神经系统RNA结合蛋白Musashi1 RRM1的初步结晶

目的 对Musashi1发挥功能的 RRM1结构域进行结晶,得到可用来衍射的蛋白晶体,为之后的结构解析打基础。方法 通过构建Musashi1RRM1的原核表达载体,并在BL21中表达、纯化高纯度的蛋白质,通过筛选结晶体条件得到蛋白晶体。结果 通过系统筛选和优化晶体生长条件得到了蛋白晶体。结论 Musashi1 RRM1的蛋白晶体质量较好,满足蛋白晶体衍射和数据收集的要求。     

鼻咽癌复发的分子标志物Jab1 和Akt1 蛋白表达的差异*

 目的：通过筛查鼻咽癌病人复发组织与鼻咽癌初发组织分子标志物表达的差异,探讨差异表达的蛋白与鼻咽癌复发的关系,为干预鼻咽癌复发提供新的靶点。方法：免疫组织化学SABC 法检测Jab1、p-STAT3、 CHOP 和Akt1 在复发和初发病人鼻咽癌组织中的表达;Western blotting 法检测鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2、CNE-2R 和HONE1 中Jab1 和Akt1 蛋白的表达。结果：复发病人鼻咽癌组织Jab1和Akt1核表达水平均高于初发鼻咽癌组织（P<0.05）;Jab1 和Akt1 在CNE-1、CNE-2R 和HONE1细胞中的表达高于在CNE-2细胞中的表达,电离辐射能促进CNE-1、CNE-2、CNE-2R 和HONE1细胞中Jab1 蛋白的表达。结论：复发病人鼻咽癌组织或辐射抗拒鼻咽癌细胞中Jab1 和Akt1 核表达均高于初发鼻咽癌组织或辐射相对敏感的鼻咽癌细胞;电离辐射促进鼻咽癌细胞中Jab1 过表达。     

窖蛋白-1与肿瘤

窖蛋白是胞膜窖结构中的特征性结构蛋白。窖蛋白在细胞内吞、胆固醇运输、细胞膜组装、调节信号转导和肿瘤生成、转移等生命活动中扮演了重要角色。窖蛋白基因家族中的窖蛋白-1(Cav-1)可能参与肿瘤生成和转移的病理机制,以及与多药耐药等密切相关。窖蛋白-1参与调节细胞周期与信号转导,在细胞凋亡程序中发挥重要作用,具有抗血管新生,负性调节生长因子,参与肿瘤细胞侵袭和转移的作用。     

Ref-1蛋白的研究进展

氧化还原因子1(Ref-1)是一种多功能蛋白酶,其主要作用是对氧化性损伤的DNA进行修复和调节转录因子的DNA结合活性.本文重点综述其生物学功能及其在氧化性损伤对p53调节、肿瘤、缺血性脑损伤中的研究进展.     

单核细胞趋化蛋白—1在大肠杆菌中的表达

将人单核细胞趋化蛋白－１（ＭＣＰ－１）的ｃＤＮＡ插入融合蛋白表达载体ｐＧＥＸ－４Ｔ－１中，构建成质粒ｐＧＥＸ／ＭＣＰ转化大肠杆菌ＪＭ１０９，经ＩＰＴＧ诱导后合成ＧＳＴ－ＭＣＰ－１融合蛋白。用１２％ＳＣＳ－ＰＡＧＥ检测在３０ｋＤ左右有新生蛋白条带出现，表达量约占菌体总蛋白的３１．７％，趋化实验证明，该产物具备明确的单核细胞趋化活性。     

Rdf—1蛋白的研究进展

氧化还原因子1(Ref-1)是一种多功能蛋白酶,其主要作用是对氧化性损伤的DNA进行修复和调节转录因子的DNA结合活性.本文重点综述其生物学功能及其在氧化性损伤对p53调节、肿瘤、缺血性脑损伤中的研究进展.     

人端粒保护蛋白1(hPOT1)研究进展

随着对端粒、端粒酶研究的深入,一类被称为端粒结合蛋白的核蛋白越来越受到重视。人端粒保护蛋白1(human protection of telomeres 1,hPOT1)及其基因在2001年被鉴定,它是一种单链端粒结合蛋白,有两大功能相关结构域:OB fold(oligonucleotide/oligosaccharide binding fold)和TRF1(TTAGGG repeatbinding factor 1)相互作用蛋白结构域。它与端粒DNA的结合具有高度特异性和对单链端粒DNA游离3′末端结合位点的优先性。hPOT1蛋白可能具有多种重要的功能。目前有关hPOT1蛋白的研究越来越多,现就hPOT1的生物学性质作一综述。     

连结蛋白36和闭锁小带蛋白1的PDZ结构域关系

目的:探讨连结蛋白36(Cx36)和闭锁小带蛋白1(ZO-1)相互作用的PDZ结构域。方法:构建pGEX-3X GST-PDZ重组载体在DH5α细菌表达,加IPTG产生融合蛋白,经纯化,免疫印迹分析Cx36与ZO-1相互作用的PDZ结构域,PVDF膜洗脱后抗GST和考马斯亮蓝染色。结果:构建了pGEX-3X GST-PDZ重组载体,与转染Cx36的HeLa细胞孵育,免疫印迹显示Cx36与ZO-1的PDZ1结构域结合。而对照组Cx43与ZO-1的PDZ2结构域结合。实验组在相对分子质量为40 000-42 000有蛋白带,提示GST-PDZ融合蛋白表达。与鼠视网膜组织孵育免疫印迹显示Cx36与ZO-1的PDZ1结构域结合,而对照组Cx43与ZO-1的PDZ2结构域结合,相同膜洗脱后抗GST抗体和考马斯亮蓝染色显示GST-PDZ融合蛋白表达。结论:Cx36与ZO-1的PDZ1结构域结合。     

硫氧还蛋白相互作用蛋白降低GLP-1促小鼠胰岛β细胞的增殖效应

目的观察硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)在胰高血糖素样肽-1(GLP-1)促小鼠胰岛β细胞的增殖效应中的作用。方法小鼠分为db/m组和db/db组,每组10只;慢病毒构建TXNIP过表达(Ad-TXNIP-GFP)稳转小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞,分为对照组、Ad-GFP组和Ad-TXNIP-GFP组。Western blot检测TXNIP、增殖细胞核抗原(PCNA)和GLP-1受体(GLP-1R)的表达,HE和免疫荧光观察胰岛形态和β细胞数量,GLP-1R、Ki67,ELISA检测小鼠血清中GLP-1的表达,免疫组化检测GLP-1R水平。结果 db/db鼠胰岛形态破坏且β细胞数量减少;胰腺组织PCNA表达降低(P0.05);血清GLP-1水平降低(P0.05);胰腺组织和胰岛GLP-1R水平降低(P0.05);胰腺组织TXNIP表达升高(P0.05);TXNIP过表达细胞模型构建成功(P0.05);TXNIP过表达时GLP-1R水平降低(P0.05);TXNIP过表达使GLP-1对胰岛β细胞的增殖效应降低(P0.05)。结论 TXNIP作用于GLP-1R从而降低GLP-1对小鼠胰岛β细胞的增殖效应。     

亨廷顿蛋白相关蛋白-1在成年大鼠脑内的定位

目的:探讨亨廷顿蛋白相关蛋白1(HAP1)在成年大鼠脑内的分布.方法:健康成年大鼠取脑做连续冠状切片,免疫组织化学方法观察HAP1在脑内的表达.结果:大量的HAP-1表达出现在海马、齿状回、隔核、黑质、红核、连合下核、连合下器、脊髓前庭核、臂旁核、大脑脚基底部、束间核、后屈束、穹窿、被盖腹侧区、嘴侧线形中缝核以及丘脑、下丘脑各区;蜗背侧核、背侧纵束、前庭内侧核、中缝背核背侧部、中缝背核腹侧部、中缝背核腹外侧部、中央灰质等处的表达稍弱;其余像嗅球、大脑皮层各区、小脑皮层等处均有表达但强度极低,Stigmoid小体数目的变化趋势与HAP1基本一致.结论:HAP1广泛分布于脑的各部,推测HAP1可能参与了脑的多种生理功能.     

X-盒结合蛋白1生物学功能研究进展

研究发现X-盒结合蛋白1(X-box binding protein1,XBP1)与内质网中蛋白质的折叠密切相关,参与调控未折叠蛋白的折叠、修饰、分选与包装;此外,XBP1是联系未折叠蛋白反应元件、脂类生物合成和内质网生物合成的纽带。细胞在异常情况下会诱导内质网压力,导致蛋白质不能折叠或者错误折叠,XBP1作为未折叠蛋白反应元件的转录调控因子,指导蛋白质再折叠和降解,帮助细胞缓解内质网压力。了解与阐明细胞中XBP1的分子生物学作用机制,有利于揭示内质网中蛋白质加工、包装的作用机理。     

IL-1β对大鼠腹膜间皮细胞葡萄糖转运蛋白1表达的影响

目的:研究白介素1β(Interleukin-1beta,IL-1β)对原代培养大鼠腹膜间皮细胞(PMCs)葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)表达的影响,为防治腹透失超滤提供理论依据及方法。方法:胰蛋白酶消化法进行雄性Wistar大鼠PMCs的原代培养及传代,不同浓度IL-1β(0、1、10、50 ng/ml)作用不同时间(0、1、12、24、48小时),逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测GLUT1的mRNA表达,Western blot检测GLUT1蛋白的表达,生化分析仪检测培养液内葡萄糖浓度的变化,以培养液内葡萄糖的减少量作为细胞对葡萄糖的净利用。结果:IL-1β以浓度及时间依赖方式促进GLUT1 mRNA及蛋白的表达(P<0.05),同时伴有葡萄糖向细胞内转运的增加,50 ng/ml IL-1刺激48小时后GLUT1 mRNA表达与对照组相比增加了近4倍(P<0.01)。结论:IL-1β可以使PMCs细胞GLUT-1表达和葡萄糖摄取增加,这为防治腹透相关腹膜纤维化及腹透失超滤提供了线索。     

软组织平滑肌肉瘤中细胞周期蛋白D1基因扩增分析及蛋白表达检测

我们采用差异聚合酶链反应 (ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌＰＣＲ ,ＤＰＣＲ)检测软组织平滑肌肉瘤 (ＬＭＳ)中细胞周期蛋白Ｄ1(ｃｙｃｌｉｎＤ1)基因ＣＣＮＤ1的扩增情况 ,并应用免疫组织化学方法检测ｃｙｃｌｉｎＤ1表达 ,以期了解二者的关系。一、材料与方法1.标本 :38例ＬＭＳ、10例平滑肌瘤和 10例正常平滑肌组织取自本院病理科 1989～ 1998年存档蜡块 ,肿瘤发生部位包括躯干、四肢、腹腔和腹膜后 (胃肠道除外 )。2 .ＤＰＣＲ :多巴胺受体基因 (ｄｏｐａｍｉｎｅｒｅｃｅｐｔｏｒＤ2 ,ＤＲＤ2 )与ＣＣＮＤ1基因同位于 11号染色体的长臂上 (…     

窖蛋白-1的功能与病毒感染

Caveolin（窖）蛋白家族是与在众多细胞的质膜系统中发现的微结构（caveolae）细胞膜穴样内陷有紧密关联的蛋白家族。Caveolin-1可与多种信号分子相互作用，下调信号分子活性。由于窖蛋白是细胞膜上的重要蛋白，参与细胞内吞作用，从而与一些病毒的感染过程密切相关。本文就该蛋白的结构、功能及与病毒感染的联系等进行综述。     

乳腺癌中高迁移率族蛋白B1蛋白表达及其临床病理意义

目的探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)蛋白在乳腺癌中的表达及临床病理意义。方法收集2006—2018年浙江省东阳市人民医院病理科浸润性乳腺癌石蜡标本417例和同时切除的正常乳腺组织石蜡标本26例。采用免疫组织化学EnVision法检测和比较浸润性乳腺癌组织和正常乳腺组织中HMGB1蛋白的表达。分析HMGB1蛋白胞核高表达及胞质阳性表达与乳腺癌患者临床病理特征的关系。结果(1)乳腺癌中HMGB1蛋白胞核高表达率及胞质阳性率分别为80.8%(337/417)和16.8%(70/417),而其在正常乳腺组织中分别为46.2%(12/26)和0。乳腺癌中HMGB1蛋白胞核高表达率和胞质阳性率均明显高于正常乳腺组织(分别P<0.001,P=0.046)。(2)组织学级别高、雌激素受体(ER)阴性、孕激素受体(PR)阴性的乳腺癌患者,其HMGB1蛋白胞核高表达率明显更高(分别P=0.006,P=0.004,P<0.001),胞质阳性率也明显更高(均P<0.001)。Logistic回归模型多因素分析显示乳腺癌患者HMGB1蛋白胞核高表达的独立相关因素为肿瘤组织学分级(OR=2.188,95%CI=1.078~4.443,P=0.030),而HMGB1蛋白胞质阳性表达的独立相关因素包括肿瘤组织学分级(OR=3.031,95%CI=1.600~5.742,P=0.001)、ER(OR=0.129,95%CI=0.034~0.494,P=0.003)及TNM分期(OR=3.820,95%CI=1.042~14.001,P=0.043)。(3)Cox比例风险模型多因素分析显示HMGB1蛋白胞核高表达是影响乳腺癌患者总生存的独立危险因素(HR=0.366,95%CI=0.138~0.972,P=0.044)。结论HMGB1蛋白胞核高表达及胞质阳性表达与乳腺癌患者多项预后不良因素密切相关,有望成为抗乳腺癌治疗的一个潜在生物学标志。     

G蛋白参与C1q／C1qR系统介导的信号转导

ａｇｇ－Ｃ１ｑ可抑制人Ｔ细胞系Ｊｕｒｋａｔ和Ｍψ系Ｕ９３７细胞受霍乱毒素刺激的（ｃＡＭＰ）ｉ增高，而百日咳毒素能遏止人Ｂ细胞系Ｒａｊｉ细胞ａｇｇ－Ｃ１ｑ诱导的（ｃＡＭＰ）ｉ升高和Ｃ１ｑＲ交联所促成的磷脂酰肌醇水解。表明：Ｇ蛋白介入了Ｃ１ｑ／Ｃ１ｑＲ系统介导的信号转导途径。     

PC-1蛋白单克隆抗体制备和鉴定

为获得高效价PC-1蛋白的鼠单克隆抗体(mAb),用于PC-1功能的实验,采用纯化的PC-1蛋白与GST的融合蛋白(GST-PC-1)为抗原,免疫小鼠和骨髓瘤细胞进行细胞融合,用直接ELISA法进行克隆化筛选,mAb的染色体分析及亚类鉴定及初步应用.结果表明细胞融合和ELISA筛选后,获得2株抗鼠PC.1蛋白mAb,两株PC-1 mAb效价分别为1:25600,1:13600,抗体亚型为IgG1,Western blot证实其特异性识别PC-1蛋白.该mAb可以用于测定PC-1蛋白.     

HTLV-1 Tax 蛋白对T细胞中HMGB1调控的影响

目的探讨人T淋巴细胞白血病1型病毒（human T-cell leukemia virus 1,HTLV-1）Tax蛋白对人高迁移率族蛋白1（ high mobility group box 1,HMGB1）基因转录调控的影响。方法提取TaxN和TaxP细胞总RNA和蛋白质,通过real-time PCR和Western blot分析HMGB1 mRNA和蛋白质的表达情况;利用脂质体介导方法,将6个含有不同长度HMGB1调控序列的pGL3-HMGB1-luc瞬时转染至TaxN 和 TaxP 细胞,观察 HMGB1基因在不同 T 细胞中的转录活性;pCMV-Tax 与 pGL3-HMGB1-luc瞬时共转染至Jurkat细胞,观察Tax蛋白对HMGB1基因的转录调控影响;染色体免疫共沉淀（ ChIP）找寻Tax蛋白影响HMGB1基因转录调控的区段。结果 TaxP细胞中HMGB1 mRNA和蛋白质表达水平高于TaxN细胞。 TaxN和TaxP细胞中HMGB1调控趋势基本相似,均表现出3号质粒（pHLuc3,含有-504～＋83 HMGB1区段）的相对荧光素酶活性（HMGB1/neo）最高,但是6号质粒（含有-1163～＋83 HMGB1区段）却表现出 TaxP 细胞 HMGB1的转录活性明显高于 TaxN 细胞。pCMV-Tax与pGL3-HMGB1-Luc报告基因共转染到Jurkat细胞也显示,6号质粒（pHLuc6）中Tax促进HMGB1基因的转录。 ChIP分析证实了Tax蛋白可能富集在HMGB1的-1163～-1043区段。结论-504～-383可能是HMGB1基因转录激活的关键启动子区,Tax蛋白可能富集在HMGB1的-1163～-1043区段促进HMGB1基因转录。     

IQSEC1通过病毒蛋白PB1调控甲型流感病毒的增殖

目的探讨IQSEC1是否通过病毒蛋白PB1调控甲型流感病毒的增殖。方法首先克隆甲型流感病毒[A/Shanghai/02/2013(H7N9)]的8个基因;其次,通过免疫共沉淀检测IQ模体Sec7结构域蛋白1(IQSEC1)与聚合酶PB1(PB1)存在相互作用;此外,通过过表达或者敲低IQSEC1的方法检测IQSEC1对PB1核定位的影响;最后,过表达或者敲低IQSEC1后检测Influenza A virus[A/Shanghai/02/2013(H7N9)]。结果病毒感染条件下,外源IQSEC1和PB1存在相互作用。当过表达IQSEC1时,细胞中IQSEC1的表达量上升,相应的PB1在细胞核中的定位减少;当用敲低IQSEC1时,细胞中IQSEC1的表达量下降,相应的PB1在细胞核中的定位上升。过表达IQSEC1后,甲型流感病毒的增殖水平下降(P0.05)。敲低IQSEC1后,甲型流感病毒的增殖水平上升(P0.05)。结论 IQSEC1通过减少甲型流感病毒蛋白PB1的核定位抑制甲型流感病毒的增殖。     

中枢多巴胺转运蛋白显像剂99Tcm-TRODAT-1研究进展

中枢多巴胺转运蛋白在多巴胺递质系统中的作用已日益为学者们所重视.TRODAT-1是一种新型的99Tcm标记的中枢多巴胺转运蛋白显像剂，其SPECT显像在临床帕金森病的早期诊断中将具有重要的临床价值和实用价值.本文综述了近年来99Tcm-TRODAT-1的生化及其标记制备、动物实验、显像方案和临床前研究方面的进展，展示了99Tcm-TRODAT-1在临床有良好的应用前景.