血清尿素测定基质效应研究

目的 评价2007年全国室间质量评价(EQA)临床化学项目材料和13种市售制备物血清尿素测定在7种脲紫外速率法测定系统上的基质效应,并考察这些测定系统的校准偏差.方法 按美国临床和实验室标准协会(CLSI)EP 14-A2试验方案,同位素稀释气相色谱质谱法作比对方法,7种尿素酶常规方法为待评方法,用比对方法和待评方法同时测定25份新鲜冰冻人血清和EQA材料及市售制备物.考察常规方法和比对方法测定EQA材料(或市售制备物)结果间的数量关系与它们测定新鲜冰冻人血清样品数量关系的一致程度,评价样品的基质效应.考察新鲜冰冻人血清样品常规方法和比对方法结果的差异,评价测定系统的校准偏差.结果 8种EQA材料和3种市售制备物对参加评价的所有测定系统无基质效应,1种市售制备物对所有系统都表现基质效应,其他样品视系统的不同而表现出不同的情况.7种测定系统中的6种都存在不同程度的校准偏差:同直线Y=X相比,系统A的斜率、截距偏差均小于5%,不存在明显校准偏差.系统B、C、D、F、G的斜率偏差小于5%,截距偏差大于5%,存在一定的校准偏差.系统E的斜率和截距偏差均大于5%,表现为存在校准偏差.结论 样品的基质效应和测定系统的校准偏差影响血清尿素测定的准确性和可比性.应充分重视基质效应和校准偏差对临床检验量值溯源的影响.     

血清总胆固醇测定的基质效应研究

目的 评价血清胆固醇常规方法对常见胆固醇参考物质的基质效应和常规方法的校准偏差.方法 用高效液相色谱测定血清总胆固醇的方法为对比方法,用胆固醇氧化酶法的6种常规测定系统为待评方法,测定30个新鲜冰冻人血清和37种制备物的总胆固醇.将两法测定新鲜人血清的结果作直线回归,求得Y预测值双侧95%的允许区间,评价制备物的基质效应.通过分析新鲜冰冻人血清样品常规方法和对比方法结果的差异,评价测定系统的校准偏差.结果 胆固醇制备物的基质效应依品种而异,冰冻血清几乎没有基质效应,冻干血清表现为负基质效应,乙醇基质校准液呈正基质效应.所有系统新鲜冰冻血清测定值同对比方法测定结果均呈较好的直线相关.A,B,E系统显负偏差,C,D,F系统显正偏差,但偏差大多处于临床可接受的范围内,可满足临床需求,个别测定系统需进行改进.结论 在我国血清胆固醇测定系统上,制备物的基质效应普遍存在,部分常规系统存在校准偏差.为实现检验结果的准确性和实验室间的可比性,临床标准化工作势在必行.     

血清尿酸测定的基质效应

目的检测21种样本(血清及制备物)的尿酸水平,评价其对13种尿酸常规检测系统的基质效应。方法根据卫生行业标准WS/T356-2011,以同位素稀释液相色谱串联质谱法(ID-LC/MS/MS)为比对方法,将不同厂商生产的13种尿酸检测试剂盒(均为酶法)分别与日立7180全自动生化分析仪组成常规检测系统,并以此为评价方法。样本包括4种校准品、5种室间质量评价(EQA)样本、6种质控品、3种制备物(1种猪血清和2种水溶液制备物)、1种美国国家标准与技术研究院(NIST)的标准参考物质(SRM)909c、2种国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)检验医学参考实验室外部质量评价计划(RELA)样本,共计21种。用比对方法和评价方法分别测定40份新鲜冰冻血清和上述21种样本。将比对方法和评价方法尿酸测定结果进行直线回归分析,求得Y预测值双侧95%可信区间,评价血清及制备物的基质效应。结果 21种评价样本中有5种基质为新鲜血清或冻干血清的样本(2种EQA正确度验证血清、2种RELA样本和SRM 909c)在所有常规检测系统中均未观察到基质效应。2种校准品(朗道和迪瑞)仅在1种常规检测系统中有基质效应。5种EQA样本中除用于正确度验证的新鲜血清样本外,其他冻干血清样本在较多常规检测系统中存在基质效应。6种质控品中有4种在所有常规检测系统中无基质效应,2种高值质控品显示负基质效应。结论新鲜血清基质样本是可靠的检测样本,可在标准物质制备、质控品制备和EQA中使用。某些校准品在非配套系统中可能存在基质效应而产生校准偏差,因此在使用这些校准品前最好经过基质效应评价或方法验证。     

胆固醇检测试剂的校准偏差和基质效应

目的 试验胆固醇试剂的校准偏差和基质效应。方法 用酶法和高效液相色谱法测定新鲜血清和不同基质类型的校准注胆固醇浓度,比较两法的测定结果。结果 多数被检试剂－校准物系统存在校准偏差（＝３．５％至＋９．４％）;所有被检试剂对冻干血清、胆固醇水溶液等制备物有不同程序的基质效应,而冰冻人血清基质效应最小。结论 制备胆固醇校准物需充分认识指定度剂条件下的基质效应,根据新鲜血清测定结果,做出正确定值。     

血清总甘油测定基质效应的研究

目的 评价28种质控血清或校准物在8种总甘油常规检测系统下的基质效应,并评价常规系统校准的准确性.方法 以同位素稀释液相色谱串联质谱测定m清总甘油的方法为对比方法,用甘油氧化酶法的8种常规测定系统为待评价方法,测定20份人新鲜血清和28种制备物中的总甘油.将两法测定人新鲜血清的结果作直线回归,求得Y值双侧95%的预测区问,评价制备物的基质效应.通过分析新鲜血清样本的测定结果评价常规系统校准的准确性.结果 制备物在进口A、B、C系统和国产D系统巾表现正基质效应,进口D系统正、负基质效应均有以正效应为主,国产A、B系统正、负基质效应均以负效应为主,只有1个制备物对国产C系统有较弱的基质效应.同对比方法相比,国产A、D系统存在正校准偏差,进口A、B、C、D和国产B系统1竽在负偏差,国产C系统不存在校准偏差.结论 我国血清总甘油的部分常规检测系统存在校准偏差,部分质控物和校准物存在基质效应.为实现检验结果的准确性和实验室问的可比性,临床标准化工作势在必行.     

双水平校准纠正苦味酸法肌酐检测偏移

目的通过临床检验实验室间质量评价(室间质评)分析苦味酸法检测肌酐的偏移及校准对偏移的影响。方法利用重庆市临床检验室间质评数据,开展冰冻混合人源血清(参考方法赋值)调查,分析苦味酸法与酶法肌酐检测结果间的差异及偏移;用双浓度水平冰冻混合人源血清(参考方法赋值)校准常规检测系统后检测室间质控品。结果 2012年至2016年重庆市苦味酸法肌酐检测实验室数下降;苦味酸法实验室稳健均值与酶法存在差异,且差值与肌酐水平有相关性(r=0.774 6);冰冻混合人源血清(参考方法赋值)调查及国家卫计委临床检验中心正确度验证结果均显示,苦味酸法肌酐在低浓度存在正偏移(最大达10.39%和13.31%),且偏移与浓度相关(r=0.988 9),而酶法肌酐的偏移较小(最大达1.04%和1.49%);用冰冻混合人源血清校准常规检测系统后,苦味酸法肌酐检测在低浓度的正偏移被抵消。结论苦味酸法肌酐检测在低值范围存在正偏移,双浓度水平校准可纠正此偏移。     

参考方法在丙氨酸氨基转移酶测定标准化中的应用

目的 调查不同检测系统使用经参考方法赋值的冰冻人血清样本作为校准品进行校准后,不同来源样本丙氨酸氨基转移酶(ALT)测定结果的可比性与准确性的改变程度.方法 5份经4家候选参考实验室应用不含磷酸吡哆醛的ALT参考方法定值的冰冻人混合血清样本用于评价广州地区10个不同检测系统ALT催化活性结果的可比性与准确性.其中一个样本用作校准品校准各系统.比较校准前后各系统间新鲜血清样本与商品制备物测定结果的变异与偏倚.结果 校准后,各检测系统间新鲜血清测定结果的变异由11.90%～8.60%下降到6.78%～2.30%,偏倚则从-12.52%～-8.44%下降到-3.36%～-0.08%.校准后,常规系统测定新鲜血清结果与参考方法的回归曲线的斜率和截距比校准前更接近1和0;而商品制备物测定结果校准后的斜率和截距则无明显改善.结论 采用定值冰冻人血清样本作为校准品可以改善不同检测系统测定结果的准确性和可比性,但由于基质效应的存在不能改善商品制备物测定结果的可比性.     

16种17-羟孕酮制备物基于两种评价方案的互通性研究

目的应用两种互通性评价方案评价16种17-羟孕酮制备物的互通性。方法互通性研究,收集2018年2月至2019年6月之间北京医院检验科的新鲜人血清共52份。根据美国临床和实验室间标准化研究所文件(CLSI)EP14-A3和国际临床化学和检验医学联合会(IFCC)互通性评价工作组报告,以血清17-羟孕酮同位素稀释液相色谱串联质谱法(ID-LC/MS/MS)为比对方法,3种临床常规分析系统(1种放射免疫法,2种LC/MS分析法)为待评方法,一同测定52个人血清样本和16种制备物的17-羟孕酮浓度,评价制备物质的互通性。结果综合两种互通性评价结果,所有正确度验证材料和国家甾体激素标准物质在LC/MS分析系统中都显示出良好的互通性,6/9的EQA材料在三种常规分析系统中都显示出互通性。其中所有材料在偏倚差值法中所有材料的LC/MS分析系统中都显示出良好的互通性。结论两种互通性评价结果有所差异,使用新鲜冰冻人血清作为血清17-羟孕酮的质评材料均能满足互通性要求。     

血清肌酐参考方法的建立及其在正确度调查中的应用

目的建立同位素稀释液相色谱串联质谱(ID-LC/MS/MS)测定人血清肌酐的参考方法,并运用于临床实验室正确度调查新鲜冰冻血清样本靶值的确立。方法按照国际检验医学溯源联合委员会(JCTLM)推荐方法,建立本实验室肌酐参考方法,利用参考物质SRM909c及RELA比对样本考察所建方法的精密度与准确度,并将建立的参考方法用于上海地区小分子正确度调查新鲜冰冻血清肌酐靶值的确立。结果参考方法测量参考物质SRM909c相对偏移为0.69%,测量不精密度2%,初步验证了方法的准确度和精密度。正确度调查样本201411、201412、201421、201422酶法检测结果与参考方法测定值的相对偏移分别为14.97%、-2.77%、-1.37%、-1.92%;苦味酸法检测结果与参考方法测定值的相对偏移分别为21.39%、2.10%、6.22%、2.38%。除201411样本(为低浓度样本)外,其余样本不同常规分析系统测定的血清肌酐浓度与参考方法赋值结果的相对偏移均不超过8%。结论建立的ID-LC/MS/MS测定血清肌酐的方法精密度、准确度均较好,靶值的确定对实验室检测结果分析有重要意义,该参考方法的建立有望在上海地区临床实验室正确度计划中发挥一定作用,并建议临床实验室重视低浓度下肌酐测量的准确度和一致性。     

常规方法测定血清尿素和肌酐正确度的验证和溯源性评价

目的 验证常规方法测定血清尿素、肌酐浓度的正确度,以评价其校准溯源性.方法 选择20份经同位素稀释气相色谱质谱法(ID-GC/MS)进行尿素定值的新鲜冰冻患者血清作为标本,用常规方法测定尿素浓度;另选择20份经同位素稀释液相色谱串联质谱法(IlD-LC/MS/MS)进行肌酐定值的新鲜冰冻患者血清作为标本,用待评价系统测定肌酐浓度;分别将尿素和肌酐的测定结果与质谱法认定值进行线性回归分析,计算百分偏倚并评估预期偏倚.结果 常规方法测定尿素结果与认定值间线性回归方程为y =0.9890X +0.0192(R2 =0.9990,P＜0.01,n=20);测定肌酐结果与认定值间线性回归方程为Y=0.9815X-6.4794(R2 =0.9989,P＜0.01,n=20);尿素、肌酐测定结果的平均百分偏倚分别为-0.41％ (P ＞0.05)和-4.20％ (P ＜0.05);通过线性回归方程计算出在3个医学决定水平的预期百分偏倚分别为尿素:-0.46％、-0.83％、-0.96％;肌酐:-15.90％、-5.87％、-2.95％.结论 常规方法定尿素结果和参考方法一致,结果可溯源至ID-GC/MS方法;肌酐测定结果与参考方法之间的偏倚符合根据生物学变异导出的“最低性能规范要求”,但是其特异性有改进的余地.     

5水平冰冻混合人血清尿酸候选二级标准物质的研制

目的研制5水平尿酸(UA)冰冻混合人血清候选二级标准物质,为UA常规检测方法的准确度验证提供稳定和互通性良好的真实值控制品。方法收集无肉眼可见脂血、溶血和黄疸的5个UA浓度混合血清,过滤并分装后,-70℃保存。参照《标准物质/标准样品定值的一般原则和统计方法》(简称ISO Guide 35)用常规方法进行均匀性和稳定性研究。3家UA候选参考实验室对血清物质进行定值,定值结果用“靶值±总不确定度(uCRM)”表示。参照美国国家临床实验室标准委员会EP14-A2文件要求评价互通性。结果血清物质均匀性良好(P>0.05),瓶间变异均<1%。室温和4℃UA浓度的稳定性能满足日常使用需要,-20℃至少可稳定115 d,-70℃至少可稳定15个月。5水平物质的定值结果分别为(70.00±3.12)、(281.67±4.69)、(383.00±6.46)、(431.00±9.95)和(520.00±12.10)μmol/L。冰冻混合血清物质在15套UA常规检测系统中的互通性良好。结论研制的5水平冰冻混合人血清UA候选二级标准物质均匀性、稳定性、互通性良好,定值准确。     

Variation of serum creatinine, cystatin C, and creatinine clearance tests in persons with normal renal function

BACKGROUND: To determine the potential sensitivity of several renal function tests for detecting early changes in renal function, we compared the within-individual (W-I) variation over 5 months of serum creatinine, serum cystatin C, and creatinine clearance. METHODS: On 31 healthy subjects, blood and timed urine specimens were collected once each month to get 6 collections. Creatinine (enzymatic) in serum and urine and cystatin C (immunonephelometric) in serum were measured and glomerular filtration rate (GFR) by creatinine clearance and the Modification of Diet in Renal Disease (MDRD) equation were calculated. To compare W-I variations between different creatinine methods, we also measured creatinine by both enzymatic and kinetic alkaline picrate methods on 15 sets of frozen samples. RESULTS: For the 31 volunteers, the mean W-I variations for serum creatinine (5.8%) and cystatin C (5.4%) were both much lower than the W-I variation of creatinine clearance (18.7%). As expected, the MDRD GFR had a similar W-I variation (6.7%) to that of serum creatinine and its values were markedly different than GFR by creatinine clearance. On the 15 sets of frozen samples, the W-I variation of creatinine measured by the enzymatic method (CV 5.2%) was slightly less than by the picrate method (CV 6.2%). CONCLUSIONS: The low W-I variation of both serum cystatin C and serum creatinine suggests that serial measurements of either would detect a changes in renal function earlier than would GFR by creatinine clearance or MDRD equation, which allows reporting only for GFRs<60 ml/min/1.7 m(2). While we measured only creatinine clearance, the large variability, difficulty, and cost of all clearance measurements make them impractical for routine monitoring of patients.     

血清ALT与AST测定的基质效应评价

摘要：目的：评价7种室间质量评价（EQA）材料和4种市售材料在9个检测系统上测定血清ALT和AST的基质效应。 方法：参照美国临床实验室标准化协会(CLSI)EP14-A2指南,根据ALT和AST的参考方法建立不含磷酸吡哆醛的比对方法。9个检测系统的常规方法为待评方法。用比对方法和待评方法同时测定新鲜人血清、EQA材料及市售材料的ALT和AST水平,评价非血清样品的基质效应。 结果：ALT测定中1种EQA材料对所有检测系统均表现基质效应,AST测定中2种EQA材料对所有检测系统无基质效应,其他材料视系统的不同而表现出不同的情况。 结论：基质效应影响血清ALT和AST测定的准确性和可比性,应充分重视基质效应对临床检验量值溯源的影响。     

Specific creatinine determination in laboratory animals using the new enzymatic test kit "Creatinine-PAP"

The new Creatinine-PAP test kit from Boehringer Mannheim GmbH was evaluated for the determination of creatinine in dogs, rabbits, guinea pigs, rats, and mice. In comparison with methods based on the reaction with alkaline picrate, the enzymatic method gave the lowest serum creatinine values. The differences are caused by serum substances (non-creatinine chromogens) reacting with picric acid. Noticeable differences between the standard inulin clearance and creatinine clearance (e. g., in rats) arise because the non-creatinine chromogens interfere differently in the picric acid methods, and serum and urine contain different concentrations of interfering substances. The concentrations of non-creatinine chromogens are different in the various laboratory animals. Since these substances cannot be entirely removed (e. g., in rats, dogs) by the adsorption procedure with Fuller's earth, we recommend the peroxidase-coupled enzymatic test as a practical and specific method for routine measurements of creatinine in laboratory animals.     

Compensating for the influence of total serum protein in the Schwartz formula

Abstract Background: The Schwartz 2009 creatinine-based revised formula is the only pediatric GFR estimating formula, which is compatible with the recent global creatinine standardization. This formula is only applicable if enzymatic creatinine methods are used. We propose an equation, taking into account the relative bias caused by serum proteins to use Jaffe based creatinine data for GFR estimation. Methods: In a cohort study of 100 pediatric patients, serum creatinine was measured using a kinetic rate-blanked Jaffe assay (modified kinetic alkaline picrate method), a kinetic rate-blanked Jaffe compensated assay for reactive proteins and an enzymatic assay (creatinine plus method). Serum total protein, albumin, urea, uric acid and total bilirubin were measured with the use of commercial agents. Results: The difference in serum creatinine between the enzymatic method and the compensated Jaffe method was mainly dependent on the total protein concentration in serum (r2=0.61, p<0.001). After applying the proposed protein correction, corrected compensated Jaffe results and creatinine clearance values became interchangeable with enzymatic serum creatinine results (r2=0.99, p<0.001; Deming regression: slope: 0.9787, intercept: -0.351) and with the newly proposed Schwartz formula, respectively (r2=0.99, p<0.001; Deming regression: slope 1.004, intercept: 2.16). Conclusions: In this study, we demonstrated the usability of the alkaline picrate method in the Schwartz formula, taking into account the relative bias caused by serum proteins.     

Commutability of possible external quality assessment materials for progesterone measurement

BackgroundThe commutability of control materials used for external quality assessment (EQA) programs is of great importance. Evaluating the commutability of control materials is crucial to assess their suitability for EQA programs.MethodsForty-eight individual patient serum samples, commercial EQA samples, human serum pools (HSPs), commercially available sterile filtered charcoal stripped serum (CS) and swine serum were analyzed using the isotope dilution liquid chromatography-tandem mass spectrometry (ID LC-MS/MS) comparative method and six immunoassays for progesterone. The commutability was assessed according to the EP14-A2 guideline and the difference in bias approach, respectively.ResultsAccording to the EP14-A2 guideline, HSPs and CS were commutable for all the tested immunoassays, while swine serum showed positive matrix effects in some assays. Based on the difference in bias approach, a large number of inconclusive and noncommutable results appeared.ConclusionsThe commutability of the processed materials varied depending on which evaluation approach and criterion was applied. Noncommutability of the EQA materials was observed. And HSPs and CS were possible commutable candidate control materials according to the EP14-A2 guideline.