NF-κB圈套寡核苷酸促进肺癌细胞A549凋亡的作用

目的:观察NF-κB圈套寡核苷酸对NF-κB活性的影响,研究其在肺癌细胞A549凋亡中的作用机制。方法: 用转染技术将FITC标记的NF-κB圈套寡核苷酸转入人肺癌细胞A549中,通过荧光倒置显微镜和共聚焦显微镜进行核内定位的观察,凝胶迁移率实验(EMSA)检测转染前后NF-κB活性的变化。生长曲线观察低活性NF-κB对细胞增殖的影响。流式细胞仪、TUNEL检测细胞凋亡率。Western blot检测NF-κB低活性引起的凋亡相关蛋白Bcl-2和Fas的改变。结果: NF-κB圈套寡核苷酸转染后定位于细胞核内,EMSA显示转染后NF-κB活性明显下降。A549细胞对NF-κB圈套寡核苷酸敏感,细胞生长速度减缓。转染NF-κB圈套寡核苷酸的A549细胞凋亡率增加。NF-κB 的低活性可以引起凋亡抑制蛋白Bcl-2表达水平下调和凋亡蛋白Fas表达增加。结论: NF-κB圈套寡核苷酸具有促进肺癌细胞A549凋亡的作用,其机制可能与NF-κB圈套寡核苷酸通过下调NF-κB的活性使凋亡蛋白Fas表达增加和凋亡抑制蛋白Bcl-2表达降低有关。     

心衰大鼠心肌核因子-κB活化及其与心肌细胞凋亡的关系

目的:探讨核因子-κB(NF-κB)活化与充血性心力衰竭(CHF)大鼠心肌细胞凋亡发生、发展的关系及其对Fas和Fas配体(FasL)表达的调控作用。方法:以假手术组为对照,观察雄性Wistar大鼠心肌梗死(MI)后2周、4周及8周的血流动力学指标、心肌细胞凋亡指数、Fas、FasL、Bcl-2和κB抑制蛋白的表达及NF-κB核结合活性的改变。结果:MI后心肌细胞凋亡指数、Fas及FasL表达水平进行性升高,Bcl-2的mRNA表达下调;κB抑制蛋白水平逐渐降低,而NF-κB活性逐渐增高。结论:心肌细胞凋亡在MI后CHF发生、发展过程中起着重要作用,NF-κB活化启动Fas和FasL基因转录,Fas和FasL表达上调、Bcl-2表达下降介导大鼠MI后心肌细胞凋亡的发生。     

Fas 抗原和caspase-8调控细菌氧化还原蛋白azurin诱导的人骨肉瘤细胞凋亡的实验研究

目的：探讨Fas抗原和caspase-8 在细菌氧化还原蛋白azurin诱导人骨肉瘤细胞凋亡中的调控机制及作用。 方法: 用150 mg/L浓度的azurin处理U2OS 细胞,分别作用6、12、24和48 h。细胞免疫化学法检测Fas 抗原的表达。用荧光试剂盒检测caspase-8 的活性。流式细胞仪检测azurin和抗-Fas-抗体诱导的骨肉瘤细胞凋亡百分率,以及加入caspase-8活性抑制剂IETD-FMK后凋亡百分率的变化。 结果: Azurin诱导U2OS 细胞凋亡后,与对照组比较,Fas 抗原表达强度增加(P<0.01)，caspase-8活性升高(P<0.01)。Fas 抗原表达和caspase-8 活性随着azurin作用时间的延长而逐渐升高,至24 h后达到高峰,然后缓慢下降,但仍显著高于对照组(P<0.01) 。Fas抗原的表达与caspase-8 活性变化呈显著正相关(r=0.873，P<0.01)。表达增强的Fas 抗原具有转导凋亡信号的功能,抗-Fas抗体借此增强azurin诱导U2OS细胞凋亡的作用。Caspase-8 活性抑制剂IETD－FMK能阻断caspase-8 活化而抑制 azurin 或抗-Fas抗体诱导的U2OS细胞凋亡,与抑制剂组比较,细胞凋亡百分率显著差异(P<0.01)。 结论： Fas 依赖途径可能为细菌氧化还原蛋白azurin诱导U2OS 细胞凋亡主要机制之一， caspase-8活性上调可能在凋亡过程中发挥重要作用。     

NF-κB在脓毒症血浆诱导的内皮细胞损伤和凋亡中的作用

 目的：探讨核因子κB（NF-κB）在脓毒症血浆诱导的内皮细胞损伤和凋亡中的作用。方法：应用脓毒症患者血浆刺激人脐静脉内皮细胞（HUVECs）,健康对照者血浆作为阴性对照。用酶联免疫吸附法（ELISA）和免疫荧光法检测NF-κB的核移位,流式细胞术检测内皮细胞凋亡。结果：脓毒症患者血中肿瘤坏死因子α（TNF-α）和von Willebrand因子(vWF)明显高于正常人。在一定范围和时间内,脓毒症血浆刺激HUVECs释放vWF呈时间、剂量依赖关系,应用NF-κB拮抗剂二硫代氨基甲酸吡咯烷（PDTC）阻断后,vWF降低。脓毒症血浆刺激HUVECs时,NF-κB活化,从胞浆移位入胞核。脓毒症血浆引起内皮细胞凋亡增加,加入NF-κB拮抗剂PDTC后HUVECs凋亡明显增加。结论: NF-κB参与了脓毒症引起的内皮细胞损伤,抑制了内皮细胞凋亡。     

Toll样受体3信号通路在人类病毒性心肌炎心肌细胞凋亡及炎症反应中的作用

 目的：研究Toll样受体3（TLR3）信号转导通路与人类病毒性心肌炎（VMC）炎症反应及细胞凋亡的关系。方法：采用免疫组化 SP 法分别检测TLR3、干扰素β TIR结构域衔接蛋白（TRIF）、核因子 κB（NF-κB）及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 3（caspase-3）在心肌组织中的变化, 原位末端标记法（TUNEL）检测心肌细胞凋亡情况,比较VMC组及正常对照组组间的差异。结果：与对照组比较,VMC组心肌组织中TLR3、TRIF、NF-κB及caspase-3蛋白表达及细胞凋亡水平明显增高,差异有统计学意义(P<0.05), 并且TLR3和TRIF、TLR3和NF-κB、TRIF和NF-κB、NF-κB和caspase-3之间的表达均呈正相关,细胞凋亡指数的变化趋势与caspase-3一致。结论：通过TLR3信号通路介导的炎症反应和细胞凋亡在VMC发生、发展过程中起着重要作用,抑制其活化有可能成为治疗VMC的一个潜在的、有价值的靶位。     

大花红天素对脑微血管内皮细胞凋亡的双相调节作用及机制(英文)

目的：研究中药红景天的有效成分-大花红天素对小鼠脑微血管内皮细胞凋亡的作用及机制。 方法： 观察不同剂量的大花红天素(25 mg/L, 100 mg/L)对体外培养的小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3株)凋亡的影响。细胞凋亡分别用流式细胞术、免疫细胞化学ABC法(Fas/Bcl-2)及Western blotting(caspase-3)测定。 结果： 与对照组比，在bEnd.3细胞中含药浓度25 mg/L组凋亡明显抑制(P<0.05)，而100 mg/L组凋亡明显加剧(P<0.05)。凋亡抑制组Fas免疫细胞化学染色比对照组弱，阳性细胞明显减少(P<0.05)；而Bcl-2染色比对照组强，阳性细胞明显增加(P<0.05)，caspase-3表达明显抑制(P<0.05)。凋亡加剧组中(100 mg/L)变化相反。 结论： 大花红天素对bEnd.3细胞凋亡有双相调节作用，其机制与Fas/Bcl-2蛋白表达及caspase-3激活的变化有关。     

NF-κB在人巨细胞病毒感染诱导宿主细胞增殖、凋亡中的作用

目的:探讨人巨细胞病毒(HCMV)是否通过激活核转录因子(NF-κB)调控宿主细胞增殖与凋亡。方法:用HCMVAD169株感染人胚肺成纤维细胞(HEL),采用免疫组化和Westernblot方法检测宿主细胞NF-κB和Bcl-2蛋白的表达与I-κBα的变化,应用MTT方法观察细胞的增殖活性,同时用流式细胞术检测细胞凋亡指数。结果:HCMV感染后48h细胞核表达NF-κB蛋白最多,24hI-κBα降到最低,120hNF-κB失活,bcl-2的表达与NF-κB的活性改变一致。HCMV感染在72h前抑制宿主细胞凋亡,促进细胞增殖,在120h可诱导宿主细胞凋亡。结论:NF-κB在HCMV感染诱导宿主细胞增殖与凋亡中起作用,与HCMV疾病的发生发展有关。     

NF-κB、AP-1及caspase-3在SC58125诱导的HepG2细胞凋亡中的作用

目的：探讨SC58125诱导HepG2细胞凋亡的分子机理。方法：应用细胞培养、酶联免疫吸附实验、流式细胞术、RT-PCR、Westernblot及电泳迁移率实验等方法研究SC58125诱导HepG2细胞凋亡及其分子机理。结果：SC58125剂量依赖性地诱导HepG2细胞凋亡,并伴有NF-κB结合活性的抑制、caspase-3的激活、bcl-2 mRNA水平的降低及p53 mRNA的上调,而AP-1的结合活性则没有明显的改变。结论：SC58125诱导HepG2细胞的凋亡,这种效应可能与抑制NF-κB结合活性、激活caspase-3、降低bcl-2 mRNA的表达及上调p53 mRNA的水平有关。     

一氧化氮和caspase-3在多巴胺诱导PC12细胞

目的：探讨一氧化氮（NO）和半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）在多巴胺诱导PC12细胞凋亡中的可能作用。方法：流式细胞仪定量检测PC12细胞的凋亡率,原位末端标记法（TUNEL）观察凋亡细胞的形态,Griess法测定NO₂^-的浓度,荧光分光光度计法检测caspase-3的活力,半定量RT-PCR法检测诱导型一氧化氮合酶（iNOS）mRNA的表达水平。结果：多巴胺（0.15-0.60 mmol/L）可剂量依赖性地诱导PC12细胞凋亡,表现为凋亡细胞的TUNEL染色阳性;iNOS mRNA的表达、NO的合成及caspase-3的活力均有明显的增加（P<0.01）;特异性的iNOS抑制剂aminoguanidine和caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO通过减少NO的生成和抑制caspase-3的激活阻断PC12细胞凋亡。结论：NO的生成可能是多巴胺诱导PC12细胞凋亡的触发因子,caspase-3的激活是其中的效应因子。     

NF-κB介导MRP8/14诱导的人肺泡上皮A549细胞凋亡

 目的: 探讨髓样相关蛋白8/14(MRP8/14)对人肺泡上皮A549细胞存活及凋亡的影响,并研究核因子κB(NF-κB)在其中的作用。方法: MRP8/14以不同剂量或刺激时间处理A549细胞,CCK-8法检测其对细胞活力的影响;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot法及间接免疫荧光法检测A549细胞内NF-κB p65蛋白核移位情况;Western blot法检测NF-κB p65蛋白磷酸化水平;使用NF-κB特异性抑制剂Bay 11-7082探讨NF-κB在凋亡过程中的作用。结果: MRP8/14能以剂量和时间依赖的方式影响A549细胞的存活(P<0.05),流式细胞技术检测结果表明MRP8/14处理后A549细胞凋亡率明显增加(P<0.01)。此外,MRP8/14能够诱导NF-κB p65蛋白发生显著磷酸化,并移位至细胞核中,NF-κB信号通路明显激活,而NF-κB特异性抑制剂Bay 11-7082能够明显抑制MRP8/14诱导的细胞凋亡(P<0.01)。结论: NF-κB在MRP8/14所导致的肺泡上皮细胞凋亡过程发挥了重要作用。     

Fas、Caspase-3和抗核小体抗体在参与SLE患者淋巴细胞凋亡紊乱中的作用

目的探讨SLE患者免疫功能紊乱与淋巴细胞凋亡信号传导途径异常之间的关系。方法应用流式细胞术测定SLE患者淋巴细胞表面Fas、FasL及细胞质中活化caspase-3的表达率，并测定凋亡细胞百分率（AnnexinV^＋PI^-）和坏死细胞百分率（AnnexinV^＋PI^＋）。应用ELISA方法测定血清中抗核小体抗体浓度。结果与健康对照组相比，稳定期和活动期SLE患者组淋巴细胞中凋亡细胞和坏死细胞百分率均显著增加（P〈0．05），淋巴细胞表面Fas、FasL及细胞质中活化caspase-3的表达率也显著增加（P〈0．05）。与稳定期SLE患者组相比，活动期SLE患者组淋巴细胞中坏死细胞百分率显著增加（P〈0．05），凋亡细胞百分率略有增加但无统计学意义（P〉0．05）。活动期患者组淋巴细胞表面Fas、FasL以及细胞质中活化caspase-3的表达率略有增加但无统计学意义（P〉0．05）。活动期SLE患者组抗核小体抗体浓度显著高于健康对照组和稳定期患者组（P〈0．05）。SLE患者凋亡细胞百分率和活化caspase-3的表达率与补体C3浓度水平呈负相关关系（P〈0．05）。结论Fas信号传导通路在SLE患者淋巴细胞凋亡紊乱中发挥了重要作用。caspase-3的活化是早期提示淋巴细胞凋亡的重要信号。SLE患者淋巴细胞凋亡活化程度与疾病活动程度和免疫效应功能紊乱密切相关，而淋巴细胞凋亡异常程度与抗核小体抗体水平的高低密切相关。淋巴细胞凋亡加速在SLE患者免疫病理损伤加重和免疫细胞调控紊乱中扮演了重要角色。     

多聚(ADP-核糖)聚合酶和半胱天冬蛋白酶-3在过氧亚硝基阴离子致气道上皮细胞损伤中的作用

目的:探讨过氧亚硝基阴离子(ONOO^-)介导气道上皮细胞损伤的作用机制。方法: 在培养的大鼠气道上皮细胞(RTE), 观察应用多聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)抑制剂3-氨基苯甲酰胺(3-AB)和半胱天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)抑制剂Ac-DEVD-CHO后, 外源性给予ONOO^-对RTE细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放、凋亡百分率的影响, 用Westernblot分析PARP裂解片段。结果:3-AB不能完全抑制ONOO^-引起的RTE细胞LDH释放率的增高。3-AB对ONOO^-引起的RTE细胞凋亡无明显影响。Ac-DEVD-CHO呈剂量依赖性抑制ONOO^-诱导的RTE细胞凋亡。ONOO^-致RTE细胞凋亡过程中有PARP的裂解。结论:PARP活化是ONOO^-介导RTE细胞损伤的途径之一, 过度的PARP活化参与了ONOO^-所致的RTE细胞坏死;caspase-3活化裂解PARP在ONOO^-致RTE细胞凋亡过程中起重要作用。     

NF-κB参与脂多糖致永生化小鼠脑血管内皮细胞通透性增高的调控

目的: 探讨脂多糖(LPS)对永生化小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3通透性的影响及可能的机制。方法: 实验分3组:bEnd.3细胞组、bEnd.3/vector细胞组和bEnd.3/muIκBα细胞组,后2组中分别转染空载pcDNA3.1hygro质粒和IκBα显性负性突变体DNMu-IκBα质粒。利用报告基因法、跨内皮细胞电阻抗(TEER)法、直接荧光染色法和免疫印迹(Western blotting)法分别检测LPS对细胞的NF-κB活性、细胞通透性、骨架蛋白F-actin分布、紧密连接蛋白(ZO-1和claudin-5)表达以及肌球蛋白轻链(MLC)磷酸化水平的影响。结果: bEnd.3组和bEnd.3/vector组细胞中,LPS作用0.5 h可引起NF-κB活化(P<0.05);3 h时细胞TEER开始下降(P<0.05),并伴随细胞F-actin重构,ZO-1表达下调;12 h时,LPS对细胞的TEER、F-actin、ZO-1和claudin-5的破坏程度均达到最高。LPS对bEnd.3组和bEnd.3/vector组细胞早期损害伴有MLC磷酸化增加。而bEnd.3/muIκBα组细胞的NF-κB活性被明显抑制;相应时点,LPS对细胞的TEER、F-actin、ZO-1和claudin-5的损害作用也被减轻。同时LPS引起细胞MLC磷酸化增加的作用被明显抑制。结论: LPS通过破坏紧密连接增加脑微血管内皮细胞的通透性,该过程受NF-κB调控。     

硫化氢通过调控NF-κB通路抑制阿霉素引起的心肌细胞炎症与细胞毒性

 目的：探讨硫化氢（H2S）是否通过调控核因子κB(NF-κB)通路抑制阿霉素（DOX）引起的心肌细胞炎症反应与细胞毒性。方法：应用Western blotting法测定NF-κB p65表达;酶联免疫吸附试验（ELISA）测定白细胞介素（IL）-1β、IL-6及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的分泌水平;细胞计数盒（CCK-8）检测细胞存活率,Hoechst 33258核染色法检测凋亡细胞的形态学及数量的变化。结果：应用5 μmol/L DOX处理H9c2心肌细胞明显上调磷酸化NF-κB p65（p-p65）表达水平,并引起炎症反应和细胞毒性,表现为IL-1β、IL-6、TNF-α的分泌水平升高、凋亡细胞数量增多及细胞存活率降低。400 μmol/L NaHS（H2S供体）预处理30 min能显著抑制DOX对心肌细胞p-p65表达的上调作用,并减轻DOX引起的炎症反应和细胞损伤,使IL-1β、IL-6、TNF-α的分泌水平下降、凋亡细胞数量降低及细胞存活率升高。与NaHS的作用相似,NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC,100 μmol/L）预处理也能阻断DOX引起的心肌炎症反应和细胞毒性。IL-1受体拮抗剂（IL-1Ra, 20 μg/L）与DOX共处理能拮抗DOX对心肌细胞NF-κB p65的激活作用及细胞毒性作用。结论：在DOX引起的心肌细胞炎症中,NF-κB通路与IL-1β之间存在正的相互作用;H2S可通过抑制NF-κB通路保护心肌细胞对抗DOX引起的炎症反应与细胞毒性。     

肌肽对脂多糖诱导脑微血管内皮细胞凋亡的保护作用及机制探讨

目的　探讨肌肽对脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）引起脑微血管内皮细胞（HBMEC）凋亡的保护作用及机制。 方法　用倒置显微镜观察细胞形态变化;MTT法检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞内的活性氧（ROS）含量及细胞凋亡情况;Western blot法检测NF-κB P65、白细胞介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）蛋白表达。 结果　与对照组相比,LPS组细胞存活率略降低（P>0.05）,早期凋亡率明显增加,同时ROS含量、核内NF-κB P65及胞浆IL-1β和TNF-α的含量均显著增加（P<0.05）。与LPS组相比,LPS+肌肽组（10 mmol/L、20 mmol/L、40 mmol/L）凋亡率有明显降低,ROS含量、核内NF-κB P65蛋白量及胞浆IL-1β和TNF-α的含量均不同程度显著降低（P<0.05）。 结论　肌肽可能通过抑制LPS诱导ROS释放,避免NF-κB P65过度激活,进而减少IL-1β和TNF-α分泌,对脑微血管内皮细胞发挥保护作用。     

同型半胱氨酸硫内酯损伤血管内皮细胞的机制研究

目的: 在体外培养的内皮细胞中探讨同型半胱氨酸硫内酯(HTL)致血管内皮细胞损伤作用及其机制。方法: 体外培养的人脐静脉内皮细胞,与不同浓度的HTL孵育,用ELISA检测内皮细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和可溶性细胞间黏附分子(sICAM)-1的浓度,荧光显微镜检测活性氧簇(ROS)的含量、核转录因子κB(NF-κB)的激活及IκBα蛋白表达,同时检测内皮细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)漏出量与一氧化氮(NO)水平。结果: HTL(1 mmol/L)孵育内皮细胞3 h后显著增加细胞 ROS含量,刺激NF-κB转入胞核而活化,孵育细胞24 h后明显升高细胞上清液中sICAM-1和TNF-α浓度;降低细胞活力和NO的水平,增加LDH的漏出量。抗氧化剂NAC、NADPH氧化酶抑制剂Apocynin和NF-κB抑制剂PDTC可显著抑制HTL所致ROS含量的增加以及NF-κB激活,降低HTL刺激的培养液中sICAM-1和TNF-α的浓度,增加培养液中NO水平。结论: HTL诱导的血管内皮细胞功能损伤的机制可能与诱导氧化应激以及NF-κB活化有关。     

IL-12诱导T细胞凋亡对Fas/FasL和TNFR/TNFα表达的影响

目的:探讨白介素12(IL-12)诱导T细胞凋亡过程中对T细胞的Fas/FasL和TNFR/TNFα表达的影响作用。方法:dUTP缺口末端标记法和Annexin V法;用FITC标记TNFR1,PE标记CD95,生物素标记FasL,流式细胞仪检测3种T细胞(人淋巴瘤T细胞株HTB176、人急性白血病T细胞株TIB152和正常人T细胞)的百分率;用半定量PCR的方法检测FasL和TNFα的mRNA的表达作用。结果:HTB176和TIB152的细胞在IL-12处理1 h,生物素标记FasL百分率和FasL的mRNA表达率开始增加,24 h达到高峰,但正常T细胞在24 h后才有反应;正常T细胞经IL-12处理1 h内细胞FasL百分率和FasL的mRNA表达率开始增加,在以后的试验期6、12、24 h始终保持恒定水平;但3种T细胞在IL-12作用下不促进细胞CD95和TNFR1及TNFα的表达。     

大花红天素对大鼠肺微血管内皮细胞凋亡影响的实验研究

目的研究大花红天素抗大鼠肺微血管内皮细胞凋亡的作用及机制.方法用血清药理学的方法观察不同量的含药血清(25、50、100μl)对体外培养的大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)凋亡的影响.细胞凋亡分别用流式细胞术、免疫细胞化学ABC法(测Fas及Bcl-2)测定.结果与对照组比,在RPMVEC中加25μl和50 μl含药血清组凋亡明显抑制(P＜0.05).凋亡抑制组Fas免疫细胞化学染色比对照组弱,阳性细胞明显减少(P＜0.05);而Bcl-2染色比对照组强,阳性细胞明显增加(P＜0.05).结论一定浓度的大花红天素具有抗大鼠肺微血管内皮细胞凋亡的作用,此作用与凋亡相关基因Fas表达减弱和Bcl-2表达加强有关.     

狼疮性肾炎肾组织CD134共刺激信号对核因子-κB表达的影响

目的:探讨CD134(OX40)对核因子-κB(NF-κB)表达的影响及CD134和NF-κB在狼疮性肾炎(LN)发病机制中的可能作用。方法:对40例LN患者肾组织, 用免疫组织化学方法检测CD134的表达, 用碱性磷酸酶-小鼠抗碱性磷酸酶免疫复合物法(APAAP)测定NF-κB表达, 分析CD134与NF-κB的相关性。结果:LN患者肾组织中, CD134表达显著上调, NF-κB在肾小球及肾小管也呈高水平表达, 尤其以Ⅳ型LN更为明显。除系膜细胞、内皮细胞和远曲小管CD134表达明显增强外, 肾间质毛细血管和大血管内皮细胞亦有CD134表达阳性的浸润细胞。LN患者肾小球和肾小管中CD134与NF-κB的表达呈正相关(r分别为0.5542, 0.6279;P＜0.05, P＜0.05)。结论:LN患者存在CD134共刺激分子的异常表达;通过CD134分子的异常信号通路的活化, NF-κB在LN肾组织局部的表达明显增高, 这在LN的发生和发展中可能起着重要的作用。     

小檗碱与育亨宾对脓毒症小鼠脾细胞凋亡的影响及其机制研究

 目的:探讨小檗碱与育亨宾对脓毒症小鼠脾细胞凋亡的影响及其作用机制。方法: 采用盲肠结扎穿孔（CLP）构建小鼠脓毒症模型,分为假手术（sham）组、CLP组、CLP+小檗碱组、CLP+育亨宾组、CLP+小檗碱与育亨宾合剂组。CLP术后2 h灌胃给予相应药物,20 h后取脾脏,用TUNEL和流式细胞术检测小鼠脾细胞凋亡,酶荧光法检测caspase-3、caspase-8和caspase-9的活性变化,Western blotting检测凋亡相关蛋白Fas、Bim、Bcl-2和Bax的表达。结果: (1) CLP组脾脏TUNEL阳性细胞百分率显著高于sham组（P＜0.05）,CLP+育亨宾与小檗碱合剂组、CLP+育亨宾组凋亡细胞百分率显著低于CLP组（P＜0.05）。(2) 流式细胞仪检测显示CLP组凋亡的脾细胞及T淋巴细胞明显多于sham组(P＜0.05),CLP+育亨宾与小檗碱合剂组、CLP+育亨宾组凋亡的脾细胞及T淋巴细胞明显少于CLP组 (P＜0.05) 。(3) CLP+育亨宾与小檗碱合剂组、CLP+育亨宾组脾细胞caspase-3、caspase-8、caspase-9的活性均低于CLP组(P＜0.05);而CLP+小檗碱组脾细胞caspase-9活性也低于CLP组 (P＜0.05)。(4) CLP+育亨宾与小檗碱合剂组胞浆Fas、Bim、Bax表达均低于CLP组,CLP+育亨宾组胞浆Fas表达低于CLP组,CLP+小檗碱治疗组胞浆Bim、线粒体Bax表达均低于CLP组。结论: (1) 小檗碱与育亨宾合用可通过阻断内、外源性凋亡途径抑制脓毒症小鼠脾细胞凋亡,特别是T淋巴细胞凋亡。(2) 育亨宾主要通过抑制Fas的表达、进而阻断内、外源性凋亡途径减少脓毒症诱导的脾细胞凋亡。(3) 小檗碱可抑制脓毒症小鼠脾细胞线粒体凋亡途径,但对脓毒症小鼠脾细胞凋亡的抑制作用并不明显。