酶联免疫法检测PAF受体RNA的聚合酶链反应产物

目的：建立PCR—ELISA法检测附受体RNA。方法：提取20例银屑病病人和20例正常对照组血液单个核细胞标本中的总RNA，用双标记的PAF—R(Biotion与Digoxin标记)及β-actin(Biotin或Fluorescein标记)引物进行RT-PCR，用ELISA检测PCR产物，用传统的琼脂糖凝胶电泳对照。结果；ELISA法和琼脂糖凝胶电泳法对β-actin检测结果均为阳性；ELISA法检测PAF-R，20例病人标本均为阳性，20例对照组16例阳性；琼脂糖凝胶电泳法检测PAF—R，20例病人标本18例阳性，20例对照组16例阳性。结论：PCR-ELISA引物双标记法检测PAF—R操作简单，有较高的敏感性。     

长链非编码RNA在自身免疫性疾病中的研究进展

长链非编码RNA(LncRNAs)是转录本长度大于等于200 nt的,不具备编码蛋白功能的RNA。LncRNAs具有基因转录、蛋白质转运及染色质重塑等功能。LncRNAs参与多种免疫性疾病的发生、发展与转归,在自身免疫性疾病中发挥重要的作用。     

类mRNA RNA研究进展

类 m RNA RNA (m RNA- like RNA)是一类 3′端有 Poly A ,无典型 ORF,不编码蛋白质 ,而直接在 RNA水平上发挥作用的 RNA分子。近年来的研究表明各种不同的类 m RNA RNA广泛存在于不同的细胞内 ,并发挥着重要的调控作用。它们与细胞的生长和分化、胚胎的发育、肿瘤的形成和抑制密切相关     

寻常型银屑病的遗传学研究

寻常型银屑病的发病机理至今尚不清楚，但遗传因素在其发病中的作用已得到普遍公认，群体、家和双生子研究均支持这一观点，有关文献报道表明银屑病除与ＨＬＡ基因相关外，尚与色体上其他位点的基因相关，为之在ＤＮＡ分子水平的防治指明方向。     

体外转录制备的siRNAs对SARS-CoV复制的抑制作用

目的体外研究针对SARS-CoV RNA依赖性RNA聚合酶（RNA-dependent RNA polymerase，RdRp）的小干扰RNA（Small interference RNA，siRNA）对SARS-CoV感染的抑制效应。方法利用Ambion公司在线设计工具，设计出4条针对RdRp基因的siRNAs，并在体外利用试剂盒进行转录合成。在SARS-CoV感染前1d，将这4条体外转录的siRNAs用Lipofectamine 2000试剂转染入Vero E6细胞中。感染后，每天观察感染细胞的细胞病变效应（Cytopathic effect，CPE）。第5天，用空斑形成实验（Plaque formation unit，PFU）检测感染细胞培养上清液中SARS-CoV滴度。结果CPE结果显示，在感染后的前4d，各siRNAs均能有效地保护细胞免受感染；在第5天，4条siRNAs中有3条仍能有效保护细胞不被感染。PFU实验结果显示，在第5天，所有siRNAs转染的细胞培养上清液中，SARS-CoV的滴度均显著低于阳性对照（P〈0．001）。结论实验结果表明针对SARS-CoV的RdRp基因的siRNAs能有效而特异地抑制该病毒在哺乳动物细胞中的复制和繁殖，提示如果应用合适的给药途径，RNAi策略可以用于体内抑制SARS-CoV的感染。     

RNA干扰分子机制研究进展

RNA干扰 (RNA interference,RNAi)即双链 RNA(double- stranded RNA,ds RNA)介导的同源m RNA特异性降解过程。作为一种简单有效的影响基因表达和一定程度上替代基因敲除的遗传学工具 ,RNAi已在秀丽新小杆线虫、黑腹果蝇、拟南芥、红色面包霉菌等多种模式生物体中得到广泛证实。同时 ,RNAi的分子机制的研究也不断取得进展 ,包括对基因转录后水平、翻译水平、基因组甲基化及沉默信号的传递等层次的研究。清晰地阐明 RNAi作用机理 ,将为大规模的基因系统筛查、新基因的发现、人类肿瘤及难治性疾病的基因治疗提供重要的理论依据和有力的工具。     

病毒对抗RNAi的方式

RNAi是近几年的重大科学发现,其作用是对基因表达在转录后水平进行调控,同时RNAi还可以清除外源基因组或抑制外源基因组的复制。因此RNAi的重要功能之一就是宿主细胞抵抗病毒感染;另一方面,病毒也具有一套对抗RNAi的机制。对于这种相互作用过程的研究可从一个新的角度了解RNAi的功能和病毒感染过程。     

调控KLF2表达改善咪喹莫特诱导小鼠银屑病样皮炎

目的 探讨KLF2在咪喹莫特诱导小鼠银屑病模型中的作用机制及治疗意义。方法 取寻常型银屑病患者皮损组织和健康正常皮肤组织石蜡切片各10例，免疫组织化学检测皮肤中KLF2的表达。将C57BL/6小鼠随机分为5组，在小鼠背部皮肤涂抹5%咪喹莫特乳膏诱导银屑病样皮炎，药物组分别给予不同剂量的阿托伐他汀(5 mg/kg、10 mg/kg或20 mg/kg)。用银屑病皮损面积及严重程度指数(PASI)和HE染色评价小鼠背部皮损严重程度；免疫组织化学检测小鼠皮肤中KLF2、CD3和Ki67的表达；免疫印迹分析KLF2、NF-κB及其磷酸化蛋白水平；qPCR检测小鼠皮肤中白细胞介素(IL)-6、IL-23、IL-17A、IL-1β和TNF-α mRNA的水平。结果 KLF2在银屑病患者和银屑病小鼠皮肤中的表达明显下降。与模型组相比，阿托伐他汀各剂量组KLF2表达上调，p-NF-κB蛋白含量减少，IL-6、IL-23、IL-17A、IL-1β和TNF-α mRNA水平降低，CD3、Ki67表达下降，银屑病样皮损减轻。结论 KLF2在银屑病患者中表达下降可能是银屑病炎症放大的重要环节，阿托伐他汀激活KL...     

银屑病的护理体会

银屑病俗称"牛皮癣", 中医名叫松皮癣,又叫白疮,是一种常见且易复发的慢性皮肤病.是一种以表皮细胞过度增殖为特点的常见皮肤病,易反复发作.临床上分为:红皮病型银屑病、脓疤型银屑病、寻常型银屑病和关节型银屑病.我院在对银屑病的四系列治疗中,护理工作密切配合,促进患者的主观能动性,积极配合医生的治疗,取得很好的疗效,提高了治愈率.     

shRNA抑制人肺癌细胞A549 SURVIVIN基因表达

目的 构建存活素(SURVIVIN)基因的短发夹RNA(shRNA)表达质粒,为肺癌RNA干扰(RNAi)途径的基因治疗打下基础.方法 设计并合成SURVIVIN短发夹结构模板序列,与穿梭载体重组质粒后转染人肺癌细胞A549,通过RT-PCR法筛选出抑制效果最强的质粒;MTT和Western blot法检测该质粒对细胞增殖和SURVIVOIN表达的影响.结果 构建和筛选出抑制作用最强的质粒;该质粒能明显抑制A549细胞的增殖和SURVIVIN的表达.结论 在RNAi的介导下,SURVIVIN的表达被下调,为肺癌的基因治疗提供实验依据.     

RNA沉寂及其抗病毒效应研究进展

RNA沉寂 (RNAsilencing)是一种新发现的、在RNA水平发挥作用的基因调控机制 ,以序列特异性方式降解病毒、转基因的RNA或内源性mRNA ,发生于真核生物 ,包括在植物细胞中描述的转录后基因沉寂、真菌中的压制现象和动物细胞中的RNA干扰。RNA沉寂发挥作用的一般机制是由dsRNA启动 ,经Dicer酶处理成2 1～ 2 5nt的小片段siRNA ,作为向导序列与核糖核酸酶构成RNA诱导的沉寂复合体 ,降解与dsRNA同源的RNA序列 ,防御外来核酸序列的入侵和调节细胞内基因的表达。作为一种古老的病毒防御机制 ,可通过沉寂同源的病毒基因或沉寂与病毒复制有关的宿主细胞基因 ,在病毒感染的不同时期抑制病毒的复制。RNA沉寂的应用非常广泛 ,在某种意义上 ,RNA沉寂将会产生一场新的生物学革命。     

RNA干扰应用新进展

RNA干扰 (RNAinterference ,RNAi)是近年发展起来的一种特异的靶基因失活技术 ,它可以象基因敲除一样非常有效地鉴定特定基因的功能。RNAi已被证明是破译各种生物中的基因功能的强大工具 ,并将为新型高效药物的开发和基因治疗的发展开辟新的领域。     

核糖核酸干扰

The phenomenon of RNA interference (RNAi) is highly conserved mechanism in the organism evolution. As a immune system , RNAi is a ubiquitous mechanism against invading microorganism in plant and animal cells. Recently, it has been found that RNAi is the process by which double-strand RNA (dsRNA) directs sequence - specific degradation of messenger RNA and the mediations of sequence specific messenger RNA degradation are 21 - and 23 - nucleotide small interfering RNAs that generate by ribonuclease from endogenous longer dsRNA or by transfectious technics from heterologous dsRNA. Over the past few years,the way in which cells respond to dsRNA by silencing homologous genes has revealed a new regulating paradigm in biology.     

广东汉族银屑病患者HLA—Ⅰ,Ⅱ类抗原的调查

广东汉族银屑病患者ＨＬＡ－Ⅰ、Ⅱ类抗原的调查肖露露张升肖巧珍许德清银屑病的病因及发病机理至今尚未完全清楚，但是，学者提出，银屑病具有显性基因遗传，与ＨＬＡ－Ⅰ、Ⅱ类抗原基因的遗传之间关联［１］。我们对广东籍银屑病患者和健康献血员进行了ＨＬＡ－Ⅰ、Ⅱ类...     

非编码RNA与肿瘤关系的研究进展

非编码RNA是指除mRNA、tRNA和rRNA以外,不编码蛋白质的RNA分子.它们在细菌、真菌和哺乳动物等许多生物体的重要生命活动中发挥着极广泛的调控作用.近年来研究表明,非编码RNA既可作为癌基因,也可作为抑癌基因,对肿瘤的发生、发展产生重大的影响.同时,非编码RNA又有希望成为肿瘤诊断的标志物和肿瘤治疗的新靶点.作者综述了小干扰RNA和微小RNA等主要非编码RNA与肿瘤关系的最新研究进展.     

银屑病的遗传学研究

本从流行病学调查回顾了银屑病的遗传学依据，从寻找银屑病新基因及建立银屑病动物模型方面探讨了银屑病遗传学方面的研究进展。     

Dicer酶及其在RNA干扰中的作用

RNA干扰(RNAInterference,RNAi)是双链RNA引起的同源mRNA特异性降解的现象。Dicer酶是核糖核酸酶Ⅲ(RibonucleaseⅢ,RNaseⅢ)家族的成员,在RNA干扰的起始阶段起着重要作用。Dicer酶最早在果蝇中发现,包括Dicer-1和Dicer-2,分别以Dicer-1/R3D1-L、Dicer-2/R2D2复合物的形式作用于微小RNA(microRNA,miRNA)和小干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA)的产生。Dicer酶除了在RNAi中发挥重要作用外,还在调节动物生殖发育中起作用。     

银屑病生物治疗研究进展

 当前医学界一致认为，银屑病是一种 T 细胞引发并维持的自身免疫性疾病，病人机体免疫系统紊乱，健康细胞受到攻击，造成临床上典型的皮肤鳞屑性炎症病变^[1]。这种慢性炎症性疾病的病理过程包括T细胞浸润、真皮血管的改变、表皮角质细胞过度增生和异常分化 。其中参与银屑病发病的 T 细胞大致经历3个阶段的变化：T细胞（CD45RO+）的初始活化；T 细胞迁移至病变皮肤；活化T 细胞释放细胞因子发挥促增殖功能。真皮内的 CD4+ T细胞及其产生的细胞因子是银屑病发病的中心环节，角质细胞与血管内皮细胞的变化只是继发于细胞免疫机制异常的一种改变^[2]。随着对银屑病发病机制及免疫学机制研究的不断深入，人们陆续开发出多种生物制剂。这些生物制剂与传统的化学制药制造出来的具有严格化学分子式的小分子药品完全不同，它们都是蛋白质大分子，可以特异性作用于T细胞活化过程中不同的信号转导分子及途径，从而阻断疾病进程。此类生物制剂均通过生物工程技术获得，按性质大致可以划分为重组单克隆抗体（单抗）、重组抗体融合蛋白、重组细胞因子或生长因子等 3 大类；根据作用于 T 细胞活化靶点的不同，又可以分为针对原发性刺激、阻断共刺激分子作用、抑制T细胞增殖、抑制有炎症介导活性细胞因子和平衡有免疫调节活性的细胞因子等 5 大类^[3-4]。生物制剂的出现，为银屑病治疗提供了新的选择，正逐步改变着皮肤科医师治疗银屑病的传统模式。本文就近几年来银屑病生物治疗方面的最新研究进展做一综述。......     

IL-20在寻常型银屑病患者皮损和PBMC中表达的研究

为了观察IL 2 0在寻常型银屑病患者皮损和外周血单个核细胞 (PBMC )中的表达情况 ,用免疫组化、免疫荧光和RT PCR方法检测IL 2 0在寻常型银屑病患者皮损处和正常人相应部位皮肤及PBMC中的表达。结果发现 ,用上述方法在正常人和银屑病患者皮肤中均不能检测到IL 2 0的表达。RT PCR检测发现 ,IL 2 0在寻常型银屑病患者PBMC中的阳性率为 2 5 % ,在正常人PBMC中的阳性率为 87 5 %。由此得出结论 ,虽然皮肤是IL 2 0作用的靶器官 ,但其本身并不表达IL 2 0。PBMC表达IL 2 0 ,但寻常型银屑病患者PBMC中IL 2 0的表达显著低于正常人 (P <0 0 1)。