非小细胞肺癌患者外周血与组织中K-ras基因突变的研究

目的检测非小细胞肺癌患者外周血与肿瘤组织K-ras基因突变率及两者的一致性,探讨外周血K-ras基因突变的临床应用价值。方法应用实时荧光定量PCR方法检测257例非小细胞肺癌组织,318例非小细胞肺癌外周血,其中185例外周血标本和组织标本配对,检测其中K-ras基因突变,比较外周血和组织标本突变一致性,分析K-ras基因突变和患者临床特征相关性。结果外周血标本中检测出37例突变(11.64%),组织标本中29例突变(11.28%),两种标本一致性为76.19%,差异有统计学意义(Kappa=0.671,P=0.000)。结论非小细胞肺癌患者外周血与组织K-ras基因突变一致性较高,在无法获得组织学标本时可以检测外周血K-ras基因状态,为非小细胞肺癌的临床诊疗提供帮助。     

三阴性乳腺癌患者BRCA1和BRCA2基因突变的临床特征及预后因素

目的:探究三阴性乳腺癌患者BRCA1和BRCA2基因突变检测的临床意义及预后因素分析.方法:研究对象选取为2003年1月至2015年12月之间的三阴性乳腺癌156例,所有患者均通过PCR法和DNA序列测定检验BRCA1和BRCA2基因突变情况,分析乳腺癌患者BRCA1和BRCA2基因突变特点.应用Log-Rank检验对BRCA1和/或BRCA2基因突变的三阴性乳腺癌患者的各项指标如年龄、ECOG状态、临床分期、淋巴结阳性数、月经状态和给药方式进行单因素分析.应用Cox风险比例回归模型分析患者年龄、ECOG状态、临床分期、淋巴结阳性数、肿瘤大小、月经状态和给药方式等多因素分析.结果:三阴乳腺癌患者发生基因突变21例,总体发生率13.46％,BRCA1突变15例,BRCA2突变6例.Log-Rank检验结果显示,发病年龄越大,ECOG评分越高,临床分期越晚,淋巴结阳性数越多,预后越差(P＜0.05),而发病时月经状态和给药方式与预后无关.COX风险比例回归模型显示,肿瘤大小(相对危险度,3.163;95％CI:1.455～9.287;P＜0.05)和淋巴结转移数(相对危险度,1.859;95％CI:1.254～6.875;P＜0.05)是BRCA基因突变三阴性乳腺癌独立的预后因素.结论:BRCA1和BRCA2基因突变可能与乳腺癌尤其是三阴乳腺癌可能有着密切的相关性,发病年龄、ECOG评分,临床分期和淋巴结阳性数及肿瘤大小与BRCA基因突变的三阴乳腺癌预后有关.     

全血细胞减少症130例病因分析

全血细胞减少症是多种疾病造成的一种全血减少综合征。血常规检测血红蛋白〈l00g／L,血小板〈100×10^9／L,白细胞〈4．0×10^9／L至少有2次,这种血象的改变常见于造血系统疾病,也见于非造血系统疾病,病种繁多,病因复杂,骨髓细胞学检查对全血细胞减少症患者的病因诊断有重要的价值,结合临床资料可提高临床诊断的准确率。现对我院2009年12月至2010年11月收治的130例全血细胞减少症患者进行回顾性总结和病因学分析,报道如下。     

逆转录—多聚酶链反应扩增黄病毒核酸的研究

黄病毒基因组为单链，正股ＲＮＡ，全长约１１Ｋｂ。在其ＮＳ１基因序列设计了一对通用引物，ＤＪＳ（＋）和ＤＪＡ（一）均为１７个硷基，扩增序列长度为４１３ｂＰ．应用逆转录一一多聚酶链反应（ＲＴ—ＰＣＲ）成功地扩增了登革病毒（ＤＥＮ）１，２，３，４型和乙型脑炎病毒（ＪＥＶ）基因部分片段，其扩增片段的大小与设计相符。采用该引物检测国内分离株ＤＥＮ１／（ＧＺ）、ＤＥＮ２（ＨＮ９１）和ＪＥＶ（Ａ２）株同样出现一条明显的扩增带（约４１３ｂＰ），说明该引物也适合于我国分离株。应用通用引物扩增黄病毒中的ＰＯＷ和ＬＧＴ均出现一条特异带。甲病毒属的辛德毕斯和基孔肯稚病毒应用该引物扩增后无特异性条带；扩增Ｃ６／３６细胞也无特异带。表明该通用引物特异性良好，对于今后黄病毒感染的临床快速诊断和进一步的分子病毒学研究均有重要意义。     

免疫毒素清除人骨髓中克隆化白血病细胞的研究

识别普通型急性淋巴细胞白血病抗原(CALLA)的单克隆抗体共价连接到完整的蓖麻毒素上,间接免疫荧光显示此免疫毒素(79:Ricin)能与Nalm-1靶细胞结合。克隆化试验表明:半乳糖存在时,10~(-9)～10~(-3)M 79:Ricin能杀死99.9％ Nalm-1细胞。正常骨髓细胞的存在并不影响它清除靶细胞的效果。79:Ricin免疫毒素对骨髓造血干细胞毒性不很大。     

抗DEN-2基因核酶的克隆及其体外切割活性的研究

目的：探讨核酶抗登革病毒活性。方法：根据DEN－2基因结构的特点，按照锤头状核酶的结构模型和作用模式，设计，合成针对172－174GUC位点的核酶基因；定向插入质粒pGEM-3Zf( )的Sac I和Sal I位点之间；核酶基因克隆和DEN－2靶基因克隆分别进行体外转录，生成核酶的靶RNA，体外进行切割反应。结果：核酶与登革病毒靶序列体外产物电泳 见预期切割条带。结论：该核酶具有切割相应靶RNA的活性，可进一步用于细胞内核酶抗登革病毒的研究。     

免疫毒素清除人骨髓中克隆化白血病细胞的研究

本实验用抗急性淋巴细胞白血病共同抗原(CALLA)的单克隆抗体与蓖麻毒素(Ri-cin)偶联的免疫毒素(79:Ricin)清除骨髓中克隆化白血病细胞。目的在于寻找减少自体骨髓移植后白血病复发可能性的有效措施。~3H-亮氨酸掺入实验结果表明,79:Ricin在     

套式逆转录聚合酶链反应在黄热病毒快速检测中的应用

目的 建立灵敏、特异的套式逆转录聚合酶联反应(RT-PCR)快速检测黄热病毒方法。方法 参照黄热病毒标准株D17序列设计套式引物，并检索国际基因序列数据库初步验证其特异性，随后对镁离子、dNTP及引物浓度，PCR反应条件进行优化，建立稳定、特异的套式RT-PCR快速检测黄热病毒方法，并以同属于黄病毒科的登革病毒1～4型、流行性乙型脑炎病毒为对照，验证其特异性。结果 外引物扩增可获得404 bp左右的特异性扩增片断，阴性对照毒株未见设计大小的扩增片断，但可见非特异性片断；内引物扩增可获得349 bp左右片断，阴性对照无扩增条带。结论 套式RT-PCR可快速、灵敏、特异的检测黄热病毒。     

两株甲病毒快速检测方法的建立

目的：建立一种快速检测甲病毒的通用方法。方法：在甲病毒3’非编码区(3-NTR)设计了一对引物，并运用RT-PCR技术对两株甲病毒进行了检测。结果：鹭山病毒(SAG)和辛德毕斯病毒(SIN)都扩增出约1.4kb片段。结论：初步建立了甲病毒的通用方法。     

连翘浓缩煎剂抗乙型脑炎病毒的体外实验研究

目的:在体外细胞模型上观察连翘浓缩煎剂对JEV感染的抵抗作用。方法:以白纹伊蚊C6/36细胞为宿主细胞,阿昔洛韦为阳性对照药物,通过观察细胞病变效应(CPE)和改良MTT法来测定受试药物的细胞毒性、药物对JEV的直接灭活作用、药物抗JEV对细胞的吸附作用以及药物对JEV在细胞内复制增殖的抑制作用,并计算出药物体外抗JEV感染的治疗指数。结果:该药物对JEV无直接灭活作用,最大无毒浓度为2.0mg/mL,半数中毒浓度TC50为23.2mg/mL,在16.0mg/mL以上浓度用药时有抗JEV吸附细胞的作用,也能抑制JEV在细胞内的复制增殖,半数有效浓度IC50为7.6mg/mL,治疗指数TI为3.1。结论:连翘浓缩煎剂在体外细胞模型中有较好的抗乙脑病毒感染作用,作用机理可能是干扰病毒对细胞的吸附及抑制病毒在细胞内的复制增殖。