大鼠与小鼠脑组织脱水方法的实验研究

近年来，我们在协助其他单位或研究生做动物实验后的组织病理学研究中发现，若按日常人体标本的脱水时间和程序制备大鼠与小鼠的脑组织蜡块，则在切片后进行染色前处理及染色时会出现严重的脱片现象，从而造成后续工作无法进行。即使在载玻片上涂蛋白甘油、多聚赖氨酸等防脱片剂效果不佳，未脱片者的HE染色、特殊染色及免疫组化染色     

大鼠不同器官组织的脱水方法改进

<正>近期,本实验室于大鼠组织病理学实验中发现,若按大鼠常规脱水时间和流程制备大鼠的组织蜡块,则组织切片易碎裂,染色易脱片,造成后续工作无法进行。即便使用防脱片剂效果亦不佳,尚未脱片的组织切片HE染色及特殊染色结果亦不理想。本实验室根据大鼠各个器官组织特点进行试验后,改进了大鼠组织的脱水方法取得较好效果,现介绍如下。     

琼脂糖明胶在组织脱水前预包埋中的应用

优质的HE切片是病理诊断的前提条件,在病理工作中占据重要地位[1]。HE染色与诸多环节有关,组织包埋质量是其中重要的一环,正确的组织包埋是HE制片及诊断的基础[2]。在日常工作中,虽然大部分组织均能被正确包埋,但仍会遇到一些问题,如细小、零碎的标本使用纱布或脱水纸进行包裹,脱水后易黏附在纱布或脱水纸上,包埋时无法进行完整剥离,造成人为标本丢失;特殊标本如内镜黏膜下剥离术(endoscopic submucosal dissection,ESD)等脱水后需查找正确的包埋面,否则会出现诊断失误;取材时某些组织与肿瘤或息肉粘连不紧密,脱水后易发生剥离或断裂的现象,对诊断工作造成一定影响[3]。     

变色硅胶在常规染色中检测二甲苯和无水乙醇含水情况的应用

正在病理技术工作中,二甲苯和无水乙醇是最常用的试剂。一张优秀的病理切片在最后的脱水透明环节用到的试剂无水乙醇和二甲苯必须是干净无水状态,若这两个试剂内含有水分,因水的折射率与树胶的折射率不同,则会导致切片封固后在镜下呈小水珠或者大片云雾状,严重影响病理医师的阅片诊断。造成组织切片显微镜下不能观察的原因主要是人为因素或环境因素,因此在不破坏切片形态的基础     

EDTA在HE染色中的应用

正苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色是病理技术中最基本的染色方法,染色理想状态是在镜下见细胞核与细胞质蓝红相映,对比明显;核膜及核染色质颗粒清晰可见。实际工作中因组织干涸、固定脱水不足、脱钙等原因会造成切片染色困难,细胞核染色淡或出现局部灰染,给临床病理诊断带来困扰。经过大量实验,本科室对处理不好的组织切片染色前用EDTA抗原修复液进行高压修复,使染色质量得     

洪水浸泡后病理切片和蜡块的抢救措施

<正>病理蜡块是将病变的组织或脏器经甲醛固定、乙醇脱水、石蜡包埋后制成的组织块;病理切片是将蜡块在切片机上切成薄片,黏附在玻片上,行HE染色后在显微镜下观察,作出病理诊断,为临床诊断和治疗提供依据。病理切片和蜡块是病理科具有重要价值的医学资料[1-4],由病理科按照《临床技术操作规范·病理学分册》《病理科建设与管理指南（试行）》规定保存。     

带植入物病理组织标本切磨片制作技术探讨

硬组织病理切磨技术主要是针对骨组织、带植入物的骨组织、埋置有坚硬植入物的其他组织标本,或在动物试验阶段进行了亲骨荧光素标记的不能进行脱钙的骨组织,通过脱水、浸润、包埋处理,由硬组织切磨系统完成的组织病理切片制作的技术。有文献报道骨组织及埋置坚硬植入物的组织进行病理组织切片制作,通常利用EXAKT硬组织切磨系统[1-3]。硬组织病理切磨技术最显著的特点是不破坏组织中的植入物,且保持了组织与植入物之间原有的组织结构形态,这对研究组织内植入物的长入情况具有重要意义。本文结合本实验室日常硬组织制片工作经验,分析硬组织病理切片制作的每个处理环节,以期能为其他技术人员提供参考。     

淋巴结免疫组化制片技术体会

在日常病理工作中由于淋巴组织疾病分型多、异型性大易造成诊断困难。随着免疫组化技术的不断发展,检测系统和抗体种类的日趋丰富,免疫组化技术已成为淋巴组织病理诊断必不可少的手段之一。病理技术人员需不断提高淋巴组织免疫组化染色效果,以满足病理诊断的需求。1组织固定良好的组织处理是制作优良病理切片的第一步。由于淋巴组织结构致密、细胞丰富且表面有被膜包绕,使固定液不易浸透易出现组织处理不良的现象。故取材宜新鲜,0.2     

乳白胶作为粘片剂的应用

在病理HE制片及免疫组织化学制片工作中,经常遇到组织切片与载玻片粘合不牢而脱片的情况。既影响工作质量和速度,又造成试剂的浪费。尤其是在免疫组化染色中,因抗体试剂昂贵,若经常脱片,不仅影响病理诊断;也会降低经济效益。因此,使用好粘片剂以减少脱片提高制片质量是病理技术     

新型条形码标签在病理制片流程中的应用

在传统的病理技术工作方法与操作流程中,粘贴手工书写的不干胶病理切片号码标签是在完成石蜡切片HE染色封固后进行的.部分病理科的病理切片号码标签采用电脑设计打印的不干胶标签[1].本文通过选用具有防水性、抗化学性和耐高温烘烤及耐摩擦的粘贴材料和打印带色素材料,在优化病理切片与HE染色操作流程的基础上,把最后粘贴手工书写或电脑打印的病理切片号码标签,改为完成石蜡切片后先粘贴专用打印的新型信息化病理组织切片条形码标签,再进行烤片等工作流程.有效改变病理切片号码字迹模糊、混乱错误、粘贴错位的现象,提升了病理技术操作安全质量监控,提高了病理制片的工作效率.     

二甲苯脱脂在快速冷冻切片染色中的应用

带有脂肪的组织如用改良固定液快速冷冻制片过程中往往会造成背景模糊、脱水不彻底的现象，影响染色及切片质量，给诊断带来困难，甚至引起严重的不良后果。本文介绍快速冷冻制片过程中染色前加热用二甲苯脱脂，可获得满意效果的体会。     

小孔包埋盒脱水对组织脱水的影响及分析

<正>病理切片质量是病理诊断的基石,影响切片质量的因素众多,病理组织脱水是其重要环节之一。脱水时根据组织大小不同,选择使用大孔或小孔包埋盒。如果每个脱水筐中的小孔包埋盒数量太多,包埋盒会互相拥挤重叠,试剂进入包埋盒阻力增大,循环流通不畅,影响组织的脱水、透明、浸蜡效果。当试剂排出脱水缸并用下一试剂更换时,会有少量的前一试剂留在脱水缸中与新试剂混合,该混合物被称为携带污染量,污染物增多会影响脱水质量。因此,我们采用常规脱水程序时加压并抽真空,并     

骨组织脱钙及其脱钙后染色的研究

近年来为配合白血病、淋巴瘤等疾病的诊断而开展了骨髓穿刺活体组织病理检查,特别是2003年以来,为了配合“非典”患者治疗后期相继出现股骨头坏死等病症的科研工作,我科先后为中国医学科学院实验动物研究所及中国人民解放军军事医学科学院等科研单位制作了大量实验动物的骨组织标本的病理学切片。在制作这些骨组织病理切片的“脱钙-染色过程中”遇到了一些问题：骨组织脱钙不足（脱钙液浓度过低、时间过短）造成组织太硬,不易切片且极易脱片;骨组织脱钙过度（脱钙液浓度过高,时间过长）严重影响骨髓组织细胞染色效果,造成细胞核无法正常着色,要么细胞核不着色或着色很浅亦或被伊红染成红色,从而影响对病变组织的病理诊断及实验动物的研究工作。为解决出现的上述问题,我们在工作中认真仔细地分析研究了骨组织的特点,经过反复实验,摸索总结出一套适用于骨穿组织及实验动物骨组织的“脱钙-染色方法”,并获得了满意的结果,现将将此方法作一简单介绍以供读者参考。     

含蜡组织块脱水不足的补救

组织脱水不足常影响后继的透明与浸蜡,表现为含蜡组织块发软,制成蜡块后组织块与周边石蜡容易发生脱离,此种蜡块往往难以切出组织薄片或即使强行切出也会出现组织挤压、破碎,影响病理诊断(图1).我们以热丙酮为介质对上述含蜡组织块进行补救性处理,能有效脱去组织内剩余水分并使石蜡充分浸透,所制蜡块亦能顺利切出组织薄片,行HE染色与常规切片无明显差异.     

提高免疫组化染色质量的相关处理和操作

恰当的组织处理是做好免疫组化染色的先决条件,也是决定染色成败的内部因素[1].在组织细胞准备过程中,不仅要求保持组织细胞形态的完整,更需要保持组织或细胞内的抗原,使之不受损失或弥散,防止组织自溶.很显然,在一张组织或细胞已坏死、抗原已丢失的材料上,再好的技术和抗体也难以成功染色.本文就组织标本及时取材、固定、组织脱水和包埋、切片以及免疫组化规范操作等过程进行分析与讨论,旨在与技术人员一起学习交流,以提高免疫组化染色的质量,为病理诊断提供有力保证.     

正丁醇脱水制作肝组织石蜡切片

肝、脾组织的细胞成分较多，细胞间隙较大，纤维结缔组织较少，其质地较脆，在采用乙醇脱水、二甲苯透明、石蜡包埋组织块时，常因脱水和透明的时间略长，而造成肝脾组织的石蜡切片易碎或在光镜下出现大量的裂纹而影响形态学的观察。因此，我们采用不同浓度的正丁醇替代乙醇和二甲苯的脱水和透明作用，所制作的肝组织石蜡切片有效地避免了上述的缺陷。     

表面脱钙法在骨髓组织病理诊断中的应用

<正>病理工作中常遇到骨或含骨的组织、伴大片钙化的组织,这些组织无法常规直接制片,传统方法是将这些组织固定后进行脱钙,使钙盐溶解组织变软后再脱水、透明、浸蜡、包埋制片。然而,常规脱钙处理往往导致组织染色效果欠佳、组织抗原丢失及DNA等核酸分子严重片段化等[1],有时     

冷冻切片锇酸染色法在脂肪染色中的应用

正在病理诊断和科研工作中,HE切片常出现大小不等的空泡,常需用脂肪染色来鉴别空泡性质;在某些疾病的诊断及鉴别诊断方面,脂肪染色也具有一定的价值。脂肪染色时常用冷冻切片作苏丹类染色,效果很好~([1])。但因其在染色过程中不能接触有机溶剂,封片时采用水溶性封固剂,切片染色后不能长久保存。为解决这些问题,作者实验中用冷冻切片进行锇酸染色,取得了较为满意的效果,现总结介绍如下。1材料与方法1.1材料收集2010~2011年广州军区广州总医院病理     

输卵管妊娠组织制片的技巧

目的通过此制片法解决了输卵管妊娠血块组织制片本身的问题,可制作出输卵管妊娠组织的优良切片,便于临床工作和科研及基础医学教学和科研。方法最好选择快速固定液;脱水时也不用常规乙醇脱水,改用丙酮脱水;浸蜡温度应控制在56℃为宜,浸蜡时间控制在1h左右;血块组织切片厚度最好为3μm;苏木精-伊红(HE)染色时,苏木素浸染时间长些,伊红浸染时间短些。结果用此法制作输卵管妊娠组织切片,不是那么脆和硬,也不易碎,能够顺利切出连续蜡带;染色时也不易脱片,染色对比度也好。结论在输卵管妊娠组织制片过程中,只要解决输卵管妊娠血块组织制片本身的问题,就能制作出优良的切片。     

蜡块修与切的体会

HE病理切片是病理诊断的基础，优质的切片是病理诊断医师作出准确诊断的前提。但病理切片制作程序复杂，影响因素繁多，往往一个极小环节的失误就会严重降低病理切片的整体质量。在实际工作中常会遇到一些HE切片，其在显微镜下会出现一些大小不一的斑块状空洞，这些空洞区内观察不到细胞形态。作者经反复研究，发现这些空洞区的出现与制片过程中蜡块修、切的操作不谨慎有关。