P27^kip1与出核因子CRM1在人淋巴瘤细胞系中的表达及相互关系

目的研究P27kip1与出核因子CRM1在淋巴瘤细胞中的表达及相互关系。方法运用血清饥饿同步化处理淋巴瘤细胞株Jurkat和Raji,10%血清刺激细胞增殖。Western blot分别检测生长阻滞及增殖的淋巴瘤细胞中P27kip1与CRM1的表达。用核浆分离方法检测P27kip1与CRM1分别在胞核、胞质的定位。免疫沉淀检测P27kip1与CRM1在淋巴瘤细胞中的结合。结果在不同状态的淋巴瘤细胞中,P27kip1与CRM1蛋白水平的表达均表现为负相关,并且P27kip1的核内外分布与CRM1的核内外分布一致。免疫沉淀结果验证在淋巴瘤细胞中P27kip1与CRM1相互结合。结论出核因子CRM1可能通过与P27kip1结合而影响P27kip1的核内外分布及表达水平,从而参与调控淋巴瘤细胞的生长。     

P27pl与出核因子CRMl在人淋巴瘤细胞系中的表达及相互关系

目的 研究P27kipl与出核因子CRMl在淋巴瘤细胞中的表达及相互关系.方法 运用血清饥饿同步化处理淋巴瘤细胞株Jurkat和Raji,10%血清刺激细胞增殖.Western blot分别检测生长阻滞及增殖的淋巴瘤细胞中P27kipl与CRMl的表达.用核浆分离方法检测P27kipl与CRM1分别在胞核、胞质的定位.免疫沉淀检测P27与CRMl在淋巴瘤细胞中的结合.结果 在不同状态的淋巴瘤细胞中,P27kipl与CRMl蛋白水平的表达均表现为负相关,并且P27kipl的核内外分布与CRMl的核内外分布一致.免疫沉淀结果验证在淋巴瘤细胞中P27kip1与CRMl相互结合.结论 出核因子CRMl可能通过P27kipl结合而影响P27kip1的核内外分布及表达水平,从而参与调控淋巴瘤细胞的生长.     

SiRNA沉默JAB1表达抑制肝癌细胞增殖

 目的 观察沉默Jab1基因表达对人肝癌细胞HepG-2增殖的影响。方法 利用RNA干扰技术构建PAVU6-JAB1 siRNA干扰质粒,将其转染HepG-2细胞,采用Real-time PCR、Western blot等方法对Jab1表达进行检测,WST-8、流式细胞分析对细胞增殖的影响。结果 成功构建PAVU6- JAB1 siRNA干扰质粒,转染HepG-2细胞后Jab1蛋白表达量较对照组明显降低,P27kip1蛋白表达量明显升高 (P<0.01)。转染96 h后能显著抑制细胞增殖活性,由空载体转染组的99.6%?1.4%降至70.8%?1.6%。结论 构建靶向Jab1基因的干扰质粒能下调Jab1基因的表达,上调P27kip1蛋白水平,并抑制HepG-2细胞在体外的增殖活性。     

草木犀石油醚提取物对NF-κB和血红素氧合酶1表达的影响

目的: 探讨草木犀的石油醚提取物在炎症中的作用.方法: 通过LPS干预RAW264.7 细胞系建立炎症细胞模型, 免疫细胞化学法检验NF-êB的表达及分布变化, 实时荧光定量RT-PCR法检测血红素氧合酶1(HO-1)的基因表达, Western blot法测定HO-1的蛋白表达量.结果: 免疫细胞化学法结果显示药物干预时胞质被染为棕色, NF-êB多分布在胞质未被激活; 仅有LPS干预时, 胞核被染为棕色, NF-êB集中分布在细胞核表达增强.药物提取物干预后HO-1的mRNA表达水平明显升高, 且呈剂量依赖型关系; Western blot结果显示药物干预后HO-1的蛋白表达水平也明显升高.结论: 草木犀的石油醚提取物通过抑制NF-êB的激活, 同时促进HO-1的释放而发挥一定的抗炎作用.     

血红素加氧酶-1对肝癌细胞细胞周期调控因子的影响

目的 观察血红素加氧酶-1(heme oxygenase 1,HO-1)对人肝癌细胞HepG2细胞周期调控因子的影响.方法 构建含有野生型和突变型HO-1基因的重组载体pcDNA3.1(+)-wtHO-1和pcDNA3.1(+)-mHO-1G143H.利用脂质体介导的方法将构建好的重组载体转染肝癌细胞系HepG2,以空载体转染作为对照组.通过G418筛选建立稳定表达野生型和突变型HO-1的HepG2肝癌细胞系.经半定量RT-PCR、Western印迹检测转染细胞系中HO-1 mRNA和蛋白的表达水平.在HO-1表达改变的稳转细胞系中,利用Western 印迹检测转染细胞系中P21、P27蛋白表达水平.结果 成功实现了野生型和突变型HO-1在HepG2细胞中的过表达;野生型和突变型HO-1过表达均能诱导抑癌基因p21和p27的表达.结论 HO-1过表达诱导抑癌基因p21和p27的表达与血红素分解产物无关.HO-1可能通过其它机制调节p21和p27的表达.     

反转录病毒载体介导的P27kip1促HepG2细胞凋亡简

 目的 研究反转录病毒介导的P27kip1基因过表达对HepG2细胞的影响。 方法 构建携带有人P27kip1基因的反转录病毒载体,经脂质体介导转染PA317包装细胞,G418筛选获得稳定产毒细胞株,病毒感染HepG2细胞,筛选出P27kip1阳性克隆,Western blot检测P27kip1在HepG2中的表达,并通过细胞形态学观察、MTT、FCW等方法,检测P27kip1对HepG2细胞的影响。结果 成功构建了含有人P27kip1基因的pLNCX-P27反转录病毒载体并导入包装细胞获得了稳定产毒细胞株,病毒感染HepG2后P27kip1基因可在细胞内高表达,过表达P27kip1基因的细胞生长速度受阻,较多细胞阻滞于G1期,且凋亡增多。结论 构建的pLNCX-P27载体能稳定高效地将P27kip1基因导入HepG2细胞,过表达P27kip1可抑制细胞生长,加速凋亡。     

藏红花素诱导卵巢癌HO-8910细胞凋亡的体外实验

目的 探讨藏红花素(crocin)诱导卵巢癌HO-8910细胞凋亡及其作用机制.方法 MTT法分析藏红花素对卵巢癌HO-8910细胞增殖的影响;流式细胞仪检测藏红花素作用于卵巢癌HO-8910细胞后,细胞周期分布及凋亡率的改变;Western印迹法检测p53、Fas/APO-1和Caspase-3蛋白的表达.结果 MTT实验分析显示,藏红花素明显抑制卵巢癌HO-8910细胞生长;流式细胞仪检测结果显示,藏红花素作用于卵巢癌HO-8910细胞后,G0/G1期细胞数比例及细胞凋亡率升高.Western印迹法检测结果显示,p53和Fas/APO-1蛋白表达水平明显增加,Caspase-3活性增强.结论 藏红花素能明显抑制卵巢癌HO-8910细胞的生长,使其被阻滞于G0/G1期,并可能通过上调p53、Fas/APO-1蛋白表达水平,进而激活Caspase-3调控的凋亡途径,从而促进卵巢癌HO-8910细胞凋亡.     

脑胶质瘤中Jab1和p27的表达与意义

目的 探讨Jab1和p27在脑胶质瘤中的表达、意义以及相互关系.方法 运用免疫组化方法检测70例胶质瘤和8例对照脑组织标本中Jab1、p27蛋白的表达.Western blot检测6例新鲜胶质瘤标本中相应分子的表达.结果 Jab1在对照脑组织中表达不明显,在Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤中阳性率分别为21.2%、65.4%、91.7% 三者之间的表达水平差异有统计学意义(P<0.001).p27在对照脑组织中表达明显,在Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤中阳性率分别为93.8%、53.8%、25.0%,三者之间的表达差异有统计学意义(P<0.001).Western blot结果显示Jab1与p27在胶质瘤中的表达水平与肿瘤细胞的恶性程度相关.相关分析显示:胶质瘤中Jab1蛋白表达与增殖指标Ki-67表达呈正相关,与p27蛋白表达呈负相关;p27蛋白表达与Ki-67表达呈负相关(P<0.001).结论 胶质瘤中Jab1的异常高表达可能是抑制p27表达的重要因素.Jab1与p27的异常表达可能在胶质瘤的发生发展过程中起促进作用.     

鼻咽癌中p27kip1表达及其与临床病理特征相关研究

目的 检测p27kip1蛋白在鼻咽癌中的表达,分析其与临床病理特征的关系.方法 收集60例手术活检切取的鼻咽癌组织蜡块,与30例非肿瘤鼻咽组织石蜡标本作比较.应用免疫组织化学技术检测鼻咽癌组织中p27kip1蛋白的表达,回顾性研究鼻咽癌患者的临床病理特征.结果 p27ksp1蛋白在鼻咽癌细胞核和细胞质中均有表达.鼻咽癌组织中细胞核表达阳性率为46.7%(28/60),低于非肿瘤鼻咽组织细胞核表达的90%(27/30),P＜0.01;而在细胞质中阳性率为68.3%(41/60),显著高于非肿瘤鼻咽组织的细胞质表达的20%(6/30),P＜0.01.未发现p27kip1蛋白在细胞核和细胞质表达与鼻咽癌原发灶的范围和局部侵犯程度有关,但p27kip1蛋白胞核表达与淋巴结转移、远处转移和TNM临床分期有关;细胞质表达仅与淋巴结转移和TNM临床分期有关,可见p27kip1蛋白胞核表达与临床病理的关系更为密切.结论 与非肿瘤鼻咽组织相比,p27kip1蛋白为细胞核低表达、细胞质高表达.鼻咽癌中p27kip1蛋白存在不同于非肿瘤鼻咽组织的错误的核质定位,其在细胞核中表达的减少或丢失可能与鼻咽癌的恶性发展有关,提示p27kip1蛋白的异常表达和定位可能涉及鼻咽癌的分期和转移.     

饥饿状态下Lewis细胞HMGB1的表达、定位与细胞自噬发生的相关性研究

目的探讨饥饿状态下小鼠肺癌细胞(Lewis)自噬的发生与高迁移率组蛋白B1(HMGB1)的相关性。方法分别用HBSS诱导Lewis自噬0、3、6及9 h,免疫荧光检测HMGB1在胞内表达水平及迁移情况;收集细胞及培养上清,Western blot检测微管相关蛋白轻链3(LC3)及其磷脂酰乙醇胺共轭物(LC3-Ⅱ)、泛素结合蛋白p62与高迁移率组蛋白(HMGB1)的表达水平;PCR检测Lewis细胞表面HMGB1配体RAGE、TLR2及TLR4的表达。结果免疫荧光显示,Lewis细胞饥饿6 h后HMGB1表达量增加并伴随从胞核向胞浆的迁移;Lewis细胞饥饿3 h后,Western blot结果显示,HMGB1及LC3-Ⅱ表达水平逐渐增加;Lewis细胞表面表达HMGB1的配体RAGE、TLR2及TLR4;利用重组的HMGB1蛋白刺激Lewis后细胞自噬明显增加。结论 HMGB1可以促进Lewis细胞自噬的发生。     

先兆子痫患者HLA-DQA1、-DQB、-DPA1基因多态性

目的：探讨人类白细胞抗原HLA-DQA1、-DQB1、-DPA1基因多态性与先兆子痫发病的关系。方法：采用序列特异性引物技术（PCR-SSP） 对46例先兆子痫患者和105例正常孕妇及其新生儿进行HLA-DQ-DPA1等位基因分型。结果：所有标本共检出11种HLA-DQA1基因表型、16种HLA-DQB1基因表型、6种HLA-DPA1基因表型。先兆子痫患者HLA-DQB1＊0301基因频率高于正常孕妇，差异有显著性（Pc=0．032，RR=2．43，AR=0．30），其余各基因表型频率两组比较差异均无显著性。结论：HLA-DQB1＊0301基因可能是一种先兆子痫发病的易感基因。     

HLA-DRB1, -DQA1, -DQB1, -DPA1 and -DPB1 genes in Japanese multiple sclerosis patients

Japanese MS patients and controls were examined for the distribution of HLA-DRB1, -DQA1, -DQB1, -DPA1 and -DPB1 alleles using in vitro amplification of genomic DNA and probing with sequence-specific oligonucleotides. No significant difference in frequency of the examined alleles was observed among the two groups. This is in contrast to Norwegian MS patients, where an association to a combination of certain DQA1 and DQB1 alleles has previously been demonstrated.     

The Rad9-Hus1-Rad1 (9-1-1) clamp activates checkpoint signaling via TopBP1

DNA replication stress triggers the activation of Checkpoint Kinase 1 (Chk1) in a pathway that requires the independent chromatin loading of the ATRIP-ATR (ATR-interacting protein/ATM [ataxia-telangiectasia mutated]-Rad3-related kinase) complex and the Rad9-Hus1-Rad1 (9-1-1) clamp. We show that Rad9's role in Chk1 activation is to bind TopBP1, which stimulates ATR-mediated Chk1 phosphorylation via TopBP1's activation domain (AD), a domain that binds and activates ATR. Notably, fusion of the AD to proliferating cell nuclear antigen (PCNA) or histone H2B bypasses the requirement for the 9-1-1 clamp, indicating that the 9-1-1 clamp's primary role in activating Chk1 is to localize the AD to a stalled replication fork.     

Comprehensive sequence analysis of HLA-DQA1 and -DQB1 alleles and characterization of DRB1-QAP-DQA1-DQB1 haplotypes

It is well known that both chain and β chain of HLA-DQ are highly polymorphic. However the polymorphisms outside the hypervariable region were not fully examined so far. To further clarify the polymorphisms in DQ genes, we determined the nucleotide sequences of full length cDNA, spanning from the leader sequence to the stop codon, from 15 DQA1 alleles and 15 DQB1 alleles. We identified several new DQ alleles which had identical exon 2 sequence and were different in other exons. On the basis of the sequence analyses, a comprehensive PCR-based oligotyping system for DQA1 gene was established. We then characterized DRB1-QAP(DQA1 promoter)-DQA1-DQB1 haplotypes of B-lymphoblastoid cell lines homozygous for HLA and healthy unrelated Japanese and Norwegian populations. It was revealed that DQA1 alleles, which were identical in exon 2 but different in other exons, showed close linkage disequilibrium with diferent characteristic DRB1, QAP and DQB1 alleles. These results suggest that DR-DQ haplotypes have been generated in the early stage of molecular evolution.     

先兆子痫患者HLA-DQA1、-DQB1、-DPA1基因多态性

目的:探讨人类白细胞抗原HLA-DQ-A1、DQB1、DPA1基因多态性与先兆子痫发病的关系。方法:采用序列特异性引物技术(PCRSSP)对46例先兆子痫患者和105例正常孕妇及其新生儿进行HLA-DQ-DPA1等位基因分型。结果:所有标本共检出11种HLADQA1基因表型、16种HLADQB1基因表型、6种HLADPA1基因表型。先兆子痫患者HLA-DQ-B10301基因频率高于正常孕妇,差异有显著性(Pc=0.032,RR=2.43,AR=0.30),其余各基因表型频率两组比较差异均无显著性。结论:HLADQB10301基因可能是一种先兆子痫发病的易感基因。