IgG-saporin 老年性阿尔茨海默病模型鼠基底前脑神经元p75NGFR阳性神经元和行为学的影响.方法:24只SD大鼠随机数字表法均分为3组:对照组、模型组、移植组.10只新生SD鼠(< 24 h)用于神经干细胞分离培养.模型组及移植组192-IgG-saporin侧脑室注射SD大鼠建立阿尔茨海默病模型.造模后,移植组行基底前脑神经干细胞移植.4周后行Y迷宫检测,结合图像分析技术观察大鼠基底前脑p75NGFR阳性神经元数目和形态学参数的变化.结果与结论:注射192-IgG-saporin 1个月,模型组损伤侧基底前脑内侧隔核和斜角带垂直支p75NGFR阳性神经元数明显减少(P < 0.01),移植组分别恢复到对照组的74.85%和71.66%,与模型组损伤侧相比较,差异显著(P < 0.01).Y迷宫测试结果显示,移植组大鼠的空间学习能力和记忆能力有改善(P < 0.05),基底前脑p75NGFR阳性神经元细胞数与大鼠的空间学习记忆能力呈正相关.提示,神经干细胞移植对注射192-IgG-saporin致阿尔茨海默病鼠基底前脑胆碱能神经元有明显的补充和保护作用,可改善大鼠的学习记忆能力.     

神经干细胞和脑源性神经营养因子联用对老年痴呆鼠学习记忆能力和基底前脑小白蛋白的影响

目的:观察神经干细胞和脑源性神经营养因子联合应用对老年痴呆大鼠学习记忆能力及其基底前脑小白蛋白神经元的作用。方法:实验于2003-12/2005-10在广州医学院解剖教研室神经生物学实验室完成。取健康雄性SD大鼠40只,随机分为4组:正常对照组、损伤组、移植组和联合组,每组10只。①利用无血清培养技术获得新生SD鼠的海马神经干细胞。②除正常组外,其他3组切断SD大鼠左侧穹隆海马伞建立老年痴呆大鼠模型;移植组和联合组,基底前脑注射神经干细胞;联合组同时侧脑室注射脑源性神经营养因子。③4周后行Y迷宫测试大鼠学习、记忆能力(学习次数分值高表示差,记忆能力分值低表示差),免疫组织化学结合图象分析技术观察各组大鼠基底前脑小白蛋白阳性神经元数目受影响的情况。结果:①损伤组大鼠比正常对照组大鼠学习、记忆能力明显下降(98.2±5.6比59.8±4.1,3.5±0.5比8.4±0.4,P<0.01)。②移植组学习、记忆能力均有改善(74.1±5.4,6.7±0.5,P<0.05),但与正常组比较差异有显著性意义(P<0.05)。③联合组学习记忆能力(56.7±0.9,8.3±0.3)与正常组比较无显著性差异(P>0.05)。④大鼠的学习记忆能力与基底前脑小白蛋白阳性细胞数呈正相关。结论:神经干细胞和脑源性神经营养因子联用较单独使用神经干细胞或脑源性神经营养因子更好地改善老年痴呆大鼠的学习记忆能力。     

神经干细胞和脑源性神经营养因子联用对老年痴呆鼠学习记忆能力和基底前脑小白蛋白的影响

目的：观察神经干细胞和脑源性神经营养因子联合应用对老年痴呆大鼠学习记忆能力及其基底前脑小白蛋白神经元的作用。方法：实验于2003-12／2005-10在广州医学院解剖教研室神经生物学实验室完成。取健康雄性SD大鼠40只，随机分为4组：正常对照组、损伤组、移植组和联合组，每组10只。①利用无血清培养技术获得新生SD鼠的海马神经干细胞。②除正常组外，其他3组切断SD大鼠左侧穹隆海马伞建立老年痴呆大鼠模型；移植组和联合组，基底前脑注射神经干细胞；联合组同时侧脑室注射脑源性神经营养因子。（3）4周后行Y迷宫测试大鼠学习、记忆能力（学习次数分值高表示差，记忆能力分值低表示差），免疫组织化学结合图象分析技术观察各组大鼠基底前脑小白蛋白阳性神经元数目受影响的情况。结果：①损伤组大鼠比正常对照组大鼠学习、记忆能力明显下降（98．2&;#177;5．6比59．8&;#177;4．1，3．5&;#177;0．5比8．4&;#177;0．4，P〈0．01）。②移植组学习、记忆能力均有改善（74．1&;#177;5．4，6．7&;#177;0.5，P〈0．05），但与正常组比较差异有显著性意义伊〈0．05）。③联合组学习记忆能力（56．7&;#177;0．9，8．3&;#177;0．3）与正常组比较无显著性差异（P〉0．05）。④大鼠的学习记忆能力与基底前脑小白蛋白阳性细胞数呈正相关。结论：神经干细胞和脑源性神经营养因子联用较单独使用神经干细胞或脑源性神经营养因子更好地改善老年痴呆大鼠的学习记忆能力。     

神经干细胞移植对老年痴呆模型鼠基底前脑小白蛋白阳性神经元和学习记忆能力的影响

目的:基底前脑是老年性痴呆患者脑皮质下神经元丢失最严重的区域,实验拟验证经神经干细胞移植治疗后老年痴呆鼠基底前脑小白蛋白阳性神经元的变化以及对其空间学习记忆能力方面的影响.方法:实验于2005-12/2006-07在广州医学院解剖学教研室完成.①动物:清洁级SD雄性大鼠28只,随机数字表法分为3组:正常对照组8只、模犁对照组8只、细胞移植组12只.另取10只新生SD鼠用于神经干细胞的分离培养.实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.②实验方法:模型对照组、细胞移植组大鼠切断左侧穹降海马伞,建立老年性痴呆动物模型.利用无血清培养技术获得鼠基底前脑神经干细胞,吸取2.5 × 1010L-1细胞悬液4 μ L,术后即刻细胞移植组损伤侧行细胞移植,坐标为前囟 0.6 mm,外侧 0.6mm插入,腹侧-5.5mm.③实验评估:移植后4周,采用Y犁迷宫对各组动物进行学习记忆能力检测.麻醉后取脑制备组织切片,ABC法免疫组化染色结合图像分析观察各组大鼠基底前脑小白蛋白阳性神经元的变化.结果:①对空间学习记忆能力的影响:细胞移植组空间学习能力、记忆能力均显著高于模型对照组(P＜0.05或P＜0.01),基本达到正常水平(P＞0.05).②对小白蛋白阳性神经元的影响:与正常对照组比较,模犁对照组损伤侧内侧隔核和斜角带核的小白蛋白阳性神经元数目分别减少62.5%和30.4%;细胞移植组降低幅度明显小于模型对照组(P＜0.01).与正常对照组比较,模型对照组损伤侧内侧隔核、斜角带核小白蛋白阳性神经元的面积、周长、灰度均显著降低(P＜0.05或0.01);细胞移植组上述指标较模犁对照组均显著增加(P＜0.05或0.01).③相关性分析:小白蛋白阳性神经元数日与大鼠在Y型迷宫中的学习次数呈显著负相关(r=-0.76～-0.79,P＜0.01),与记忆能力呈显著正相关(r=0.78～0.84,P＜0.01).结论:神经干细胞移植对老年性痴呆模型鼠基底前脑退变的小白蛋白阳性神经元具有补充和保护作用,并能够明显改善其学习记忆能力,二者呈正性相关.     

神经营养因子联用对老年痴呆鼠学习记忆能力和基底前脑小白蛋白的影响

目的:探讨Neurturin和神经生长因子(nervegrowthfactor,NGF)联合应用对老年痴呆鼠学习记忆能力的影响以及与基底前脑小白蛋白(parvalbumin,PV)神经元的关系。方法:切断老年SD大鼠左侧穹窿海马伞(fimbria-fornix,FF),侧脑室注射Neurturin和NGF,用Y迷宫测试大鼠的学习记忆能力。用免疫组化结合图像分析技术观察Neurturin,NGF对大鼠基底前脑PV阳性神经元数目的影响。结果:损伤组大鼠空间学习记忆能力明显下降(P<0.01);NGF组学习记忆能力均有改善(P<0.05),但与正常组比较差异有显著性意义(P<0.05);联合组的学习记忆能力与正常组差异显著无显著性意义(P>0.05)。大鼠的学习记忆能力与基底前脑PV阳性细胞数呈正相关。结论:Neurturin和NGF的联合应用较单独使用NGF更好改善老年FF损伤鼠学习记忆能力。     

神经营养因子联用对老年痴呆鼠学习记忆能力和基底前脑小白蛋白的影响

目的：探讨Neurturin和神经生长因子(nerve growth factor，NGF)联合应用对老年痴呆鼠学习记忆能力的影响以及与基底前脑小白蛋白(parvalbumin，PV)神经元的关系。方法：切断老年SD大鼠左侧穹窿海马伞(fimbria-fornix，FF)，侧脑室注射Neurturin和NGF，用Y迷宫测试大鼠的学习记忆能力。用免疫组化结合图像分析技术观察Neurturin，NGF对大鼠基底前脑PV阳性神经元数目的影响。结果：损伤组大鼠空间学习记忆能力明显下降(P&;lt;0．01)；NGF组学习记忆能力均有改善(P&;lt;0．05)，但与正常组比较差异有显著性意义(P&;lt;0.05)；联合组的学习记忆能力与正常组差异显著无显著性意义(P&;gt;0.05)。大鼠的学习记忆能力与基底前脑PV阳性细胞数呈正相关。结论：Neurturin和NGF的联合应用较单独使用NGF更好改善老年FF损伤鼠学习记忆能力。     

碱性成纤维细胞生长因子对阿尔茨海默病模型大鼠的影响

目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对红藻氨酸损毁Meynert基底核致阿尔茨海默病（AD）模型大鼠学习记忆能力的影响及脑内胆碱能纤维密度的变化。方法：AD组、AD治疗组及AD对照组大鼠前脑Meynert基底核注射红藻氨酸制造AD模型，正常对照组注射生理盐水；AD治疗组造模后30min,1d,3d,5d及7d侧脑室注射bFGF，AD对照组同时间注射生理盐水，30d细胞化学染色及尼氏染色，测量基底前脑皮层及海马区AchE纤维密度及海马区神经元密度，结果：AD组大鼠Y迷宫学习及记忆能力较正常对照组减低（P＜0．01），AchE纤维密度减低（P＜0．01），治疗组Y迷宫学习及记忆能力较AD对照组有改善（P＜0．01），AchE纤维密度亦有所增加（P＜0．01），但是没达到正常对照组的水平（P＜0．05），结论：bFGF可提高红藻氨酸前脑Meynert基底核注射致AD模型大鼠基底前脑皮层及海马区AchE纤维密度，增加海马神经元密度，改善其Y迷宫记忆能力。     

神经生长因子缓释微球植入后阿尔茨海默病模型鼠基底前脑神经生长因子受体阳性神经元的变化

背景:已有研究表明,神经营养因子对中枢和周围神经损伤后的存活修复有促进作用.然而,神经生长因子是大分子蛋白类物质,生物半衰期很短,很难透过血脑屏障.寻找有效的神经营养因子投递系统至关重要.目的:观察了神经生长因子微球对阿尔茨海默病模型鼠基底前脑神经生长因子受体阳性神经元的保护作用.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2005-11/2006 07在广州医学院神经生物学实验室完成.材料:采用双乳化技术制备神经生长因子缓释微球.28只SD大鼠,随机分为3组:正常对照组8只,模型对照组8只,神经生长因子缓释微球植入组12只.方法:模型对照组和神绛生长因子缓释微球植入组左侧穹隆海马伞切断制备阿尔茨海默病模犁,正常对照组不做任何处理.神经生长因子缓释微球植入组切断后即刻行基底前脑注射神经生长因子缓释微球.正常对照组和模型对照组注射等量生理盐水.主要观察指标:注射4周后,利用免疫组化法观察各组大鼠基底前脑神经生长因子受体阳性神经元变化.结果:28只大鼠均进入结果分析.模犁对照组损伤侧的内侧隔核和斜角带核的神经生长因子受体阳性神经元大量减少,分别减少59.7%和54.4%:神经生长因子缓释微球植入组损伤侧的内侧隔核和斜角带核细胞数分别减少17.9%和19.8%,明显高于模型对照组损伤侧的神经生长因子受体阳性神经元存活数(P<0.05).结论:神经生长因子缓释微球植入对阿尔茨海默病模型鼠基底前脑神经生长因子受体阳性神经元有明显的保护作用.     

骨髓间充质干细胞移植对阿尔茨海默病大鼠行为学的影响

背景:目前研究表明,骨髓间充质干细胞作为包括阿尔茨海默病在内的神经退行性疾病的细胞替代治疗,可能是一种有应用前景的工程细胞,但其对阿尔茨海默病的治疗效果尚不明确.目的:观察定向诱导骨髓间充质干细胞移植对阿尔茨海默病大鼠行为学的影响,试图发现有效治疗阿尔茨海默病的策略.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2009-03在武警医学院生理学与病理生理学教研室完成.材料:健康雄性Wistar大鼠40只,鼠龄24个月,体质量450 g左右.方法:自然衰老痴呆模型大鼠是通过迷宫试验筛选,将大鼠随机数字表法分为4组,每组10只.对照组大鼠双侧海马注射生理盐水;骨髓间充质干细胞移植组大鼠注射骨髓间充质干细胞:常氧分化移植组大鼠注射常氧环境下向神经元样细胞诱导的骨髓间充质干细胞;低氧分化移植组大鼠注射低氧环境下向神经元样细诱导的骨髓间充质干细胞.主要观察指标:阿尔茨海默病大鼠的学习和记忆能力在移植前及实验后8周通过Y迷宫试验测定,记忆能力测定在学习能力测定48 h后进行.结果:对照组阿尔茨海默病大鼠术后学习记忆成绩均下降,与术前相比,差异无显著性意义(P>0.05);骨髓间充质干细胞移植组大鼠学习记忆成绩提高,与移植前相比差异无显著性意义(P>0.05);常氧分化移植组和低氧分化移植组大鼠学习记忆成绩均较移植前提高:与对照组相比,其他3组大鼠学习记忆成绩均提高(P<0.01).结论:骨髓间充质干细胞移植可以改善阿尔茨海默病模型大鼠的学习记忆能力,提示骨髓间充质干细胞移植对痴呆大鼠的认知功能障碍有治疗作用,且定向诱导分化的骨髓间充质干细胞移植治疗优于未分化的骨髓间充质干细胞,低氧诱导分化的骨髓间充质干细胞移植治疗效果最佳.     

神经干细胞移植联合脑源性神经营养因子局部注射对老年性痴呆鼠海马线粒体膜电位及行为学的影响

背景：移植神经干细胞的分化受移植部位微环境、各种生长及细胞因子的影响。目的：实验拟观察神经干细胞移植与脑源性神经营养因子联合应用列老年性痴呆鼠行为学恢复及海马线粒体膜的影响。设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2006-09／2007-09在重庆医科大学动物实验室及细胞实验室完成。材料：神经干细胞来源于新生1d龄SD大鼠。Y迷宫筛选对电击敏感并逃避迅速的三四月龄健康雄性SD大鼠，随机分成4组：正常对照组、神经干细胞组、脑源性神经营养因子组、联合组移植，每组10只。方法：分离培养大鼠神经干细胞。参照包新民等的大鼠脑立体定位图谱制备老年性痴呆大鼠模型。造模后，神经干细胞组双侧海马区注射神经千细胞，脑源性神经营养因子组双侧海马区注射脑源性神经营养因子，联合移植组注射神经干细胞同时持续恻脑室注射脑源性神经营养因子。主要观察指标：用分子生物学检测老年性痴呆大鼠海马线粒体膜电位的变化，行Y迷宫试验观察大鼠行为学中学习记忆能力。结果：联合移植组老年性痴呆大鼠海马线粒体膜电位明显升高，并高于神经干细胞组、脑源性神经营养因子（P〈0．05），与正常对照组比较无明显差异。脑源性神经营养因子组、神经干细胞组学习记忆能力虽有明显恢复，但与联合移植组和正常对照组比较还有定的距离（P〈0．05）。结论：神经干细胞与脑源性神经营养因子联合应用能能稳定海马线粒体功能，从而抑制神经细胞凋亡，能改善老年性痴呆箭的学习记忆功能障碍。     

立体定向移植骨髓间充质干细胞改善血管性大鼠的学习记忆能力

背景：大量的实验证明将骨髓间充质干细胞移植到复制的中枢神经系统疾病大鼠模型后,能迁移到损伤部位,表达神经细胞的潜在特性并且提高神经功能。目的：验证骨髓间充质干细胞对拟人类血管性痴呆模型大鼠学习记忆障碍的改善作用。方法：分离SD大鼠骨髓间充质干细胞,于细胞移植前掺入10mg/L的BrdU进行标记。建立Wistar大鼠血管性痴呆样学习记忆障碍动物模型,随机分为模型组、假手术组与移植组。移植组致伤后第14天,通过立体定向途径移植骨髓间充质干细胞到大鼠海马,假手术组给予等量生理盐水,模型组大鼠不做处理。采用Morris水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力。损伤后第90天处死大鼠,观察海马组织有无Brdu＋神经元特异性烯醇化酶、Brdu＋胶质纤维酸性蛋白免疫组织化学双染阳性细胞,并且观察从侧脑室到海马是否存在神经元前体细胞的标志Doublecortin（DCX）吻侧迁移流。结果与结论：①移植组大鼠采用Morris水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力逃避潜伏期及跨越平台次数优于模型组及假手术组（P〈0.05）。②移植组大鼠海马组织及其周围可见免疫组织化学双染阳性细胞,但未见从侧脑室到海马关于神经元前体细胞的标志Doublecortin（DCX）吻侧迁移流。结果提示,骨髓间充质干细胞移植可以促进脑损伤大鼠的神经功能的恢复,其机制可能与移植细胞分化为神经元样和神经胶质细胞样细胞,并分泌或促进宿主分泌神经营养因子有关。     

神经干细胞移植对阿尔茨海默病大鼠海马突触素表达和学习记忆能力的影响

背景:前期实验已证实,移植入阿尔茨海默病大鼠脑内的神经干细胞能够存活、增殖,但其是否可替代损伤或坏死的神经细胞而重建神经通路,改善学习记忆能力尚不清楚.突触素是突触重建的重要标记之一.目的:观察神经干细胞移植对阿尔茨海默病大鼠学习记忆能力及突触表达的影响.方法:SD大鼠随机数字表法分为正常对照组、阿尔茨海默病模型组、2周移植组和4周移植组,除正常对照组外制各阿尔茨海默病模型.另取新生24 h SD大鼠海马齿状回分离、培养神经干细胞,经Hoechst33258标记后植入2周和4周移植组海马CA1区,行Y迷宫实验检测大鼠的学习记忆能力,然后取脑进行尼氏染色和突触寨免疫组织化学染色.阿尔茨海默病模犁组则以同样的方法、同样的位点注入等量无菌生理盐水.正常对照组不施以任何处理.结果与结论:①2周和4周移植组海马CA1区细胞比阿尔茨海默病模型组增多,但仍少于正常对照组(P＜0.05),平均吸光度与正常对照组相比差异无显著性意义(P＞0.05).②2周移植组和4周移植组大鼠海马结构内突触奈吸光度值明显高于正常对照组和阿尔茨海默病模型组(P＜0.05).③与阿尔茨海默病模型组相比,2周和4周移植组大鼠学习能力和记忆能力均显著增强,正确反应率明显提高(P＜0.05),而与正常对照组相比,差异无显著性意义(P＞0.05).提示移植入脑内的神经干细胞可促进突触形成,改善学习记忆能力.     

脑源性神经营养因子基因修饰骨髓间质干细胞移植对痴呆大鼠记忆功能的影响

背景：一些研究已显示，重组脑源性神经营养因子基因修饰的骨髓间质干细胞具有向神经样细胞分化的潜能，且能提高脑缺血模型鼠的神经缺失功能。目的：拟进一步观察脑源性神经营养因子基因修饰的骨髓间质干细胞移植对阿尔茨海默病鼠学习记忆能力的改善。设计、时间及地点：随机对照动物观察，于2006-01/2007-06在中山大学一附院神经病学实验摩完成。材料：清洁级8周龄雄性SD大鼠48只，随机分为正常对照组、损伤模型组、基因修饰细胞组、未修饰细胞组，12只／组。另取出生3d的清沽级SD大鼠10只，用于骨髓间质干细胞的分离培养。方法：取传至第6代的骨髓间质干细胞，双酶切后亚克隆至pcDNA3质粒，行增强型绿色荧光蛋白基因转染，采用电穿孔法得到重组腺病毒Ad—BDNF，转染293细胞进行病毒包装。除正常对照组外，其余3组大鼠均建立阿尔茨海默病模型。造模后12d，基因修饰细胞组取重组腺病毒脑源性神经营养因子基因修饰的不含血清骨髓间质干细胞悬液，于伤侧侧脑室坐标前囟后1．6mm、外侧1．5mm、腹侧4．0mm注入8μL；未修饰细胞组移植等量的单纯骨髓间质干细胞悬液。主要观察指标：Western blotting法鉴定重组病毒在骨髓间质干细胞中表达，流式细胞仪检测基因感染效率。细胞移植后2周采用Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力。结果：Ad—BDNF感染的骨髓间质干细胞存在M14000的脑源性神经营养因子蛋白条带，2d后约34％骨髓间质干细胞被感染。基因修饰细胞组、未修饰细胞组大鼠平均逃避潜伏期均明显低于损伤模型组（P〈0．01），且前者基本达到正常水平。与损伤模型组寻找平台的运动策略比较，基因修饰细胞组与未修饰细胞组趋向式、直线式显著增多（P〈0．01），边缘式、随机式明显减少（P〈0．01），且前者基本达到正常水平。结论：移植的骨髓间质干细胞经脑源性神经营养因子基因修饰后，可明显改善阿尔茨海默病模型鼠的记忆能力。     

立体定向移植骨髓间充质干细胞改善血管性大鼠的学习记忆能力

背景:大量的实验证明将骨髓间充质干细胞移植到复制的中枢神经系统疾病大鼠模型后,能迁移到损伤部位,表达神经细胞的潜在特性并且提高神经功能。目的:验证骨髓间充质干细胞对拟人类血管性痴呆模型大鼠学习记忆障碍的改善作用。方法:分离SD大鼠骨髓间充质干细胞,于细胞移植前掺入10mg/L的BrdU进行标记。建立Wistar大鼠血管性痴呆样学习记忆障碍动物模型,随机分为模型组、假手术组与移植组。移植组致伤后第14天,通过立体定向途径移植骨髓间充质干细胞到大鼠海马,假手术组给予等量生理盐水,模型组大鼠不做处理。采用Morris水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力。损伤后第90天处死大鼠,观察海马组织有无Brdu+神经元特异性烯醇化酶、Brdu+胶质纤维酸性蛋白免疫组织化学双染阳性细胞,并且观察从侧脑室到海马是否存在神经元前体细胞的标志Doublecortin(DCX)吻侧迁移流。结果与结论:①移植组大鼠采用Morris水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力逃避潜伏期及跨越平台次数优于模型组及假手术组(P<0.05)。②移植组大鼠海马组织及其周围可见免疫组织化学双染阳性细胞,但未见从侧脑室到海马关于神经元前体细胞的标志Doublecortin(DCX)吻侧迁移流。结果提示,骨髓间充质干细胞移植可以促进脑损伤大鼠的神经功能的恢复,其机制可能与移植细胞分化为神经元样和神经胶质细胞样细胞,并分泌或促进宿主分泌神经营养因子有关。     

阿尔茨海默病动物模型的建立及神经干细胞对阿尔茨海默病的治疗作用

目的：建立大鼠阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)动物模型．并观察神经干细胞对AD的治疗作用。方法：30只SD大鼠(体质量250～300g)被随机分为3组：模型组(n=10)、对照组(n=10)和神经干细胞治疗组(n=10)，模型组和神经干细胞治疗组用ALZET微型渗透泵侧脑室内慢性灌注Okadaic acid(OA)；对照组灌注等量的磷酸缓冲液。56d后神经干细胞治疗组在海马处进行神经干细胞移植。76d后用Morris水迷宫实验检测3组大鼠学习记忆能力；用旷场实验观察3组大鼠探究活动能力和紧张度；随后处死大鼠，分别用硫磺素-S法和镀银法检测3组大鼠海马中老年斑和神经元纤维缠结形成情况。结果：模型组的平均逃避潜伏期(mean escape latency，MEL)第1天为84S，第4天为60S；对照组的MEL第1天为66S，第4天为15S；治疗组的MEL第1天为68S，第4天为18S。模型组通过的格子数为21个．对照组为69个，治疗组为61个。模型组大鼠的学习、记忆功能和探究活动与对照组和神经干细胞治疗组相比均明显下降(P&;lt;0．05)；神经干细胞治疗组与对照组相比差异无显著性意义(P&;gt;0．05)。显微镜下，模型组大鼠在海马可见到大量老年斑沉积和神经元纤维缠结形成：神经干细胞治疗组可见少量老年斑沉积和神经元纤维缠结形成；而对照组大鼠未见老年斑沉积和神经元纤维缠结形成。结论：通过微型渗透泵侧脑室内慢性灌注OA可成功地建立AD动物模型；神经干细胞可提高大鼠的学习和记忆能力并可减少老年斑沉积和神经元纤维缠结形成。     

嗅鞘细胞和神经干细胞联合移植阿尔茨海默病大鼠脑内的增殖和定向分化

背景:阿尔茨海默病大鼠脑内神经元减少,神经干细胞移植后增殖和向神经元分化能力有限。目的:观察联合移植嗅鞘细胞和神经干细胞在阿尔茨海默病大鼠脑内,嗅鞘细胞对神经干细胞的增殖和向胆碱能神经元分化的影响。方法:体外培养嗅鞘细胞和神经干细胞,移植前用5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记神经干细胞。将生理盐水,神经干细胞和神经干细胞+嗅鞘细胞分别移植入阿尔茨海默病模型大鼠海马。移植7,14,21,28d后,进行大鼠脑组织切片免疫组织化学染色检测BrdU和ChAT阳性表达。结果与结论:联合移植组神经干细胞的增殖和分化情况明显优于其他两组,联合移植组BrdU阳性细胞数和ChAT阳性细胞数明显高于神经干细胞移植组和生理盐水组(P<0.01)。提示嗅鞘细胞能促进移植的神经干细胞在阿尔茨海默病大鼠脑内增殖和向胆碱能神经元的分化。     

阿尔茨海默病动物模型的建立及神经干细胞对阿尔茨海默病的治疗作用

目的:建立大鼠阿尔茨海默病(Alzheimer'sdisease,AD)动物模型,并观察神经干细胞对AD的治疗作用。方法:30只SD大鼠(体质量250～300g)被随机分为3组:模型组(n=10)、对照组(n=10)和神经干细胞治疗组(n=10),模型组和神经干细胞治疗组用ALZET微型渗透泵侧脑室内慢性灌注Okadaicacid(OA);对照组灌注等量的磷酸缓冲液。56d后神经干细胞治疗组在海马处进行神经干细胞移植。76d后用Morris水迷宫实验检测3组大鼠学习记忆能力;用旷场实验观察3组大鼠探究活动能力和紧张度;随后处死大鼠,分别用硫磺素-S法和镀银法检测3组大鼠海马中老年斑和神经元纤维缠结形成情况。结果:模型组的平均逃避潜伏期(meanescapelatency,MEL)第1天为84s,第4天为60s;对照组的MEL第1天为66s,第4天为15s;治疗组的MEL第1天为68s,第4天为18s。模型组通过的格子数为21个,对照组为69个,治疗组为61个。模型组大鼠的学习、记忆功能和探究活动与对照组和神经干细胞治疗组相比均明显下降(P<0.05);神经干细胞治疗组与对照组相比差异无显著性意义(P>0.05)。显微镜下,模型组大鼠在海马可见到大量老年斑沉积和神经元纤维缠结形成;神经干细胞治疗组可见少量老年斑沉积和神经元纤维缠结形成;而对照组大鼠未见老年斑沉积和神经元纤维缠结形成。结论:通过微型     

人间质干细胞移植治疗缺氧缺血性脑病的实验

目的：观察人胚间质干细胞移植至缺氧缺血性脑病新生大鼠后对其学习记忆能力的改善效果。 方法：7窝SD新生1d大鼠共81只，同窝随机分为正常对照组、间质千细胞组、生理盐水组和未治疗组4组。①后3组大鼠左颈动脉结扎，吸入体积分数为0．08的氧制作缺氧缺血性脑病模型；间质干细胞组脑定位注射分离培养的中期引产人胚胎（获供者知情）骨髓间质干细胞，每点注射2μL（细胞浓度为2&;#215;10^11L^-1）；生理盐水组同法注射等量生理盐水。观察各组新生大鼠1周内成活率。②移植后第6周对同窝4组大鼠进行Morris水迷宫训练，4d后进行测试，以找到平台的时间代表大鼠学习和记忆能力。③移植后第10周麻醉后处死实验鼠，苏木精-伊红染色和间接免疫荧光检测骨髓间质干细胞在大鼠脑内存活和分化情况。 结果：①组新生大鼠1周内成活率比较：间质干细胞组明显高于生理盐水组和未治疗组[75．0％（15／20），35．3％（6／17）50．0％（7／14），P〈0．01]，而与正常对照组比较差异不显著（P〉0．05）。②4组新生大鼠水迷宫实验结果：间质干细胞组大鼠找到平台的时间明显短于生理盐水组和未治疗组（P〈0．01）；训练3d后与正常对照组差异不显著。（3）4组新生大鼠免疫荧光检测结果：间质千细胞组中，进针注射部位存在大量移植细胞，并向周围迁移，皮质层、海马等部位检测到移植细胞；所植入的细胞约6％表达胶质纤维酸性蛋白，约8％表达神经特异性烯醇化酶。 结论：移植人胚胎骨髓间质干细胞能提高缺氧缺血性脑病新生大鼠存活率，改善其学习记忆能力。间质干细胞在鼠脑内最少可以存活10周。     

人胚胎骨髓间质干细胞移植治疗新生大鼠缺氧缺血性脑病的实验

目的：在制作新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型基础上，研究间质干细胞移植治疗缺氧缺血性脑病的应用前景。 方法：实验于2002-09／2004-03在深圳宝安血站干细胞研究实验室内完成。实验中采用L-DMEM分离培养骨髓中间质干细胞。7窝SD 1d龄新生大鼠共81只同窝随机分为4组：①正常组，不干预。②模型组：结扎左颈动脉，吸氧3h制成缺氧缺血性模型。③生理盐水组：造模后24h定位注射生理盐水8μL。④间质干细胞组：处理同生理盐水组，注射间质干细胞（1．0～2．0）&;#215;10^6／μL。Morris水迷宫试验评估移植后第42天大鼠学习和记忆能力；第10周麻醉状态下处死实验鼠，制作病理切片，苏木精-伊红染色和间接免疫荧光检测间质干细胞在脑内存活和分化情况。 结果：①第1周内成活率：第7天，81只实验鼠存活42只，间质干细胞组与正常对照组大鼠存活率分别为75．0％和82．4％，差异不显著；明显高于生理盐水组（35.3％）和模型组（50．0％）（P〈0．01）。②水迷宫试验显示间质干细胞组大鼠的空间识别和记忆能力明显优于生理盐水组和模型组（P〈0．01）；培训后第5天，间质干细胞组识别平台的平均时间为7．5s，与正常组7．0s不存在差异。③病理切片、苏木精-伊红染色和间接免疫实验结果显示：间质干细胞移植组中，进针注射部位存在大量移植细胞，并向周围迁移，皮质层、海马等部位检测到移植细胞；所植入的细胞约6％表达胶质纤维酸性蛋白，约8％表达神经元特异性烯醇化酶。结论：移植人间质干细胞组能有效修复缺氧缺血导致的神经受损，改善其功能，明显提高缺氧缺血性脑损伤大鼠1周内成活率。     

向脑海马区移植骨髓间充质干细胞改善阿尔茨海默病大鼠记忆功能

背景：通过药物治疗虽然能在一定程度上减轻和延缓阿尔茨海默病进展,但是效果不明显,因此采用细胞替代治疗是目前治疗该疾病的一种新的尝试和探索。目的：观察骨髓间充质干细胞移植对阿尔茨海默病大鼠记忆能力改善的影响。方法：注射β淀粉样蛋白1-40制备阿尔茨海默病动物模型并于双侧海马区移植骨髓间充质干细胞。治疗4周后采用Morris水迷宫检测大鼠空间认知和记忆能力变化,采用Brd U和NF,GFAP的免疫荧光双标技术观察移植的细胞是否存活并分化,免疫印迹和免疫组化技术检测大脑皮质及海马区β淀粉样蛋白表达。结果与结论：与单纯造模组比较,移植骨髓间充质干细胞治疗后大鼠逃避潜伏期明显缩短（P〈0.01）,跨越平台次数明显均多（P〈0.05）。免疫荧光双标显示,移植细胞在大鼠海马周围分化为NF或GFAP阳性的细胞。免疫组化和免疫印迹分析显示,经骨髓间充质干细胞移植治疗后,其脑内β淀粉样蛋白表达明显下降（P〈0.05）。结果表明骨髓间充质干细胞移植后能在阿尔茨海默病大鼠脑内局部存活并分化,并且能够提高阿尔茨海默病大鼠学习记忆能力。