LAK细胞之诱导条件的探讨

目的探讨LAK细胞的诱导条件.方法采用不同含量的r-IL-2T和PHA制备LAK细胞,经台盼兰拒染实验计数法及MTT比色法检验LAK细胞数目及活性.结果在r-IL-2 300μ/ml和PHA10μg/ml时,制备的LAK细胞数量多,杀伤活性较高.结论结论r-IL-2和PHA可诱导LAK细胞增殖.     

丹参酮ⅡA磺酸钠对胰腺癌BX-PC-3细胞系增殖与细胞周期调控因子表达的影响

 目的：观察丹参酮ⅡA磺酸钠对胰腺癌细胞系BX-PC-3细胞增殖和细胞周期调控因子cyclin A、cyclin D2蛋白表达的影响。方法：分别用不同剂量的丹参酮ⅡA磺酸钠作用于胰腺癌细胞系BX-PC-3,应用MTT比色法检测培养48 h的细胞存活率, 应用流式细胞术测定培养48 h细胞周期的变化,Western blotting检测周期蛋白cyclin A和cyclin D2 的表达情况。结果：丹参酮ⅡA磺酸钠能明显抑制BX-PC-3细胞增殖,且具有明显的剂量依赖性;流式细胞术显示一定浓度药物作用细胞,可将细胞周期阻滞于G0/G1期;Western blotting检测发现药物能显著下调周期蛋白cyclin A和cyclin D2的表达水平。结论：丹参酮ⅡA磺酸钠能显著抑制人胰腺癌BX-PC-3细胞增殖,下调周期相关因子cyclin A和cyclin D2蛋白表达水平,这可能是丹参酮ⅡA磺酸钠抑制胰腺癌细胞生长增殖的作用机制。     

Involvement of macrophage migration inhibitory factor in pathogenesis of atrial fibrillation as a redox-sensitive cytokine

Background Macrophage migration inhibitory factor(MIF)is a pleiotropic cytokine that controls inflammatory processes,and inflammation is known to play an important role in the pathogenesis of atrial fibrillation(AF).The present study sought to investigate whether MIF played an important role in the pathogenesis of AF.Methods MIF protein and mRNA levels in specimens of human right atrial appendage(from patients with AF or sinus rhythm)or atrium myocytes(HL-1 cells)were assayed using enzyme-linked immunosorbe...     

母血白细胞锌和血清锌与胎儿宫内发育迟缓关系的探讨

母血白细胞锌和血清锌与胎儿宫内发育迟缓关系的探讨陶莉莉，李国，李大慈中山医科大学第一附属医院妇产科（广州５１００８０）肖定璋，蔡雪珍广东省老年医学研究所ＡａｓｔｒａｃｔＴｈｅｓｅｒｕｍａｎｄｌｅｕｃｏｃｙｔｅｚｉｎｃｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｗｅｒ...     

献血员HCV RNA的检测及对控制丙型肝炎传染的意义

近年来，我国已经认识到输血传播丙型肝炎（HC）的严重危害性。所以，法定对献血者采取用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血中的抗丙型肝炎病毒抗体（抗-HCV）。然而，抗-HCV要在病毒感染后一段时间才出现。因此，检测丙型肝炎病毒核糖核酸（HCVRNA）对预防漏诊意义重大，本试验用多聚酶链反应（PCR）技术对广州地区147例抗-HCV（＋）献血者和360例抗-HCV（－）献血者进行了HCVRNA的检测，并与ELISA检测抗-HCV进行了比较。现将结果报告如下。l材料与方法1．1标本：lop年5月一1叩6年6月广州地区献血员，用EllSA法测出抗一Hey…     

MIF活性区域相互作用蛋白的筛选

目的: 筛选与巨噬细胞移动抑制因子(MIF)催化巯基蛋白质氧化还原酶(TPOR)活性域相互结合的蛋白。方法: 采用酵母双杂交系统进行筛选。首先构建pBTM116-MIF诱饵质粒,转化酵母菌株L40;将表达MIF催化 TPOR活性域的L40酵母菌株制备成感受态菌,在人骨肉瘤cDNA文库中筛选。通过组氨酸(HIS3报告基因活性和β半乳糖苷酶实验,初步确定与催化TPOR活性域片段相互作用的蛋白,最终通过免疫共沉淀和免疫荧光技术来确认。结果: 分别构建含野生型MIF的pBTM116-MIF和野生型硫氧还蛋白样蛋白2(TXNL2)的pACT2-TXNL2质粒,将其共转染L40酵母菌。HIS3报告基因活性检测和β半乳糖苷酶阳性实验结果提示TXNL2可能是与MIF催化 TPOR活性片段相互作用的蛋白。将重组质粒pcDNA3.1-Myc-TXNL2转染MCF7细胞,免疫共沉淀实验结果表明MIF抗体能够共沉淀Myc-TXNL2蛋白;免疫荧光结果显示Myc-TXNL2与MIF在细胞质中位置分布相同。结论: TXNL2可能是与MIF催化TPOR活性片段相互作用的蛋白。本研究为MIF氧化还原机制的研究提供了新的实验依据。     

RNA干扰沉默MIF基因对HeLa细胞生长、迁移和黏附性的影响

目的:探讨巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor, MIF)对宫颈癌HeLa细胞生长、迁移和黏附能力的影响.方法:通过反转录病毒载体介导RNA干扰,获得稳定抑制MIF表达的HeLa细胞株.Western印迹法检测MIF蛋白沉默效果以及FAK、ICAM-1、Bax和Bcl-2蛋白表达情况.观察HeLa细胞生长状态的变化,采用迁移实验、黏附实验和软琼脂糖克隆形成实验检测MIF对HeLa细胞迁移和黏附能力的影响.通过裸鼠成瘤实验观察沉默MIF基因后HeLa细胞的成瘤效果.肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor α,TNF-α)和放线菌酮(cycloheximide,CHX)诱导细胞凋亡后,FCM法检测沉默MIF基因对HeLa细胞凋亡的影响.结果:构建获得稳定抑制MIF蛋白表达的HeLa-pSUPER-MIF细胞株.MIF基因沉默后细胞生长减慢,迁移能力和黏附功能减弱;HeLa细胞中FAK、ICAM-1的表达量减少,无法在裸鼠中形成肿瘤;同时能减少TNF-α 和CHX诱导的细胞凋亡,并且使Bax表达量下降.结论:MIF通过影响HeLa细胞中FAK、ICAM-1的表达,促进肿瘤细胞生长,增加肿瘤细胞的迁移和黏附能力,因此MIF可能是肿瘤形成过程中的重要因子.     

钠钙交换体启动子促进诱导多能干细胞向心肌细胞转化

背景：诱导多能干细胞治疗缺血性心脏病被认为是极具前景的方法,但目前仍未找到一种理想的诱导方式。 目的：探讨钠钙交换体(NCX1)启动子诱导多能干细胞体外分化为心肌细胞的作用。 方法：构建含钠钙交换体1启动子的pLVX-IRES-ZsGreen1慢病毒质粒,使用ViraPowerTM慢病毒包装系统共转染293FT细胞。收集病毒测定病毒滴度后感染小鼠诱导多能干细胞,并使用嘌呤霉素进行筛选。观察胚状体数量以及诱导多能干细胞的分化效率,使用RT-PCR、免疫荧光分析法检测心肌特异标记物。 结果与结论：成功构建了含钠钙交换体1启动子的pLVX-IRES-ZsGreen1慢病毒,感染小鼠诱导多能干细胞后使用流式细胞仪分选NCX1⁺/GFP⁺细胞。与NCX1^-/GFP^-细胞相比,NCX1⁺/GFP⁺细胞在4 d即出现细胞分化和跳动,NCX1+细胞GATA4/MEF2c/Nkx2.5基因表达分别是NCX1-细胞的4.2,7.5,2.5倍,免疫荧光显示CX43和心肌肌钙蛋白I呈阳性表达。结果表明,钠钙交换体1启动子可以促进小鼠诱导多能干细胞向心肌细胞分化。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

人Fn14基因真核重组质粒的构建及其表达

目的构建人成纤维细胞生长因子诱导早期反应蛋白14（fibroblast growth factor—inducible 14，Fn14）基因真核重组质粒及其表达。方法从人肝细胞癌组织抽取总RNA，RT—PCR扩增出Fn14基因全长cDNA，经测序正确后，核酸内切酶EcoR I、Xba I酶切PCR产物，亚克隆人pcDNA3．1-Myc载体，重组质粒pcDNA3．1-Myc—Fn14经酶切及测序鉴定正确后转染COS-7细胞，通过免疫组织化学DAB法检测Myc—Fn14融合蛋白的表达。结果重组质粒pcDNA3．1-Myc—Fn14经EcoR I、Xba I酶切及测序鉴定正确，重组质粒包含人Fn14基因完整编码区。免疫组织化学检测结果显示，重组质粒转染COS-7细胞后成功表达Myc—Fn14融合蛋白，转染空载体pcD—NA3．1-Myc的COS-7细胞未见Myc—Fn14融合蛋白表达。结论构建了人Fn14基因真核表达载体，该重组质粒可表达含Myc-Fn14的融合蛋白，为研究Fn14功能奠定了基础。     

B7-1分子增强NK细胞对肝癌细胞毒活性的体外研究

】 ObjectiveTo investigate the effect of B7-1 expression on cytotoxicity of human natural killer cells (NK cells) against hepatocellular carcinoma (HCC) cells in vitro. MethodsHuman B7-1 gene was directly transduced into HepG₂ cells in presence of DOSPER to establish HepG₂/hB7-1 cell clone. Peripheral blood lymphocytes (PBL) were seperated from healthy donors and HCC patients' blood and subjected to test NK cytotoxicity by detecting their ability to lyse HepG₂,HepG₂/neo and HepG₂/hB7-1 cells by MTT dye method. ResultsHepG₂/hB7 1 cell clone was established through direct B7-1 gene transfer,which strongly expressing B7-1 molecules. NK cytotoxicity against HepG₂,HepG₂/neo in healthy donors' PBL was about 2 times much as that of in HCC patients' PBL. NK cytotoxicity in healthy donors' and HCC patients' PBL against HepG₂/hB7-1 cells were 2.23～3.48 and 1.49～ 2.14 times higher than that of lysing HepG₂/neo cells,respectively (P<0.001). NK cytotoxicity ability in HCC patients' PBL against HepG₂/hB7-1 cell was 43.8,lower than that of healthy donors' (57.2) at E/T=5∶1,while E/T=10∶1,20∶1,they reached 78.6～86.4,as much as the same of healthy donor' s 82.8～84.4, no statistical significance was found (P>0.05). ConclusionsB7-1 molecules strongly enhance NK cytotoxicity against hepatocellular carcinoma cells in vitro.