慢性乙型肝炎患者外周血淋巴及单核细胞表面B7-H1表达研究

目的 探讨B7家族共刺激分子B7-H1在慢性乙型病毒性肝炎(乙肝)患者外周血淋巴细胞及单核细胞表面的表达情况.方法 利用荧光抗体标记结合多色流式技术,检测慢性乙肝患者外周血T淋巴细胞、B淋巴细胞、单核细胞群体表面B7-H1分子的表达.结果 在慢性乙肝患者,T、B淋巴细胞表面B7-H1低表达,与健康对照无差异;单核细胞表面B7-H1的表达率为(19.17±11.64)%,显著高于健康对照的(7.30±5.49)%(P＜0.01),且B7-H1的表达与患者血浆ALT水平成正相关(r=0.423,P＜0.01).结论 慢性乙肝患者外周血T、B淋巴细胞表面B7-H1低表达,单核细胞B7-H1表达上调,且与ALT水平正相关,提示B7-H1可能与乙肝病毒感染慢性化相关.     

人BclGL基因siRNA逆转录病毒的制备及其对T淋巴细胞增殖的影响

目的:制备表达针对BclGL基因的siRNA逆转录病毒,研究其对体外培养Jurkat细胞中BclGL基因的沉默效应及Jurkat细胞增殖的影响.方法: 利用siRNA预测软件获取3条siRNA 编码序列,插入pSilencer 5.1-H1构建重组逆转录病毒siRNA表达质粒,脂质体法转染PT67细胞包装重组逆转录病毒pSilencer 5.1-H1-BclGL,体外感染Jurkat细胞,嘌呤霉素筛选病毒感染阳性细胞克隆,实时定量 PCR 及 Western 验证干扰效率;CCK-8法体外检测BclGL基因沉默后Jurkat细胞的增殖能力.结果: 酶切及测序结果证实,表达siRNA的逆转录病毒构建成功,重组病毒表达的siRNA能有效干扰Jurkat细胞内BclGL基因的表达;BclGL表达下调可增强Jurkat细胞的增殖能力ela.结论: 成功制备了表达人BclGL基因 siRNA的重组逆转录病毒,并证实其对Jurkat细胞的生长抑制效应.     

人BclGL基因慢病毒表达载体构建及其对T淋巴细胞凋亡的影响

目的 构建针对人BclGL的慢病毒表达载体,检测其对Jurkat T淋巴细胞系凋亡的影响,为进一步研究BclGL在细胞内信号转导及分子功能奠定基础.方法 RT-PCR方法扩增人全长BclGL基因,克隆于pGrP-N1质粒中构建BclGL绿色荧光蛋白融合基因(BclGL-GFP),将融合基因克隆于慢病毒载体FUGW并转染293FT细胞包装浓缩慢病毒颗粒.将浓缩慢病毒感染Jurkat细胞,同时设立PBS对照及FUGW病毒阴性对照组,流式细胞术及荧光定量PCR鉴定BclGL在Jurkat细胞中的表达,Annexin V-APC/PI双染检测细胞凋亡变化.结果 酶切及测序证实人BclGL慢病毒表达载体构建成功,转染Jurkat细胞72 h后Jurkat细胞凋亡明显增加.结论成功构建了高效稳定表达人BclGL的重组慢病毒转染系统,并证实其对Jurkat淋巴细胞的促凋亡效应,为进一步探讨BclGL的生物学功能奠定了基础.     

青藤碱促进树突状细胞分化抑制其成熟

目的 探讨青藤碱对树突状细胞(Dendritic cell,DC)体外分化发育、成熟、抗原递呈及刺激T细胞活化能力的影响.方法 DC体外培养时,青藤碱处理,观察细胞生长情况,流式检测细胞表型及抗原内吞能力,混合淋巴细胞反应检测DC刺激T细胞活化的能力,E(I)ISA检测细胞因子分泌.结果 与对照组相比,青藤碱处理DCCD1a表达上调而CD14下调,IL-12分泌减少,共刺激分子表达减少,同种T细胞刺激活性降低.结论 合适剂量的青藤碱能刺激单核细胞分化为不成熟DC但能抑制其进一步成熟.     

补体C5b-9复合物促进树突状细胞成熟

探讨补体C5b-9复合物对树突状细胞成熟及免疫学功能的影响。rhGM-CSF+rhIL-4体外诱导单核细胞分化为不成熟树突状细胞,体外于不成熟树突状细胞表面用补体蛋白纯品组装CSb-9,37℃,5%CO_2温育96 h,流式分析细胞表型及抗原捕获能力;与同种异体CD4~+和CD8~+T细胞共培养检测其免疫刺激功能;ELISA检测细胞因子分泌。结果显示,亚溶解型C5b-9处理DC表面标志CD83、HLA、CD80、CD86、B7-H1、B7-H3、B7-H4以及BTLA等表达上调;DC分泌IL-12及TNF-α上调,抗原捕获能力降低;C5b-9处理DC刺激CD4~+T细胞活化及分泌IFN-γ、IL-2能力增强。结论:补体C5b-9复合物可以促进树突状细胞成熟,衔接天然免疫和特异性免疫。