lncRNA COLCA1/miR-423-5p/FAM172A分子轴对皮肤鳞状细胞癌A431细胞的增殖和迁移的影响

目的探讨长链非编码RNA(long-chain non-coding RNA, lncRNA)COLCA1在皮肤鳞状细胞癌(cutaneous squamous cell carcinoma, CSCC)组织中的表达及其对细胞增殖和迁移的影响、分子机制。方法采用qRT-PCR法检测COLCA1在正常皮肤组织和CSCC组织、细胞系及人角质形成细胞系中的表达;选择表达最低的细胞系,分别转染空白质粒(对照组)或COLCA1过表达质粒(实验组);采用MTT法和细胞划痕实验分别检测过表达COLCA1对CSCC细胞系增殖和迁移的影响;通过生物信息学法预测COLCA1潜在的分子机制。采用qRT-PCR和Western blot法检测过表达COLCA1对靶基因表达的影响。结果 CSCC组织中COLCA1的表达显著低于正常皮肤组织(1.01±0.20 vs 5.71±0.78,P<0.01)。CSCC细胞系中COLCA1的表达显著低于人角质形成细胞系(P<0.01),A431细胞系中的表达最低(P<0.01)。与对照组相比,过表达质粒可有效促进COLCA1的表达(1.00±0.04 vs 9.31±0.99,P<0.01)。过表达COLCA1可抑制A431细胞的增殖能力和迁移能力(P均<0.01)。COLCA1可能与miR-423-5p互补结合,miR-423-5p可能与FAM172A mRNA互补结合。与对照组相比,过表达COLCA1可抑制A431细胞中miR-423-5p的表达(1.00±0.05 vs0.20±0.05,P<0.01),并促进FAM172A在mRNA和蛋白的表达(P<0.01)。结论 COLCA1在CSCC组织和细胞系中呈低表达,过表达COLCA1可能通过miR-423-5p/FAM172A分子轴抑制CSCC细胞系A431的增殖和迁移能力。     

ATF4对皮肤癌细胞增殖的影响及相关机制

目的：探讨沉默/过表达ATF4对人皮肤癌细胞增殖的影响及其相关作用机制。方法：Western blot技术检测不同类型皮肤癌细胞中ATF4的蛋白表达水平。构建ATF4沉默/过表达的A431皮肤癌细胞株,采用CCK-8法、克隆形成实验和流式细胞术检测A431细胞增殖能力的变化及细胞周期分布;Western blot技术检测细胞周期调控因子cyclin D1、cyclin E、P21和p-Rb/Rb的蛋白表达水平。结果：ATF4在3种不同类型的皮肤癌细胞中均呈高表达。CCK-8法和克隆形成实验结果显示沉默ATF4的A431细胞存活率和增殖能力均显著降低(P<0.05),而过表达ATF4可促进A431细胞的增殖;流式细胞仪检测结果显示沉默ATF4可明显抑制A431细胞从G0/G1期向S期转换,过表达ATF4则促进其G1/S转换。同时Western blot实验结果显示沉默ATF4后,cyclin D1、cyclin E和p-Rb的蛋白水平均显著降低,而P21的蛋白表达显著增加(P<0.05),过表达ATF4后则cyclin D1、cyclin E和p-Rb的蛋白水平显著增加,而P21的蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论：ATF4能够促进人皮肤鳞状细胞癌细胞株A431的增殖,其潜在作用机制可能与促进细胞周期G1/S转换及影响相关周期调控因子的表达有关,提示AT F 4可作为治疗皮肤癌的一个潜在作用靶点。     

穿心莲内酯对人皮肤基底细胞癌A431细胞生长、凋亡及增值细胞核抗原蛋白表达的影响

目的 探讨穿心莲内酯（AD）对人皮肤基底细胞癌A431细胞生长、凋亡及增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白表达的影响。方法 应用酸性磷酸酶（APA）法检测细胞增殖抑制率,荧光显微镜观察细胞形态,Annexin V-FITC/PI双染法、流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率, Rh123染色FCM检测细胞线粒体膜电位,免疫细胞化学法检测细胞PCNA蛋白表达。结果AD呈时间、剂量依赖性抑制A431细胞生长增殖;且同一时间点50mg/L、100mg/L AD组与溶媒对照组相比差异显著（P＜0.05）。AD组作用A431细胞24h时,部分细胞核染色质出现典型凋亡形态学改变。不同浓度AD作用A431细胞24h,早期凋亡率、晚期凋亡及坏死率均随AD浓度升高而逐渐增加,且50mg/L、100mg/L AD组与溶媒对照组相比差异显著（P＜0.05）。AD作用A431 24h细胞内PCNA蛋白随AD浓度升高表达逐渐减少。AD作用A431细胞24h后,线粒体膜电位下降明显,与溶媒对照组相比较,50mg/L、100mg/L AD组差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 AD可明显抑制A431细胞生长增殖,其抑制细胞增殖可能与下调PCNA蛋白表达有关。AD能诱导A431细胞凋亡,其凋亡机制可能与细胞线粒体膜电位下降有关。     

RAD51相关蛋白1在宫颈癌组织中的表达及通过TGF-β/Smad 通路 参与调控人宫颈癌细胞的增殖和凋亡*

目的：探讨RAD51相关蛋白1（RAD51AP1）通过调节转化生长因子β（TGF-β）/Smad 信号通路对人宫颈 癌细胞（SiHa）增殖和凋亡的影响。方法：收集2018 年7 月至2021 年3 月间南阳市中心医院51 例宫颈癌组织与 癌旁组织标本,免疫组织化学法检测宫颈癌组织RAD51AP1蛋白表达。筛选RAD51AP1高表达宫颈癌细胞系, 体外培养SiHa 细胞,分为对照组、si-RAD51AP1 组（ 转染si-RAD51AP1 质粒）、si-NC 组（ 转染si-NC 质粒）、 抑制剂组（TGF-β/Smad 通路抑制剂LY2109761）、si-RAD51AP1+ 激活剂组（ 转染si-RAD51AP1 质粒+TGF-β/ Smad 通路激活剂人重组TGF-β1）。采用MTT法与平板克隆形成实验检测各组SiHa 细胞增殖;流式细胞术检测 细胞凋亡;实时荧光定量PCR法检测细胞中RAD51AP1、TGF-β1 mRNA 水平;免疫印迹检测细胞中RAD51AP1 蛋白、TGF-β/Smad 通路相关蛋白及增殖、凋亡相关蛋白表达。结果：RAD51AP1在宫颈癌组织与SiHa 细胞系中 均显著高表达;抑制RAD51AP1表达或抑制TGF-β/Smad 通路后,细胞增殖活性、细胞克隆形成率及cyclin D1、 TGF-β1、p-SMAD2、p-SMAD3 蛋白表达水平显著减低,细胞凋亡率、Bax、caspase-3、cleaved caspase 3 蛋白 表达水平显著升高,而抑制RAD51AP1表达基础上使用TGF-β/Smad 通路激活剂后,可部分逆转上述变化。结 论：RAD51AP1在宫颈癌中表达上调,抑制RAD51AP1表达可通过抑制TGF-β/Smad 通路而抑制宫颈癌细胞增殖, 促进细胞凋亡。     

整合素α5β1蛋白及mRNA在子宫颈鳞状细胞癌中的表达及意义

目的 探讨子宫颈鳞状细胞癌(cervix squamous cell carcinoma,CSCC)中整合素α5β1蛋白和mRNA的表达,并分析其与临床病理特征的关系.方法 采用免疫组化SP法、RT-PCR技术检测60例CSCC及40例子宫颈正常组织中整合素α5β1蛋白及mRNA的表达.结果 CSCC中整合素α5β1蛋白及mRNA表达均高于子宫颈正常组织,差异有统计学意义(P＜0.05);整合素α5β1蛋白及mRNA的表达均与CSCC分化程度、pTNM分期、淋巴结转移、浸润深度有相关性(P＜0.05),与患者年龄无相关性(P＞0.05).结论 CSCC中整合素α5β1蛋白及mRNA的表达与其生长、侵袭与转移密切相关.采用免疫组化SP法与RT-PCR技术联合检测CSCC中整合素α5β1蛋白及mRNA,有望成为评估CSCC恶性程度、侵袭、转移和临床预后的指标.     

TRIB3激活Wnt/β-catenin信号通路对喉癌TU686细胞体外生长增殖及移植瘤小鼠外周免疫抑制分子表达的影响

目的：探讨TRIB3激活Wnt/β-catenin信号通路对喉癌TU686细胞体外生长增殖及移植瘤小鼠外周免疫抑制分子表达的影响。方法：分别在体外细胞（人永生化表皮细胞系HaCat及喉癌细胞TU686）及组织（喉癌及癌旁组织）中检测TRIB3蛋白及RNA表达，随后将TU686细胞分为阴性对照组（NC组）及敲低TRIB3组（sh-TRIB3组），提取细胞总蛋白及RNA，验证两组细胞中TRIB3表达水平。验证成功后，CCK-8、集落克隆实验及流式细胞术检测TU686细胞的增殖能力；Western blot检测两组细胞中Wnt、Cyclin-D1、C-myc、β-catenin、p-β-catenin蛋白表达水平，相关性分析验证TRIB3与Wnt、Cyclin-D1、C-myc、β-catenin、p-β-catenin蛋白表达的相关性。利用敲低TRIB3的核心质粒构建低表达TRIB3的裸鼠移植瘤模型（TRIB3 sgRNA组），并设置平行对照组（Control sgRNA组），观察瘤体的生长体积及重量，ELISA测定移植瘤小鼠血清免疫抑制分子表达。结果：与HaCat细胞及正常癌旁组织相比，...     

外源性FHIT基因对人皮肤癌细胞系A431细胞增殖与凋亡的影响

目的 研究脆性组氨酸三联体基因(FHIT)对皮肤癌细胞株A431增殖与凋亡作用的影响，探讨FHIT基因在皮肤肿瘤发生发展中的作用。方法 脂质体介导的质粒pcDNA3-FHIT转染到有FHIT基因表达异常的皮肤癌细胞株A431，用G418 对转染后细胞进行筛选，获得G418 抗性的细胞用免疫细胞化学方法进行FHIT基因表达鉴定。用MTT法、克隆形成试验及流式细胞仪观察转染前后细胞生长特性的变化。结果 转染FHIT基因的A431细胞FHIT蛋白表达阳性,其增殖活性减弱、克隆形成能力降低、凋亡率增加,且与对照组差异均有统计学意义。结论 导入外源性FHIT基因可以抑制皮肤肿瘤细胞A431的增殖,诱导细胞凋亡。     

子宫颈鳞状细胞癌中Wnt-1和β-catenin的表达及其与转移的关系

目的：探讨Wnt-1、β-catenin蛋白在子宫颈鳞状细胞癌( cervical squamous cell carcinoma, CSCC)中的表达及其与侵袭转移的关系。方法采用免疫组化EliVision法检测78例CSCC组织和30例正常子宫颈组织中Wnt-1、β-catenin蛋白表达。结果在正常子宫颈组织中,Wnt-1、β-catenin蛋白的阳性率分别为20.0%和10.0%;CSCC组织中,Wnt-1、β-catenin蛋白的阳性率分别为56.4%和74.4%,二组差异有统计学意义(P<0.001)。33例CSCC淋巴结转移中Wnt-1、β-catenin蛋白的阳性率分别为72.7%和90.9%;45例CSCC无淋巴结转移中Wnt-1、β-catenin蛋白的阳性率分别为44.4%和62.2%。 Wnt-1、β-catenin蛋白表达与CSCC的分化程度( P <0.05)、浸润深度及 FIGO 分期均有关( P <0.05),与患者年龄、肿瘤大小等均无关。Spearman相关性分析显示：Wnt-1与β-catenin蛋白表达呈正相关关系(rs =0.490,P<0.001)。结论 Wnt-1、β-catenin蛋白的表达异常可能参与CSCC的发生、发展及转移,Wnt-1、β-catenin蛋白均可作为预测CSCC侵袭、转移的潜能及临床预后的指标。     

STIL基因通过调控IL-6/STAT3通路影响宫颈癌细胞增殖和凋亡

目的：探讨STIL基因对宫颈癌增殖和凋亡的影响并研究其机制。方法：RT-qPCR和Western blot检测STIL mRNA和蛋白在宫颈癌组织、癌旁组织、宫颈癌细胞系HeLa、SiHa、caski、人正常宫颈上皮细胞HUCEC中的表达。将HeLa细胞分为对照（NC）组、si-NC组、si-STIL组、si-STIL+IL-6组。CCK-8和平板克隆实验检测各组细胞增殖和克隆能力,流式细胞术检测各组细胞凋亡率。Western blot检测各组细胞IL-6、IL-6R和p-STAT3蛋白表达。将稳定转染sh-STIL的HeLa细胞注射到裸鼠背部,研究抑制STIL表达对肿瘤形成的影响。结果：宫颈癌组织中STIL mRNA和蛋白表达显著高于癌旁组织（P<0.05）。HeLa、SiHa、caski细胞中STIL mRNA和蛋白表达显著高于HUCEC细胞（P<0.05）。与si-NC组比较,si-STIL组细胞吸光度、克隆数及IL-6、IL-6R和p-STAT3蛋白水平显著降低（P<0.05）,凋亡率显著升高（P<0.05）。与si-STIL组比较,si-STIL+IL...     

靶向VEGF的shRNA对皮肤鳞癌A431细胞的作用

 目的 构建靶向VEGF的shRNA（psilencer-VEGF1-shRNA,VEGF-s1;psilencer-VEGF2-shRNA,VEGF-s2）干预皮肤鳞癌细胞（A431）的一系列生物学行为,探讨VEGF-s1和VEGF-s2干预作用的意义。方法 构建psVEGF-shRNA真核表达质粒干预体外培养的A431细胞, 同时构建含随机靶序列的阴性对照表达质粒(psilencer-Target-off-shrank,T-off)。RT-QPCR,western blot 和ELISA检测细胞内VEGFmRNA和蛋白表达水平的变化;CCK-8法检测细胞活性;流式细胞仪检测癌细胞增殖周期细胞百分比与细胞凋亡;划痕试验和Transwell小室试验别检测癌细胞二维和三维空间的迁移能力;FN黏附试验检测癌细胞的黏附潜能。结果 A431细胞转染psVEGF-shrank后活性降低,细胞周期发生阻滞,与对照组相比细胞在G1期比率显著增加(P<0.05),在S期比率明显降低,细胞调亡增加(均P<0.05),细胞内VEGFmRNA和蛋白表达水平下降,细胞迁移和黏附潜能均受到抑制。结论 VEGF是人皮肤鳞癌细胞生长相关的重要基因,干扰VEGF基因能有效抑制人皮肤鳞癌细胞的生物学行为。     

成纤维细胞生长因子受体4基因沉默对口腔鳞癌细胞增殖 和凋亡的影响及其作用机制*

目的：探讨成纤维细胞生长因子受体4（FGFR4）基因沉默介导RAS/RAF/MAPK信号通路对口腔鳞癌细 胞增殖和凋亡的影响。方法：收集本院2018 年4 月至2019 年8 月收治的口腔鳞癌患者32 对肿瘤组织样本和癌旁 非癌组织，利用免疫组织化学和免疫印迹检测FGFR4蛋白的表达；免疫印迹检测正常口腔上皮细胞HOEC和口 腔鳞癌细胞（HSC-2、CAL-27 和SACC-83）中FGFR4蛋白的表达水平。通过基因沉默技术下调FGFR4表达，利 用qRT-RCR 和免疫印迹检测SACC-83 细胞的FGFR4表达的变化，克隆形成实验检测SACC-83 细胞的增殖能力， 流式细胞术检测SACC-83 细胞的凋亡和细胞周期，免疫印迹检测SACC-83 细胞的RAS/RAF/MAPK信号通路。 结果：与癌旁非癌组织相比，口腔鳞癌组织的FGFR4表达升高；与正常口腔上皮细胞HOEC相比，口腔鳞癌细 胞（HSC-2、CAL-27 和SACC-83）的FGFR4表达量高；下调FGFR4表达可抑制SACC-83 细胞的增殖，抑制抗 凋亡蛋白Bcl-2 的表达，上调凋亡蛋白Bax 的表达，促进SACC-83 细胞的凋亡，同时抑制周期蛋白P21 的表达， 使SACC-83 细胞停滞于G0/G1 期；下调FGFR4表达可抑制RAS、RAF及p-MEK和p-ERK1 蛋白的表达。结论： 下调FGFR4表达可抑制口腔鳞癌细胞增殖，促进细胞凋亡，使其停滞于G0/G1 期，可能与抑制RAS/RAF/MAPK 信号通路有关。     

青蒿琥酯抑制人食管癌Eca-109细胞系的CDC25A表达

目的观察青蒿琥酯（artesunate，Art）对人食管癌Eca-109细胞系的抑瘤作用，并进一步探讨ATt诱导肿瘤细胞周期阻滞与CDC25A、TGF-β表达的关系。方法体外培养人食管癌Eca-109细胞系及正常人外周血单个核细胞（hPBMC），利用MTT法测定细胞增殖；采用流式细胞术（FCM）测定细胞周期；应用RT．PCR方法检测CDC25AmRNA表达，应用Western blot方法检测蛋白表达。结果Art能显著抑制Eca-109细胞的增殖，ICS0为（68．80±0．76）μmol／L，而对hPBMC的增殖则没有明显抑制作用。低浓度Art可将细胞阻滞于G0／G1期，S期细胞显著减少，当浓度达到100μmol／L时，细胞阻滞于G2／M期。Art可显著抑制Eca-109细胞CDC25AmRNA及蛋白表达，同时显著上调TGF-β的蛋白表达水平。结论Art可抑制肿瘤细胞生长，上调TGF-β表达，抑制CDC25A表达。     

雌激素受体2对前列腺癌细胞系PC-3M增殖的影响

目的： 构建带有人雌激素受体2（ESR2）全长cDNA的重组质粒pcDNA3.1-hERβ,转染人前列腺癌PC-3M细胞株,观察ESR2对细胞增殖能力的影响。 方法：RT-PCR方法从人正常卵巢组织中获取ESR2全长cDNA,利用基因重组技术与真核表达载体pcDNA3.1连接,构建重组质粒pcDNA3.1-hERβ;瞬时转染前列腺癌PC-3M细胞株,应用细胞计数、MTT法及流式细胞术检测细胞增殖能力的改变;半定量RT-PCR法及Western blotting法分别检测增殖相关基因cyclinD1和 P21Cip1 mRNA及蛋白表达。 结果：DNA测序结果显示扩增的ESR2序列与GenBank（NM_001437）所公布的序列完全一致。重组质粒pcDNA3.1-hERβ瞬时转染人PC-3M细胞48 h后,与质粒对照组相比：RT-PCR法及Western blotting法显示,ESR2基因在mRNA水平和蛋白水平的表达均明显增加;细胞计数及MTT结果发现,细胞数目减少,细胞增殖活性下降（P<0.01）;流式细胞实验显示,G0/G1期细胞比例增加（P<0.05）,S期及G2/M期细胞比例减少（P<0.05）;RT-PCR及Western blotting结果还发现cyclinD1的表达减弱,而P21Cip1的表达增强。 结论：成功构建pcDNA3.1-hERβ重组质粒;带有ESR2全长基因的重组质粒转染PC-3M细胞后,细胞的增殖活性受到抑制;RSR2可能通过影响细胞增殖相关基因cyclinD1和 P21Cip1的表达抑制细胞的增殖。     

β-拉帕醌对胃癌细胞生长与侵袭的抑制作用及机制

目的：探讨β-拉帕醌体外抑制胃癌细胞增殖和迁移及诱导凋亡的作用及机制。方法应用噻唑蓝（ MTT）及平板克隆实验检测β-拉帕醌对SGC-7901与AGS胃癌细胞增殖的影响,划痕实验检测β-拉帕醌抑制胃癌细胞的迁移能力,流式细胞术检测β-拉帕醌诱导胃癌细胞凋亡的作用。应用Western b1ot法检测β-拉帕醌处理胃癌细胞前后其增殖、迁移、上皮-间质转化（ epithe1ia1-mesenchyma1 transition,EMT）及凋亡分子标志物的变化。结果β-拉帕醌可显著抑制SGC-7901和AGS胃癌细胞的增殖能力,并下调增殖与周期相关Skp2和DEK蛋白的表达（ P均<0.05）;经β-拉帕醌处理后,胃癌细胞的迁移能力明显下降,且显著下调MMP-2/9和Ezrin蛋白以及EMT间质标志物的表达,上调EMT上皮标志物表达水平;另外,β-拉帕醌增加胃癌细胞的凋亡,下调BCL-2/Bax比值以及上调活化型Caspase-3/8/9的表达。结论β-拉帕醌对胃癌细胞有明显的抑制增殖及诱导凋亡的作用,并可通过MMPs和EMT途径抑制胃癌细胞的迁移能力。     

低表达S100钙离子结合蛋白A6促进食管腺癌SK-GT-4细胞的增殖和迁移

目的 探讨S100钙离子结合蛋白A6（S100A6）对食管腺癌SK-GT-4细胞增殖和迁移的影响。 方法 慢病毒转染，构建稳定细胞系shNC和shS100A6，Real-time PCR检测S100A6 mRNA表达情况；倒置显微镜和MTT检测细胞的增殖能力，Transwell检测细胞的迁移能力及U0126（MER1/2的抑制剂）、LY294002（PI3K抑制剂）对细胞增殖、迁移的影响；Western blotting检测细胞中S100A6、p-ERK、p-Akt及其下游参与增殖、迁移的相关蛋白的表达情况，检测U0126、LY294002对p-ERK、p-Akt及其下游参与增殖、迁移的相关蛋白表达的影响。 结果 构建了敲低S100A6的稳定细胞系，敲低S100A6促进了细胞的增殖和迁移，p-ERK、p-Akt水平升高，细胞周期抑制蛋白p21表达量下降、细胞周期蛋白D1(cyclinD1）表达升高，间质细胞标志蛋白——波形蛋白（vimentin）、β-连环蛋白（β-catenin）表达升高；U0126处理shS100A6细胞后，对细胞的增殖无影响，抑制细胞的迁移，p-ERK、β-catenin表达下降；LY294002处理shS100A6细胞后，抑制细胞的增殖和迁移，p-Akt表达下降，p21表达量升高，cyclinD1表达量下降，β-catenin表达下降。 结论 低表达S100A6促进细胞的增殖和迁移，其可能机制是通过p-Akt调控细胞周期的进程促进细胞增殖，通过激活p-Akt/p-ERK调控β-catenin促进细胞的迁移。     

Polo-like激酶l反义RNA对肺癌细胞A549生长的实验研究

目的： 探讨Polo-like激酶1（Plk1）基因表达下调对肺癌细胞周期分布及其生长的影响。方法： 培养肺腺癌细胞株A549，构建表达Plk1反义RNA的质粒pcDNA3-Plk1，通过脂质体介导转染A549细胞，采用RT-PCR和Western blotting的方法检测Plk1基因的表达，细胞计数、BrdU脉冲标记检测细胞增殖，流式细胞仪分析细胞周期变化和凋亡，MTT法检测长春瑞宾（NVB）对各组细胞的生长抑制率。结果： A549细胞转染pcDNA3-Plk1后24 h，Plk1 mRNA及蛋白表达均下降；细胞变圆、漂浮、增殖减慢；S期细胞百分数（BrdU标记指数）显著低于对照组（P<0.05）；转染后48 h A549细胞出现G₂/M期阻滞（P<0.05）并发生凋亡；等浓度化疗药物诺维本对转染pcDNA3-Plk1细胞的抑制率明显高于各对照组（P<0.05），转染pcDNA3与未转染的对照细胞差异无显著（P>0.05）。结论： pcDNA3-Plk1的转染能下调Plk1基因的表达，抑制A549细胞增殖，诱导凋亡，并能增加A549细胞对化疗药物的敏感性。     

雌二醇促人乳腺细胞株增殖及其ERβ表达

 目的：观察不同浓度雌二醇（E₂）对HBL-100细胞的增殖作用及ERβ的表达。方法：用MTT法观察不同浓度E₂处理后细胞增殖情况，流式细胞仪分析细胞周期，免疫组化法检测ERβ表达。结果：E₂（0.01-1 μmol/L）可增强HBL-100的增殖活性，G₁、G₂/M期细胞增多，S期细胞减少；ERβ表达从胞质转至胞核。结论：E₂具有促进人乳腺细胞增殖的作用，可能与ERβ重新分布有关。     

重组人血管内皮抑素对人多发性骨髓瘤细胞RPMI 8226增殖和相关蛋白表达的影响

 目的： 研究重组人血管内皮抑素（恩度）在体外对人多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226细胞增殖、细胞周期及细胞相关蛋白表达的影响。方法： 用CCK-8检测恩度对RPMI 8226细胞增殖的影响;流式细胞术检测凋亡和细胞周期的改变;Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2和caspase-3表达变化;以实时定量PCR和Western blotting检测RPMI 8226细胞血管细胞粘附因子 1（VCAM-1）、白细胞介素 6（IL-6）和血管内皮生长因子（VEGF）mRNA以及蛋白表达变化;ELISA检测细胞上清液中细胞因子IL-6和VEGF水平。结果： 恩度对RPMI 8226细胞有增殖抑制作用,250 mg/L恩度对RPMI 8226细胞 72 h增殖抑制率为（59.5±5.6）%（P<0.05）,细胞G1期比例增加（P<0.05）,但对细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2和caspase-3表达无显著影响;经恩度作用后RPMI 8226细胞 VCAM-1表达下降（P<0.05）,IL-6和VEGF表达及分泌降低（均P<0.05）。结论： 恩度能通过改变细胞周期变化抑制RPMI 8226细胞增殖,并能减少VCAM-1表达及IL-6、VEGF分泌,对细胞凋亡无明显改变。     

肾上腺素对U251细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨肾上腺素对人胶质瘤细胞系U251细胞增殖、凋亡、周期的作用。方法:应用RT-PCR方法检测U251细胞中β-肾上腺素能受体(β-AR) mRNA的表达。MTT法检测肾上腺素对U251细胞增殖的影响;克隆形成实验检测肾上腺素对U251细胞克隆形成的影响; Annexin V-FITC/PI检测肾上腺素对U251细胞凋亡的影响;流式细胞术检测肾上腺素对U251细胞周期的影响; Western Blot检测周期、凋亡和自噬相关蛋白表达变化。结果:人胶质瘤细胞U251表达β-AR;肾上腺素以浓度依赖性的方式抑制U251细胞增殖(P 0. 05);肾上腺素抑制U251细胞的克隆形成(P 0. 05);流式结果显示,随着肾上腺素浓度的增加,细胞的凋亡率明显增加(P 0. 05),G_0/G_1期细胞比例显著增加(P 0. 05),G_2/M期细胞比例下降(P 0. 05);肾上腺素处理U251细胞48 h,细胞周期蛋白Cyclin D表达下调,促凋亡蛋白Bax表达上调,自噬相关蛋白LC3-II/LC3-I比值升高。结论:肾上腺素可能通过激活细胞自噬抑制人胶质瘤细胞的增殖,使细胞阻滞在G_0/G_1期。     

人鳞状细胞癌细胞株(A431)中NET-1基因对癌细胞增殖和浸润的影响

目的 探讨小分子干扰核酸(siRNA)对皮肤鳞状细胞癌(简称皮肤鳞癌)细胞株(A431)中NET-1基因的抑制作用,及其基因对癌细胞增殖、浸润的影响.方法 构建针对人NET-1基因的siRNA NET-1真核表达载体(pU6H1-GFP-siRNA NET-1),转染A431细胞后通过半定量RT-PCR检测细胞中NET-1 mRNA水平以筛选较有效的siRNA NET-1.同时设置针对NET-1的正、反义真核表达载体和随机序列对照组siRNA表达载体,体外瞬时转染A431细胞,RT-PCR、Western blot分别检测癌细胞内NET-1 mRNA和蛋白的表达,经免疫荧光染色在激光共聚焦显微镜下观察NET-1蛋白在细胞内的表达;四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞仪分别榆测A431细胞增殖与占不同细胞周期中细胞增殖指数(PI);划痕试验和Transwell迁移试验分别检测A431细胞的迁移和侵袭能力.结果 测序证实编码NET-1序列的siRNA已经插入载体pU6H1-GFP中U6和H1两个启动子之间,其他载体测序结果 符合设计要求.pU6H1-GFP载体转染A431细胞后其转染率达到80%.转染siRNA NET-1和反义NET-1后分别与未转染组比较,A431细胞中NET-1 mRNA分别减少72%和62%(t值分别为-36.01,-17.65;均P<0.05)和蛋白表达水平分别减少61%和69%(t值分别为-21.13,-33.14;均P<0.05);在转染48 h后能显著抑制A431细胞的增殖、迁移和浸润(均P<0.05).在转染对照组siRNA后并未见到明显的抑制效果.转染正义NET-1后,能分别增加细胞内52%NET-1 mRNA和49%蛋白表达水平(t值分别为12.49,13.98,均P<0.01).结论 靶向NET-1的siRNA真核表达载体能特异、有效的下调NET-1基因蛋白的表达,并抑制A431细胞增殖、迁移和浸润.进而证明内源性NET-1基因的功能与A431细胞增殖、迁移、浸润有关.靶向NET-1的siRNA显示基因抑制效率比反义核酸技术更好.