肝脏cDCs亚群研究

目的探究肝脏不同c DCs亚群的特性和抗原递呈能力。方法分离肝脏非实质细胞和脾脏混合细胞,流式分选得到肝脏CD103~+ cDC(脾脏内CD8α~+ cDC)和CD11b~+ cDC,Q-PCR检测不同cDCs亚群特征性分子的表达。分离OT-Ⅰ/OT-Ⅱ转基因小鼠na?ve T细胞,并将得到的T细胞进行CFSE标记。将DCs和CFSE标记的T细胞加入特异的OVA肽段,体外共培养3 d,收集细胞检测T细胞增殖。结果稳态下小鼠肝脏内的CD103~+ cDC和CD11b~+ cDC类似脾脏CD8α~+ cDC和CD11b~+ cDC,分别负责活化CD8~+T细胞和CD4~+T细胞。结论发现了肝脏DCs的分群特性,以及证明了肝脏内cDC不同亚群对不同T细胞的活化作用,为进一步研究肝脏DCs的功能奠定基础。     

TGF-β1调控卵巢癌微环境中CD8~+Treg的表型及功能初探

目的初步探讨TGF-β1在卵巢癌微环境中对CD8+Treg诱导过程的作用。方法建立卵巢癌细胞系SKOV3与健康人外周血CD8+T细胞体外Transwell共培养系统,实验组为SKOV3与健康人外周血CD8+T细胞共培养组,对照组为健康人外周血CD8+T细胞单独培养组,培养5 d后收集2组共培养上清。ELISA法检测2组上清中TGF-β1水平。在上述共培养体系基础上增加anti-TGF-β1中和组,即在SKOV3与健康人外周血CD8+T细胞共培养体系中加入anti-TGF-β1中和抗体,共培养5 d后收集3组CD8+T细胞。流式细胞术检测各组CD8+T细胞中Treg相关标志物(CD25、Foxp3、CD28)的表达率。将3组CD8+T细胞和na?ve CD4+T细胞按照1∶0、1∶1、1∶5、1∶10、0∶1的比例进行共培养,并在体系中加入anti-CD3及辐照的PBMCs,培养56 h后加入3H-Td R,继续培养16 h后收集细胞,液体闪烁仪检测CPM值。结果与CD8+T细胞单独培养组相比,SKOV3/CD8共培养组上清中高表达TGF-β1(P0.01)。在共培养体系中加入anti-TGF-β1中和抗体后,与SKOV3/CD8共培养组相比,anti-TGF-β1中和组CD8+CD28-Treg、CD8+CD25+Treg和CD8+Foxp3+Treg细胞比例显著下降,但相比CD8+T细胞单独培养组仍然升高。功能抑制试验结果显示,共培养组CD8+T细胞能抑制na?ve CD4+T细胞的增殖,anti-TGF-β1中和组仅在CD8+T细胞和na?ve CD4+T细胞比例为1∶1时对na?ve CD4+T细胞增殖呈现抑制作用,而单独培养组CD8+T细胞不能抑制na?ve CD4+T细胞的增殖。结论 anti-TGF-β1可部分中和卵巢癌微环境诱导的CD8+Tregs表型及功能,TGF-β1是卵巢癌细胞生长微环境诱导CD8+Treg分化过程重要的作用因素之一。     

卵巢癌细胞通过P38 MAPK通路促进CD8~+调节T细胞的生成

目的探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在卵巢癌细胞(SKOV3)诱导CD8+Treg分化过程中的作用。方法建立SKOV3与健康人CD8+T细胞体外共培养体系,设置CD8+T细胞单独培养组为对照组。共培养5 d后,收集各组CD8+T细胞,荧光定量PCR和流式细胞术检测CD8+T细胞中Treg相关标志物(CD25、Foxp3、CD28)的表达率;功能抑制试验检测两组CD8+T细胞对nave CD4+T细胞增殖能力的影响;Western blot检测MAPK通路相关蛋白(ERK/p-ERK、JNK/p-JNK、P38 MAPK/p-P38 MAPK)的表达水平;P38 MAPK特异性抑制剂SB203580预处理CD8+T细胞后,评价CD8+T细胞中Treg相关标志物(CD25、Foxp3、CD28)的表达变化。结果共培养组CD8+T细胞中CD25及Foxp3表达率均显著高于对照组(P0.05),CD28表达率显著低于对照组(P0.05);共培养组CD8+T细胞相比对照组,抑制nave CD4+T细胞的增殖力增强;Western blot结果显示,共培养组p-P38 MAPK的表达水平显著高于对照组(P0.05),SB203580预处理后CD8+T细胞中Treg相关标志物表达率均下调。结论卵巢癌细胞通过活化CD8+T细胞的P38 MAPK信号通路诱导具有抑制作用的CD8+Treg的生成,促进肿瘤进展。     

结核分枝杆菌Rv2986c对小鼠树突状细胞成熟和功能的影响

目的探索结核分枝杆菌Rv2986c蛋白诱导小鼠树突状细胞成熟及Na?ve CD4~+T细胞极化的作用。方法克隆表达Rv2986c蛋白,用纯化后的蛋白刺激小鼠树突状细胞,流式检测树突状细胞MHC-Ⅱ表面分子,ELISA检测培养上清中IL-6和IL-12p40分泌情况。将Na?ve CD4~+T细胞与经Rv2986c刺激后的树突状细胞共培养,检测培养上清中IFN-γ的分泌水平。结果成功克隆表达了Rv2986c蛋白。经Rv2986c蛋白刺激后,树突状细胞MHC-Ⅱ表面分子表达水平显著增高,IL-6和IL-12p40释放水平显著升高。淋巴细胞共培养上清液中IFN-γ分泌量显著增加。结论结核分枝杆菌蛋白Rv2986c能促进小鼠树突状细胞成熟,激活抗原递呈作用,诱导CD4~+T向Th1型极化。     

抗原特异性初始CD4~+T细胞的体内分化及特性

为了探讨抗原特异性CD4+T细胞在体内的分裂、表型、Th1细胞因子的产生和组织器官的分布。将CFSE标记的抗原特异性初始CD4+T细胞静脉被动输给小鼠后,进行免疫,3d后处死小鼠取其脾脏、淋巴结和肺组织,分离单个核细胞,利用流式细胞计数仪在单个细胞水平上,观察细胞的分裂、表型、Th1细胞因子的产生和组织分布。结果显示在没有抗原刺激的情况下,未见初始CD4+T细胞分裂,其主要分布于淋巴结和脾脏。当受到抗原刺激后,CD4+T细胞分裂1～5次,主要分布于脾脏和肺组织,CD25的表达增加,CD62L的表达随着细胞分裂次数的增加而减少。IL-12促进CD25的表达和细胞的分裂。促进Th1细胞的分化和IFN-γ的表达。研究的结果提示,在体内,当CD4+T细胞活化后,主要分布于脾和非淋巴组织发挥其免疫效应。     

青藤碱促进树突状细胞分化抑制其成熟

目的 探讨青藤碱对树突状细胞(Dendritic cell,DC)体外分化发育、成熟、抗原递呈及刺激T细胞活化能力的影响.方法 DC体外培养时,青藤碱处理,观察细胞生长情况,流式检测细胞表型及抗原内吞能力,混合淋巴细胞反应检测DC刺激T细胞活化的能力,E(I)ISA检测细胞因子分泌.结果 与对照组相比,青藤碱处理DCCD1a表达上调而CD14下调,IL-12分泌减少,共刺激分子表达减少,同种T细胞刺激活性降低.结论 合适剂量的青藤碱能刺激单核细胞分化为不成熟DC但能抑制其进一步成熟.     

NKT细胞及其免疫调节与免疫耐受诱导作用

NKT细胞是一种特殊类型的T淋巴细胞,同时表达NK细胞和T淋巴细胞标记,其主要特征为T细胞受体基因表达的恒定性、CD1d的限制性以及细胞因子产生的高水平性。NKT细胞通过识别由非经典的MHC-Ⅰ类分子CD1d递呈的糖脂类抗原而活化,通过分泌大量Th1和Th2类细胞因子,调节Th1和Th2淋巴细胞的分化,参与自身免疫、感染免疫、抗肿瘤免疫和移植免疫等多种免疫反应。     

体外诱导小鼠胚胎干细胞分化为T淋巴细胞

目的 体外诱导小鼠胚胎干细胞(ESC)分化为T淋巴细胞. 方法 借助小鼠胚胎干细胞体外自然分化形成的类胚体(EB)中含有=三胚层细胞的独特细胞环境,加入多种细胞因子和胸腺肽α1,体外诱导小鼠ESC向T淋巴细胞分化.利用流式细胞仪在不同时间点检测诱导细胞表面T淋巴细胞发育相关的表面标志CD25、CD44、CD3、CD4、CD8以及T细胞受体(TCR)αβ和TCRγδ分子的表达水平. 结果 诱导3 d后,出现CD44+细胞;第6天出现CD44+、CD44+CD25+和CD25+细胞群;第15天开始表达CD3分子;1周后开始出现CD4+CD8+双阳性细胞.随着诱导时间的延长,CD3+细胞和CD4+CD8+细胞的百分比不断升高.培养1个月后,出现少量的CD4+和CD8+的单阳性细胞.诱导细胞早期表达TCRαβ和TCRγδ.随着诱导时间的延长,T细胞进一步成熟,诱导细胞以TCRαβT细胞为主. 结论 细胞因子和胸腺肽α1的共同作用可以在体外诱导小鼠胚胎干细胞分化成具有T淋巴细胞表型的细胞,且细胞的表型变化与T细胞体内正常的胸腺发育过程中的表型变化一致.     

天花粉蛋白合成肽通过激活抑制性CD8~+ T细胞诱导免疫抑制

为了探讨天花粉蛋白合成肽(M-Tk)诱导免疫抑制的机制,应用小鼠针对可溶性抗原OVA的增殖系统,检测M-Tk处理后对淋巴细胞增殖的抑制作用和细胞因子格局的变化,以及M-Tk激活的T淋巴细胞亚群的表型及功能。结果表明,M-Tk可诱导一群CD8+ T抑制性细胞,其表型为CD8+CD28-CTLA4+,采用双层非接触共培养系统发现,该群抑制性细胞主要依赖于细胞因子IL-10、IL-4和细胞间接触发挥免疫抑制作用。     

IL-12对BALB/c小鼠Th17细胞的分化的影响

目的: 观察细胞因子IL-12对Th17细胞分化的影响.方法: 小鼠脾淋巴细胞经抗CD3单克隆抗体(mAb)和不同浓度的重组小鼠IL-12刺激, 3 d后使用ELISA方法观察培养物上清液中IL-17的产生情况.并使用细胞内细胞因子染色的方法, 通过流式细胞术观察CD3 mAb和重组小鼠IL-12刺激对Th1和Th17细胞分化的影响.结果: Th17细胞不分泌IFN-γ、 IL-5、 IL-10等细胞因子, 不表达Foxp3, 是一个独立的细胞亚群.不同浓度的重组小鼠IL-12可以诱导抗CD3 mAb 的T细胞分泌IFN-γ, 并向Th1细胞方向分化.同时, IL-12可以抑制活化的T细胞分泌IL-17, 抑制T细胞向Th17细胞分化.结论: IL-12可以抑制Th17细胞的分化.     

U87MG培养上清致Na觙ve CD4分化为Th2细胞的能力降低

目的肿瘤微环境或者肿瘤细胞本身对免疫细胞的分化具有定向诱导作用,本研究目的在于了解胶质瘤细胞株U87MG外泌分子对Na觙ve CD4细胞分化可能的影响。方法外周血PBMC中分离Na觙ve CD4细胞,U87MG培养液上清以1/5量加至Na觙veCD4细胞培养体系中,培养7 d,检测Na觙ve CD4细胞分化增殖情况以及分化为Th1、Th2、Th17、Treg四个亚群量的变化。结果加有1/5量U87MG培养上清的Na觙ve CD4细胞分化成Th2减低,较对照组有显著性差异8.17%±2.08%vs 9.63%±2.48%(P<0.05),Th1较对照组均值低,但无显著性差异,Th17、Treg细胞在2组之间无明显差异。结论观察到U87MG外泌分子Na觙ve CD4分化为Th2细胞能力减弱,同时初步观察了Na觙ve CD4细胞分化为其他亚群的变化规律,为理解肿瘤细胞对Na觙ve CD4细胞分化影响提供了实验基础。     

霉酚酸及其衍生物对人T淋巴细胞及混合淋巴细胞免疫应答的影响

目的探讨霉酚酸及霉酚酸衍生物对人T淋巴细胞和混合淋巴细胞免疫应答的影响。方法从正常人外周血中分离单个核淋巴细胞(PBMC),在抗CD3刺激下和混合淋巴细胞反应体系中,加入或不加霉酚酸及其衍生物共培养,应用ELISA和流式细胞术检测CD4+和CD8+T细胞细胞因子的产生、细胞活化和增殖情况。结果经抗CD3刺激后,PBMC产生的细胞因子明显增加,加入霉酚酸及其衍生物后,IFN-γ及TNF-α明显降低,IL-2产生略有增加。在混和淋巴细胞反应体系中,3种细胞因子产生皆被抑制。抗CD3刺激和混和淋巴细胞反应后,T细胞表面活化分子CD25及CD69表达增加,加入霉酚酸及其衍生物共培养24、48 h后,T细胞CD25及CD69的表达并未被抑制。霉酚酸及其衍生物可抑制抗CD3刺激下和混和淋巴细胞反应后T细胞的增殖。结论霉酚酸及其衍生物对T淋巴细胞和混合淋巴细胞体系中因子的产生和细胞增殖都有抑制作用,为其在临床自身免疫疾病及移植排斥中的广泛应用提供了理论依据。     

脐带间充质干细胞体外对脐带血CD4+ T 淋巴细胞免疫调节作用的研究

目的:研究脐带间充质干细胞(UCMSCs)在体外对异源脐血CD4+ T 淋巴细胞增殖、凋亡及向CD4+ CD25+ 调节性T 细胞(Treg)分化的免疫调控作用。方法:建立不同比例UCMSCs 与植物血凝素(PHA)活化的脐血CD4+ T 淋巴细胞共培养,或与Transwell 共培养体系,检测CD4+ T 淋巴细胞增殖情况、CD4+ CD25+ / CD4+ 比率的变化及调节性T 淋巴细胞标志基因Foxp3 相对表达量的变化。同时,建立UCMSCs 与地塞米松(DXM)刺激的脐血CD4+ T 淋巴细胞共培养,或与Transwell 共培养体系,检测CD4+ T 淋巴细胞凋亡情况。结果:PHA 活化的脐血CD4+ T 淋巴细胞在与UCMSCs 共培养3 d 后,较无UCMSCs对照组相比,细胞数量明显减少(P<0. 05)且CD4+ CD25+ / CD4+ T 淋巴细胞的比率及Foxp3 的相对表达量显著增加(P<0. 01),并随UCMSCs 数量增加,作用增强(P<0. 05)。DXM 诱导的脐血CD4+ T 淋巴细胞与UCMSCs 共培养7 d 后,细胞凋亡比率较无UCMSCs 对照组显著降低(P<0. 01)。上述效应在Transwell 共培养中部分减弱但无法消除。结论:UCMSCs 对脐血CD4+ T细胞介导的免疫反应具有负调节作用,其作用主要表现在对细胞增殖能力和分化的调控而不是促进凋亡。     

骨髓来源的原代树突状细胞对细菌颗粒抗原交叉呈递的动力学研究

目的研究小鼠骨髓细胞来源的树突状细胞对细菌颗粒抗原交叉递呈的动力学特点。方法取小鼠骨髓细胞,采用GM-CSF诱导培养。用倒置显微镜观察培养过程中细胞形态,用流式细胞仪进行细胞纯度和表型测定。采用第7天未成熟的DC细胞进行细菌抗原的交叉递呈能力检测和动力学分析。结果小鼠骨髓细胞经GM-CSF诱导培养,第7天获得大量具有典型形态和免疫表型的树突状细胞,并且在细菌脂多糖刺激后,其表型也发生特征性变化表现在共刺激分子CD80由刺激前的27.7%上调到71.6%,CD86从刺激前的36.0%上调到80.3%,DEC205从刺激前的6.5%上调到26.2%。同时该细胞吞噬低剂量的细菌抗原即可有效活化T细胞,其动力学曲线为:1～3h,该细胞抗原递呈能力呈对数增加,3～8hDC抗原递呈能力进入一个平台期,10～12h,抗原递呈能力又迅速增强。结论采用GM-CSF可以从小鼠骨髓中获得大量纯度高并且具有典型免疫表型的DC,该DC细胞能有效的递呈外源性细菌抗原,并具有特殊的抗原递呈动力学曲线。     

MBD2对Th2/Th17细胞平衡的调控及其在哮喘中的作用研究北大核心CSCD

目的:探究甲基CpG结合区域蛋白2(MBD2)在哮喘中的作用及其对Th2/Th17分化的影响。方法:在条件性敲除CD4+T细胞中MBD2表达的小鼠构建以中性粒细胞浸润为主的哮喘模型,并将小鼠分为4组:WT生理盐水组(A组)、WT哮喘组(B组)、CD4CreMBD2fl/fl生理盐水组(C组)、CD4CreMBD2fl/fl哮喘组(D组),每组10只。应用RT-PCR和Western blot实验检测MBD2在各组小鼠脾脏组织中的表达;使用乙酰胆碱(Mch)激发试验检测各组小鼠的气道高反应;收集小鼠肺泡灌洗液(BALF),使用血细胞计数法计算其中的细胞总数、嗜酸性粒细胞和中性粒细胞数量,ELISA法检测细胞因子IL-4与IL-17的表达,HE染色观察各组小鼠肺组织的病理学改变;免疫磁珠分选各组小鼠脾脏中的CD4+T细胞,流式细胞术、RT-PCR及ELISA分别检测Th2、Th17细胞比例及其相关细胞因子的表达水平;分离并培养小鼠na?ve CD4+T细胞,通过慢病毒载体以靶向沉默细胞中MBD2基因表达,流式细胞术检测其对na?ve CD4+T细胞Th2与Th17分化的影响。结果:与A、B组小鼠相比,C组与D组小鼠脾脏组织中MBD2的mRNA及蛋白表达均显著降低(P<0.01);A组与C组小鼠肺组织结构正常,而B组小鼠肺组织中支气管黏膜充血水肿,管腔狭窄,黏膜上皮细胞出现大量坏死脱落,大量炎症细胞浸润,D组介于A组与B组之间;与A组小鼠相比,B组与D组小鼠的气道反应性显著增高(P<0.05),且BALF中细胞总数和嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、IL-4及IL-17均显著增加(P<0.05),C组中仅有嗜酸性粒细胞及IL-4明显增加(P<0.01);而与B组相比,D组小鼠中嗜酸性粒细胞及IL-4表达均明显增加(P<0.05)。在脾脏淋巴细胞中,B组与D组小鼠的Th2、Th17细胞比例、GATA3和RORγt mRNA及IL-4与IL-17表达水平均较A、C组小鼠显著增加(P<0.01),与B组相比,D组小鼠中以Th2细胞及相关细胞因子占主导地位(P<0.05);成功利用慢病毒载体沉默小鼠na?ve CD4+T细胞MBD2的表达,且沉默其表达后能显著促进Th2细胞的分化比例(P<0.05),而Th17细胞比例明显降低(P<0.05)。结论:敲除CD4+T细胞中MBD2基因表达可通过促进Th2细胞及IL-4细胞因子表达,而抑制Th17细胞及IL-17表达从而改善以中性粒细胞浸润为主的重症哮喘。     

调节性B 细胞与多发性硬化的研究进展

正B细胞主要通过分泌抗体在免疫应答中发挥正向免疫调节作用。同时,B细胞还可以分泌IFN-γ、IL-6、IL-10、TGF-β等多种细胞因子,这些细胞因子协同B细胞表面的CD86、CD80、CD40L等共刺激信号促进CD4+T细胞的活化。此外,B细胞还具有递呈抗原、调节T淋巴细胞分化及树突状细胞功能等多彩的免疫学活性~([1])。近年来,在多种自身免疫性疾病和炎症性疾病的小鼠模型中都证实B细胞还     

负载滋养层细胞抗原对小鼠树突状细胞表型及功能的影响

目的 研究负载滋养层细胞抗原对小鼠髓源性树突状细胞(DC)分化成熟过程的影响,获得致耐受性DC.方法 体外使用粒细胞巨细胞集落刺激因子(GM-CSF)诱导小鼠骨髓细胞定向分化、经LPS刺激获得成熟DC;通过外胎盘锥组织块培养法获得滋养层细胞,制备可溶性抗原,加入DC培养体系.流式细胞术检测DC表面共刺激分子及MHC-Ⅱ的表达,ELISA法检测DC分泌IL-10和IL-12的浓度,混合淋巴细胞培养评估 DC刺激同种T细胞增殖、活化的功能.结果 成熟DC表型为CD40high CD80highCD86highMHC-Ⅱhigh,分泌大量的IL-12和极少量的IL-10 ,体外能有效刺激T细胞的增殖;负载滋养层细胞抗原的DC表型为CD40midCD80lo wCD86lowMHC-Ⅱlow,在分泌大量IL-12的同时IL-10也明显升高,不能有效刺激T细胞增殖,并使T细胞分泌细胞因子呈现明显Th2偏倚.结论 负载滋养层细胞抗原后的DC表面共刺激分子及MHC-Ⅱ表达降低,刺激T细胞增殖能力下降;其自分泌和促使T细胞旁分泌的细胞因子呈现Th2偏倚,是一种耐受性DC.     

Galectin-9对活化的CD4+T细胞免疫调节作用的机制研究

目的 研究Galectin-9对活化的CD4+T细胞的免疫调节作用,并进一步探讨其作用机制.方法 获取野生型C57BL/6小鼠淋巴细胞,利用MACS分选CD4+ na(i)ve T细胞,给予anti-CD3 (2.5 μg/ml)抗体、anti-CD28(5μg/ml)抗体和IL-2(100 ng/ml)刺激,培养3d.将活化的CD4+T细胞分为3组:正常对照组、Galectin-9组和Galectin-9+α-乳糖组.利用CFSE检测T细胞增殖情况,并动态观察细胞形态变化;检测CD4+ CD69+T细胞、Th1、Th2和Th17细胞的比例;并利用ELISA检测淋巴细胞分泌IFN-γ 、IL-4、IL-10、IL-12、IL-17A和TGF-β1等细胞因子的水平;利用Western blot检测T-bet、GATA-3和ROR-yt等T细胞分化调控蛋白的变化.结果 与正常对照组和Galectin-9+α-乳糖组相比,Galectin-9组于2h时开始出现细胞形态改变,同时CD4+ CD69+T细胞、Th1和Th17细胞表达减少(P＜0.05),但Th2细胞无明显变化;培养上清液中IFN-γ、IL-12、IL-17A和TGF-β1的表达水平降低(P＜0.05),而IL-4和IL-10等Th2型细胞因子水平无明显变化;同时T-bet和ROR-γt的表达水平减少(P＜0.05).结论 Galectin-9抑制活化CD4+T细胞的Th1和Th17型免疫应答,而对Th2型免疫应答无影响,免疫调节的机制可能与其在转录水平影响Th1和Th17特定转录因子的表达有关.     

超抗原SEB 活化的NKT 细胞亚群形态和分化途径的研究

目的:以NKT细胞形态和分化途径为焦点, 研究超抗原SEB活化的NKT 细胞亚群的特征.方法:C57BL/J小鼠脾细胞分别经SEB或者ConA诱导, 收集体外扩增10 d 和5 d的淋巴细胞以及获取正常黏附性巨噬细胞.用荧光抗体染色, 流式细胞仪测定淋巴细胞和大淋巴细胞群表面CD69的表达、 NKT细胞亚群百分数和不同NKT 细胞亚群的分化途径.倒置显微镜400倍下比较大淋巴细胞的形态.结果:SEB活化的淋巴细胞和大淋巴细胞表面CD69分子表达由正常值的0.11%分别提高到55.00%和68.95%.大细胞群中CD8+ 和TCRVB8+NKT 细胞亚群的百分数由原始的0.36%和0.81%分别提高到30.29%和31.48%.这些细胞位于流式细胞图的上部, 是大体积细胞群.显微镜下显示SEB活化的大淋巴细胞体积不仅大于ConA活化的T淋巴细胞, 而且比正常巨噬细胞大5倍以上, 是非黏附性细胞.胞内质粒松散、胞质与核之比＞1.SEB活化的CD8+ 和TCRVβ8+NKT细胞亚群均由T细胞直接分化而来.结论:SEB活化10 d的NKT细胞亚群主要是CD8+ NK1.1+和TCRVβ8+ NK1.1+的NKT细胞.这些细胞是大体积淋巴细胞, 应属于T细胞的亚群.     

CD107a/b分子用于评价SARS-CoV/S抗原特异性免疫应答

目的 观察抗原刺激以后CD4+和CD8+T细胞表面CD107a/b分子的表达与效应性细胞因子的产生之间的关系.方法 正常Balb/c小鼠脾细胞经多克隆刺激剂刺激或者SARS-CoV/S DNA疫苗免疫小鼠脾细胞经S抗原多肽刺激以后,使用流式细胞仪检测CD4+和CD8+T细胞表面CD107a/b分子的表达与IFN-γ、INF-α、IL-2等细胞因子的表达之间的关系.结果 经抗原多肽刺激后,抗原特异性CD4+ 和CD8+T细胞表面均表达CD107a/b.约80%的CD8+IFN-γ+细胞同时表达CD107a/b;约25%～40%的CD8+TNF-α+细胞表达CD107a/b;而大部分分泌IL-2的抗原特异性T细胞均不表达CD107a/b.结论 可以通过对抗原特异性T细胞表面CD107a/b分子的检测来鉴定抗原特异性T细胞.同时检测效应性细胞因子,可以提高检测的准确性和灵敏度.