心房颤动致犬肺静脉肌袖缝隙连接蛋白40表达降低

目的探讨心房颤动时犬肺静脉肌袖缝隙连接蛋白40和43(Cx40,Cx43)基因及蛋白表达的变化及其意义。方法17只杂种犬随机分为心房颤动组(11只)和对照组(6只),房颤组经颈外静脉将电极置入右心耳快速起搏(400次/分)8周复制房颤模型,开胸取右上肺静脉近心房1cm内组织,用荧光实时定量PCR及Western blot技术检测缝隙连接蛋白40和43(Cx40,Cx43)mRNA及蛋白的表达量。结果房颤组和对照组犬肺静脉肌袖组织Cx40和Cx43的mRNA表达无显著性差异,房颤组Cx40蛋白表达明显低于对照组(P<0.05),Cx43蛋白表达无显著性差异。结论房颤可使肺静脉肌袖Cx40蛋白表达降低,缝隙连接发生重构,从而促进房颤的维持和稳定。     

螺内酯对慢性房颤模型兔心房结构重构的影响

目的:探讨螺内酯(SP)对慢性房颤模型兔心房结构重构的影响及其可能的机制。方法:新西兰兔开胸后于左心房植入起搏电极,随机分为快速心房起搏组(RAP组)、螺内酯组(RAP+SP组)和假手术组(sham组)。RAP组和RAP+SP组持续心房起搏3周,分别给予安慰剂和螺内酯20 mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃,sham组不起搏,不给药。起搏前、后评价心房结构和功能,检测房颤诱发率;起搏后评价心房间质纤维化程度,检测心房胶原蛋白(collagen)Ⅰ、collagenⅢ、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的表达水平。结果:起搏3周后,与sham组相比,RAP组和RAP+SP组兔左心房明显扩张且伴收缩功能障碍;RAP+SP组与RAP组相比,左房结构和功能无明显差异。Sham组、RAP组和RAP+SP组各7只兔分别有0只、7只、5只诱发持续性房颤。与sham组相比,RAP组和RAP+SP组兔心房纤维化程度及collagenⅠ、collagenⅢ、MMP-2和MMP-9的蛋白表达水平明显增加;RAP+SP组与RAP组相比,心房纤维化程度和上述蛋白表达水平均下降(P0.05)。结论:螺内酯能够抑制慢性房颤模型兔心房间质纤维化和胶原蛋白表达,抑制心房结构重构,这可能与螺内酯抑制心房MMP-2和MMP-9蛋白的表达有关。     

MPO、MMP-2和MMP-9在兔房颤模型心房肌中的表达变化

目的:观察兔房颤模型心房肌组织髓过氧化物酶(MPO)、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的表达,并探讨三者与房颤时心房结构重构的关系。方法:20只新西兰大白兔,开胸后于左心房植入起搏电极,随机分为2组:快速心房起搏组(RAP组)以600 min-1的频率快速起搏心房3周;假手术组(sham组)不予起搏。起搏前、后行超声心动图检查评价心房和心室的结构和功能,行心房burst刺激检测房颤诱发率;起搏后采用Masson染色评价心房的间质纤维化程度,采用RT-q PCR和Western blot检测心房MPO、MMP-2和MMP-9 mRNA和蛋白的表达水平。结果:起搏3周后,与sham组相比,RAP组兔左心房明显扩张伴收缩功能障碍,左心室的结构和功能变化不明显;RAP组房颤诱发率和间质纤维化百分比均明显增加,且心房MPO、MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白的表达明显增加。结论:持续快速心房起搏兔房颤模型会出现明显心房结构重构,心房MPO、MMP-2和MMP-9表达上调可能是其潜在的分子机制。     

阿托伐他汀对慢性兔房颤模型心房电重构的影响

目的:通过快速起搏心房3周建立慢性兔房颤模型,探讨阿托伐他汀(ATO)对该模型心房电重构的影响及其可能机制。方法:将24只新西兰大白兔开胸,于左心房植入起搏和测试电极,随机分为3组:模型(model)组和ATO组持续心房起搏3周,分别给予安慰剂和阿托伐他汀2.5 mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃;假手术(sham)组不起搏,不给药。起搏前后用电生理刺激仪检测心率、P波宽度、心房有效不应期(AERP)和房颤诱发率的变化;起搏后采用Western blot检测心房Cav1.2、Kv4.3和髓过氧化物酶(MPO)的蛋白表达水平。结果:Sham组、model组和ATO组分别有0、5和4只兔诱发持续性房颤。起搏3周后,与sham组相比,model组和ATO组兔心率和P波宽度均增加,AERP缩短(P0.05);ATO组与model组相比,AERP增加(P0.05),心率和P波宽度无明显变化。与sham组相比,model组和ATO组兔心房Cav1.2和Kv4.3的蛋白表达水平下降,MPO的蛋白表达水平升高(P0.05);ATO组与model组相比,Cav1.2的表达增加,MPO的表达下降(P0.05),Kv4.3无明显变化。结论:阿托伐他汀能够通过抑制慢性兔房颤模型心房Cav1.2蛋白表达下降和AERP的缩短,抑制心房电重构,其潜在机制可能是阿托伐他汀抑制了心房MPO蛋白的高表达。     

乌头碱诱导的心房颤动对内皮素1分泌及其受体表达的影响

<正>目的:观察和探讨乌头碱诱导的心房颤动(房颤)对内皮素1(ET-1)分泌及其受体表达的影响,并观察ET-1下游的信号通路的变化。方法:采用大鼠左心房离体灌流模型,利用放射性免疫技术检测ET-1分泌的水平;利用蛋白免疫印迹法分析心房肌缝隙连接蛋白40(Cx40)、43(Cx43)、ETA型受体(ETRA)、ETB型受体(ETRB)蛋白水平的变化以及MAPK/ERK和PI3K/     

甲状腺素对犬心房电生理特征和连接蛋白Cx43的影响

目的 研究甲状腺素对犬心房电生理特征和连接蛋白Cx43表达及分布的影响，探讨甲状腺功能亢进性心脏病（甲亢性心脏病）发生房颤的机制。方法 健康成年杂种犬16只，随机分为对照组（n=6）和实验组（n=10）。给实验组犬腹腔注射左旋甲状腺素（L-Thy）80μg/(kg·d)，持续8个月，以建立犬甲亢动物模型，分别于0、2、4、6和8个月测定心房有效不应期（AERP），Western blot检测心房连接蛋白Cx43表达，激光共聚焦显微镜观察Cx43表达及分布的改变。 结果 和对照组相比，L-Thy组犬第4、6、8个月AERP明显缩短（P<0.05），左右心房Cx43表达显著下降(P<0.01)，两组左房Cx43的表达量的差值显著高于两组右房Cx43表达量的差值(P<0.05)，左右心房分布于细胞两端的Cx43显著减少（P<0.01）。结论 甲状腺激素导致的心房电重构和连接蛋白的重构是甲状腺激素所致心房重构过程的一部分，参与促成了甲亢性心脏病房颤的发生、发展及维持。     

心房纤颤患者心房肌Cx43的蛋白表达

目的：研究房颤患者心房肌细胞连接蛋白43(Cx43)的蛋白表达。方法：应用SP免疫组化方法，比较正常和房颤患者心房肌Cx43的表达。结果：(1)正常心房肌细胞Cx43呈斑点状或带状，大量分布于细胞侧连接处。部分位于闰盘处。(2)房颤患者心房肌细胞Cx43颗粒发生重排，杂乱地分布于心肌的各个部位。房颤时间长者，部分Cx43移入细胞质中，表现为某些区域极度增加或减少。(3)房颤患者心房肌细胞Cx43的蛋白表达量未发生显著变化。结论：Cx43在房颤患者心房肌细胞发生重排，呈无序分布，可能是心房纤颤发病的原因之一；并提示房颤仅对Cx43的表达形式产生影响。     

丹酚酸B通过调控Cx43抑制铁死亡对心肌梗死大鼠模型的保护机制研究

目的：基于铁死亡探讨丹酚酸B(Sal B)对心肌梗死（MI）大鼠模型的保护作用,并分析缝隙连接蛋白43(Cx43)在其中的作用。方法：经结扎左冠状动脉法构建MI大鼠模型,随机分组为假手术（sham）组、MI组、Sal B组、Sal B+AAV9-GFP组、Sal B+AAV9-GFP-Cx43-siRNA组和Sal B+AAV9-GFP-Cx43-siRNA+铁死亡抑制剂ferrostatin-1(Fer-1)组,造模2 d后给予相应处理。4周后,HE染色和Perl blue染色分别观察心肌形态和铁累积;免疫荧光染色观察Cx43在心肌中分布;透射电镜观察心肌超微结构;试剂盒检测血清肌酸激酶MB(CK-MB)、心肌钙蛋白I(cTnI)和乳酸脱氢酶（LDH）水平,以及心肌丙二醛（MDA）、活性氧（ROS）、谷胱甘肽（GSH）和铁含量;Western blot检测心肌p-Cx43和Cx43蛋白水平。结果：相较于sham组,MI组心肌纤维出现坏死、断裂,排列紊乱,心肌线粒体出现损伤,Cx43蛋白在心肌细胞侧侧连接处弥散分布,血清CK-MB、cTnI和LDH水平,以及心肌MDA、ROS、铁离子含...     

迷走神经与心房颤动犬上腔静脉肌袖内缝隙连接重构的关系

目的探讨心房颤动(AF)犬上腔静脉(SVC)肌袖缝隙连接蛋白(Cx)含量和分布改变与迷走神经的关系。方法24只杂种犬,分为3组:假手术组(Sham组)、切除上腔静脉-主动脉根部(SVC-AO)脂肪垫组(RM组)和保留SVC-AO脂肪垫组(RS组)。RM组和RS组植入起搏器起搏6周,以程序刺激或猝发刺激诱发建立AF犬模型;Sham组植入起搏器但不起搏。取SVC肌袖组织行Cx40、Cx43免疫荧光染色并定量分析,透射电镜观察缝隙连接(GJ)超微结构。结果RS组持续性AF诱发率为71.4%,高于RM组(P<0.01)。Sham组和RS组Cx40、Cx43表达高于RM组(P<0.05);RS组Cx40、Cx43表达高于Sham组(P<0.05)。Sham组和RM组Cx40、Cx43端/侧比值高于RS组(P<0.05)。RS组GJ通道变宽,出现肌溶解和线粒体空泡状改变。结论迷走神经可能通过介导SVC肌袖Cx重构而使AF易于发生和维持;切除SVC-AO脂肪垫可减弱此效应。     

螺内酯对高甲状腺素诱导的兔心房颤动和心房重构的影响

目的:探讨螺内酯对高甲状腺素诱导的兔心房颤动(AF)和心房重构的影响。方法:新西兰兔33只随机分为3组:正常对照组(C)、高甲状腺素组(H)和螺内酯组(S)。H和S组腹腔注射甲状腺素4周建立兔甲亢性AF模型,之后,S组给予螺内酯灌胃2周。给药结束后,通过心内电生理高频刺激诱发AF,计算AF诱发率,测量心房有效不应期(AERP)。荧光定量PCR测定L型钙通道亚基(Cav1.2)、钾通道相关亚基(Kv1.5、Kv4.3)和缝隙连接蛋白(Cx40、Cx43)的mRNA表达,Western blot和免疫组化测定上述指标的蛋白表达。结果:螺内酯降低AF诱发率。H组和S组的AERP无明显差异(P0.05)。S组Cav1.2蛋白表达水平明显高于H组(P0.05)。S组Kv1.5的mRNA和蛋白表达水平均明显低于H组(P0.05),S组Kv4.3的蛋白表达水平显著低于H组(P0.05)。S组Cx43的mRNA表达水平明显低于H组(P0.01),S组Cx40的蛋白表达水平显著低于H组(P0.05)。结论:螺内酯可降低高甲状腺素所致的AF诱发率,改善其引起的心房重构。     

雌激素改善卵巢切除合并慢性铝中毒对大鼠心脏Cx43表达和金属元素变化的影响

目的 探讨雌激素治疗卵巢切除合并慢性铝中毒大鼠,对心脏间隙连接蛋白43(Cx43)表达和金属离子含量的影响. 方法 40只6月龄雌性SD大鼠,随机分为卵巢假切除组(Sham组),卵巢切除组(OVX组)、卵巢切除合并慢性铝中毒组(OVX+Al组)和卵巢切除合并慢性铝中毒及尼尔雌醇灌胃组(OVX+Al+E2组).于术后3个月,利用离子体发射光谱仪测定心脏金属元素含量,采用免疫组织化学和图像分析法观测心肌细胞Cx43表达.结果 1. Cx43表达:Sham组心房肌Cx43遍布于心肌细胞侧面连接和端闰盘处.心室肌分布于心肌闰盘处.OVX组心房肌的Cx43颗粒部分由细胞侧-侧连接处移至闰盘处或杂乱排列,心室肌Cx43由闰盘处移至细胞侧-侧连接处或杂乱地无序排列,少部分出现在细胞质中,OVX+Al组Cx43排列类似于OVX组,且更加紊乱.OVX+Al+E2组心房肌Cx43回复正常分布,但心室肌未发现回复.2.图像分析结果,各组大鼠心肌细胞Cx43的面积构成比比较无显著差异.3.金属元素含量:在Sham组,金属元素在心脏含量的排列顺序如下:Mg＞Ca＞Fe＞Zn＞Al＞Si＞Cu＞Mn＞Se和Cd.各组间比较具有显著差异的是:与Sham组比较,OVX组Zn降低;OVX+Al+E2组Al、Cd、Si、Se均升高;OVX+Al组与OVX组比较,Si升高、Zn降低.OVX+Al+E2组与OVX+Al组比较, Cd、Mn、Se升高. 结论雌激素改善卵巢切除及加铝后引起的心脏金属元素含量改变和心肌细胞间隙连接蛋白Cx43重构.     

心房颤动患者心房纤维化与缝隙连接重构的关系

目的：探讨心房颤动患者心房肌胶原纤维与缝隙连接重构在房颤发病机制中的可能作用以及它们之间的关系。 方法： 取44例心脏病患者的右心耳标本（房颤26例,为AF组；窦性心律18例，为SR组）,（1）行天狼猩红染色，偏光显微镜下观察AF组与SR组心房肌Ⅰ型胶原并通过图像分析系统分析统计2组间Ⅰ型胶原含量分数（collagen volume fraction of collagen Ⅰ,CVF-Ⅰ）的差异；（2）超微病理切片，透射电镜下观察闰盘并统计闰盘组数及闰盘重构分数（remodeled intercalated disc fraction, RIDF）；（3）连接蛋白43（connexin 43,Cx43）免疫组化染色，普通显微镜下观察分析缝隙连接蛋白Cx43的含量分数（volume fraction of Cx43,Cx43VF），统计2组间的差异；（4）CVF-I与Cx43VF、RIDF分别进行Pearson相关分析。 结果： （1）AF组CVF-I高于SR组（1.26 vs 0.57, P＜0.01）；(2)2组间闰盘组数无显著差异(9.54 vs 10.11, P>0.05), AF组闰盘重构分数大于SR组(39.48 vs 15.61, P＜0.01)；(3)AF组Cx43VF低于SR组(3.45 vs 5.22, P＜0.01)；(4)CVF-I与闰盘重构比例正相关(r＝0.96,P＜0.01)；(5)CVF-I与Cx43VF负相关(r＝－0.98,P＜0.01)。 结论： 房颤患者Ⅰ型胶原纤维化程度增加，闰盘与连接蛋白发生重构。纤维化可能分离心肌，使闰盘重构,进而影响到缝隙连接蛋白的分布，参与房颤发生发展的过程。     

肌肽对1型糖尿病大鼠心脏的保护作用

目的:探讨肌肽(CAR)对1型糖尿病(T1DM)大鼠心功能的影响及保护机制。方法:采用链脲佐菌素(STZ)单次腹腔注射的方法制作大鼠1型糖尿病模型。将40只雄性SD大鼠随机分为正常对照(C)组,肌肽对照(C+CAR)组,糖尿病模型(DM)组和糖尿病CAR治疗(DM+CAR)组,每组10只。12周后处死大鼠,颈总动脉插管测定心功能;酶联免疫吸附法测定左心室肌超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;real-time PCR法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和IL-6的mRNA表达;免疫荧光法检测缝隙连接蛋白43(Cx43)的分布;Western blot法检测Cx43及蛋白激酶C(PKC)各亚型的蛋白表达。结果:与C组相比,DM组大鼠左心室舒张末压(LVEDP)升高,左心室内压最大上升和下降速率(±dp/dt_(max))降低(P 0. 01);左心室肌组织SOD活性降低,MDA含量升高(P 0. 01);TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA表达水平升高(P 0. 01);Cx43分布紊乱;磷酸化Cx43和PKCε蛋白水平升高(P 0. 01)。与DM组相比,DM+CAR组的LVEDP降低,±dp/dt升高(P 0. 01);左心室肌组织的SOD活性升高,MDA含量降低(P 0. 05);TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA表达水平降低(P 0. 01);Cx43分布好转;磷酸化的Cx43及PKCε蛋白水平降低(P 0. 01)。结论:肌肽治疗能改善1型糖尿病大鼠心功能障碍,其机制可能与降低左心室氧化应激和炎症反应,通过PKCε抑制Cx43磷酸化,并改善其分布有关。     

缝隙连接蛋白43通过调控L型钙电流参与心房肌细胞的电重塑

目的:观察缝隙连接蛋白43(Cx43)是否通过与L型钙通道共定位,调控L型钙电流,参与房颤(AF)的发病机制。方法:使用蛋白免疫印迹和实时荧光定量PCR检测AF和窦性心律患者心房组织中Cx43的蛋白和mRNA表达差异;用RNA干扰技术沉默心房肌细胞的Cx43表达,实时荧光定量PCR和全细胞膜片钳实验观察对L型钙通道mRNA表达和L型钙电流的影响;免疫共沉淀和激光共聚焦显微成像观察心房肌细胞中Cx43与L型钙通道是否存在共定位。结果:AF患者心房组织中的Cx43表达明显低于窦性心律患者;干扰Cx43表达可明显抑制L型钙电流和L型钙通道α1c亚基的mRNA表达;且心房肌细胞中Cx43与L型钙通道存在共定位。结论:心房肌细胞中的Cx43可通过与L型钙通道形成分子复合物,调控L型钙电流,参与心房肌细胞的电重塑。     

Cx43沉默对机械应力作用下调控的软骨细胞自噬介导软骨基质合成的影响

目的:探究机械应力作用下通过沉默缝隙连接蛋白43(Cx43)调控软骨细胞自噬对软骨细胞的基质代谢的影响。方法:对小鼠成软骨细胞系ATDC5加载机械应力,采用q PCR和Western blot法检测ATDC5细胞中Cx43的mRNA和蛋白表达。将细胞分为空白对照组、机械应力组、Cx43 siRNA转染组、scramble siRNA转染组、机械应力+scramble siRNA转染组、机械应力+Cx43 siRNA转染组和机械应力+Cx43 siRNA转染+3-MA组,CCK-8法检测细胞活力,q PCR检测软骨细胞Ⅱ型胶原mRNA的表达,1,9-二甲基亚甲蓝(DMMB)染色法检测细胞糖胺多糖(GAG)含量,Western blot法检测自噬相关蛋白beclin 1和LC3的表达。结果:机械应力刺激下,ATDC5细胞Cx43表达上调,细胞活性显著降低,II型胶原mRNA表达降低,GAG含量减少,beclin 1和LC3-II/LC3-I蛋白表达降低(P 0. 05)。转染Cx43 siRNA可下调Cx43的mRNA和蛋白的表达。机械应力作用下,Cx43沉默显著增强软骨细胞活力,提高II型胶原的mRNA表达和GAG含量,上调beclin 1和LC3-II/LC3-I的蛋白表达(P 0. 05)。此外,自噬抑制剂3-MA处理后,Cx43沉默对机械应力下软骨细胞的保护作用受到抑制。结论:Cx43沉默通过促进机械应力作用下小鼠软骨细胞自噬,从而促进软骨细胞的合成代谢,减轻软骨细胞在机械应力下的损伤。