大鼠局灶性脑缺血再灌注后内皮细胞对不同缺血时间的耐受性

背景：脑缺血后内皮细胞结构和功能的完整性是决定缺血时间窗和出血转化的重要因素。目的：动态观察缺血再灌注内皮细胞形态学和超微结构变化，了解内皮细胞对不同缺血时间的耐受性。设计：随机对照实验。单位：暨南大学第二临床学院神经内科。材料：实验于1998—03／1999-03在暨南大学第二临床学院实验动物室完成。选择SD大鼠53只，随机分为9组：①假手术组5只。②缺血3h组6只。③缺血3h再灌3h组6只。④缺血6h组6只。⑤缺血6h再灌3h组6只。⑥缺血12h组6只。⑦缺血12h再灌3h组6只。⑧缺血24h组6只。⑨缺血24h再灌3h 6只。方法：采用线栓并环扎的方法建立大鼠局灶脑缺血模型。冠状面按A，B，C，D，E5等分切脑，取C片脑组织TTC染色定位边缘区。取D片常规脱水、透明、包埋、切片，苏木精-伊红染色，光镜观察。取B片缺血周围区和中心区脑组织，经固定包埋，半薄切片，超薄切片，透射电镜下观察。主要观察指标：①显微镜下观察不同缺血时间点内皮细胞的变化和出血性梗死发生的时间。②电镜下观察不同缺血时间点内皮细胞的超微结构改变。③电镜下观察紧密连接开放时间。④电镜下观察不同缺血时间点胶质细胞足突层空泡化程度。结果：53只大鼠均进入结果分析。光镜下：缺血3h即可见神经毡疏松，小血管周围水肿，缺血12h再灌3h可见缺血中心区小动脉破裂出血。电镜下：缺血3h可见毛细血管内皮细胞核肿胀，胞浆内胞饮增加，足突层空泡化呈＋；缺血3h再灌3h中心区足突层空泡化呈＋＋，边缘区呈卅；缺血6h再灌3h可见内皮紧密连接开放，足突层空泡化呈＋＋＋；缺血12h再灌3h后胞饮明显减少，线粒体肿胀也少见，但紧密连接开放增加，足突层空泡化呈＋＋＋-＋＋＋＋。结论：内皮细胞在缺血3h即可发生明显的结构变化，缺血6h可见内皮细胞紧密连接开放，缺血12h后可发生出血性转化，出血转化多发生于再灌注后的缺血中心区。     

局灶脑缺血边缘区星形胶质细胞的超微结构变化

目的:观察缺血再灌边缘区星形胶质细胞的形态学和超微结构变化,了解其坏死过程中形态学变化特点。方法:SD大鼠随机分为假手术组、单纯缺血组、缺血再灌组。标本冠状面按A,B,C,D4等分切脑。采用线栓并环扎的方法建立大鼠局灶脑缺血模型,单片脑组织TTC染色定位边缘区。取缺血周围区和中心区脑组织,经固定包埋,半薄切片(1μm),超薄切片。JEOL100透射电镜下观察。结果:缺血3h既可见星形胶质细胞明显变化,以细胞和核肿胀为主。再灌3h胞浆内可见肿大的线粒体和空泡变。缺血6h:细胞水肿加重。缺血6h再灌3h可见细胞肿胀破溃,染色质漏出核周,核周明显水肿。缺血12h,水肿进一步加重。缺血24h及再灌3h星形胶质细胞核破溃变形,核周明显水肿。结论:星形胶质细胞在缺血3h即可发生明显的结构变化,缺血中心区的星形细胞随着缺血时间的延长变化逐渐加重,而边缘区细胞的损伤与缺血时间呈不一致性。星形胶质细胞对缺血呈高度的敏感性,可以作为判断早期缺血的一个指标。     

局灶脑缺血时碱性成纤维生长因子和内皮生长因子的表达及其关系

目的:就血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF),碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)和VEGF-mRNA在局灶脑缺血不同时间和不同部位的表达和变化及他们之间的关系进行探讨。方法:SD大鼠48只。根据缺血时间和再灌时间分为9组,采用线栓并环扎的方法建立局灶脑缺血再灌模型,采用单片脑组织四氮唑(TTC)染色定位的方法确定中心区和边缘区。LSAB法免疫组化染色观察缺血中心区和边缘区VEGF,bFGF免疫阳性表达。RT-PCR法检测VEGF-mRNA动态变化。结果:在缺血3～6h,缺血中心区与边缘区VEGF,bFGF免疫阳性反应同时达高峰。单纯缺血组6h中心区和边缘区VEGF-mRNA转录水平达高峰,分别为0.86±0.07,1.00±0.11,24h基本降至正常水平。而假手术组和24h组中心区分别为0.20±0.04,0.22±0.04。缺血再灌组6h中心区和边缘区也在6h达高峰,分别为0.60±0.02,0.62±0.07,24h基本降至正常水平。假手术组和24h组中心区分别为0.20±0.037,0.31±0.04。结论:VEGF,bFGF早期的高表达在缺血损伤中起重要的作用,可能与神经细胞和内皮细胞的自身保护作用有关,VEGF,bFGF有相互促进表达的作用。     

局灶脑缺血边缘区星形胶质细胞的超微结构变化

目的：观察缺血再灌边缘区星形胶质细胞的形态学和超微结构变化，了解其坏死过程中形态学变化特点。方法：SD大鼠随机分为假手术组、单纯缺血组、缺血再灌组。标本冠状面按A，B，C，D4等分切脑。采用线栓并环扎的方法建立大鼠局灶脑缺血模型，单片脑组织TTC染色定位边缘区。取缺血周围区和中心区脑组织，经固定包埋，半薄切片(1μm)，超薄切片。JEOL100透射电镜下观察。结果：缺血3h既可见星形胶质细胞明显变化，以细胞和核肿胀为主。再灌3h胞浆内可见肿大的线粒体和空泡变。缺血6h：细胞水肿加重。缺血6h再灌3h可见细胞肿胀破溃，染色质漏出核周，核周明显水肿。缺血12h，水肿进一步加重。缺血24h及再灌3h星形胶质细胞核破溃变形，核周明显水肿。结论：星形胶质细胞在缺血3h即可发生明显的结构变化，缺血中心区的星形细胞随着缺血时间的延长变化逐渐加重，而边缘区细胞的损伤与缺血时间星不一致性。星形胶质细胞对缺血星高度的敏感性，可以作为判断早期缺血的一个指标。     

大鼠脑缺血再灌注后半影区葡萄糖转运体3表达的变化

背景近年来的研究表明,缺血缺氧导致脑内代谢异常乃至能量衰竭,是引起脑组织损伤坏死的重要原因,可见能量代谢障碍是脑缺血再灌注损伤的中心问题.在脑的能量代谢中葡萄糖转运体3中发挥着重要作用.目的观察大鼠局灶性脑缺血不同缺血时间和不同再灌注时间的脑梗死体积比、皮质半影区葡萄糖转运体3转录水平和蛋白水平的表达.设计随机对照实验.单位中山大学附属第二医院神经外科.材料实验于2002-08/10在中山大学附属第二医院医学研究中心动物试验室完成.选择SD大鼠56只,随机分成3组①缺血1 h再灌注组28只.②缺血3 h再灌注组24只.③假手术对照组4只.缺血1 h再灌注组自缺血开始分别选取1,3,6,12,24,72 h,1周7个时间点,每个时间点7只大鼠;缺血3 h再灌注组除无1 h时点外,其余时间点与缺血1 h再灌注组相同,假手术对照组只作切口,不作插线.方法用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血模型,检测缺血中心区和缺血半影区脑梗死体积比;剥取缺血半影区皮质组织,采用反转录-聚合酶链反应测定葡萄糖转运体3 mRNA水平的变化;用免疫组织化学方法半定量测定葡萄糖转运体3蛋白水平的变化.主要观察指标①各组大鼠脑缺血再灌注后的脑梗死面积.②各组大鼠脑缺血再灌注后的葡萄糖转运体3 mRNA表达水平的变化.③各组大鼠脑缺血再灌注后的葡萄糖转运体3蛋白水平表达的变化.结果56只大鼠均进入结果分析.①脑缺血1 h后再灌注组的脑梗死体积明显小于缺血3 h再灌注组梗死体积.②葡萄糖转运体3 mRNA及蛋白水平表达变化葡萄糖转运体3自3 h即开始升高,24 h到达高峰,1周时仍高于假手术对照组;缺血3 h再灌注组在3 h有一下降点,然后升高,24 h到高峰,1周时接近正常水平.葡萄糖转运体3蛋白水平的表达与mRNA相符合.结论葡萄糖转运体3在缺血半影区的表达上调,可能是机体对缺血再灌注的保护性反应.     

大鼠局灶脑缺血再灌注神经细胞与微循环形态学动态病理变化

目的动态观察大鼠缺血边缘区神经细胞与微循环形态学改变。方法采用线栓并环扎的方法建立大鼠局灶脑缺血动物模型,用单片脑组织TTC染色定位方法确定缺血中心区与边缘区。结果缺血3h和再灌3h边缘区即可见正常组织和缺血组织交错存在。缺血6h以后中心区与边缘区分界尚不清,脑组织的损伤和水肿进一步加重。缺血12h后缺血中心区和边缘区分界明显,呈裂隙状改变,并在中心区可见片状出血灶。结论神经细胞和微循环的缺血性改变发生在缺血3h,缺血3h边缘区可见以小血管为中心的缺血小区,正常组织和缺血组织交错存在。缺血12h缺血与正常组织分界清楚,可见中心靠边缘区小血管出血。     

局灶脑缺血时碱性成纤维生长因子和内皮生长因子的表达及其关系

目的：就血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)，碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)和VEGF-mRNA在局灶脑缺血不同时间和不同部位的表达和变化及他们之间的关系进行探讨。方法：SD大鼠48只。根据缺血时间和再灌时间分为9组，采用线栓并环扎的方法建立局灶脑缺血再灌模型，采用单片脑组织四氮唑(TTC)染色定位的方法确定中心区和边缘区。LASB法免疫组化染色观察缺血中心区和边缘区VEGF,bFGF免疫阳性表达。RT-PCR法检测VEGF-mRNA动态变化。结果：在缺血3～6h，缺血中心区与边缘区VEGF，bFGF免疫阳性反应同时达高峰。单纯缺血组6h中心区和边缘区VEGF-mRNA转录水平达高峰，分别为0．86&;#177;0．07，1．00&;#177;0．11，24h基本降至正常水平：而假手术组和24h组中心区分别为0．20&;#177;0．04，0．22&;#177;0．04。缺血再灌组6h中心区和边缘区也在6h达高峰，分别为0．60&;#177;0．02，0．62&;#177;0．07，24h基本降至正常水平。假手术组和24h组中心区分别为0．20&;#177;0．037，0.31&;#177;0．04。结论：VEGF，bFGF早期的高表达在缺血损伤中起重要的作用，可能与神经细胞和内皮细胞的自身保护作用有关，VEGF，bFGF有相互促进表达的作用。     

大鼠局灶脑缺血再灌注神经细胞与微循环形态学动态病理变化

目的 动态观察大鼠缺血边缘区神经细胞与微循环形态学改变。方法 采用线栓并环扎的方法建立大鼠局灶脑缺血动物模型，用单片脑组织TTC染色定位方法确定缺血中心区与边缘区。结果 缺血3h和再灌3h边缘区即可见正常组织和缺血组织交错存在。缺血6h以后中心区与边缘区分界尚不清，脑组织的损伤和水肿进一步加重。缺血12h后缺血中心区和边缘区分界明显呈裂隙状改变，并在中心区可见片状出血灶。结论 神经细胞和微循环的缺血性改变发生在缺血3h，缺血3h边缘区可见以小血管为中心的缺血小区，正常组织和缺血组织交错存在。缺血12h缺血与正常组织分罪清楚，可见中心靠边缘区小血管出血。     

大鼠脑缺血再灌注后半影区葡萄糖转运体3表达的变化

背景：近年来的研究表明，缺血缺氧导致脑内代谢异常乃至能量衰竭，是引起脑组织损伤坏死的重要原因，可见能量代谢障碍是脑缺血再灌注损伤的中心问题。在脑的能量代谢中葡萄糖转运体3中发挥着重要作用。 目的：观察大鼠局灶性脑缺血不同缺血时间和不同再灌注时间的脑梗死体积比、皮质半影区葡萄糖转运体3转录水平和蛋白水平的表达。 设计：随机对照实验。 单位：中山大学附属第二医院神经外科。材料：实验于2002-08／10在中山大学附属第二医院医学研究中心动物试验室完成。选择SD大鼠56只，随机分成3组：①缺血1h再灌注组28只。②缺血3h再灌注组24只。③假手术对照组4只。缺血1h再灌注组白缺血开始分别选取1，3，6，12，24，72h，1周7个时间点，每个时间点7只大鼠；缺血3h再灌注组除无1h时点外，其余时间点与缺血1h再灌注组相同，假手术对照组只作切口，不作插线。 方法：用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血模型，检测缺血中心区和缺血半影区脑梗死体积比；剥取缺血半影区皮质组织。采用反转录-聚合酶链反应测定葡萄糖转运体3mRNA水平的变化；用免疫组织化学方法半定量测定葡萄糖转运体3蛋白水平的变化。 主要观察指标：①各组大鼠脑缺血再灌注后的脑梗死面积。②各组大鼠脑缺血再灌注后的葡萄糖转运体3mRNA表达水平的变化。③各组大鼠脑缺血再灌注后的葡萄糖转运体3蛋白水平表达的变化。 结果：56只大鼠均进入结果分析。①脑缺血1h后再灌注组的脑梗死体积明显小于缺血3h再灌注组梗死体积。②葡萄糖转运体3mRNA及蛋白水平表达变化：葡萄糖转运体3白3h即开始升高，24h到达高峰，1周时仍高于假手术对照组；缺血3h再灌注组在3h有一下降点，然后升高，24h到高峰，1周时接近正常水平。葡萄糖转运体3蛋白水平的表达与mRNA相符合。 结论：葡萄糖转运体3在缺血半影区的表达上调，可能是机体对缺血再灌注的保护性反应。     

电针刺激神经干对脑缺血再灌注后不同时期皮层BDNF mRNA表达的影响

目的　观察脑缺血再灌注大鼠脑源性神经营养因子 (BDNF)的动态变化过程及电针刺激神经干对BDNF表达的影响。方法　共选取成年健康雌性Wistar大鼠 68只 ,采用线栓法建立脑缺血再灌注动物模型 ,并随机分为对照组 (4只 )、MCAO组 (3 2只 )及神经干电针刺激组 (3 2只 )。神经干电针刺激组大鼠于再灌注后 2h ,6h ,12h ,2 4h ,2d ,3d ,7d及 14d时各进行 1次神经干电针刺激。利用原位杂交法观察上述时间点各组大鼠脑皮层BDNFmRNA表达的时程变化过程。结果　脑缺血 1h再灌注 2h ,6h ,12h ,2 4h ,2d及 3d时 ,MCAO组与对照组比较 ,前者缺血侧脑皮层BDNFmRNA阳性细胞数量显著增多 (均P <0 .0 1) ,并且于再灌 2h及再灌 2 4h时分别出现峰值 ,如再灌 2h时的BDNFmRNA含量显著高于再灌 6h及再灌 12h时的BDNFmR NA含量 ,而再灌 2 4h时的BDNFmRNA含量则显著高于其它各时间点的BDNFmRNA含量 (均P <0 .0 5 )。经电针刺激神经干后 ,大鼠在缺血再灌 2h以后的各时间点里 ,其缺血侧脑皮层BDNFmRNA阳性细胞数量均显著多于MCAO组及对照组 (均P <0 .0 5 )。结论　电针刺激缺血再灌注大鼠神经干 ,可显著增强其缺血侧脑皮质BDNFmRNA的表达 ,可能是电针刺激发挥脑保护效应的重要机制之一。     

雌激素抑制脑缺血再灌注损伤后炎症反应

背景:炎性细胞因子的释放、粘附分子上调导致的白细胞浸润与脑梗死灶的形成有密切关系,哪些因素对其能产生影响已得到人们的广泛关注。目的:探讨雌激素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后炎症反应的影响。设计:随机对照实验。单位:解放军南京军区南京总医院。材料:实验在解放军南京军区南京总医院神经内科和病理科完成。成年雌性SD大鼠,制作脑缺血模型时体质量控制在280～350g。方法:大鼠分3组:对照组、卵巢切除组、雌激素治疗组(雌二醇,200μg/kg,皮下注射,每周1次,共4周)。4周后线栓法建立右侧大脑中动脉闭塞1h、2h再灌注0、1、3、6、22、70h模型。在苏木精-伊红染色缺血半球选取10个高倍视野计算脑组织内浸润的中性粒细胞均数,免疫组化检测核因子κB表达。主要观察指标:脑实质内中性粒细胞浸润程度和核因子κB表达水平。结果:①核因子-κB表达:卵巢切除组缺血1h即有表达,对照组及雌激素治疗组在缺血2h才有阳性细胞,3组均在缺血2h再灌注3h时相表达最强,后逐渐降低,卵巢切除组在再灌注70h仍有少量表达,对照组及雌激素治疗组再灌注22h后未见核因子κB阳性细胞。②在缺血2h再灌注22h时,卵巢切除组动物脑缺血区中性粒细胞浸润数量明显增多,与雌激素治疗组相比,差异有显著性差异(P=0.045)熏在缺血2h再灌注70h时,卵巢切除组仍多于对照组和雌激素治疗组,但仅和对照组的差异有显著性意义。结论:雌激素能抑制脑缺血再灌注损伤后炎症反应。     

丹参甘露醇对肢体缺血再灌注所致远处器官损伤的保护作用

目的 通过动物实验观察丹参和甘露醇对肢体缺血再灌注所致心、肝、肾、胰损伤的保护作用。方法 150只Wistar大鼠随机分成正常对照组、缺血2h组、缺血3h组、缺血3h组用丹参组和缺血3h用甘露醇组5个组。实验组于缺血、再灌注1、2、3和24h聚材光镜对比观察。结果 肢体缺血和再灌注后,实验组心、肝、肾、胰毛细血管扩张、充血、中性白细胞浸润、细胞变性、组织损伤。用丹参和甘露醇的病变明显轻于未用药组。结论 丹参和甘露醇都有减轻肢体缺血再灌所致远处器官损伤作用。     

脑缺血/再灌注后缺血核心区皮质内MCP-1mRNA和蛋白质表达

目的　观察大鼠脑缺血 /再灌注后缺血核心区皮质内单核细胞趋化蛋白 (MCP) - 1mRNA和蛋白质表达情况。方法　用半定量的逆转录PCR(RT -PCR)法测定缺血 2h再灌注不同时间缺血核心区脑皮质内MCP - 1mRNA的表达 ,ELISA法测定MCP - 1含量的变化。结果　缺血核心区脑皮质内MCP - 1的mRNA表达于缺血 2h明显升高 ,再灌注后 16h达高峰(均值是缺血 2h组的 2 2倍 ,与缺血 2h组相比差异显著 ,P <0 0 1) ,此后仍维持较高水平的表达直至再灌注后 4 8h(与假手术组相比 ,P <0 0 5 ) ;MCP - 1含量于再灌注后 6h开始升高 (均值 2 2 5ng/g组织 ,是假手术组的 17 0倍 ,P <0 0 5 ) ,此后逐渐升高 ,4 8h达到高峰 (均值 110 9ng/g组织 ,是假手术组的 83 7倍 ,P <0 0 1)。结论　脑缺血 /再灌注后缺血核心区皮质内MCP - 1的mRNA和蛋白质表达均明显增加 ,提示MCP - 1在脑缺血 /再灌注损伤中发挥重要作用     

肢体缺血再灌流致肠损伤的组织学观察

目的 :通过动物实验观察肢体缺血再灌流损伤对肠粘膜形态学结构的影响。方法 :110只Wistar大鼠随机分成三个组 :缺血 2h ,缺血 3h和对照组。缺血、再灌注 1、 2、 3和2 4h取材行光镜观察和组织学评估。结果 :肢体缺血和再灌流期间 ,大肠和小肠粘膜固有层毛细血管扩张、充血、多核白细胞浸润 ,粘膜厚度和隐窝深度明显减少 (P <0 0 1)。小肠绒毛高度相对增加 ,隐窝细胞变性、坏死。结论 :肢体缺血再灌流可引起肠结构和功能改变     

肌苷对脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和细胞色素C基因表达的影响

背景细胞色素C(chromosome C,CytC)的释放是细胞凋亡的重要环节之一.肌苷对脑缺血损伤神经细胞凋亡可能具有一定的抑制作用,但其机制尚不十分清楚.目的研究肌苷对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和CytC基因表达的影响.设计随机对照的实验研究.地点和材料本实验在青岛大学医学院脑血管病研究所和山东省脑血管病防治重点实验室完成.成年健康雌性SD大鼠68只,体质量230～280 g,清洁级,由中国科学院上海实验动物中心提供.干预应用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞再灌注模型,随机分为治疗组(腹腔注射肌苷,100mg/kg)32只和对照组(腹腔注射生理盐水)32只,每组再随机分为缺血1.5 h再灌注2,6,12,24 h,2,3,7,14 d组(n=4),另外4只作假手术组.原位末端标记和原位杂交技术分别观察神经细胞凋亡和CytC mRNA表达.主要观察指标脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和CytC mRNA表达.结果脑缺血再灌注后2 h皮质区与纹状体区即出现凋亡细胞并逐渐增加,分别于1 d和2 d达高峰,之后逐渐减少,至14 d接近于假手术组水平;经肌苷治疗后凋亡神经细胞减少,其中再灌注12 h～7 d较对照组有显著性差异.CytC mRNA于脑缺血再灌注2h开始表达,皮质区12 h达高峰,纹状体区1 d达高峰,以后逐渐下降;肌苷治疗组CytC mRNA表达于再灌注12 h～7 d在皮质区、12 h～14d在纹状体区较对照组显著降低.结论肌苷可能通过抑制细胞凋亡及相关基因表达而发挥其神经保护作用,对治疗脑血管病有潜在的应用价值.     

肢体缺血再灌注致肠损伤及甘露醇的保护作用

通过动物实验观察甘露醇对肢体缺血再灌注所致肠损伤的保护作用。方法８０只Ｗｉｓｔａｒ大白鼠随机分成正常对照组,缺血３小时和缺血３小时用甘露醇３个组。实验组于缺血、再灌注１、２、３和２４小时取材光镜对比观察和组织学评估。结果肢体缺血和再灌注后,实验组肠粘膜固有层毛细血管扩张、充血、大量多核白细胞浸润。     

肢体缺血再灌注致肺损伤及丹参的保护作用

目的 通过动物实验方法观察丹参对肢体缺血再灌注所致肺损伤的保护作用。方法110只Wistar大鼠随机分成正常对照、缺血3h和缺血3h用丹参三个组。实验组于缺血、再灌注1、2、3和24h取材，光镜下对比观察和组织学评估。结果肢体缺血和再灌注后，实验组肺泡隔增厚、水肿，毛细血管扩张、充血，大量多核白细胞浸润、贴壁，部分肺不张。用丹参组的病理改变明显轻于未用丹参组。结论丹参能有效地减轻肢体缺血再灌注所致的肺损伤。     

脑缺血再灌注后皮质区和纹状体区细胞周期蛋白D1和周期蛋白依赖性蛋白激酶4基国表达对神经细胞凋亡的影响

背景脑缺血再灌注后细胞周期蛋白的表达以其在凋亡机制中的作用为主,部分细胞凋亡是由于细胞增殖周期的异常调控所致. 目的研究脑缺血再灌注后细胞周期蛋白 D1( cyclin D1)和周期蛋白依赖性蛋白激酶 4( cyclin dependent kinase,CDK4)基因表达及其与神经细胞凋亡的关系. 设计随机对照的实验研究. 地点和材料本实验在青岛大学医学院脑血管病研究所和山东省脑血管病防治重点实验室完成.成年健康雌性 SD大鼠 36只,体质量 230～ 270 g,清洁级,由中国科学院上海实验动物中心提供.将动物随机分为假手术组 4只和实验组 32只,实验组再进一步分为缺血 1.5 h再灌注 2, 6, 12 h, 1, 2, 3, 7和 14 d亚组,每组 4只. 方法全部实验均由本文作者完成.具体方法应用线栓法经左侧颈外-内动脉插线建立 SD大鼠大脑中动脉阻塞再灌注模型,原位末端标记法检测脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的变化,原位杂交技术检测 cyclin D1 mRNA和 CDK4 mRNA的表达. 结果脑缺血再灌注 2 h脑组织即开始出现凋亡神经细胞,并于 1 d和 2 d分别在皮质区和纹状体区达高峰(分别为 72.80± 4.66和 96.75 ± 4.37).神经细胞 cyclin D1 mRNA和 CDK4 mRNA的表达分别于再灌注 2 h和 6 h开始逐渐增强,并于 12 h和 1 d分别在皮质区和纹状体区达高峰(皮质区分别为 94.50± 2.75和 85.75± 3.73,纹状体区分别为 88.25± 5.06和 89.80± 2.93),至再灌注 14 d降至假手术组水平. cyclin D1 mRNA和 CDK4 mRNA的表达与凋亡细胞的区域基本相同. 结论脑缺血再灌注后皮层区较纹状体区对缺血更为敏感, cyclin D1 mRNA和 CDK4 mRNA表达可能是诱导细胞凋亡的重要因素之一.     

小鼠局灶性缺血再灌注模型的插线法试验

背景国外小鼠局灶性脑缺血模型技术已经成熟,由于条件限制国内现多以大鼠制作脑缺血模型.目的建立小鼠局灶性脑缺血再灌注模型,以适应在基因水平进行脑缺血和再灌注损伤分子机制的研究.设计随机对照实验.单位承德医学院基础医学研究所.材料实验于2002-09/2003-05在承德医学院基础研究所完成.选择18只昆明小鼠2～3月龄,体质量20～25 g,雌雄兼用.分为假手术组、缺血3 h再灌18 h和24 h组,每组6只.干预通过神经病学评分,红四氮唑染色及病理形态学的观察,对造模的可靠性进行评价.选用尼龙钓丝(Ф0.128 mm)经过液体石蜡浸泡后,从颈外动脉向颈内动脉插入,阻断小鼠右侧大脑中动脉3 h后,拔出线栓再灌注18 h和24 h.主要观察指标小鼠脑梗死体积及神经学评分.结果实验共18只小鼠均进入结果分析.①假手术组未出现神经缺损症状.②手术组小鼠神经症状表现为提尾悬空时头向左歪,左前肢内收、肩内旋,左前肢肌张力降低,不能完全伸直,自主活动时,以左后腿为圆心向左旋转,左前肢压在腹下与右前肢交叉成剪刀状,左侧肢体瘫痪更为明显,尤其是前肢,神经症状随再灌注时间延长而加重.③红四氮唑染色可清晰地显示出脑梗死范围,缺血3 h再灌18 h梗死体积为(13±2.3)mm3,缺血3 h再灌注24 h梗死体积为(16±4.5)mm3,并相对稳定,光学显微镜下可见脑缺血后的病理改变.阻断3 h再灌18,24 h后病理损伤性改变随时间延长加重.结论插线法制作小鼠脑缺血再灌注模型无需开颅,创伤小,缺血的部位较恒定、可以准确控制缺血和再灌注时间,此模型可做为观察脑血管疾病的病理生理改变、预后及药物治疗作用的理想实验动物模型.