抗慢性B淋巴细胞白血病患者IgM单抗相对亲和力的分析

本文采用间接ELISA法检测了11株抗B-CLL患者IgM腹水和杂交瘤上清McAb的相对亲和力。结果提示,各株McAb结合抗原的相对亲和力不同。根据50％最大结合浓度分为两组。其中4株杂交瘤上清McAb与纯化腹水McAb测得结果基本吻合。实验结果为合理地选用这些单抗提供了重要依据。     

恶性疟原虫乳酸脱氢酶单克隆抗体的制备及其特性鉴定

为制备抗恶性疟原虫乳酸脱氢酶（LDHp)单克隆抗体（McAb),并对其特异性进行鉴定。用纯化的LDHp重组抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备McAb,筛选出分泌高滴度McAb的杂交瘤细胞株,测定其免疫球蛋白亚类及其效价,ELISA,Westen blotting试验分析其特异性。结果,制备出2A5和1H10两株能稳定分泌抗LDHpMcAb的杂交瘤细胞株,两株单抗均为IgG2b,2A5和1H10培养上清的ELISA效价分别为1：512和1：256,腹水效价分别为1：25600和1：12800,两株单抗与间日疟,红细胞,弓形虫,日本血吸虫等抗原均不发生交叉反应,能识别恶性疟原虫的33Kda虫源蛋白。证明制备的抗LDHp杂交瘤细胞株能分泌高滴度和高特异性的单抗。     

杂交瘤细胞的复苏及分泌单克隆抗体稳定性的观察

单克隆抗体(McAb)杂交瘤技术已在医学生物学各个领域中得到广泛应用。为了解杂交瘤细胞冻存一般时间复苏后产生McAb的稳定性,我们复苏了30株杂交瘤细胞,并用其中一部分细胞株制备McAb腹水。本文就杂交瘤细胞复苏后的生长情况及细胞冻存后分泌McAb的稳定性等进行了探讨。     

人单隆克抗体技术的现状和展望

单克隆抗体(McAb)技术问世13年了,McAb的应用已涉及生物医学的每个领域。但鼠单抗是异种蛋白,注入人体内会诱发免疫反应,临床应用受限,发展人单抗(HMab)势在必行。1977年Steinitz等首次报告用EB病毒(EBV)转化人的B细胞,建立了产生特异性HMab的细胞系。1980年美国的两个实验室几乎同时报告用人一人杂交瘤技术产生特异性HMab,1982年Kozbor等用EBV—杂交瘤技术制备了HMab,由于HMab在医学实践中用途更广,HMab技术为生物医学界普遍关注。但HMab的制备,不能简单地照搬小鼠淋巴细胞杂交瘤技术,其方法和技术要复杂得多,11年来,HMab技术有所改进和发展。一些病毒、细菌、寄生虫,细胞及可溶性抗原的人单抗陆续制备成功,但抗体产量低而不稳定,还有许多难题要解决。     

低血清培养杂交瘤细胞及提高单克隆抗体产量的研究——Ⅰ、静止培养条件下的研究

单克隆抗体(McAb)在诊断,免疫纯化和治疗等领域的应用日益广泛,使得对McAb的需求量不断增加。小鼠腹水法简便易行,但腹水含有大量杂蛋白,包括小鼠正常Ig。这就给提纯工作带来了困难。所以目前多用体外培养法大量生产McAb。遗憾的是杂交瘤细胞通常需在含有较高浓度(10～20％)小牛血清的培养液中生长繁殖,且培养上清中的抗体浓度比小鼠腹水的抗体浓度低得多。但也用有低血清培养杂交瘤细胞的成功报道。同时改善培养条件可提高培养上清液中的抗体浓度。为了使发酵罐能在成本较低的情况下生产较高滴养度的McAb。我们首先对静止培养的杂交瘤细胞进行了两个方面的研究——驯化适应低血清培的杂交瘤细胞株和添加蛋白质不同水解物以提高培养上清中的抗体产量。     

无蛋白培养中杂交瘤细胞的生长与单克隆抗体分泌

目的：建立应用无蛋白培养基大量制备单克隆抗体（McAb)的生产方法。方法：本实验以3株猪瘟病毒特异单抗杂交瘤细胞为研究对象，通过与常规的有血清培养法比较，研究了无蛋白培养基中杂交瘤的细胞生长特性、抗体分泌效率、活性和纯度。结果：无蛋白培养基中单抗的产量与效价比有血清培养的单抗高2－4倍，而且单抗的纯度显著提高。结论：无蛋白培养基可完全取代常规的有血清培养基，用于生产高滴度、高纯度单克隆抗体。     

表面表位包埋法制备肿瘤表面抗原P185neu/c-erbB-2单克隆抗体及其性质研究

目的 :细胞表面表位包埋法 (SEM)是一种选择细胞表面特定的表达分子制备单克隆抗体的新途径。由于P185 neu c erbB 2 是乳腺癌及其他肿瘤的一个重要表面标志 ,这个研究旨在应用SEM法制备特异性好 ,灵敏度高的P185单克隆抗体并分析其特性以便于临床。方法 :采用细胞表面表位包埋法免疫BALB C小鼠 ,常规杂交瘤技术进行细胞融合 ,ELISA法测定 ,有限稀释法克隆化。结果 :筛选得到 3株能稳定分泌抗人癌基因erbB 2产物P185蛋白的McAb杂交瘤细胞。经间接免疫过氧化物酶染色和流式细胞术分析证明该McAb特异性与P185阳性细胞膜结合 ,而不与结构类似的EGFR膜阳性细胞结合。免疫印迹实验证明这些McAb特异地与P185蛋白结合 ,病理切片免疫组化结果证明该单抗对乳腺癌组织呈特异膜阳性反应。结论 :SEM法制备的肿瘤表面抗原P185的McAb杂交瘤具有很好的用于临床诊断肿瘤抗原P185的价值及工程化改造的前景。     

人用鼠源性单克隆抗体中鼠源性病毒的检测

加强对人用鼠源性McAb中的鼠源性病毒的检测,对加强McAb人体内应用的质量控制,促进体内应用单抗于临床诊断,预防和治疗均有重要意义。按照我国目前制定的《人用鼠源性McAb生产和质量控制要点》(简称要点)的要求,我们对不同来源的8株分泌McAb杂交瘤细胞株进行了鼠源性病     

抗HPT单克隆抗体的制备与生物学特性鉴定

目的：制备抗潮霉素B磷酸转移酶(HPT)的单克隆抗体(McAb)，建立一种快速检测转基因作物中该选择标记基因HPT编码蛋白的方法。方法：用基因重组潮霉素B磷酸转移酶(HPT)抗原免疫BALB/C小鼠，采用杂交瘤技术制备McAb。选择不同的抗原决定簇与兔抗HPT多抗配对，建立双抗夹心ELISA检测HPT抗原。结果：筛选出四株稳定分泌抗HPT单抗的杂交瘤细胞株，IgG亚类鉴定均为IgG1，ELISA检测证实单抗可特异性识别细胞培养上清、重组子菌体裂解产物中及纯化出的HPT蛋白。结合位点测定实验表明4株单抗是针对不同的抗原决定簇，与多克隆抗体组成双抗夹心ELISA法，均可较好地检测到HPT抗原。检测的灵敏度为30ng／ml，且与别的无关抗原无交叉反应性。结论：4株杂交瘤细胞株特异性好，亲和力强，组成双抗夹心ELISA法可用于快速、灵敏检测HPT抗原。     

抗肾综合征出血热病毒血凝素单克隆抗体8F8轻链可变区基因的克隆及序列分析

本文用基因工程技术,从8F8杂交瘤细胞提取总RNA,逆转录合成cDNA,应用PCR快速克隆出8F8单抗的轻链可变区基因V_L,并对8F8单抗V_L的核苷酸序列和相应编码的氨基酸序列进行了测定和推导。 1 杂交瘤细胞系 抗HFRSV血凝素McAb 8F8株培养于RPMI-1640培养液(含20％小牛血清)中。     

杂交瘤细胞在玻璃微载体培养中生物特性观察

本文报道以玻璃微载体小珠(CMB,Class microcarrier beads)作为载体培养杂交瘤细胞方法的建立。结果表明4株杂交瘤细胞在GMB培养显示GNB法上清中特异性单克隆抗体的滴度。OD值较单层培养法为高。比较培养7d后的杂交瘤细胞数,也以GMB法获得细胞数为多。各株细胞都诱生出高滴度腹水。亚类鉴定方面,GMB法培养的4株杂交瘤细胞上清内McAb所属亚类,又都保持了与单层法培养者完全相同的结果。表明杂交瘤细胞在CMB培养中,细胞迅速增殖,且保持各细胞株分泌其特异的McAb的生物特性,细胞活力旺盛,为今后体外培养杂交瘤细胞,制备McAb,提供了新的途径。     

用免疫荧光法筛选抗人μ链单克隆抗体(McAb)的研究

用人血清IgM球蛋白重链-μ链免疫的BALB/c小鼠脾细胞与鼠骨髓瘤Sp 2/0细胞在PEG作用下融合,用免疫荧光法筛选出6种分泌McAb的杂交瘤细胞,其中5株确定为抗人μ链McAb,一株未定。杂交瘤细胞经四次克隆,半年多传代,接种BALB/c鼠可稳定的产生腹水抗体。     

Annexin A2单克隆抗体制备及初步鉴定

制备Annexin A2特异性单克隆抗体(McAb),为Annexin A2的体内外功能的研究提供有力的抗体工具。以原核表达的全长p36蛋白(Annexin A2单体)免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术制备针对Annexin A2的McAb。以间接ELISA法筛选出目的杂交瘤细胞株并进行染色体计数;分析McAb的亚型,检测其效价、浓度及亲和常数;以细胞荧光染色,Western blot和RT-PCR鉴定McAb特异性。结果得到1株能稳定分泌特异性针对p36的McAb的细胞株F8,其抗体亚类重链为IgG2a,轻链为κ型;腹水纯化后效价为1∶4 000;亲和常数为3.4×109L/mol。成功获得了能稳定分泌AnnexinA2特异性McAb的细胞株。     

抗乙醇诱导的大鼠肝脏微粒体细胞色素P-450单克隆抗体的制备及特性鉴别

从乙醇处理的大鼠分离细胞色素P-450(EtOH-P-450)。纯化后免疫BALB/c雌鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓癌细胞制备杂交瘤。应用固相放射免疫法筛选单克隆抗体(McAb)产生杂交瘤。试验中使用~(35)[S]蛋氨酸标记的大鼠抗小鼠k链McAb作为第二抗体(Yelton,D.E,etal:HYbriboma 1。5-11。1981)。分离31个单独的产生一种单一鼠免疫球蛋白     

人单克隆抗体及其在乙肝病毒中的研究

七十年代中期,Kohler和Milstein运用小鼠B细胞杂交瘤技术,开创了体外产生单克隆抗体(McAb)的新纪元。在此基础上,国内外各实验室在不断完善和改进这一新技术的同时,建立了分泌各种各样McAb的杂交瘤细胞系。并且在生物医学的分析研究,疾病的诊疗中,由于McAb的应用也取得了显著成绩。但由于产生的McAb多为异源性的啮齿类抗体,要把它们广泛地用于人类疾病的体内诊疗和预防中受到了很大限制。因此,近年来对制备人源性McAb,建立分泌人McAb的杂交瘤细胞系进行了研究。本文旨在对近年来国内外人McAb研制及其在乙肝病毒(HBV)中的研究概况做一简要回顾。     

平榛主要过敏原Corh1单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备和鉴定鼠抗平榛主要变应原Cor h 1的单克隆抗体(Monoclonal Antibody,McAb)。方法用重组Cor h 1蛋白为免疫原,免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤NS-1细胞融合。通过间接ELISA法筛选分泌特异性McAb的杂交瘤细胞。用杂交瘤细胞株诱导小鼠产生腹水,再用蛋白A亲和层析法纯化抗体。采用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定该单克隆抗体的Ig亚型;通过间接ELISA、Western Blotting鉴定该McAbs的特性和交叉性。结果获得4株可稳定分泌鼠抗平榛主要变应原Cor h 1的McAbs,其Ig亚型均为IgG1,均具有良好的效价;ELISA和Western Blotting分析表明该4株单抗均能识别重组Cor h 1蛋白,其中3株单抗能够识别天然平榛提取物。结论成功制备了4株鼠抗平榛主要变应原Cor h 1的单克隆抗体,为建立平榛主要变应原Cor h 1检测及纯化方法奠定了基础。     

低血清条件下杂交瘤细胞系生长和McAb产生的研究

本文报告了肾综合症出血热(HFRS)病毒单克隆抗体(McAb)3G1/3F8杂交瘤细胞系在无/低血清条件细胞生长和McAb产生的实验结果,首先将3G1/3FB细胞系培养于小牛血清(CFS)浓度为20％、10％、7.5％、5％、2％、1％和0％的RPMI-1640中观察血清浓度对细胞生长和McAb产生的影响。结果显示在2％～7.5％CBS中培养96h细胞系生长达到最大密度,10％～20％CBS中培养72h即可达到最大密度,CBS低     

人促甲状腺激素单克隆抗体的制备及鉴定

目的：制备特异性强、灵敏度高的人促甲状腺激素（hTSH）单克隆抗体,为建立高灵敏性和高特异性的hTSH检测方法奠定基础。方法：人工合成人促甲状腺激素（hTSH）上的28个氨基酸,采用戊二醛交联法与牛血清白蛋白（BSA）构建完全抗原。用人工免疫原免疫BALB／c小鼠,利用杂交瘤技术建立分泌抗hTSH单克隆抗体的杂交瘤细胞,并对得到的单抗进行鉴定。结果：建立了一株杂交瘤细胞4E5,制备了腹水单抗,经鉴定,抗体重链属于IgG1类型,轻链属于K型,McAb腹水ELISA效价达1：1．6×10^5,与促黄体生成激素（LH）、促卵泡激素（FSH）、人绒毛膜促性腺激素（HCG）无明显交叉反应,细胞株冻存复苏后抗体分泌稳定。结论：本实验建立的细胞株显示稳定性好,特异性高,McAb腹水效价高,为进一步提高hTSH检测的灵敏性和简便性提供依据。     

DNA免疫法研制抗猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白中和性单克隆抗体

目的：研制抗PRRSVM蛋白的单克隆抗体（McAb），以期获得中和性单克隆抗体。方法：将PRRSVM蛋白的基因克隆入真核表达载体pcDNA3．1，利用构建成的重组真核质粒免疫BALB／c小鼠，采用杂交瘤技术制备抗PRRSVM蛋白的单抗，建立间接ELISA方法筛选阳性克隆。利用试剂盒检测Ig亚类。通过免疫印迹（Western blot）、间接免疫荧光试验（IFA）鉴定McAb的特异性。间接ELISA和病毒中和试验检测杂交瘤细胞上清McAb效价和腹水McAb效价。结果：获得3株可分泌特异性抗PRRSVM蛋白抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为1A7、4G3、51：3。1A7和4G3的Ig亚类为IgM。ELISA检测杂交瘤细胞培养上清效价为1：54～1：1024，腹水效价为1：3200～1：10240。同时用Western blot、IFA检测，结果均是阳性。4G3和1AT相对亲和力不同，证明其识别不同抗原位点。1AT和4G3具有病毒中和活性，中和效价达到1：96。结论：获得2株特异性抗PRRSVM蛋白的中和性单抗，为PRRSV诊断和免疫预防研究奠定了重要基础。     

14株抗乙型肝炎表面抗原单克隆抗体与变异表面抗原的反应模式及应用

目的制备抗乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)的单克隆抗体,检测单克隆抗体与15种变异HBsAg的反应模式。用筛选出的单抗建立快速检测变异HBsAg的ELISA实验方法,并做初步评价。方法用中国乙型肝炎病毒感染者血清中分离的HBsAg免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞融合技术制备抗-HBs单克隆抗体。检测不同单克隆抗体与野生及变异HBsAg的反应性。筛选出两种可以较好识别变异HBsAg的单克隆抗体McAb2和McAb3,建立两种抗体ELISA检测HBsAg的方法。结果制备了14株抗-HBs单抗。经过初筛,有4种可以较好识别包括G145R在内的大多数变异HBsAg。优化了McAb2和McAb3检测HBsAg的条件,检测HBsAg的灵敏度较好,检测变异HBsAg的能力优于2种现行国产HBsAg检测试剂盒。结论用本实验制备的单抗可以很好地识别包括G145R在内的大多数变异HBsAg。