粒细胞集落刺激因子动员对供者外周血细胞树突状细胞亚群的影响

目的：研究粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员对外周血单个核细胞（PBMNC）中树突状细胞（DC）亚群及其功能的影响。方法：以CD34^-Lin^- HLA-DR⁺细胞群设门4色荧光分析方法检测25例无关供者G-CSF动员前、后外周血细胞DC亚群；ELISA检测其血清相关细胞因子IL-12p40、IL-10、IFN-γ、IL-4活性，并分析DC₁/DC₂（CD11c⁺CD123^- /CD11c^-CD123⁺）比值与CD34⁺细胞含量的相关性。结果：G-CSF动员后, 供者PBMNC 的DC₁/DC₂比值显著低于动员前（P<0.05）；DC₁/DC₂与CD34⁺细胞含量呈负相关（r=-0.438, P<0.05），CD34⁺细胞/MNC≥0.4%时， DC₁/DC₂倒置；而血清相关细胞因子IL-12p40、IL-10、IFN-γ、IL-4水平无显著改变（P>0.05）； DC₂ HLA-DR表达上调而CD83不表达。结论： G-CSF动员后，供者外周血CD34⁺细胞数量增加的同时，DC₂数量也增加，这些DC₂尽管HLA-DR表达上调，但仍处前体细胞状态，不直接分泌或调节Th2细胞分泌免疫抑制因子。     

参麦注射液对大鼠急性心肌缺血及eNOS mRNA表达的影响

目的：探讨参麦注射液(SMI)预处理可能对 大鼠急性心肌缺血及心肌内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA表达的影响。方法:大鼠随机分为对照组、模型组、处理组1和处理组2，应用异丙肾上腺素建立大鼠心肌 缺血模型,以心电图ST段抬高值作为心肌缺血指标，硝酸还原酶法测定血清和心肌的NO^-₂/NO^-₃，RT-PCR检测心肌eNOS mRNA表达。结果：模型组各时点的心 电图ST段均显著高于对照组，缺血20 min时达高峰，血清和心肌NO^-₂/NO^-₃含量及 心肌eNOS mRNA表达均低于对照组；两个处理组于缺血20、30、40 min时的心电图ST段抬高 幅度均显著低于模型组，血清和心肌NO^-₂/NO^-₃含量均显著高于模型组，心肌eNOS mRNA表达强于模型组；处理组1和处理组2比较，心电图ST段抬高幅度、血清和心肌的NO^-₂/NO^-₃含量及心肌eNOS mRNA表达差异均无显著。结论：参麦注 射液可能是通过促进心肌组织eNOS mRNA表达、增强eNOS活性而提高NO水平，达到抗心肌缺 血的作用。     

感染性休克下调大鼠血管内皮和血小板L-精氨酸/一氧化氮通路

目的：观察感染性休克对大鼠血小板及血管L-精氨酸(L-Arg)/一氧化氮合酶(NOS) /一氧化氮(NO)通路的影响及其相互联系,探讨感染性休克损伤的机制。方法:利用盲肠结扎并穿孔复制早期和晚期感染性休克大鼠模型,采用Greiss法测定血管各层及血小板孵育液亚硝酸盐(NO^-₂/NO^-₃)含量;以同位素示踪法检测其NOS活性及L -Arg转运。结果:早、晚期感染性休克大鼠血小板和主动脉内膜NO-2/NO-3水平、NOS 活性及低亲合L-Arg 转运量均显著低于假手术组(高亲合L- Arg 转运量在早期休克增加、晚期休克降低);而中膜和外膜的NO^-₂/NO^-₃水平、NOS 活性及L-Arg 转运量则显著高于假手术组,均以休克晚期改变为显著。血小板和主动脉内膜NO^-₂/NO^-₃生成、NOS 活性及高、低亲合L-Arg 转运的改变均呈正相关(均P< 0. 01)。结论:感染性休克下调血管内膜和血小板的L-Arg/NO通路,上调血管中膜和外膜L-Arg/ NO通路。提示检测血小板L-Arg/NO通路的变化可能反映休克时血管内皮功能的损伤。     

细胞因子信号传导抑制蛋白-1减轻细胞因子诱导胰岛β细胞促凋亡基因的表达

目的 构建稳定表达细胞因子信号传导抑制蛋白－1（SOCS-1）蛋白的细胞,探讨其在胰岛β细胞凋亡中的保护作用。方法 克隆大鼠SOCS-1基因,构建表达载体pEGFP-C1-SOCS1并转染入大鼠胰岛细胞系RINm5F中,构建稳定表达SOCS-1蛋白的细胞。分别用细胞因子IL-1β 、TNF-α、IFN-γ 、IL-1β联合IFN-r、IL-1β联合TNF-α及IFN-γ刺激24h,RT-PCR与Western blot检测凋亡相关指标。结果 成功构建了稳定表达SOCS-1蛋白的细胞。用IFN-γ、IL-1β联合IFN-r、IL-1β联合TNF-α及IFN-γ刺激后,未转染SOCS-1质粒的细胞iNOS转录水平显著升高。在用所有细胞因子刺激后,未转染SOCS-1质粒的细胞caspase-3表达及活性均显著升高。 结论 SOCS-1蛋白能减轻多种细胞因子诱导的胰岛β细胞促凋亡基因的表达。     

诱导型一氧化氮合酶对大鼠胰岛细胞凋亡的影响

目的:探讨细胞因子和诱导型一氧化氮合酶(iN-OS)对体外培养的大鼠胰岛细胞凋亡和功能的影响及其机制。方法:大鼠胰岛细胞体外培养,随机分组,培养液中分别加入细胞因子IL-1β、TNF-α和/或iNOS抑制剂氨基胍,分为空白对照组、细胞因子组、氨基胍组、氨基胍+细胞因子组。检测指标包括:培养液NO水平和组织iNOS、结构型NOS活性,RT-PCR检测胰岛组织中iNOS基因和凋亡相关基因Bax、Bcl-2的表达情况,AO/EB染色检测胰岛存活,胰岛素释放实验检测胰岛功能。结果:与细胞因子IL-1β和TNF-α共同培养后,大鼠胰岛组织中iNOS的表达增强,活性显著提高(38.93±4.72)U/mL,NO水平上升(313.0±35.4)mol/L,而结构型NOS没有变化;同时胰岛促凋亡基因表达上调,抗凋亡基因表达下降,细胞的存活率下降,胰岛素分泌大大减少。加入氨基胍后,随着胰岛组织中iNOS的活性明显受到抑制,胰岛的凋亡程度减轻,存活和胰岛素分泌情况都明显改善。结论:iNOS在细胞因子诱导的胰岛细胞凋亡中起到十分关键的作用,而氨基胍通过抑制iNOS活性,减轻了细胞因子的损害,降低了胰岛凋亡水平,改善胰岛的存活与功能。     

核因子-κB对TNF-α诱导的大鼠气道平滑肌细胞增殖、凋亡及TGF-β1表达的影响

目的: 探讨核因子-κB(NF-κB)对TNF-α诱导的大鼠气道平滑肌细胞（ASMCs）增殖、凋亡和转化生长因子β₁（TGF-β₁）表达的影响。方法: 体外培养ASMCs，以肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及NF-κB特异性抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)作为工具药,将ASMCs分为对照组、TNF-α组和TNF-α+PDTC组。逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测TGF-β₁ mRNA表达，Western blotting检测NF-κB、TGF-β₁的表达，免疫细胞化学染色法检测PCNA、Bcl-2蛋白表达及定位，四甲基偶氮唑蓝(MTT)微量比色法测定ASMCs增殖，Annexin V/PI双标记流式细胞仪分析法检测细胞凋亡。结果: （1）TNF-α组ASMCs的NF-κB活性显著高于对照组(P<0.01),TNF-α+PDTC组NF-κB活性显著低于TNF-α组 (P<0.01)。（2）TNF-α组ASMCs增殖显著高于对照组(P<0.01),TNF-α＋PDTC组的增殖反应显著低于TNF-α组(P<0.01)；TNF-α+PDTC组细胞凋亡率显著高于TNF-α组及对照组(P<0.01)。（3）TNF-α组ASMCs的PCNA、Bcl-2蛋白表达量均显著高于对照组(P<0.01)，TNF-α+PDTC组的PCNA、Bcl-2蛋白表达量均显著低于TNF-α组(P<0.01)。（4）TNF-α组ASMCs的TGF-β₁的mRNA及蛋白表达水平均显著高于对照组及TNF-α＋PDTC组（P<0.01）。结论: NF-κB活化可能参与调控TNF-α诱导的大鼠气道平滑肌细胞的增殖、凋亡及TGF-β₁的表达和分泌。     

自发1型糖尿病小鼠细胞因子变化及β细胞凋亡

研究自发的1型糖尿病雌鼠模型（NOD）在自然状态下发生糖尿病过程中β细胞凋亡及细胞因子TNF-α，TNF-γ，诱生型NO合酶（iNOS)和Fas,FasL在不同周龄的表达。HE法检测胰岛炎，免疫组化法检测各种抗体的表达。TUNEL法检测凋亡细胞，半定量法对胰岛炎评分并计数凋亡的β细胞和各种抗体阳性细胞率，分析其相关性，凋亡细胞两个峰值出现在3周和32周，与周龄无关，与胰岛炎及血糖均相关，Fas 细胞97.3%为胰岛细胞，FasL表达于胰岛细胞和浸润的单核细胞。在发病小鼠单核细胞上阳性率增高，FasL与血糖相关，IFN-γ，TNF-α的表达与周龄相关，IFN-γ在晚期而TNF-α持续起作用，但在幼鼠与鼠不同，两种细胞因子相关，iNOS与周龄，胰岛炎及血糖均相关，β细胞主要以凋亡方式死亡，凋亡是多因素作用的结果。Fas-FasL,NO和IFN-γ，TNF-α可能独自起作用。后两者作用于不同阶段。     

胆红素对大鼠急性肺损伤形成过程中氧自由基以及caspase-3表达的影响

目的： 探讨胆红素对抗急性肺损伤（ALI）形成的可能机制。方法: 健康雌性Wistar大鼠(190-210 g) 30只，随机分为生理盐水对照组、脂多糖（LPS）致ALI模型组、胆红素干预组。检测肺组织匀浆中羟自由基（OH^-）、过氧化氢(H₂O₂)和超氧阴离子自由基（O₂^·）含量以及肺组织中caspase-3表达的变化。结果: ①ALI模型组肺组织匀浆OH^-、H₂O₂、O₂^·含量及肺组织中caspase-3表达显著高于生理盐水对照组（均P<0.05）。②胆红素干预组肺组织匀浆OH^-、H₂O₂、O₂^·及肺组织中caspase-3表达明显高于ALI正常大鼠（均P<0.05），但少于ALI模型组（均P<0.05）。结论: ①胆红素能在一定程度上减少肺内凋亡细胞数量。②胆红素能减少ALI大鼠肺组织OH^-、H₂O₂、O₂^·水平。③ Caspase-3表达的变化有促脂多糖性肺损伤细胞凋亡作用。     

木犀草素对H2O2氧化损伤的血管内皮细胞的影响

目的： 探讨木犀草素（luteolin）对氧化损伤的血管内皮细胞（endothelial cells）的影响。方法： 体外培养内皮细胞，将细胞分为7组，即空白对照组（control）、溶剂对照组（DMSO）、氧化损伤组（H₂O₂）、氧化损伤加入槲皮素对照组(quercetin+H₂O₂)、氧化损伤加入木犀草素低、中、高浓度组(luteolin-L+H₂O₂、luteolin-M+H₂O₂、luteolin-H+H₂O₂)。将750 μmol/L H₂O₂作用于加入槲皮素及不同浓度木犀草素预培养24h的内皮细胞，继续培养18h（半胱氨酸蛋白酶表达测定时间为14h），然后观察木犀草素对细胞培养液内乳酸脱氢酶（LDH）、一氧化氮（NO）、乳酸脱氢酶（LDH）丙二醛（MDA）含量和细胞活力的影响, 并对细胞进行流式细胞和免疫组化分析，观察该药对细胞凋亡和半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）表达的影响。 结果： 木犀草素呈剂量依赖性降低H₂O₂对内皮细胞生长抑制率，降低MDA、LDH量，增加培养液中 NO^-₂/NO^-₃含量，并显著抑制半胱氨酸蛋白酶-3阳性表达，减少细胞凋亡数量，各指标差异显著（P<0.01）。结论： 木犀草素可拮抗和修复过氧化氢诱导的血管内皮细胞的损伤，其作用可能与抗氧化、促进NO释放，抑制caspase-3表达有关。     

1,25-二羟维生素D_3对胰岛β细胞免疫保护作用

目的研究1,25-二羟维生素D3对胰岛β细胞的免疫保护作用,为胰岛β细胞的免疫保护治疗提供实验依据。方法培养胰岛β细胞株NIT细胞及正常对照外周血单个核细胞,分别与以下4组作用：①（IL-1β＋IFN-γ）组,②（IL-1β＋IFN-γ＋D3）组,③D3组,④对照组（DMEM）。采用酶联免疫吸附分析（ELISA）检测培养上清液中IL-4、IFN-γ水平,用硝酸还原酶法检测上清液NO水平,用化学发光法检测上清液胰岛素水平。结果①IL-1β＋IFN-γ＋D3刺激的NIT-1细胞与IL-1β＋IFN-γ刺激组相比,分泌IL-4水平增高（P〈0.01）、IFN-γ减少（P〈0.01）,IL-4/IFN-γ增高（P〈0.01）;②IL-1β＋IFN-γ＋D3刺激的NIT-1细胞与IL-1β＋IFN-γ刺激组相比,分泌NO水平减少（P〈0.01）;③IL-1β＋IFN-γ＋D3刺激的NIT-1细胞与IL-1β＋IFN-γ刺激组相比,胰岛素分泌增加（P〈0.05）。结论 1,25-二羟维生素D3可减轻IL-1β＋IFN-γ对NIT细胞的损伤作用,保护NIT细胞的胰岛素分泌功能。     

雷公藤单体T4对胰岛β细胞免疫保护作用的机制探讨

目的探讨雷公藤单体T4对胰岛β细胞的免疫保护作用,为胰岛β细胞的免疫保护治疗提供实验依据。方法培养胰岛β细胞株NIT细胞及正常对照外周血单个核细胞,分别与以下6组作用：①IL-1β＋IFN-γ组;②IL-1β＋IFN-γ＋DXM组;③IL-1β＋IFN-γ＋T4组;④T4组;⑤DXM组;⑥对照组（DMEM）。ELISA法检测培养上清IL-4、IFN-γ水平,硝酸还原酶法检测上清一氧化氮水平,化学发光法检测上清胰岛素水平。结果①IL-1β＋IFN-γ刺激的NIT-1细胞分泌IL-4水平较其他各组减少（P〈0.01）,IFN-γ分泌比其他各组增多（P〈0.01）,IL-4/IFN-γ比其他各组降低（P〈0.01）。②T4＋IL-1β＋IFN-γ刺激的NIT-1细胞与IL-1β＋IFN-γ刺激组相比,分泌IL-4水平增高（P〈0.01）,IFN-γ减少（P〈0.01）,IL-4/IFN-γ增高（P〈0.01）。③IL-1β＋IFN-γ刺激的NIT-1细胞分泌NO较其他各组增高（P〈0.01）,胰岛素分泌减少（vsIL-1β＋IFN-γ＋T4组、IL-1β＋IFN-γ＋DXM组,P〈0.05;vsT4组、DXM组、对照组,P〈0.01）。④T4＋IL-1β＋IFN-γ刺激的NIT-1细胞与IL-1β＋IFN-γ组相比,分泌NO水平减少（P〈0.01）,Ins增加（P〈0.05）;与IL-1β＋IFN-γ＋DXM组相比,NO分泌减少（P〈0.05）。结论 T4可减轻IL-1β＋IFN-γ对NIT细胞的损伤作用,保护NIT细胞的胰岛素分泌功能。     

瘦素对巨噬细胞IL-1α的表达和氧化应激的调节作用

目的： 研究瘦素(leptin)对小鼠腹腔巨噬细胞(PM)产生白介素1α (IL-1α)的影响及氧化应激在这一过程中的作用。方法：体外培养的小鼠PM，按瘦素不同浓度和/或不同的培养时间以及自由基清除剂catalase或SOD进行分组，分别收集培养细胞和上清液，用ELISA方法测定培养上清中IL-1α水平，用激光共聚焦显微镜检测细胞内过氧化氢以及超氧阴离子的产生，用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)测定IL-1α mRNA的表达。 结果：瘦素能够剂量依赖地诱导小鼠PM产生IL-1α，瘦素浓度为75 μg/L时IL-1α表达至峰值，是对照组的12.2倍，并在瘦素作用2 h达高峰。瘦素可增加细胞内H₂O₂和O^-·₂的量，分别是对照组的2.1倍和17.4倍。H₂O₂的特异性清除剂catalase能够抑制瘦素引起的H₂O₂产生和IL-1α mRNA表达，分别比瘦素处理组减少79%和65%。O^-·₂的特异清除剂SOD可使瘦素引起的O^-·₂产生和IL-1α mRNA表达比瘦素处理组减少93.8%和70％。结论：瘦素在小鼠PM通过增加H₂O₂和O^-·₂的产生而诱导细胞表达IL-1α。     

PGF2α促进NIT-1β细胞葡萄糖刺激性胰岛素分泌的相关机制研究

目的:探讨PGF₂α促进葡萄糖刺激性胰岛素分泌的作用机制。 方法:运用放免方法检测PGF₂α在不同情况下对NIT-1β细胞葡萄糖刺激性胰岛素分泌量的变化，并以Fluo-3AM为探针，利用激光共聚焦显微镜检测细胞内钙的改变。 结果:在0和5.5 mmol/L葡萄糖时，5 μmol/L的PGF₂α使NIT-1β细胞胰岛素分泌无明显增加；但在16.5 mmol/L葡萄糖时，PGF₂α明显增加胰岛素分泌（P<0.01）；ddA或Ly-83583对PGF₂α增强的胰岛素分泌没有显著影响（均P<0.01），预先给予U-73122抑制了PGF₂α促进的胰岛素分泌（P<0.01）；预先给予calphostin C，PGF₂α也不能进一步诱导增强胰岛素的分泌（P<0.05）。另外，PGF2α能够引起β细胞内钙升高，预先给予ddA或Ly-83583，均不能阻断其作用，而预先给予U-73122则抑制了PGF₂α引起的β细胞内钙升高。 结论:PGF₂α增强高浓度葡萄糖刺激下的胰岛素分泌，可能是通过激活PLC双信号途径，诱导细胞内钙升高和激活PKC途径发挥作用。另外，PGF₂α的作用与cAMP/PKA或cGMP/PKG信息通路可能没有关系。     

S100β对炎症条件下嗅鞘细胞的作用及机制

目的:明确S100β对干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)诱导的炎症条件下嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)的作用,并探讨其发挥作用的机制。方法:将采用改良差速贴壁联合胰酶限时消化3 min法纯化培养的大鼠OECs分为空白对照组、炎症模型组、S100β组等3组,每组种板1×106/ml;空白对照组采用常规培养体系培养OECs,炎症模型组采用重组IFN-γ诱导炎症建立OECs体外炎症模型,S100β组在炎症模型组基础上加入S100β蛋白进行干预;采用免疫荧光染色进行OECs鉴定及纯度分析;利用MTT法检测OECs的增殖情况并筛选IFN-γ诱导OECs炎症模型的适宜浓度;利用TUNEL染色法判断各组OECs的凋亡状况;采用Real-Time PCR检测各组OECs表达炎症相关因子i NOS、IL-1β、TNF-α的mRNA水平。根据以上结果,判断在炎症环境中S100β对OECs的影响及可能机制。结果:采用改良方法原代培养的大鼠OECs能够获得80%纯度;与5 ng/ml的浓度相比,10 ng/ml的IFN-γ对OECs的抑制率更高,凋亡细胞更多;与炎症模型组比较,S100β干预组细胞增殖能力升高,凋亡细胞减少;炎症相关因子i NOS、IL-1β以及TNF-α的基因表达水平下降。结论:S100β可以下调IFN-γ激活的炎症因子i NOS、IL-1β和TNF-α的基因表达水平,提示S100β可能是通过抑制炎症因子的表达从而减少了OECs凋亡的发生。本研究结果为深入研究S100β联合嗅鞘细胞移植对周围神经损伤的修复作用奠定了基础。     

过表达SIRT1抑制脂多糖诱导的胰岛β细胞炎症因子表达及NF-κB信号通路激活

目的研究沉默信息调节因子1(SIRT1)对脂多糖(LPS)诱导的胰岛β细胞炎症因子表达及核因子-κB(NF-κB)信号通路激活的影响。方法用LPS处理胰岛β细胞,qRT-PCR和Western blot测定细胞中SIRT1表达变化。用pcDNA3.1-SIRT1慢病毒感染胰岛β细胞,qRT-PCR检测细胞中白细胞介素-6(IL-6)mRNA和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达水平,流式细胞术测定细胞凋亡变化,Western blot检测细胞中Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化型Caspase-3(cleaved Caspase-3)、核因子-κBp65亚型(NF-κBp65)、Toll样受体4(TLR4)蛋白表达水平。结果 LPS处理后的胰岛β细胞中SIRT1表达水平降低。pcDNA3.1-SIRT1慢病毒感染可以提高LPS条件下胰岛β细胞中SIRT1表达水平。LPS处理后的胰岛β细胞中IL-6 mRNA和TNF-αmRNA表达水平升高,凋亡率升高,细胞中Bax、Cleaved Caspase-3、NF-κBp65、TLR4蛋白表达升高。过表达SIRT1可以降低LPS条件下胰岛β细胞中IL-6 mRNA和TNF-αmRNA表达水平,抑制细胞凋亡,减少细胞中Bax、cleaved Caspase-3、NF-κBp65、TLR4蛋白表达。结论 SIRT1减少LPS诱导的胰岛β细胞炎症因子表达并下调细胞中NF-κB信号激活水平。     

西红花酸对H2O2诱发心肌细胞凋亡及相关调控蛋白caspase-3、Bcl-2表达改变的影响

目的：探讨西红花酸对过氧化氢（H₂O₂）诱导的培养心肌细胞凋亡及相关调控蛋白caspase-3、Bcl-2表达改变的作用。 方法： 通过光镜观察细胞形态、碘化丙啶（PI）染色法和流式细胞术相结合检测培养细胞凋亡率、免疫荧光染色法和流式细胞术相结合检测细胞中caspase-3、Bcl-2蛋白。 结果： 在本实验使用浓度范围内，各浓度H₂O₂组细胞形态明显改变、凋亡率明显高于正常对照组，1×10^-4 mol·L^-1 H₂O₂可使培养心肌细胞Bcl-2蛋白表达明显减少，而caspase-3表达明显增多；各剂量西红花酸组细胞形态学改变减少、凋亡率明显低于1×10^-4 mol·L^-1 H₂O₂组，细胞中Bcl-2蛋白减少幅度与caspase-3增加幅度均减小，且较高浓度（5×10^-5 mol·L^-1）西红花酸组比较低浓度（5×10^-7 mol·L^-1）西红花酸组作用也更明显（P<0.05）。 结论： 西红花酸能够减轻H₂O₂对培养心肌细胞的损伤性凋亡作用，可能与稳定细胞内凋亡相关调控蛋白caspase-3、Bcl-2的功能有关。     

AngⅡ诱导血管内皮细胞衰老及凋亡相关基因的表达

目的： 探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老及凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达。方法: 体外培养人脐静脉内皮细胞, 采用四甲基偶氮唑蓝比色法测定内皮细胞存活率，用AngⅡ(10^-6mol/L)及valsartan（AngⅡ1型受体特异性拮抗剂）干预,分为实验对照组、AngⅡ诱导组及valsartan组，采用β-半乳糖苷酶染色和流式细胞术鉴定细胞衰老，通过Hoechst33258荧光染色观察细胞形态学变化，并利用免疫细胞化学染色法、RT-PCR法和Western blotting分析各组细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax mRNA及蛋白的表达水平。结果: 与对照组相比，10^-6mol/L AngⅡ诱导组存活的细胞数为对照组的（81.90±0.04)%; (80.10±6.81)%的细胞呈现β-半乳糖苷酶阳性染色。流式细胞仪检测细胞周期停滞于G₀-G₁［(91.36±6.45)%］，证实细胞衰老；荧光显微镜可见明显的细胞凋亡［(31.84±2.86)%］。与AngⅡ诱导组相比，valsartan组Bcl-2mRNA及蛋白表达水平明显增高(P<0.05), Bax mRNA及蛋白表达水平降低（P<0.05）。结论: AngⅡ可诱导体外培养的HUVECs老化。经AngⅡ诱导的衰老HUVECs发生凋亡，提示细胞凋亡参与了AngⅡ诱导HUVECs细胞的衰老过程。AngⅡ诱导血管内皮细胞衰老的分子机制之一可能与Bcl-2、Bax mRNA及蛋白表达的失衡有关。缬沙坦对血管内皮细胞衰老有一定保护作用。     

结直肠癌患者外周血Vδ2 T细胞IL-17A的表达研究1

目的:比较结直肠癌患者与正常人外周血单个核细胞来源的Vδ2 T细胞CD27、IL-17A、IFN-γ和TNF-α的表达变化。方法:抽取试验对象外周血,分离单个核细胞,采用流式细胞术分析其中CD27+Vδ2 T细胞与CD27-Vδ2 T细胞的IL-17A、IFN-γ和TNF-α的分泌表达情况。结果:结直肠癌患者外周血Vδ2 T细胞的IL-17A表达明显高于正常人[(5.99±0.80)%比(3.48±0.57)%,P=0.01;]IFN-γ与TNF-α的分泌表达具有明显正相关性(P0.0001)。结直肠癌患者和正常人CD27+Vδ2 T细胞的IL-17A表达均较CD27-Vδ2 T细胞低,而CD27+Vδ2 T细胞的IFN-γ和TNF-α分泌表达则高于CD27-Vδ2 T细胞。结论:结直肠癌患者Vδ2 T细胞的IL-17A表达是升高的,而IFN-γ与TNF-α的分泌表达之间具有显著正相关性;共刺激受体CD27影响VδT细胞的功能表达。     

与IGFBP-3相关的RXRα、STAT-1信号通路在β-淀粉样肽1～42诱导大鼠海马神经元凋亡中的可能作用

目的 探讨胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3）、视网膜X受体α（RXRα）及信号转导子和转录激动子（STAT-1）在β-淀粉样肽_1～42(Aβ_1～42)诱导大鼠海马神经元凋亡中的可能作用。方法 以原代培养的大鼠海马神经元为模型，分为对照组和Aβ_1～42组，加入不同浓度的凝聚态Aβ_1～42，原位缺口末端标记法（TUNEL）观察凋亡细胞的形态；免疫细胞荧光方法检测凋亡细胞及IGFBP3、RXRα阳性细胞；免疫印迹法检测RXRα蛋白和STAT-1蛋白的表达水平。结果 20μmol/L Aβ_1～42作用大鼠海马神经元24h能明显诱导神经元凋亡，表现为TUNEL/DAPI染色出现阳性细胞；20μmol/L Aβ_1～42作用大鼠海马神经元3～6h后IGFBP3阳性细胞、RXRα阳性细胞、RXRα蛋白的表达水平均较对照组有明显增高（P<0.01），在较高水平保持一段时间后逐渐下降；而STAT-1蛋白的表达水平则显著降低（P<0.01）。 结论 IGFBP3/RXRα或STAT-1信号转导通路可能在Aβ_1～42诱导大鼠海马神经元凋亡中起一定作用。